E6_E7阳性在宫颈病变风险评估及风险分层管理中的价值研究.pdf

论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期现阶段，宫颈癌(CC)是全球关注的重要公共卫生问题，是继乳腺癌、结直肠癌及肺癌后第四大常见恶性肿瘤1。随着CC筛查工作的开展，细胞学检查已被诸多国家纳入基本筛查体系中，并作为疾病筛查的二级预防方案，在降低CC发病率与死亡率方面发挥着重要作用2。细胞学检查灵敏度高、可重复性强，结果不依赖形态学诊断，更具客观性的优势成为CC诊断的主要筛查手段。但其无法对一过性与持续性的人乳头瘤病毒(HPV)感染进行有效区分，因此无法对病变进展状态进行评估，易引发过度转诊、诊断及治疗问题，给HPV阳性患者的准确分流带来困难3。E6/E7作为主要HPV癌蛋白，在宿主细胞中可对多种细胞蛋白发挥抑制作用并对细胞增殖及凋亡等生物学过程产生影响，其基因组的不稳定性将进一步诱发HPV感染的细胞向浸润性癌发展4。本文探讨HPV E6/E7mRNA检测应用于宫颈病变诊断筛查中的价值及在风险评估管理中的意义，现报告如下。资料与方法选取2019年1月2023年1月重庆市璧山区妇幼保健院收治的宫颈病变患者490例作为观察对象。年龄2575岁，平均(50.124.3)岁；HPV E6/E7 mRNA阳性患者200例；490例患者中305例检查结果异常，阴道镜活检显示慢性宫颈炎97例，宫颈上皮内瘤变E6/E7阳性在宫颈病变风险评估及风险分层管理中的价值研究舒平402760重庆市璧山区妇幼保健院门诊妇科，重庆摘要目的：研究人乳头状瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测在宫颈病变风险评估及在宫颈癌筛查中的潜在应用价值。方法：选取2019年1月2023年1月重庆市璧山区妇幼保健院收治的宫颈病变患者490例作为观察对象，患者均接受HPVE6/E7 mRNA及薄层液基细胞学检测，将组织病理学检测结果作为金标准，比较不同程度宫颈病变患者HPV E6/E7 mRNA阳性率及相对表达量。结果：病理分级CIN2及以上患者HPV E6/E7 mRNA阳性患者占比高于HPV E6/E7 mRNA阴性占比，病理分级CIN2以下患者HPV E6/E7 mRNA阳性患者占比低于HPV E6/E7 mRNA阴性占比，差异有统计学意义(P0.001)。随着宫颈组织学与细胞学病变程度不断提高，HPV E6/E7 mRNA阳性率及拷贝数量均逐渐升高，差异有统计学意义(P0.001)。结论：HPV E6/E7 mRNA表达与宫颈病变程度存在明显关联，可将该检测作为HPV阳性患者的分流方式。关键词宫颈癌；人乳头状瘤病毒；E6；E7；薄层液基细胞学检测；分层管理Study on the Value of E6/E7 Positivity in Risk Assessment and Risk Stratification Management of Cervical LesionsShu PingDepartment of Outpatient Gynecology,Chongqing Bishan District Maternal and Child Health Hospital,Chongqing 402760,ChinaAbstractObjective:To study the potential application value of human papilloma virus(HPV)E6/E7 mRNA test in riskassessment of cervical lesions and in cervical cancer screening.Methods:Four hundred and ninety patients with cervical lesionsadmitted to Chongqing Bishan District Maternity and Child Health Hospital from January 2019 to January 2023 were selected asthe observation subjects.The patients were subjected to HPV E6/E7 mRNA