MenSCs对PCOS大鼠卵巢损伤修复、生殖系统及HSP90表达的影响.pdf

论著M e n S C s对P C O S大鼠卵巢损伤修复、生殖系统及H S P 9 0表达的影响*常庆玲1,2 蔡文涛1,2 陈丽华3(1.中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院生殖科,河南 洛阳 4 7 1 0 0 0;2.慈铭博鳌国际医院生殖中心,海南 琼海 5 7 1 4 4 2;3.河北北方学院附属第一医院生殖科,河北 张家口 0 7 5 0 0 0)【摘要】目的 研究经血间充质干细胞(M e n S C s)移植对多囊卵巢综合征(P C O S)大鼠卵巢损伤修复、生殖系统及热休克蛋白9 0(H S P 9 0)表达的影响。方法 选取健康S P F级S D雌性大鼠4 0只,随机分为健康组、模型组、治疗组、对照组,每组1 0只。除健康组外,剩余3 0只大鼠均建立P C O S模型,其中1 0只为模型组;1 0只P C O S模型大鼠于尾部静脉注射2 0 0 L(51 07个/m L)M e n S C s悬液,共饲养2周为治疗组;1 0只P C O S模型大鼠给予二甲双胍2 0 m gk g-1d-1灌胃,共饲养2周为对照组。E L I S A检测性激素水平。阴道涂片观察动情周期。R T-P C R检测生殖功能相关指标P P A R G 1、N C O R 1、HD A C 3 mR NA表达水平。HE染色观察卵巢病理形态。免疫印迹检测H S P 9 0。结果 与健康组相比,模型组大鼠动情周期无规律并缩短(P0.0 5);与模型组相比,治疗组与对照组大鼠动情周期均有所改善(P0.0 5)。模型组大鼠有较多闭锁坏死卵泡及炎性细胞;与模型组相比,治疗组与对照组大鼠不同时期卵泡数均有所改善。与健康组相比,模型组F S H、P P A R G 1降低,L H、T、N C O R 1、H D A C 3升高(P 0.0 5);与模型组相比,治疗组F S H、P P A R G 1升高,L H、T、N C O R 1、H D A C 3降低(P 0.0 5)。与健康组相比,模型组H S P 9 0蛋白表达降低(P 0.0 0 5);与模型组相比,治疗组H S P 9 0蛋白表达升高(P 0.0 5)。结论 移植M e n S C s细胞后可改善P C O S大鼠的生殖功能及卵巢功能,可能通过上调H S P 9 0表达影响性激素水平从而改善卵巢损伤。【关键词】M e n S C s细胞移植;热休克蛋白9 0;卵巢损伤修复;生殖系统【中图分类号】R 7 1 1.7 5 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 0 3 基金项目:河北省卫生厅科研基金项目(2 0 1 8 0 8 3 6);张家口市科技计划项目(1 9 2 1 0 4 1 D)通讯作者:陈丽华,E-m i a l:j i l a 8 8 8 2 0 4 4 81 6 3.c o m引用本文:常庆玲,蔡文涛,陈丽华.M e n S C s对P C O S大鼠卵巢损伤修复、生殖系统及H S P 9 0表达的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 2):1 7 2 9-1 7 3 4.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 2.0 0 3T h e e f f e c t o f M e n S C s o n P C O S r a t o v a r i a n i n j u r y r e p a i r,r e p r o d u c t i v e s y s t e m a n d h e a t s h o c k p r o t e i n 9 0 e x p r e s s i o nC H A N G Q i n g l i n g1,2,C A I W e n t a o1,2,C H E N L i h u a3(1.D e p a r t m e n t o f R e p r o d u c t i o n,T h e 9 8 9t h H o s p i t a l o f J o i n t L o g i s t i c S u p p o r t F o r c e o f C h i n e s e P e o p l e s L i b e r a t i o n A r m y,L u o y a n g 4 7 1 0 0 0,H e n a n,C h i n a;2.R e p r o d u c t i v e C e n t e r,C i m i n g B oa o I n t e r n a t i o n a l H o s p i t a l,Q i o n g h a i 5 7 1 4 4 2,H a i n a n,C h i n a;3.D e p a r t m e n t o f R e p r