miR-26a、IL-17、Hcy在胃癌患者外周血中的表达及其与胃癌复发的关系.pdf

基金项目:国家自然科学基金(81472750)第一作者简介:徐珍琴,硕士,主治医师,研究方向:肿瘤治疗。E-mail:1783776674 doi:10.3969/j.issn.1006-5709.2023.09.009miR-26a、IL-17、Hcy 在胃癌患者外周血中的表达及其与胃癌复发的关系徐珍琴1,胡艳1,鲁恒珍2,刘虎31.合肥京东方医院肿瘤科,安徽 合肥 230000;2.安庆市第一人民医院肿瘤科;3.中国科学技术大学附属第一医院肿瘤科【摘要】目的探讨 miR-26a、IL-17、Hcy 在胃癌患者外周血中的表达及其与胃癌复发的关系。方法选取我院 2016 年 10 月至2020 年 10 月收治的 120 例胃癌患者(胃癌组),选择同期年龄、性别匹配的 120 例胃部良性病变患者(良性病变组),及健康体检者120 名(健康对照组),比较各组外周血 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平,分析其对胃癌的诊断价值;根据胃癌患者术后是否复发,分为复发组(n=54)及未复发组(n=66),分析其对胃癌复发的诊断价值。结果胃癌组 miR-26a 表达水平低于良性病变组及健康对照组,IL-17、Hcy 表达水平高于良性病变组及健康对照组(P0.05)。miR-26a、IL-17、Hcy 三者联合诊断胃癌的 AUC 高于单一检测(P0.05)。复发组 miR-26a 表达水平低于健康对照组,IL-17 及 Hcy 水平高于未复发组(P0.05),具有可比性。本研究符合赫尔基辛宣言要求。本研究通过我院伦理委员会批准(伦理号:2022003)。1.2方法1.2.1IL-17 及 Hcy 检测方法:胃癌组患者入院时采集静脉血 10 ml,良性病变组患者内镜检查后采集静脉血 10 ml,健康对照组来院体检当日采集静脉血 10 ml,放入 4 的低温离心机离心(离心半径为 13 cm,转速6 000 r/min)10 min,离心后取上清液于无菌干净的试管中,置入-70 冰箱冷藏,待测。Hcy 水平采用酶循环检测法进行检测(日本日立公司 7600 型全自动生化分析仪,产品型号:7600-010),试剂盒购自宁波瑞源生物科技公司(货号:KS10022);采用酶联免疫吸附法检测 IL-17 水平,试剂盒购自上海抚生实业公司(货号:BKE9469),采 用 赛 默 飞 公 司 生 产 的 多 功 能 酶 标 仪(Varioskan LUX 型)进行检测,所有操作严格按照使用说明书进行。1.2.2miR-26a 检测方法:所有研究对象抽取静脉血后根据 RNA 提取试剂盒提取外周血 RNA,并根据反转录试剂盒进行反转录反应,根据 SYBR RT-PCR 试剂盒(中国杭州博日科技有限公司,货号:RT0411-01)说明书进行 RT-PCR 实验。反应体系为:95 30 s,95 5 s,60 30 s,循环 35 次。采用 2-Ct法来测定各组 miR-26a 相对表达量5,内参为 U6,每个样本重复 3 次,取平均值。引物由上海信帆生物科技合成,序列如表 1 所示。表 1引物系列Tab 1Primer sequence引物序列miR-26a上游:5-AATCGGAAGCCTAACTACAGCG-3下游:5-GTCCCAGATGAGCATTGGCA-3U6上游:5-CTCGCTTCGGCAGCACA-3下游:5-AACGCTTCACGAATTTGCGT-31.2.3随访:对胃癌患者进行随访,并根据随访结果分为复发组和未复发组,比较两组入组时的 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平。1.3统计学方法采用 SPSS 22.0 统计软件进行数据分析,计量资料以 xs 表示,两组间比较采用独立样本 t 检验,多组间比较采用 F 检验;AUC 评价 miR-26a、IL-17 及 Hcy 对胃癌及胃癌复发的诊断价值;P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1各组 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平的比较各组 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平比较,差异均有统计学意义(P=0.000),胃癌组的 miR-26a 表达水平低于良性病变组及健康对照组,IL-17、Hcy 表达水平高于良性病变组及健康对照组,差异有统计学意义(P0.05,见表 2)。表 2各组 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平的比较(xs)Tab 2Comparison of the expression levels of miR-26a,IL-17 and Hcy in each group(xs)组别例数miR-26aIL-17/(ng/L)Hcy/(mol/L)胃癌组1200.970.128.962.4229.544.32良性病变组1204.881.05a4.291.52a14.692.56a健康对照组1206.751.96a1.170.31a6.981.07aF 值35.38129.78331.424P 值0.0000.0000.000注:与胃癌组比较,aP0.05。