and thin-layer liquid-based cytology testing,and theresults of histopathologic testing were used as the gold standard to compare the HPV E6/E7 mRNA positivity rate and relativeexpression in patients with different degrees of cervical lesions.Results:The percentage of HPV E6/E7 mRNA positivity patientswas higher than the percentage of HPV E6/E7 mRNA negativity in patients with pathological grading CIN2 and above,and thepercentage of HPV E6/E7 mRNA positivity patients was lower than the percentage of HPV E6/E7 mRNA negativity in patientswith pathological grading CIN2 or below,and the difference was statistically significant(P0.001);With the increasing degree ofcervical histologic and cytologic lesions,HPV E6/E7 mRNA positivity and copy number were gradually increased,and thedifference was statistically significant(P0.001).Conclusion:There is a significant correlation between HPV E6/E7 mRNAexpression and the degree of cervical lesions,and the test can be used as a triage method for HPV-positive patients.Key wordsCervical cancer;Human papilloma virus;E6;E7;Thin-layer liquid-based cytology test;Stratification management基金项目重庆市卫生健康委员会(编号：2023WSJK048)148论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期(CIN1)85 例，高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)95例，浸润癌5例。患者均知情同意本研究，且自愿签署知情同意书。纳入标准：年龄2575岁；正常性生活史，不处于妊娠状态；3 d内未接受阴道冲洗、上药等操作，且3 d内无性生活；临床资料完整；无免疫缺陷或肿瘤病变。排除标准：处于月经期或妊娠期女性；存在CC或癌前病变；接受子宫切除、有宫颈手术史及盆腔放射治疗者；无法积极配合完成检查者。方法：标本采集：选择非经期进行标本采集，要求采集前24 h无性生活，72 h内未接受阴道冲洗、检查与用药。患者取膀胱结石位，采集前使用窥阴器充分暴露宫颈，使用无菌棉签将宫颈表面分泌物擦净，将细胞刷放置于宫颈管内并使顶端位于宫颈外口上方1 cm，于宫颈管内，以宫颈外口为圆心，顺时针旋转510圈后取出，将标本放置于细胞保存液中停留10 s，确保标本采集量充足。检测方法：a.HPV DNA：将采集的宫颈上皮细胞在 DNA 提取液中进行 DNA 提取，将样品分别加入至不同PCR反应液与酶混合液中混匀并制备成反应混合液，使用PCR仪进行PCR扩增及HPV型别分析，对不同高危型HPV进行检测。b.HPV E6/E7 mRNA：应用分支链DNA信号扩增技术进行检测。检测结果由计算机软件自动转化为拷贝值，无需人工干预，当HPV E6/E7 mRNA拷贝值1.0则为阴性，1.0则为阳性。c.