o d u c t i o n,T h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a l o f H e b e i N o r t h U n i v e r s i t y,Z h a n g j i a k o u 0 7 5 0 0 0,H e b e i,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f M e n S C s t r a n s p l a n t a t i o n o n H S P 9 0 e x p r e s s i o n,o v a r i a n i n j u r y r e p a i r a n d r e p r o d u c t i v e s y s t e m i n P C O S r a t s.M e t h o d s F o r t y h e a l t h y f e m a l e S D r a t s w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o h e a l t h y g r o u p,m o d e l g r o u p(P C O S r a t s),t r e a t m e n t g r o u p(m o d e l+M e n S C s t r a n s p l a n t a t i o n)a n d c o n t r o l g r o u p(m o d e l+m e t-f o r m i n).P C O S m o d e l w a s e s t a b l i s h e d i n m o d e l g r o u p,a n d M e n S C s s u s p e n s i o n w a s i n j e c t e d 2 0 0L(51 07 P C S/m L)i n t o t a i l v e i n o f r a t s f o r 2W.T h e c o n t r o l g r o u p w a s g i v e n m e t f o r m i n 2 0 0 m gk g-1 i n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o n f o r a t o t a l o f 2W.E L I S A w a s u s e d t o t e s t t h e s e x h o r m o n e l e v e l s.V a g i n a l s m e a r w a s u s e d t o o b s e r v e t h e e s t r o u s c y c l e.R e p r o d u c-t i v e f u n c t i o n r e l a t e d i n d e x e s P P A R G 1,N C OR 1 a n d HD A C 3 w e r e d e t e c t e d b y R T-P C R.HE s t a i n i n g w a s u s e d t o o b s e r v e 9271西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2t h e p a t h o l o g i c a l m o r p h o l o g y o f o v a r y.W e s t e r n b l o t t i n g w a s u s e d t o d e t e c t H S P 9 0.R e s u l t s T h e e s t r o u s c y c l e o f m o d e l g r o u p w a s i r r e g u l a r a n d s h o r t e n e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,b o t h t r e a t m e n t g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p w e r e i m p r o v e d(P0.0 5).T h e r e w e r e m o r e n e c r o t i c f o l l i c l e s a n d i n f l a mm a t o r y c e l l s i n m o d e l g r o u p.C o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,t r e a t m e n t g r o u p a n d c o n t r o l g r o u p r a t s i m p r o v e d.C o m p a r