2.2miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌的诊断价值miR-26a 诊 断 胃 癌 的 最 佳 截 断 值 为 1.24 时,敏 感 度 为86.5%,特异度为 82.6%,AUC 为 0.804;IL-17 诊断胃癌的最佳截断值为 7.98 ng/L 时,敏感度为 86.4%,特异度为 80.7%,AUC 为 0.796;Hcy 诊断胃癌的最佳截断值为 24.67 mol/L 时,敏感度为 80.6%,特异度为79.7%,AUC 为 0.803;三者联合诊断胃癌的敏感度为96.3%,特异度为 95.9%,AUC 为 0.928;三者联合诊断胃癌的 AUC 最大(P0.05,见表 3、图 1)。7001胃肠病学和肝病学杂志2023 年 9 月第 32 卷第 9 期Chin J Gastroenterol Hepatol,Sep 2023,Vol.32,No.9表 3miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌的诊断价值Tab 3Diagnostic value of miR-26a,IL-17 and Hcy for gastric cancer指标最佳截断值AUC约登指数敏感度特异度95%CImiR-26a1.240.8040.6690.8650.8260.7150.895IL-177.98 ng/L0.7960.6710.8640.8070.7100.882Hcy24.67 mol/L0.8030.6030.8060.7970.7230.891三者联合0.9280.9220.9630.9590.8720.9832.3复发组与未复发组 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平的比较对胃癌患者进行随访,随访时间 8 61 个月,随访结果显示,120 例胃癌患者中 54 例出现复发(复发组),66 例未复发(未复发组)复发组的 miR-26a表达水平低于未复发组,IL-17 及 Hcy 水平高于未复发组,差异有统计学意义(P=0.000,见表 4)。2.4miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌复发的诊断价值miR-26a 诊断胃癌复发的最佳截断值为 0.73 时,敏感度为 76.4%,特异度为 82.1%,AUC 为 0.710;IL-17 诊断胃癌复发的最佳截断值为 11.84 ng/L 时,敏感度为79.1%,特异度为 79.6%,AUC 为 0.723;Hcy 诊断胃癌复发的最佳截断值为 33.81 mol/L 时,敏感度为78.6%,特异度为 81.3%,AUC 为 0.780;三者联合诊断胃癌的敏感度为 82.8%,特异度为 97.1%,AUC 为0.916;三者联合诊断胃癌复发的 AUC 最大(P0.05,见表 5、图 2)。表 4复发组与未复发组 miR-26a、IL-17、Hcy 表达水平的比较(xs)Tab 4Comparison of miR-26a,IL-17 and Hcy expression levels between the recurrence and non-recurrence groups(xs)组别例数miR-26aIL-17/(ng/L)Hcy/(mol/L)复发组540.480.0912.051.4437.534.21未复发组661.610.186.951.0521.523.11t 值44.63621.72622.235P 值0.0000.0000.000表 5miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌复发的诊断价值Tab 5Diagnostic value of miR-26a,IL-17 and Hcy for recurrence of gastric cancer指标最佳截断值AUC约登指数敏感度特异度95%CImiR-26a0.730.7100.5850.7640.8210.6130.808IL-1711.84 ng/L0.7230.5870.7910.7960.6270.819Hcy33.81 mol/L0.7800.5990.7860.8130.6970.863联合0.9160.7990.8280.9710.8720.983图 1miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌的诊断价值;图 2miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌复发的诊断价值Fig 1Diagnostic value of miR-26a,IL-17,and Hcy for gastric cancer;Fig 2Diagnostic value of miR-26a,IL-17 and Hcy for recurrence of gastric cancer3讨论炎症反应在肿瘤患者中普遍存在,癌细胞的增殖能加重宿主体内炎症反应严重程度,同时加重机体免疫应答程度。