薄层液基细胞学检测(TCT)：将细胞保存液中的宫颈脱落细胞放置于光镜下进行观察，结果分为未见上皮内病变及恶性细胞(NILM)，包括正常范围及良性反应性细胞改变(轻、中、重度炎性反应)；鳞状上皮内病变，未明确诊断意义的不典型鳞状细胞和不除外高级别上皮内病变的不典型鳞状细胞；低级别宫颈鳞状上皮内病变(LSIL)；鳞状细胞癌。腺细胞病变包括不典型腺细胞，倾向于瘤变的不典型腺细胞，宫颈管原位腺癌及腺癌。本次研究中将结果为NILM及LSIL归纳为HSIL，HSIL与CC归纳为HSIL+。d.组织病理学检查：将活检中取下的标本放入10%中性福尔马林溶液中浸泡，进行常规制片及苏木素-伊红染色，由于病理科高年资医生进行诊断。将结果分为LSIL、HSIL、CC、良性、炎性反应。e.阴道镜宫颈活检：患者取膀胱截石位后，使用阴道窥器充分暴露宫颈，使用干棉球对宫颈表面分泌物进行擦拭，取低倍 7.5倍观察宫颈原始图像；使用 3%醋酸棉球对宫颈、穹隆及阴道各壁进行涂抹，缓慢取出窥器后，将醋酸棉球留于阴道内，使醋酸充分与阴道及穹隆充分接触，再次暴露宫颈、穹隆及阴道各壁并于镜下仔细观察宫颈上皮及阴道壁变化，再放大到15倍观察下摄片。将摄片进行保存并于可以病灶位置取活检，之后送检。病理结果报告为慢性宫颈炎、CIN1级、CIN2级、CIN3级、宫颈鳞状细胞癌、宫颈腺癌。观察指标：宫颈组织学结果及HPV E6/E7 mRNA阳性率。组织病理学结果中HPV E6/E7 mRNA阳性率及表达情况。统计学方法：数据均用SPSS 22.0统计学软件予以处理；计数资料以 n(%)表示，比较采用2检验；计量资料以2表示，比较采用 t检验；P0.05为差异有统计学意义。结果宫颈组织学结果及 HPV E6/E7 mRNA 阳性率情况：490 例患者均进行 HPV E6/E7 mRNA 及 TCT 检测，HPV E6/E7 mRNA阳性患者200例，其中病理分级 CIN2 及以上的患者 78 例，占比 39%；病理分级CIN2以下122例，占比61%；HPV E6/E7 mRNA阴性患者 85例，其中病理分级 CIN2及以上的患者 3例，占比 3.5%，病理分级 CIN2 以下的患者 82 例，占比96.5%。病理分级CIN2及以上患者HPV E6/E7 mRNA阳性患者占比高于HPV E6/E7 mRNA阴性占比，病理分级CIN2以下患者HPV E6/E7 mRNA阳性患者占比低于HPV E6/E7 mRNA阴性占比，差异有统计学意义(P0.001)。见表1。各组织病理学结果中HPV E6/E7 mRNA阳性率及表达情况：490例患者中共有292 例检查异常患者，为其提供阴道镜活检后，慢性宫颈炎患者 97 例(占比33.3%)，CIN1患者85例(占比29.1%)，CIN2患者 48 例(占比 16.4%)，CIN3 患者 57 例(占比 19.5%)，宫颈癌患者5例(占比1.7%)。HPV E6/E7 mRNA在不同病变分级患者检测结果中阳性率不同，其中CIN2及以上 HPV E6/E7 mRNA阳性患者 78例，阳性率最表1宫颈组织学结果及HPV E6/E7 mRNA阳性率情况PV E6/E7 mRNAn病理结果检测结果CIN2及以上CIN2以下阳性20078(39.0)122(61.0)阴性853(3.5)82(96.5)232.56324.057P0.0010.001149论著 检验医学与临床JOURNAL OF CHINESE AND FOREIGN MEDICINE AND PHARMACY RESEARCH中外医药研究2023年第2卷第17期中外医药研究2023年第2卷第17期高的为宫颈腺癌组，最低的为宫颈炎组，随着宫颈组织学与细胞学病变程度不断提高，HPV E6/E7 mRNA阳性率及拷贝数量均逐渐升高，差异有统计学意义(P0.001)。见表2。讨论近年来，如何进一步提高CC筛查准确率并为患者提供及时有效的转诊与治疗已成为各国医疗系统关注的热点话题。目前国际上通用的CC及宫颈上皮内病变的诊断主要遵循“三阶梯式”诊断程序，即宫颈细胞学、阴道镜及组织病理学检查。HPV DNA检测作为现阶段主要的检测方式之一，但该方式的弊端也较为凸显。现如今临床逐渐发现，部分特异性分子标志物可为癌前病变的诊断提供参考价值，HPV RNA检测是在检测高危型 HPV E6/E7 mRNA 的基础上进行5。