e d w i t h h e a l t h y g r o u p,F S H a n d P P A R G 1 i n m o d e l g r o u p w e r e d e c r e a s e d,w h i l e LH,T,N C OR 1 a n d HD A C 3 w e r e i n c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,F S H a n d P P A R G 1 i n t r e a t m e n t g r o u p w e r e i n c r e a s e d,w h i l e LH,T,N C OR 1 a n d HD A C 3 w e r e d e c r e a s e d(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h h e a l t h y g r o u p,H S P 9 0 p r o t e i n e x p r e s s i o n i n m o d e l g r o u p w a s d e c r e a s e d(P0.0 0 5).C o m p a r e d w i t h m o d e l g r o u p,H S P 9 0 p r o t e i n e x-p r e s s i o n w a s i n c r e a s e d i n t r e a t m e n t g r o u p(P0.0 5).C o n c l u s i o n M e n S C s t r a n s p l a n t a t i o n c a n i m p r o v e t h e r e p r o d u c-t i v e f u n c t i o n a n d o v a r i a n f u n c t i o n o f P C O S r a t s,w h i c h m a y a f f e c t t h e l e v e l o f s e x h o r m o n e s b y u p r e g u l a t i n g t h e e x p r e s-s i o n o f H S P 9 0,t h e r e b y i m p r o v e o v a r i a n i n j u r y.【K e y w o r d s】M e n S C s c e l l t r a n s p l a n t a t i o n;H S P 9 0;O v a r i a n i n j u r y r e p a i r;R e p r o d u c t i v e s y s t e m 多囊卵巢综合征(P o l y c y s t i c o v a r y s y n d r o m e,P-C O S)是常见的内分泌紊乱疾病,其发病率高达5%1 0%,是女性无排卵不孕的的最常见原因1。P C O S通常在青少年时期开始出现,其临床表现具有显著的差异性,常见的临床表现为月经异常、不孕、多毛、痤疮等。此外,P C O S还常伴有高血压、心血管疾病、子宫内膜癌等多种并发症。相关调查显示2,育龄期女性P C O S发病率接近1 5%,在无排卵性不孕患者中该病的发病率在9 0%以上,是目前致使女性不孕的主要原因。P C O S引起的无排卵性不孕是妇科的研究难点,也是我国生育保健的难题。研究发现3,抑制干细胞后改善局部微环境及病理状态,能提升机体相关器官的功能,且对受试者无不良影响。目前,关于间充质干细胞应用于妇科内分泌疾病治疗的研究逐渐增加。研究发现4,将骨髓间充质干细胞(B o n e m a r-r o w-d e r i v e d M S C s,BM-M S C s)移植到卵巢早衰大鼠体内,发现可缓解顺铂引发的颗粒细胞凋亡;另外,研究将经血间充质干细胞(M e n s t r u a l b l o o d m e s e n c h y-m a l s t e m c e l l s,M e n S C s)移植到A s h e r m a n综合征大鼠体内,发现在移植后可增强血管生成因子和抗炎性因子的分泌,提高A s h e r m a n综合征大鼠的妊娠率以及产仔率5。M e n S C s是从育龄女性的经血中提取出的,易于收集,来源丰富,其免疫原性与炎性反应较低,显著优于其他类干细胞,同时还具有较高的组织容受性,增殖及自我更新能力较好,还可分化为骨细胞、软骨细胞、神经元细胞等6。另有研究发现7,M e n S C s在特定条件下还可分化为卵巢颗粒样细胞并具有该细胞的相关功能,具有修复损伤卵巢组织并促进再生的作用。另外,热休克蛋白(H e a t s h o c k p r o-t e i n,H S P)也参与P C O S的产生与发展,并在其中发挥着重要的作用。H S P 9 0隶属于H S P家族,具有分子伴侣等多种功能,参与免疫调控、抗细胞凋亡等过程。