IL-10表达对小鼠脾脏CD4 T细胞亚群相关细胞因子的影响.pdf

878.Doi:10.13621/j.1001-5949.2023.10.0878宁夏医学杂志2 0 2 3年10 月第45卷第10 期Ningxia Med J,Oct.2023,Vol.45,No.10著IL-10 表达对小鼠脾脏 CD4+T细胞亚群相关细胞因子的影响论李东杰 薛永平,刘丽媛，陆思敏，程锁利?【摘要目的研究应用T细胞特异性慢病毒过表达白细胞介素10(IL-10)或 siRNA片段抑制IL-10后对小鼠脾脏CD4*T细胞亚群的影响。方法磁珠分选试剂分离小鼠初始CD4+T细胞,通过IL-10过表达特异性慢病毒侵染 CD4*T细胞,应用qRT-PCR检测IFN-、IL-4、IL-17 A、Fo x p 3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-、IL=4、IL-17 A、Fo x p 3在CD4*T细胞中的分泌比率。应用siRNA干扰片段抑制IL-10,应用qRT-PCR检测IFN-、I L-4、I L-17 A、Fo x p 3的mRNA表达量,应用流式细胞术分别检测IFN-、I L-4、I L-17A、Fo x p 3在CD4*T细胞中的分泌比率。结果过表达IL-10后,IFN-、IL-4、IL-17 A m RNA 水平明显下降（P 0.0 5）,Fo x p 3mRNA 表达明显上升（P0.05）;IFN=、IL-4、IL-17 A 分泌量均明显降低（P0.05），Fo x p 3分泌量明显增高（P0.05）。I L-10 抑制后,IFN-和IL-17AmRNA表达明显上升（P0.05）；I FN-和IL-17A分泌量均明显升高（P0.05）。结论过表达IL-10后抑制Thl、T h 2、T h 17 亚群中的IFN-、IL-4、IL-17 A的表达,对 Treg细胞Foxp3的分泌具有促进作用。IL-10抑制能明显促进IFN-、IL-17 A 的表达。【关键词CD4+T细胞；IL-10;慢病毒过表达；siRNA 抑制中图分类号 R532.14The effect of IL-10 expression on CD4+T cell subset related cytokines in mouse spleenLI Dongjie,XUE Yongping,LIU Liyuan,LU Simin,CHENG Suoli.1.Department of Clinical Laboratory,Peoples Hospital ofNingxia Hui Autonomous Region,Yinchuan 750002,China;2.Department of Joint Surgery,Peoples Hospital of Ningxia Hui AutonomousRegion,Yinchuan 750002,China;3.The Third Clinical Medical College of Ningxia Medical University,Yinchuan 750004,ChinaCorresponding author:CHENG Suoli,Email:chengsuoli Abstract Objective To study the effect of CD4*T cell subsets in mouse spleen after inhibiting IL-10 by using T cell specif-ic lentiviruses overexpression of IL-10 or siRNA fragments respectively.Methods Magnetic bead sorting reagent was used to isolateinitial CD4*T cells from mouse.IL-10 overexpression specific lentiviruses and Inhibition of IL-10 using siRNA interference fragmentswere used to infect CD4*T cells respectively.The mRNA expression levels