IL-17 是机体常见炎症因子6,其由 Th细胞分泌,可与特异性受体 IL-17R 结合,诱导机体中性粒细胞趋化因子及肿瘤坏死因子的释放,发挥促炎8001胃肠病学和肝病学杂志2023 年 9 月第 32 卷第 9 期Chin J Gastroenterol Hepatol,Sep 2023,Vol.32,No.9作用。目前研究7显示,IL-17 在肺癌、结直肠癌等多种癌症患者血清中呈高水平表达,且参与肿瘤病灶血管的生成。国外研究8显示,胃癌患者中 IL-17 呈高表达,且与胃癌病变严重程度呈正相关,提示 IL-17 在胃癌发生发展中具有重要作用。Hcy 是蛋氨酸去甲基后形成的含硫氨基酸,可在叶酸等辅酶作用下继续代谢,国外研究显示,Hcy 的硫内脂毒性可促进肿瘤细胞分化及增殖9,在肿瘤发生发展中有重要作用。本研究结果显示,胃癌组的 IL-17、Hcy 表达水平高于良性病变组及对照组,提示 IL-17、Hcy 与胃癌发生发展可能具有一定关系。miRNA 是真核生物基因中一类非编码的负性调控 RNA,研究10显示,miRNA 能与靶基因 3端-非编码区结合,发挥抑制 RNA 转录的作用。随着人们对肿瘤研究的不断深入,发现 miRNA 在多种肿瘤发生发展中具有重要作用,相关研究11显示,miRNA 在肝细胞癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤患者中可作为早期诊断标志物。既往研究多探讨肿瘤组织中 miRNA 的作用,但有部分研究12显示,miRNA 因其在循环中的稳定性、无创性、可重复性等,被认为是潜在肿瘤诊断及预后判断标志物,循环 miRNA 主要来源于肿瘤细胞,通过微囊泡主动转运或漏出进入循环,故循环中的 miRNA 来源更广泛,也可降 低肿瘤异质 性对 结 果 产 生 的 影 响。miR-26a 是 miRNA 家族中的一员13,其全长为 21nt,位于 3p2123,具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,在乳腺癌、肝癌患者中呈低水平表达。研究显示14,miR-26a具有抑癌作用,其能抑制细胞周期相关蛋白及抑癌基因,抑制细胞凋亡。本研究结果显示,胃癌组的 miR-26a 表达水平低于良性病变组及对照组,与目前文献报道结果一致15。本研究结果显示,miR-26a、IL-17、Hcy 均对胃癌具有一定诊断价值,且三者联合诊断胃癌的价值最大,提示临床上可将三种指标纳入,为胃癌的早期评估提供参考。在胃癌复发方面,既往研究16证实,miRNA 与胃癌的复发关系密切,且将多个 miRNA 综合建立模型与单个 miRNA 相比,诊断价值更高。本研究结果显示,复发组的 miR-26a 表达水平低于未复发组,IL-17 及Hcy 水平高于未复发组,本研究结果提示 miR-26a、IL-17及 Hcy 与胃癌的复发具有一定关系。部分研究15显示,miR-26a 能够对抑癌基因人第 10 号染色体缺失的磷酸酶(pTEN)发挥调控作用,降低致瘤性,因 pTEN是一种典型抑癌基因,故推测 miR-26a 在上述过程中发挥抑癌基因的作用。研究17显示,miR-26a 过表达能显著降低乳腺癌、肺癌及结肠癌细胞的增殖及侵袭能力,其能通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B 信号通路,抑制巨噬细胞聚集,进而影响巨噬细胞的免疫调节作用。本研究结果显示,miR-26a、IL-17、Hcy 对胃癌复发均具有一定价值,三者联合对胃癌复发的诊断价值最高,提示临床上可检测胃癌患者的上述指标,评估患者复发风险,并采取相应的诊疗措施。综上所述,miR-26a、IL-17、Hcy 在胃癌患者中均呈异常表达,且三者对胃癌均有诊断价值,在胃癌复发患者中 miR-26a 呈低水平表达,IL-17、Hcy 呈高水平表达,检测 miR-26a、IL-17、Hcy 能对胃癌复发作出诊断,且三者联合诊断价值最高。参考文献1 杨寿艳,邓彬兵,孟雄,等.肺癌患者血清 miRNA-4534 水平和病理分期与预后的关系J.分子诊断与治疗杂志,2020,12(10):1319-1322,1327.DOI:10.3969/j.issn.1674-6929.2020.10.011.Yang SY,Deng BB,Meng X,et al.Relationship between serum miRNA-4534 level and pathological staging and prognosis of patients with lung cancer J.J Mol Diagn Ther,2020,12(10):1319-1322,1327.DOI:10.3969/j.issn.1674-6929.2020.10.011.2 李霞,张恩,谢服役,等.白细胞介素 1 和白细胞介素 17 基因多态性与胃癌易感性的相关研究J.中国卫生检验杂志,2022,32(1):76-78,82.Li X,Zhang E,Xie FY,et al.Study on relationship between polymor-phisms of IL-1 and IL-17 and gastric cancer J.Chin J Health Lab Tec,2022,32(1):76-78,82.3 张智,吉维民,严东城,等.进展期胃癌患者血清同型半胱氨酸水平与一线化疗疗效的相关性J.