研究显示8,P C O S是由于机体处于长期应激或卵巢内卵母细胞/颗粒细胞不正常凋亡所致,而这两种状态均有H S P的参与。目前有关运用M e n S C s治疗P C O S的相关文献较少,具体的治疗机制尚未完全掌握。因此,本文通过构 建P C O S动 物 模 型,研 究M e n S C s移植对P C O S大鼠H S P 9 0表达、卵巢损伤修复及生殖系统的影响。1 材料与方法1.1 实验动物 选取健康S P F级S D雌性大鼠4 0只,体质量2 0 03 0 0 g,由长沙市海天勤公司提供 生产许可证号:S C X K(湘)-2 0 1 9-0 0 1 4。大鼠于中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院动物实验室进行饲养,实验室保持整洁、通风,维持昼夜规律,室温在2 02 2,相对湿度在5 5%左右,每个鼠笼中饲养5只大鼠,鼠笼中保持充足的饮用水及营养饲料,适应性饲养1周后进行实验。本实验已通过我院动物伦理委员会批准(批号:1 9 0 8 1 1 2 3)。1.2 主要实验试剂及仪器 F S H、LH、LH试剂盒(上海研生实业公司),P P A R G 1、N C O R 1、HD A C 3引物序列(上海齐源生物公司),来曲唑(上海沪峥生物科技有限公司,货号:H h z y-2 8 8 5),羟甲基纤维素钠(武汉荣灿生物科技有限公司,货号:9 0 8 5-2 6-1),P C R仪(北京福意电器公司,型号:4 3 1 L),H S P 9 0一抗(中国,碧云天生物公司),辣根过氧化物酶二抗(北京博尔西科技公司)。1.3 细胞来源及培养 M e n S C s细胞株由杭州易文赛生物技术有限公司提供。将M e n S C s细胞放入含有1 0%胎牛学清的DMEM培养基中常规培养,待细胞融合至7 0%8 0%时传代,取第3代细胞进行实验。显微镜下观察M e n S C s呈梭状,成旋涡状排列,贴壁生长,具有典型的M S C s的细胞特征(图1)。运用流式细胞仪检测了其表面分子标志物,显示在该细0371西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2胞中存在C D 2 9、C D 7 3、C D 9 0、C D 1 0 5的表达,不表达C D 3 4、C D 4 5、C D 1 1 7和HL A-D R,符合国际细胞治疗学会建议的关于间充质干细胞的标准。图1 M e n S C s细胞形态F i g u r e 1 M o r p h o l o g y o f M e n S C s c e l l s注:A.M e n S C s细胞原代;B.M e n S C s细胞第3代。1.4 模型建立及分组 4 0只大鼠按照随机数字方法分为健康组、模型组、治疗组及对照组,每组1 0只。除健康组外,剩余3 0只大鼠均建立P C O S模型9:给予1 m gk g-1d-1来曲唑(溶于0.5%羟甲基纤维素钠1 m L)灌胃,高脂饲料喂养,直至出现多囊卵巢样改变以及高表达的睾酮(t e s t o s t e r o n e,T)提示建模成功。1 0只P C O S模型大鼠为模型组;1 0只P C O S模型大鼠于大鼠尾部静脉注射2 0 0 L(51 07个/m L)M e n S C s悬液1 0,共饲养2周为治疗组;1 0只P-C O S模型大鼠予二甲双胍2 0 m gk g-1d-1灌胃,共饲养2周为对照组。1.5 检测指标 1.5.1 E L I S A检测性激素水平 取4组大鼠外周血2 m L,离心5 m i n,1 2 5 0 r/m i n,后取血清。E L I S A试剂盒检测促卵泡激素(f o l l i c l e-s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)、黄体生成素(l u t e i n i s i n g h o r m o n e,LH)、睾酮(T),实验严格按照试剂盒说明书进行。1.5.2 阴道涂片观察动情周期 每日上午8:0 0时用棉签将大鼠阴道口处赃物擦净,运用无菌柔软的习惯吸取0.5 m L的生理盐水放于阴道口0.5 c m处进行吹打,并冲洗,吸出冲洗液,离心1 m i n,3 0 0 0 r/m i n,吸取5 0 L液体放入载玻片上,涂匀后晾干。4%P F A滴至涂片上固定标本 3 0 m i n。P B S 浸泡,摇床振动,清洗后涂在载玻片上,吉姆萨染色,冲洗后光镜下观察,根据细胞种类、形态判断动情周期。动情前期:有大量核上皮细胞,圆形深染;动情期:大量角化细胞,无核片状;动情后期:可见上皮细胞,角化细胞,白细胞,各占三分之一;动情间期:有大量白细胞。见图2。1.5.3 R T-P C R检测生殖功能相关指标P P A R G 1、N C O R 1、HD A C 3 mR NA表达水平 取4组大鼠卵巢组织,剪碎、研磨、离心后,T r i z o l提取总R NA后逆转录合成c D NA。