of IFN-,IL-4,IL-17A and Foxp3 were tested by qRT-PCR,and the secretion ratios of IFN-,IL-4,IL-17A and Foxp3 were tested by flow cytometry.Results The mRNA levels of IFN-,IL-4,IL-17A were significantly decreased after IL-10 overexpression(P0.05)and the expression of Foxp3 mRNA significantlyincreased(P0.05).The secretion of IFN-,IL-4,IL-17A significantly decreased(P0.05)and the secretion of Foxp3 signifi-cantly increased(P0.05).After IL-10 inhibition,the mRNA levels of IFN-and IL-17A significantly increased(P0.05),andthe secretion of IFN-and IL-17A significantly increased(P0.05).Conclusion Overexpression of IL-10 can inhibite the ex-pression of IFN-,IL-4 and IL-17A,and significantly promote the expression of Foxp3.IL-10 inhibition can significantly promotethe expression of IFN-and IL-17A.Key words CD4+T cell;IL-10;Lentiviruses overexpression;siRNA inhibition白细胞介素10(IL10)是一种多效性细胞因子,在免疫调节和抗炎中发挥重要作用。IL10 具有强大的抗炎作用,确立机体的免疫耐受状态，可以抑制病原体对机体的过度免疫反应 。IL-10 在所【基金项目】宁夏自然科学基金资助项目（2 0 2 2 AAC03367）【作者单位 1.宁夏回族自治区人民医院临床医学检验诊断中心，宁夏银川7 50 0 0 22.宁夏回族自治区人民医院关节外科，宁夏银川7 50 0 0 23.宁夏医科大学第三临床医学院，宁夏银川7 50 0 0 4【作者简介 李东杰（197 2 一），博士研究生，副主任技师，主要从事输血医学和临床免疫学研究。通信作者程锁利,副主任医师,Email:文献标识码 A有固有免疫和适应性免疫应答细胞中均有分泌，但在CD4+T细胞亚群中分泌最常见,特别是Th2和Treg。IL-10 能通过抑制共刺激分子、促炎因子和趋化因子的表达影响巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞的功能。近年来,人们对IL-10的功能研究进一步深人，但仍有许多未解问题2 。有研究认为IL-10抑制促炎因子 IFN-、I L-2、I L-3、T NF-的合成3,但对CD4+T细胞亚群的具体影响仍需要进一步探讨。本研究通过 IL-10 过表达 T细胞特异性慢病毒侵染初始(naive)CD4+T 细胞和 siRNA片段抑制 IL-10 后,分析对小鼠脾脏 CD4T细胞宁夏医学杂志2 0 2 3年10 月第45卷第10 期Ningxia Med J,0Oct.2023,Vol.45,No.10Th1、T h 2、T h 17、T r e g 亚群中的 IFN-、I L-4、I L-17A、Fo x p 3基因和蛋白表达的影响。1资料与方法1.1 一般资料:雌性 BALB/c 小鼠,6 8 周龄,来自宁夏医科大学动物实验中心。小鼠被安置在温度为(221)、相对湿度为（50 1)%的环境中，光/暗周期为12 h/12 h。动物研究符合宁夏医科大学动物管理机构的规定和指南，并根据国际实验动物饲养管理评估认证委员会（AAALAC）和实验动物使用和管理委员会(IACUC)指南进行。1.2T细胞分离,CD4*T细胞分选小鼠2 只,颈椎脱白处死。