HPV E6与E7病毒癌蛋白在诱发细胞向肿瘤发生过程中发挥着重要作用，在复制病毒基因组的过程中，二者均可诱导癌细胞所有特征，如不受控制的细胞增殖，血管生成、侵袭、转移及逃避细胞凋亡等6。目前已有研究指出，在没有E6与E7活性的情况下，癌细胞将自行衰老或凋亡，这也证实了二者持续存在是导致HPV介导CC发生的关键7。现阶段受地区、经济、社会发展等因素的影响，CC发生与病死率在不同地区表现出明显差异性。本次研究以组织病理学结果作为“金标准”，将重庆市璧山区妇幼保健院患者作为观察对象，重点探究HPV E6/E7与宫颈病变程度的关系，旨在更好地进行疾病诊断及进一步分流。结果显示，HPV E6/E7 mRNA 阳性患者 200 例，其中病理分级 CIN2及以上的患者 78例，占比 39%；病理分级 CIN2 以下 122 例，占比 61%；HPV E6/E7mRNA阴性患者85例，其中病理分级CIN2及以上的患者3例，占比3.5%，病理分级CIN2以下的患者82例，占比 96.5%。病理分级 CIN2 及以上患者 HPV E6/E7mRNA 阳性患者占比高于 HPV E6/E7 mRNA 阴性占比，病理分级CIN2以下患者HPV E6/E7 mRNA阳性患者占比低于HPV E6/E7 mRNA阴性占比，差异有统计学意义(P0.001)。提示 HPV E6/E7 mRNA 阳性率越高，组织病理学分级越高。高级别病变时，HPVE6/E7 mRNA阳性率较高，癌前病变的风险高，HPVE6/E7 mRNA阴性时患癌前病变风险极低，能很好地预测病变风险，进行风险评估及风险分层管理。HPV病毒在该组中存在较低的转录活性，致癌风险相对较小，认为HPV E6/E7 mRNA可较好的检测一过性HPV感染患者；E6/E7 mRNA检测阳性率随患者病理级别升高而不断上升。分析原因，主要是由于随着基底上皮细胞的分化，病毒成功度过了基因扩增、病毒组装及释放阶段，伴随进展中基因表达模式的改变，E6/E7癌蛋白基因发生过表达且病毒载量逐渐升高，同时也使细胞学形态发生转变。综上所述，HPV E6/E7 mRNA的表达与宫颈病变程度存在明显关联，对于HPV阳性高风险人群的诊断效能较高，具有较好的客观性与可重复性。可将该检测方式作为合理化筛查及宫颈癌筛查分流管理方式的一种，对可能存在的高级别风险人群进行分流并做好高效管理，同时提高宫颈病变检出率、降低宫颈低级别病变过度诊断风险及促进疾病风险分层管理具有重要的意义。参考文献1何立群,袁婧,胡孟钧.人乳头状瘤病毒E6/E7 mRNA检测与宫颈低度鳞状上皮内病变预后的相关性分析J.中国妇幼保健,2023,38(6):979-982.2刘红丽,刘智荣,赵淑芳,等.HPV-E6/E7-mRNA 和 HPV-DNA检测在宫颈病变筛查中的应用价值J.分子诊断与治疗杂志,2023,15(2):205-208.3王艳,王玲玲,王才智.HPV E6/E7 mRNA的表达及阴道微生态与宫颈病变的关系J.中华全科医学,2022,20(11):1841-1844.4杨弋弋,周新欢,邹科,等.TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈上皮内瘤样病变和宫颈浸润癌中的应用价值J.中国卫生检验杂志,2022,32(15):1811-1815.5江星元,刘应南,陶霞.HPV E6/E7在宫颈病变恶性进展或宫颈癌复发中的预测作用J.中国妇产科临床杂志,2020,21(1):97-99.6蓝碧波,冉爱冬,沈少俊.HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA检测在宫颈癌早期筛查中的临床价值J.中外女性健康研究,2019(21):11-12.7薛鹏,沈洁,李莉,等.HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA检测技术在宫颈上皮内瘤变中的诊断价值分析J.癌症进展,2019,17(10):1160-1163.表2组织病理学结果中HPV E6/E7 mRNA阳性率及表达情况组织病理学结果nHPV E6/E7 mRNA阳性慢性宫颈炎9721(21.6)CIN18524(28.2)CIN24830(62.5)CIN35744(77.1)宫颈癌54(80.0)257.686P0.001150