P C R反应条件:9 4 5 m i n;9 4 3 0 s,7 2 5 0 s,3 6个循环;7 2 1 0 m i n。以U 6为内参,用2-C t计算相对表达量,引物序列见表1。图2 健康大鼠与模型大鼠阴道涂片F i g u r e 2 V a g i n a l s m e a r s o f h e a l t h y a n d m o d e l r a t s注:A.健康大鼠阴道涂片;B.P C O S大鼠阴道涂片。表1 引物序列T a b l e 1 P r i m e r s e q u e n c e s基因方向引物序列P P A R G1F5 -T G GAG T T T T A T A T T T G G G T T G T T T T-3 R5 -C A C AA TAAAA C C C C TA C T C A C C-3 NC O R1F5 -G G C A C A G T C AA G G C T GA GAA T G-3 R5 -A T G G T G G T GAA GA C G C C A G T A-3 HD A C3F5 -C T GAA C C A T G C A C C C A G T G T C-3 R5 -C G G C A T C C A T G C T G C T C T T A-3 U6F5 -G C T T C G G C A G C A C A T A TA C T AAAA T-3 R5 -C G C T T C A C GAA T T T G C G T G T C A T 3-3 1.5.4 HE染色观察卵巢病理形态并计数 取4组大鼠戊巴比妥钠麻醉后处死,取卵巢组织,手术刀剪成小块,甲醛固定,冲洗1 h,脱水,浸蜡,包埋,切5 m片,HE染色后中性树胶封固,光镜下观察卵巢组织病理学形态并计数卵泡数。1.5.5 免疫印迹检测H S P 9 0 取4组大鼠卵巢组织剪碎后研磨,裂解液裂解,冰浴中静置2 0 m i n后,离心取上清,B C A测定蛋白浓度,电泳仪电泳,后进行转膜,转膜终止后,P B S冲洗5 m i n,用丽春红染膜,观察转膜效果,然后用P B S将丽春红冲洗干净,用封闭液封闭1.5 h,按 照 一 定 比 例 稀 释 一 抗,加 入 稀 释 的H S P 9 0(1 5 0 0)一抗,孵育过夜,P B S清洗,加入辣根过氧化物酶二抗(1 2 0 0 0),孵育1 h后清洗,E C L化学发光试剂盒曝光显影3 m i n,计算H S P 9 0蛋白相对表达量。1.6 统计学分析 采用G r a p h P a d P r i s m 8.0统计学软件进行分析,计数资料采用(xs)表示,多组间对比采用单因素方差分析,多组内两两比较采用L S D-t法检测。以P0.0 5表示差异有统计学意义。2 结果2.1 M e n S C s对4组大鼠动情周期的影响 健康组大鼠动情周期稳定;与健康组相比,模型组大鼠动情1371西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2周期无规律,动情前期、动情间期时间延长,动情期时间缩短(P0.0 5);与模型组相比,治疗组与对照组小鼠动情周期数、动情期时间增加,间期时间减少,周期相对规律(P0.0 5),见表2。表2 M e n S C s对4组大鼠动情周期的影响(xs)T a b l e 2 E f f e c t o f M e n S C s o n e s t r o u s c y c l e o f r a t s i n e a c h g r o u p组别n动情周期数(个)动情前期(d)动情期(d)动情后期(d)动情间期(d)健康组1 06.6 10.9 43.6 41.2 11 2.4 22.1 47.7 61.8 63.7 52.1 1模型组1 03.7 11.9 59.2 62.1 34.5 22.6 16.7 12.0 87.5 22.9 6治疗组1 05.2 41.1 67.9 42.2 87.1 42.3 86.2 23.0 75.9 72.6 5对照组1 05.2 11.2 08.0 12.3 17.1 02.4 16.2 43.1 06.0 12.6 3F7.5 1 21 4.6 1 01 9.2 6 00.7 7 63.5 5 2P0.0 50.0 50.0 50.5 20.0 2注:与健康组比较,P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。2.2 M e n S C s对4组大鼠性激素水平的影响 与健康组相比,模 型组F S H降 低、LH与T升 高(P0.0 5);与模型组相比,治疗组F S H升高、LH与T降低(P0.0 5),见表3。