将小鼠的脾脏无菌取出,置于无菌的RP-MI1640培养基（Sigma）中，加人10%胎牛血清（FBS）、青霉素（10 0 U/mL）和链霉素（10 0 U/mL）（Si g ma）。按照试剂盒说明书操作,使用脾脏淋巴细胞分离试剂盒（Solarbio Life Sciences,P.R.China）获得淋巴细胞。随后，根据美天旋公司试剂盒说明书操作,应用磁珠分选和小鼠 naive CD4*T细胞分离试剂盒（MiltenyiBiotec，德国）分离出小鼠脾脏淋巴细胞初始 CD4+T细胞（应用流式细胞仪检查,纯度大于90%）。初始CD4+T细胞在RPMI1640培养基中培养（37,5%C0,）,加入10%胎牛血清和100 U/mL浓度的青霉素和链霉素。1.3应用qRT-PCR和流式细胞术检测 IFN-IL-4、I L-17 A、Fo x p 3的表达1.3.1制备IL-10过表达T细胞特异性慢病毒载体:IL-10(Gene ID 16153,NM_010548.2,537 bp)过表达T细胞特异性慢病毒包装(绿色荧光)。通过检测 NCBI数据库,获得目的基因小鼠 IL-10 蛋白编码序列,总长达537 bp，被翻译氨基酸量为17 8 个。目的载体为 pLV-CMV-MCS-3FLAG-EF1-Zs-Green-T2A-PURO 载体。慢病毒载体系统由慢病毒载体系列、psPAX2载体和pMD2G载体三质粒组成。2 93T细胞是慢病毒的包装细胞株,其生长培养基是DMEM（内含10%FBS）。通过培养,贴壁细胞经由生长增殖可完成向单层细胞的转变。预先完成供转染之用2 93T细胞的传代（前提为具备良好的细胞培养状态，能够满足后续转染实验所需）。观察细胞密度，发现其汇合率达7 0%8 0%时，启动转染处理;制备脂转complex,脂转complex混匀后于室温中进行15min温育,然后低速滴加到2 9 3T细胞内,最后移至细胞培养箱（37、5%CO,）内进行培养。经过16 h转染，替换为新鲜的完全培养基（内含10%FBS）;转染后48 h和7 2 h分别收集2 次慢病毒上清液（48 h收集后置换新鲜完全培养基）。按照实验要求分装病毒，-8 0 冰箱保存。1.3.2慢病毒侵染naive CD4*T细胞:T细胞培养于RPMI1640（10%FBS,1%双抗）培养基中。准备879.12 孔板,将上述小鼠脾脏 naive CD4+T细胞悬液分为3孔（每孔细胞密度约0.510 7 mL），并进行标记,分别为空白（blank）组,阴性对照（OE-NC）组，IL10 过表达（0 EI L10）组。细胞用 10%FBS1640培养基正常培养，生长到90%以上，传代。先离心弃去细胞培养上清液,加2 mL的PBS清洗细胞离心弃去。加7 0 0 L的胰蛋白酶液（0.2 5%）,接着放置在COz培养箱内,计时1.5min左右,显微镜下观察细胞形态变圆后轻轻拍打培养皿，使贴壁细胞脱落。加2 mL的10%FBS1640培养基使细胞全部脱落。转移细胞混悬液至经过灭菌处理的离心管内,于室温中离心,转速为7 0 0 r/min,计时3 min。弃去上清液,用1mL的正常培养液重悬,取10 L细胞悬液加1 L的锥虫蓝混匀后,加于细胞计数板进行计数。小鼠CD4*T细胞的活力保证在95%以上，细胞铺6 孔板,每孔约2 10 5个细胞。细胞贴壁后弃上清液，换成完全培养基，加人慢病毒，混匀,培养72 h后收样,用于后续检测。病毒添加量根据下述公式计算,MOI（感染指数）=（病毒滴度病毒量)/细胞量。CD4+T 细胞 MOI=100,TLV-m-IL-10-3flag-ZsGreen-PURO慢病毒滴度为1 10 TU/mL,阴性过表达对照病毒 TLV-ZsGreen-PURO 滴度为 1 10 TU/mL。将上述细胞在6 孔板中配置2 mL的约2 10 s个/孔的T细胞悬液。把培养板移至培养箱内,接受24h预培养（培养条件为5%CO2、37）。后续按照实验所需分组进行IL-10过表达T细胞特异性慢病毒侵染，侵染7 2 h后收样。转入到提前包被好的anti-CD3的12 孔板中，各孔加人antiC D 2 8 稀释液10 L。在37 温箱孵育48 h。后续进行qRT-PCR和流式细胞术检测。各组实验独立重复3次,每组各指标有2 次重复。