现代肿瘤医学,2021,29(22):3977-3981.DOI:10.3969/j.issn.1672-4992.2021.22.019.Zhang Z,Ji WM,Yan DC,et al.The correlation between serum ho-mocysteine level and the efficacy of first-line chemo-therapy for ad-vanced gastric cancer patients J.Modern Oncology,2021,29(22):3977-3981.DOI:10.3969/j.issn.1672-4992.2021.22.019.4 中华医学会肿瘤学分会,中华医学会杂志社.中华医学会胃癌临床诊疗指南(2021 版)J.中华医学杂志,2022,102(16):1169-1189.DOI:10.3760/112137-20220127-00197.5 葛建祥,张伯,黄小平.慢性乙型肝炎肝纤维化患者血清微小RNA-30amRNA 与 微 小 RNA-196bmRNA 相 对 表 达 量 及 临 床 意义J.中国肝脏病杂志(电子版),2020,12(1):76-83.DOI:10.3969/j.issn.1674-7380.2020.01.013.Ge JX,Zhang B,Huang XP.Relative expression and clinical signifi-cance of microRNA-30a mRNA and microRNA-196b mRNA in chronic hepatitis B patients complicated with liver fibrosis J.Chinese Journal of Liver Disease(Electronic Edition),2020,12(1):76-83.DOI:10.3969/j.issn.1674-7380.2020.01.013.6 Punt S,Langenhoff JM,Putter H,et al.The correlations between IL-17 vs.Th17 cells and cancer patient survival:a systematic review J.Oncoimmunology,2015,4(2):e984547.DOI:10.4161/2162402X.2014.984547.7 赵跃,梁国庆.IL-17 在肿瘤血管生成和转移中的作用J.医学研究生学报,2017,30(9):1004-1008.DOI:10.16571/ki.1008-8199.2017.09.022.Zhao Y,Liang GQ.The role of IL-17 in tumor angiogenesis and metas-tasis J.J Med Postgra,2017,30(9):1004-1008.DOI:10.16571/ki.1008-8199.2017.09.022.(下转第 1014 页)9001胃肠病学和肝病学杂志2023 年 9 月第 32 卷第 9 期Chin J Gastroenterol Hepatol,Sep 2023,Vol.32,No.9S3-47.DOI:10.1016/j.gie.2008.07.052.6 Nishimura M,Saito Y,Nakanishi Y,et al.Pathology definitions and resection strategies for early colorectal neoplasia:Eastern versus West-ern approaches in the post-Vienna era J.Gastrointest Endosc,2019,91(5):983-988.DOI:10.1016/j.gie.2019.12.021.7 Zauber AG,Winawer SJ,O Brien MJ,et al.Colonoscopic polypecto-my and long-term prevention of colorectal-cancer deaths J.N Engl J Med,2012,366(8):687-696.DOI:10.1056/NEJMoa1100370.8 Minoo P,Moyer MP,Jass JR.Role of BRAF-V600E in the serrated pathway of colorectal tumourigenesis J.J Pathol,2007,212(2):124-133.DOI:10.1002/path.2160.9 Torella MC,Duarte B,Villarroel M,et al.Increased risk of synchro-nous colorectal lesions in patients referred for endoscopic mucosal resec-tion of lateral spreading tumors J.Arq Gastroenterol,2019,56:276-279.DOI:10.1590/S0004-2803.201900000-52.10 Cong ZJ,Hu LH,Ji JT,et al.A long-term follow-up