表3 4组大鼠性激素水平比较(xs)T a b l e 3 E f f e c t s o f M e n S C s o n s e x h o r m o n e l e v e l s i n e a c h g r o u p组别nF S H(mU/mL)L H(n m o l/L)T(n m o l/L)健康组1 01 6.3 72.1 49.3 21.4 61.2 30.1 7模型组1 07.2 11.5 42 0.3 42.8 11.6 80.2 6治疗组1 01 3.2 62.0 51 6.2 12.3 71.4 10.2 8对照组1 01 3.1 82.1 21 6.3 22.2 51.4 50.3 1F3 7.4 9 04 0.4 3 05.0 5 2P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与健康组比较,P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。2.3 M e n S C s对4组大鼠生殖功能相关指标mR NA表达的影响 与健康组相比,模型组P P A R G 1 mR-NA降 低,N C O R 1 mR NA、HD A C 3 mR NA升 高(P0.0 5);与模型组相比,治疗组P P A R G 1 mR NA升高,N C O R 1 mR NA、HD A C 3 mR NA降 低(P0.0 5),见表4。表4 4组大鼠生殖功能相关指标m R N A表达比较(xs)T a b l e 4 E f f e c t s o f M e n S C s o n t h e m R N A e x p r e s s i o n o f r e p r o d u c t i v e f u n c t i o n r e l a t e d i n d i c a t o r s i n e a c h g r o u p o f r a t s组别nP P A R G 1 mR NA N C O R 1 mR NA HD A C 3 mR NA健康组1 02.3 50.2 11.0 20.0 31.0 50.0 2模型组1 00.5 20.0 62.6 80.2 62.5 40.2 7治疗组1 01.6 70.1 21.5 90.1 31.5 20.1 1对照组1 01.6 10.1 51.6 10.1 21.5 50.0 8F2 7 0.8 0 01 9 2.5 0 01 7 1.1 0 0P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与健康组比较,P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。2.4 M e n S C s对4组大鼠卵巢组织病理形态的影响 健康组大鼠卵巢组织结构正常;模型组大鼠卵巢结构紊乱,可见较多闭锁坏死卵泡、较多卵泡囊性扩张、颗粒细胞疏松且层数减少、成熟卵泡内未见卵母细胞、放射冠消失,发育期卵泡与黄体数量明显减少;与模型组相比,治疗组与对照组大鼠卵巢组织有所改善,见图3。与健康组相比,模型组原始卵泡、生长卵泡数量减少,闭锁卵泡数量增加(P0.0 5);与模型组相比,治疗组与对照组生长卵泡数量增加、闭锁卵泡数量减少(P0.0 5),见表5。2.5 4组大鼠卵巢组织H S P 9 0蛋白表达的影响 健康组、模型组、治疗组及对照组的H S P 9 0蛋白表达水平分别 为(1.5 20.2 5)、(0.2 60.0 3)、(0.8 50.1 1)及(0.8 70.1 0)。与 健 康 组 相 比,模 型 组H S P 9 0蛋白表达降低(t=2 0.4 5 0,P0.0 0 1);与模型组相比,治疗组H S P 9 0蛋白表达升高(t=2 5.3 3 0,P0.0 0 1);治疗组与对照组H S P 9 0蛋白表达水平比较差异无统计学意义(t=0.5 9 5,P=0.5 5 9),见图4。3 讨论应激状态通过激活H S P 9 0影响性激素平衡,使得卵泡发育失常,导致多囊卵巢发生1 1。H S P 9 0主要定位于卵巢的颗粒细胞中,在闭锁的卵泡中显著减少1 2-1 3。LH通过刺激卵泡膜增加雄激素含量,阻滞卵泡成熟,未成熟的卵泡会分泌雌二醇并转化为雌酮,此时机体雌酮为异常高表达,促进LH分泌,形成恶性循环,使F S H水平降低,从而发展为多囊卵巢的症状1 4。本研究结果显示,P C O S大鼠无明显动情周期,且促黄体酮生成素、睾酮水平增加,呈现多囊卵巢样病变,同时H S P 9 0水平下降,与吴庚香等1 5报道一致。M e n S C s细胞具有较低的免疫原性,可以逃避宿主免疫系统的清除而不引起免疫应答,是M e n S C s细胞成为临床细胞治疗强有力的候选者的原因之一1 6。与其他多种干细胞相比,M e n S C s细胞具有增殖快等特点,异体移植成功率高,当M e n S C s细胞移植于机2371西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2 图3 M e n S C s对4组大鼠卵巢组织病理形态的影响F i g u r e 3 E f f e c t o f M e n S C s o n p a t h o l o g i c a l m o r p h o l o g y o f o v a r i a n t i s s u e s o f r a t s i n e a c h g r o u p注:A、E为健康组(A:2 0 0,E:4 0 0);B、F为模型组(B:2 0 0,F:4 0 0);C、G为治疗组(C:2 0 0,G:4 0 0);D、H为对照组(D:2 0 0,H:4 0 0)。