1.3.3qRT-PCR：根据试剂盒说明书操作，使用Trizol试剂（Invitrogen）从小鼠脾脏CD4*T细胞中提取总 RNA,使用 TB GreenTM Advantage qPCR Premix（T a k a r a）试剂盒进行反转录定量PCR（q RT PCR）反应。小鼠PCR引物应用NCBI网站上的Primer-BLAST工具设计。所有的mRNA表达都应用 GAPDH基因做内参。基因序列见表1。qRT-PCR 结果用 2 -AACi法计算。表1qRT-PCR基因引物序列基因前置引物(5-3）IFN-YGCCACGGCACAGTCATTGAIL-4ATCATCGGCATTTTGAACGAGGIL-17ATTTAACTCCCTTGGCGCAAAAFoxp3ACCATTGGTTTACTCGCATGTGAPDHCCATGTTTGTGATGGGTG反向引物(5-3)TGCTGATGGCCTGATTGTCTTTGCAGCTCCATGAGAACTACTTTCCCTCCGCATTGACACTCCACTCGCACAAAGCACTTCCTTCTTGATGTCATCATAC880.1.3.4T细胞分化：在96 孔板的每孔中，在37（含5%C0,）的完全16 40 培养基中培养初始的CD4*T细胞（约510 个细胞/孔）。4 h后,在48孔板中分别使用4 种不同的细胞因子组合将小鼠CD4+T细胞分化为T细胞的4种亚群,即Th1、T h 2、Th17 和 Treg。对于 Th1 细胞分化,应用包被的 CD3抗体（1 g/mL）和可溶性CD28抗体（1 g/mL）、IL-2(20 ng/mL)、I L-12(50 n g/m L)和抗 IL-4 抗体(10 ng/mL,BD)培养细胞7 2 h。对于 Th2细胞分化,用1 g/mL包被的 CD3抗体、1 g/mL抗CD28、20 ng/mL IL-2、10 n g/m L IL-4(BD)和 10 ng/mL抗IFN-处理细胞7 2 h。为了使细胞分化成Th17细胞,应用包被的 CD3 抗体（1 g/mL）和可溶性CD28 抗体(0.2 g/mL)、T CF-(5 ng/mL)IL-6(100 ng/mL)、抗 IFN-（10 n g/m L)、抗 IL-4(10 ng/mL)和 IL 2 3（50 n g/m L,BD）培养细胞72 h。对于调节性 T(Treg)细胞,应用包被的 CD3 抗体(1 g/mL）和可溶性CD28抗体（0.2 g/mL）、IL-2(20 ng/mL)和 TGF-1(50 ng/mL,BD)培养细胞7 2 h。1.3.5流式细胞仪检测：为了进行细胞内染色，在染色前用细胞刺激剂（Cell StimulationCocktail）加蛋白转运抑制剂（Protein Transportation Inhibitors，Invitrogen公司）刺激细胞6 h。为了检测IFN、IL-4、I L-17 A 和Foxp3在CD4*T细胞中的细胞内表达，按照试剂盒的说明，使用细胞固定/破膜试剂（Invitrogen公司）对细胞进行固定、破膜（细胞浓度约0.510/孔）。应用抗CD4（货号552 0 51）和抗CD3抗体（货号56 2 2 8 6）对细胞进行染色，然后用Invitrogen公司的固定缓冲液在4暗室中固定30 min。应用Invitrogen公司的破膜缓冲液（1x）对细胞进行破膜,然后用标记荧光色素的抗IFN（货号M1001160 9A）、抗IL4（货号8 1112 60-25）、抗IL-17A（货号192 9432）和抗Foxp3（货号56 0 414）抗CD25抗体（货号0 7 312-8 0 25,BD）染色。用BD FACSCalibur流式细胞仪（BD）对染色细胞进行检测，用FlowJoX软件(Tree-star,Inc.)分析结果。1.4 IL-10抑制后检测 IFN-、I L-4、I L-17 A、Foxp3的基因和蛋白水平表达：准备48 孔板,将上述磁珠分选后得到的小鼠脾脏 naive CD4+T细胞悬液（每孔细胞密度约0.510 7 个/mL)进行标记,分别为阴性对照组,IL-10 抑制组（siRNA 基因干扰组）。由上海吉玛基因合成3个IL10 干扰片段，分别为IL-10-mus-217（货号 5156 2)、IL-10-mus-304（货号5156 3）、IL10 m u s 490（货号5156 4）相应阴性对照(NC）,基因序列见表2。