study on the prognosis of endoscopic submucosal dissection for colorectal laterally spreading tumors J.Gastrointest Endosc,2016,83(4):800-807.DOI:10.1016/j.gie.2015.08.043.11 Lui RN,Kyaw MH,Lam TYT,et al.Prevalence and risk factors for sessile serrated lesions in an average risk colorectal cancer screening population J.J Gastroenterol Hepatol,2020,36(6):1656-1662.DOI:10.1111/jgh.15368.12 许炎钦,林峥嵘,钟世顺,等.老年人结直肠侧向发育型肿瘤恶变相关危险因素分析J.中华消化内镜杂志,2020,37(12):892-897.DOI:10.3760/321463-20200630-00583.Xu YQ,Lin ZR,Zhong SS,et al.Risk factors for malignant transfor-mation of colorectal laterally spreading tumors in elderly patients J.Chin J Dige Endosc,2020,37(12):892-897.DOI:10.3760/321463-20200630-00583.13 Kim KO,Jang BI,Jang WJ,et al.Laterally spreading tumors of the colorectum:clinicopathologic features and malignant potential by mac-roscopic morphology J.Int J Colorectal Dis,2013,28(12):1661-1666.DOI:10.1007/s00384-013-1741-6.14 Monreal-Robles R,Jquez-Quintana JO,Benavides-Salgado DE,et al.Serrated polyps of the colon and rectum:a concise review J.Rev Gastroenterol Mex(Engl Ed),2021,86(3):276-286.DOI:10.1016/j.rgmxen.2021.06.001.15 Caputi Iambrenghi O,Ugenti I,Martines G,et al.Endoscopic man-agement of large colorectal polyps J.Int J Colorectal Dis,2009,24(7):749-753.DOI:10.1007/s00384-009-0684-4.16 亢倩玉,宋顺喆,宫爱霞.结直肠侧向发育型肿瘤黏膜下层侵犯的危险因素分析J.中华消化内镜杂志,2020,37(12):930-933.DOI:10.3760/321463-20200304-00541.17 Saito Y,Uraoka T,Matsuda T,et al.Endoscopic treatment of large superficial colorectal tumors:a case series of 200 endoscopic submu-cosal dissections(with video)J.Gastrointest Endosc,2007,66(5):966-973.DOI:10.1016/j.gie.2007.02.053.18 Torella MC,Duarte B,Villarroel M,et al.Increased risk of synchro-nous colorectal lesions in patients referred for endoscopic mucosal re-section of lateral spreading tumors J.Arq Gastroenterol,2019,56(3):276-279.DOI:10.1590/S0004-2803.201900000-52.(上接第 1009 页)8 牛世伟,龚红霞,付晓燕,等.IL-17 及其介导的信号通路在胃癌中的研究 进展 J.医 学研究生学报,2022,35(6):660-663.DOI:10.16571/ki.1008-8199.2022.06.017.Niu SW,Gong HX,Fu XY,et al.Research progress of IL-17 and its mediated signaling pathway in gastric cancer J.J Med Postgra,2022,35(6):660-663.DOI:10.16571/ki.1008-8199.2022.06.017.9 辛林,曹伟新.限制甲硫氨酸与肿瘤治疗J.