表5 4组不同时期卵泡数比较(xs,个)T a b l e 5 F o l l i c u l a r s u r g e r y i n d i f f e r e n t p e r i o d s i n e a c h g r o u p组别n原始卵泡生长卵泡闭锁卵泡健康组1 07 3.1 55.9 41 6 8.4 52 6.1 72 4.6 83.5 6模型组1 05 8.2 24.7 11 0 5.7 61 7.6 53 6.1 22.6 7治疗组1 05 9.9 85.1 81 4 8.7 62 5.8 12 1.2 32.5 5对照组1 05 7.6 44.8 71 4 6.2 22 6.3 42 0.6 42.3 8F1 9.9 31 1.7 56 4.7 3P0.0 0 10.0 0 10.0 0 1注:与健康组比较,P0.0 5;与模型组比较,P0.0 5。图4 M e n S C s对4组大鼠卵巢组织H S P 9 0蛋白表达的影响F i g u r e 4 E f f e c t o f M e n S C s o n H S P 9 0 p r o t e i n e x p r e s s i o n i n o v a r i a n t i s-s u e s o f r a t s i n e a c h g r o u p体内后,通过“归巢”方式修复损伤卵巢1 7-1 9。有研究2 0显示,M e n S C s可能只在P C O S特殊病理条件下起作用,通过这种环境里的某种机制增加了P C O S大鼠芳香化酶的产生,进而促使卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化量增加。目前已有研究证实9二甲双胍对P C O S的治疗效果显著,因此本研究运用二甲双胍作为对照组,证实移植M e n S C s后对P C O S的治疗效果。在本研究中,与模型组相比,移植M e n S C s细胞后治疗组F S H、LH、T水平有所改善、多囊状扩张的卵泡减少,这提示干细胞移植对P C O S大鼠有明显的治疗效果,这与刘荣华1 0研究一致。治疗组与对照组F S H、L H、T水 平比较无差 异,说明移植M e n S C s与运用二甲双胍干预P C O S的治疗结果相接近。为研究M e n S C s细胞对H S P 9 0的作用,本研究认为M e n S C s细胞通过升高H S P 9 0表达,改善性激素水平,从而达到治疗P C O S大鼠的作用。P P A R G 1参与机体糖脂代谢、细胞生物学行为等过程,影响P-C O S等多种疾病的产生2 1。P P A R G 1在维持卵巢功能正常运转上具有重要作用,参与颗粒细胞的增殖、分化 以 及 卵 巢 组 织 的 重 塑 等2 2。研 究 发 现2 3,P P A R G激动剂可有效改善P C O S患者的高雄症及排卵障碍,提示P P A R G 1在P C O S患者体内低表达,对卵巢卵泡发育中具有重要作用。P P A R G 1是一种转录因子,其需要与多种调节因子相互作用,共同完成转录作用,N C O R 1和HD A C 3是其中两个最重要的共抑制子2 4。N C O R 1通过接受核受体的招募发挥转录作用,可与HD A C 3稳定结合后成为HD A C 3的激活亚单位,参与机体生殖发育全过程2 5。本研究发现,模型组大鼠体内P P A R G 1降低,N C O R 1、HD A C 3升 高,在 经 过M e n S C s治 疗 后P P A R G 1升 高,N C O R 1、HD A C 3降低,且与对照组较为接近。陈夏凉2 6研究显示,在P C O S大鼠体内通过改善性激素水平,可促进P P A R G 1升高及N C O R 1、HD A C 3降低,从而达到对P C O S大鼠的治疗作用。本文研究与上述研究结果相似。4 结论移植M e n S C s细胞后可改善P C O S大鼠的生殖功能及卵巢功能,可能通过上调H S P 9 0表达影响性激素水平从而改善卵巢损伤。3371西部医学 2 0 2 3年1 2月 第3 5卷第1 2期 M e d J W e s t C h i n a,D e c e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 2【参考文献】1李云秀,官 洁,马蕊,等.多囊卵巢综合 征模型 大 鼠 卵 巢 组 织BMP-1 5及子宫内膜G l y c o d e l i n-A的表达J.西部医学,2 0 2 1,3 3(5):6 4 4-6 4 9.2郭娅棣,高燕燕,刘建国,等.二甲双胍对伴胰岛素抵抗的多囊卵巢综合征患者血清