取2 支 PCR管,标记为IL-10基因干扰组和阴宁夏医学杂志2 0 2 3年10 月第45卷第10 期Ningxia Med J,Oct.2023,Vol.45,No.10性对照组（NC），各加人RPMI1640培养基（无血清）50L,稀释好的IL-10基因干扰片段（150 nmol）或阴性对照各30 L,轻轻混匀,再各加人Hiperfect转染试剂（QIACEN公司，货号30 17 0 5)10 L,轻轻混匀,室温放置10 min以上。将上述IL10 基因干扰片段和相应阴性对照加人48 孔板对应各孔细胞悬液中,放人37 培养箱（5%CO,）中培养4h进行下一步操作。将上述48 孔板中细胞,加人含10%FBS1%双抗的RPMI1640培养基330 L,转人到提前包被好的antiC D 3的2 4孔板中,加人anti-CD28稀释液10 L。置于37 温箱孵育48 h。后续进行qRTPCR和流式细胞检测IFN-、I L-4、IL-17A、Fo x p 3的表达,检测方法同上。各组实验独立重复3次，每次实验指标2 次重复。表2 IL-10抑制片段引物序列基因前置引物(5-3)IL-10-mus-217GGUGAAGACUUUCUUUCAATTIL-10-mus-304 GCCAAGCCUUAUCGGAAAUTTIL-10 mus-490GGUGAAGAGUGAUUUUAAUTT阴性对照UUCUCCGAACGUGUCACGUTTACGUGACACGUUCGGAGAATT1.5统计学方法：应用Prism7.0（G r a p h Pa d 软件）进行统计分析，数据来自至少3次独立的实验，每次实验指标2 次重复，以求s表示；计量资料采用t检验或Mann-WhitneyU检验,以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1IL-10过表达后荧光定量PCR检测IFN-、IL-4、IL-17 A、Fo x p 3 m RNA 表达:与阴性对照组(OE-NC)比较,IL-10过表达组（OEI L-10)IFN-、I L 4、I L 17 A m RNA 表达下降(P0.05）,Fo x p 3 m RNA 表达上升（P0.05),见表3。表3荧光定量PCR检测IFN-、IL-4、IL-17 A、Foxp3mRNA表达(xs)分组n阴性对照组61.002 0.064IL-10过表达组60.255 0.045值9.55P值0.052.2IL-10 过表达后流式细胞术检测 IFN-IL-4、I L-17 A、Fo x p 3 的分泌比率:与阴性对照组(OE-NC)比较,IL-10 过表达组（OEI L10)IFN-、I L-4、I L-17 A 表达降低(P0.05),Foxp3表达明显增高（P0.05），见表4（目次后）。2.3IL-10抑制（siRNA片段干扰）的效果：小鼠naive CD4+T细胞分别用150 nmol的IL-10-反向引物(5-3)UUGAAAGAAAGUCUUCACCTTAUUUCCGAUAAGGCUUGGCTTAUUAAAAUCACUCUUCACCTTIFN-IL-41.061 0.2780.147 0.0333.260.05IL-17A0.918 0.0530.285 0.0419.420.05Foxp31.0880.09512.440 1.7996.300.05宁夏医学杂志2 0 2 3年10 月第45卷第10 期NingxiaMed J,Oct.2023,Vol.45,No.10mus-217、I L-10 -m u s -30 4、I L-10 -m u s -490 干3讨论扰片段转染后,荧光定量PCR检测IL-10的表达。CD4+T细胞作为辅助型T淋巴细胞,包括 Th1、与阴性对照组比较,IL-10-mus-217 转染组 IL-Th2、T h 17、T r e g 等亚群,分别主要分泌 IFN-、IL-10mRNA表达量明显减少（P0.05）。I L-10-4、I L-17 A、Fo x p 3等细胞因子,在适应性免疫应答中mus-304转染组IL-10 mRNA表达量明显下调发挥重要作用。在小鼠脾脏 CD4+T细胞亚群中利(P0.05)。I L-10 -m u s -49 0 转染组的 IL-10用 T细胞特异性慢病毒过表达 IL-10 后,在基因水mRNA表达量明显降低（P0.05）。