国际肿瘤学杂志,2006,33(8):574-577.DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2006.08.005.Xin L,Cao WX.Methionine restriction and cancer treatment J.J Int Oncol,2006,33(8):574-577.DOI:10.3760/cma.j.issn.1673-422X.2006.08.005.10 Torkey H,Heath LS,El Hefnawi M.MicroTarget:microRNA target gene prediction approach with application to breast cancer J.J Bioinform Comput Biol,2017,15(4):1750013.DOI:10.1142/S0219720017500135.11Fu XT,Shi YH,Zhou J,et al.MicroRNA-30a suppresses autophagy-mediated anoikis resistance and metastasis in hepatocellular carcinoma J.Cancer Lett,2018,412:108-117.DOI:10.1016/j.canlet.2017.10.012.12 Bersier LF,Sugihara G.Scaling regions for food web properties J.Proc Natl Acad Sci U S A,1997,94(4):1247-1251.DOI:10.1073/pnas.94.4.1247.13 李凡凡,杨宁,王慧敏,等.微小 RNA-26a 通过靶向调控 E2F7表达影响乳腺癌细胞增殖与迁移J.中华实验外科杂志,2019,36(3):442-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.03.013.Li FF,Yang N,Wang HM,et al.Effect of microRNA-26a on prolif-eration and migration of breast cancer cell via targeting regulation ex-pressions of E2F7 J.Chin J Exp Surg,2019,36(3):442-445.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2019.03.013.14 宋倩倩.miR-26a 靶向 ITG8 调控 JAK2/STAT3 信号通路促进肺癌细胞转移的作用机制研究D.天津:天津医科大学,2018.15 杨俭,薛辉,穆素恩,等.微小 RNA-26a 在胃癌患者血清中的表达及其对该病的诊断价值J.中国医药,2020,15(10):1572-1575.DOI:10.3760/j.issn.1673-4777.2020.10.020.Yang J,Xue H,Mu SE,et al.Expression of serum microRNA-26a in patients with gastric cancer J.China Medicine,2020,15(10):1572-1575.DOI:10.3760/j.issn.1673-4777.2020.10.020.16 程向东,刘翔,陈香浏,等.胃癌术后复发微小 RNAs 指纹图谱筛选及临床应用J.中华实验外科杂志,2017,34(11):1965-1968.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.11.048.Cheng XD,Liu X,Chen XL,et al.Differential expression of mi-croRNAs in patients with gastric cancer:a potential marker for gastric cancer recurrence screening J.Chin J Exp Surg,2017,34(11):1965-1968.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.11.048.17 张建祥,李建华,王芳,等.微小 RNA-181a、微小 RNA-23a 和微小 RNA-26b 在乳腺癌孕激素受体表达中的调控机制J.中华实验外科杂志,2017,34(11):1954-1957.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.11.045.Zhang JX,Li JH,Wang F,et al.Regulation mechanism of microRNA-181a,microRNA-23a and microRNA-26b in progesterone receptor in breast cancer J.Chin J Exp Surg,2017,34(11):1954-1957.DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2017.11.045.4101胃肠病学和肝病学杂志2023 年 9 月第 32 卷第 9 期Chin J Gastroenterol Hepatol,Sep 2023,Vol.32,No.9