I L-10-m u s-平明显降低了IFN-、IL-17 A、IL-4的表达,明显217对IL-10抑制效果最好,后续将应用IL-10-升高了Foxp3 的基因表达,同时应用流式细胞术检mus-217进行实验，见表5。测到明显降低的IFN-、I L-17 A、I L-4的分泌,明表4流式细胞术检测IFN-、I L-4、I L-17 A、显升高的 Foxp3 的表达,表明IL-10 能够使 Th1、Foxp3的分泌比率(%,xs)Th2及 Th17 亚群的免疫反应减弱,对 Treg 细胞分组IFN-阴性对照组621.97 2.851-10过表达组64.37 0.75值5.98P值0.05表5IL-10抑制（siRNA片段干扰）的效果（xs）分组IL-10 mus-217阴性对照组6297.60 20.39IL-10抑制组6值值2.4IL-10 抑制后对 IFN-、I L-4、I L-17 A、Foxp3 mRNA表达的影响：与阴性对照组比较,IL-10抑制组IFN-、I L-17 A m RNA 表达明显上升(P0.05),见表6。2.5流式细胞术检测IL-10抑制后IFN-IL-4、I L-17 A、Fo x p 3 的表达：与阴性对照组比较,IL-10抑制组IFN-、IL-17 A 表达升高（P0.05）,见表7,图1至图4（目次后）。表 6 IL-10 抑制后对 IFN-、IL-4、IL-17 A、Foxp3mRNA表达的影响(xs)分组IFN-阴性对照组60.63 0.08IL-10抑制组61.14 0.09值4.25P值0.05表7流式细胞术检测 IL-10 抑制后 IFN-、IL-4、IL-17A、Fo x p 3的表达(xs)分组nIFN-阴性对照组62.49 0.291.50 0.201.33 0.23IL-10 抑制组63.69 0.12 1.79 0.27 2.27 0.08t值4.21P值0.05881.IL-4IL-17A15.00 2.2923.003.550.06 0.034.48 0.846.525.070.050.05IL-10-mus-304297.60 20.392.48 1.56137.60 7.1414.437.410.050.050.050.05Foxp313.32 2.7951.60 6.195.640.05IL-10-mus-490297.60 20.39187.20 16.434.220.05Foxp30.590.05Foxp3的分泌具有促进作用,在基因和蛋白水平验证了 IL-10 对 CD4+T细胞亚群分化的影响。通过siRNA片段抑制IL-10后,在基因水平明显升高IFN-、I L-17 A 的表达,但对 IL-4和Foxp3影响不显著，同时应用流式细胞术检测到明显升高的IFN-、I L-17 A 分泌水平,但对 IL-4和Foxp3影响不明显。提示 IL-10对IFN-、I L-17 A 的表达起反向调控作用。IL10 是一种重要的抗炎细胞因子及免疫抑制因子,是免疫系统对微生物抗原反应的负调控因子。尽管先天和适应性免疫系统的几乎所有细胞都能产生IL10,但T细胞在许多情况下构成了IL10 的重要来源,主要由Th2和 Treg细胞产生。IL10 对于分泌 Th17 和 Th1 亚群的标志性因子IL-17A 和IFN-的 CD4*T 细胞具有抑制作用4,本研究在小鼠脾脏 CD4+T细胞中通过 IL-10的过表达和抑制进一步明确了以上结论。IL-10通过调节机体过度活化的自身免疫性疾病的过度免疫反应，从而实现对机体的保护作用。IL10 产生的水平决定免疫调节和炎症与体液反应之间的平衡。IL-10 发现的早期,它是由 Th2 细胞所产生的一种细胞因子,并且能抑制Th1 细胞的功能5。IL-10不但能阻止某些细胞因子产生，还能促进某些细胞因子分泌和某些共刺激分子的共同表达，诸如CD80、C D 8 6 和MHCI类分子等6 。IL-10可以和表达于大部分免疫细胞的IL10 R及IL-10R受体相结合，调节多种固有和适应性免疫应答细胞引起各种不同的免疫病理反应,诸如诱导 Treg 细胞和 Trl 细胞,或者在巨噬细胞和树突状细胞中发挥自分泌抑制效应7 。本研究在小鼠脾脏CD4+T细胞中应用过表达 IL-10验证了对 Treg 细胞中 Foxp3的促进作用。IL-10 作为Th2型细胞因子,抑制Th1型免疫反应,同时抑制IL-4的分泌,与体内的超敏反应、类风湿关节炎、过敏性哮喘、炎症性肠病等密切相关,也可以用来治疗某些自身免疫性和炎症性疾病8-9。本研究通过在小鼠脾脏 CD4+T细胞中对 IL-10 的抑制和过表达进一步验证了IL-10对IFN和IL-4的抑制作882用。IL-10和IL-10R2小鼠具有明显的Th1极化反应,并且易患炎症性肠病,表明 IL-10 通过抑制Th1 亚群在炎症性肠病等免疫性疾病的发病机制中具有重要作用10-1在病原体对宿主的免疫活动中,IL10 发挥的作用至关重要。IL-10不但在宿主与病原体免疫平衡中具有调节作用,并且参与在巨噬细胞对抗病原体所起的抑制作用过程，从而有利于细胞内病原体的生存。在病原体感染过程中,降低的 IFN水平与升高的IL10 水平有利于病原体逃避宿主的免疫攻击，导致病原体在体内持续生存12-14。在没有强化的免疫病理反应的情况下，IL10 水平降低导致一些病原体更好地被清除15。对IL10 缺陷的研究,包括在小鼠中 IL-10 基因的抑制或者通过抗体阻断IL-10受体,大多数情况下有利于病原体在细胞内被控制和清除16-17 。IL-10缺陷导致适应性免疫反应增强,CD4*T细胞中Th1亚群的标志性因子IFN-产生增多,正常的促炎反应被强化,有利于病原体感染的控制18-2 0 1。IL-10的分泌增多扰乱机体对病原体的炎症反应和适应性免疫，为病原体提供持续生存的温床2 1。综上所述,IL10 已成为免疫反应的主要调节因子,是炎症性疾病和感染性疾病的关键刺激因子，发挥作用具有多效性和双重性，需要对其生物学功能和相关分子机制进一步深入探索。过表达IL-10后引起 CD4*T细胞中 IFN-、I L-17 A 的基因和蛋白水平的明显降低。抑制IL一10 后引起CD4*T细胞中 IFN-和 IL-17A 的基因和蛋白水平明显升高。IL-10调节T细胞免疫应答,特别是反向调控CD4*T细胞中 Th1、T h 17 亚群中的IFN-、I L-17 A因子，在机体促炎和抗炎过程中发挥重要作用。参考文献1叶芳,文瑞婷,杨志刚,IL-10 在移植物抗宿主病免疫调节作用中的研究进展J.中国免疫学杂志，2 0 2 2,38（19）：2 42 5-2 42 9.2RASQUINHA M T,SUR M,LASRADO N,et al.IL-10 as a Th2cytokine:differences between mice and humans J.Journal of Im-munology,2021,207(9);2205-2215.3吴俊铮,宋雅娟,余州,等.IL-10在增生性瘢痕中的作用研究进展J.细胞与分子免疫杂志，2 0 2 2,38（4）：36 8-37 3.4王楠楠，王婧，刘嗣同，等.TLR2、I L-10 m RNA 的表达及树突状细胞分布在外阴硬化性苔藓中的临床意义J.中国免疫学杂志,2 0 2 1,37(8):9 7 9 -9 8 2.5赵静，魏苏，李庆风.血清IL-10、C D 4+T 淋巴细胞在自身免疫性甲状腺炎患者中的表达及临床意义J.临床和实验医学杂志,2 0 2 1,2 0(2 1):2 30 7 2 311.6 WEI H X,LI BF,SUN Y A,et al.Interleukin-10 family ceytokines宁夏医学杂志2 0 2 3年10 月第45卷第10 期Ningxia Med J,ct.2023,Vol.45,No.10immunobiology and structure J.Advances in Experimental Medi-cine and Biology,2019,1172:79-96.7WEI H X,WANG B L,LI B F.IL-10 and IL-22 in mucosal im-munity:driving protection and pathology J.Frontiers in Immunolo-gy,2020,11:1315.8BRANCHETT W J,STOLTING H,OLIVER R A,et al.A T cell-myeloid IL-10 axis regulates pathogenic IFN-gamma-dependentimmunity 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