Corilagin对OX-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用及对MyD88信号通路表达的影响.pdf

陶代菊，昆明医科大学药学院 2021 级在读硕士研究生。主要从事心脑血管药理学专业研究工作。以第一作者在北大核心期刊发表论文 1 篇，申请专利 1 项。Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 细胞损伤的保护作用及对MyD88 信号通路表达的影响陶代菊，陈鹏，李雨晴，陈临宜，杨仁华，何波，沈志强（昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明650500）摘要 目的探讨不同浓度和时间的柯里拉京（Corilagin）处理对氧化性低密度脂蛋白（oxidative low-densitylipoprotein，ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）损伤的保护作用，以及其对 MyD88 信号通路表达调控的影响。方法体外培养 HUVECs 复制 ox-LDL 诱导损伤模型，利用形态学及免疫学方法鉴定 HUVECs 细胞，MTT 法确定复制 ox-LDL 损伤 HUVECs 模型的最佳条件，根据不同处理将细胞分为正常组（Normal）、模型组（Model）、Corilagin（3.125、6.25、12.5、25、50 mol/L）组、阳性对照（VE 10 mol/L、Simvastain 1 mol/L）组。观察 Corilagin 对 ox-LDL 诱导损伤的 HUVECs 保护作用；Western blot 和 RT-qPCR 方法检测 HUVECs 细胞中 MyD88、P65、TNF-、MCP-1 表达变化。结果经形态学及免疫学方法鉴定，所培养细胞为 HUVECs；70 mg/L 的 ox-LDL 刺激 12 h 是复制 ox-LDL 损伤 HUVECs 模型的最佳条件；MTT 结果显示，与 ox-LDL 组比较，Corilagin 组细胞活力明显升高（P 0.01）；RT-qPCR 和 Western blot 结果表明，与 Normal 组比，ox-LDL 组 MyD88、P65、TNF-及 MCP-1 的 mRNA 和蛋白表达升高（P 0.01）；与 ox-LDL 组比较，Corilagin 组及阳性对照组的 MyD88、P65、TNF-及 MCP-1 的 mRNA 和蛋白表达降低（P 0.01），且 Corilagin组呈现剂量依赖下调 MyD88、P65、TNF-及 MCP-1 的 mRNA 和蛋白表达。结论随着时间和浓度的增加，Corilagin 能明显提高 ox-LDL 诱导损伤的 HUVECs 细胞活力，其保护作用与抑制 MyD88 信号通路有关。关键词Corilagin；人脐静脉内皮细胞 HUVECs；氧化型低密度脂蛋白；动脉粥样硬化中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 2095 610X（2023）10 0018 08Protective Effect of Corilagin on OX-LDL-Induced HUVECsCell Damage and Its Impact on the Expression of the MyD88Signaling PathwayTAO Daiju，CHEN Peng，LI Yuqing，CHEN Linyi，YANG Renhua，HE Bo，SHEN Zhiqiang（School of Pharmaceutical Science/Yunnan Key Laboratory of Pharmacology for Natural Products，Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650500，China）Abstract ObjectiveTo investigate the protective effects of different concentrations and durations of收稿日期20230531基金项目国家自然科学基金资助项目（82260271）；云南省科技厅科技计划基金资助项目（202001AY070001-157）作者简介陶代菊（1997），女，云南楚雄人，在读硕士研究生，主要从事心脑血管药理学研究工作。通信作者何波，E-mail：；沈志强，E-mail：昆明医科大学学报2023，44（10）：1825JournalofKunmingMedicalUniversityDOI:10.12259/j.issn.2095-610X.S20231019CN531221/Rcorilagin treatment on oxidative low-density lipoprotein（ox-LDL）-induced damage in human umbilical veinendothelial cells（HUVECs），as well as its effects on the expression regulation of the MyD88 signaling pathway.MethodsIn vitro cultured HUVECs were used to replicate the ox-LDL-induced damage model.Morphological andimmunological methods were employed to identify HUVECs cells.The MTT assay was used to determine the optimalconditions for replicating the ox-LDL-induced damage model in HUVECs.Cells were divided into different groupsbased on different treatments：normal group，model group，Corilagin（3.125，6.25，12.5，25，50 mol/L）group，and positive control（VE 10 mol/L，Simvastatin 1 mol/L）group.The protective effect of corilagin on ox-LDL-induced damage in HUVECs was observed.Western blot and RT-qPCR methods were used to detect theexpression changes of MyD88，P65，TNF-，and MCP-1 in HUVECs cells.ResultsThe cultured cells wereconfirmed as HUVECs by using morphological and immunological methods.The best condition for replicating ox-LDL-induced damage to HUVECs was 12 hours of treatment with 70 mg/L of ox-LDL.MTT results showed thatcompared with the ox-LDL group，the corilagin group had a significantly higher cell viability（P 0.01）.RT-qPCRand Western blot results showed that compared with the control group，the mRNA and protein expression of MyD88，P65，TNF-，and MCP-1 were increased in the ox-LDL group（P 0.01）.Compared with the ox-LDL group，the mRNA and protein expression of MyD88，P65，TNF-，and MCP-1 were decreased（P 99%，防潮低温避光保存。维生素 E（Vit E）原料药（T-438），购 自 Sigma，分 子 式 为 C29H50O2，分 子 量 为430.71，纯度 99%，白色粉末，-20 保存。1.1.3主要试剂OX-LDL 购自广州奕源生物科技有限公司，MTT-705B054 购自 Solarbio 公司，BCA 蛋 白 浓 度 测 定 试 剂 盒 购 自 碧 云 天 公 司，TRNzol-A+总 RNA 提取试剂裂解液，Golden TaqPCR 试剂盒，TIANScript M-MLV 第一链 cDNA 合第 10 期陶代菊，等Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 细胞损伤的保护作用及对MyD88 信号通路表达的影响19成试剂盒购自 Fermentas 公司，一抗-actin 购自 SAB 公司，MYD88（11000），P65（1500），TNF-（1：500），MCP-1（11000）购自爱博泰克生物科技有限公司。1.2研究方法1.2.1药液配制Corilagin 药液：用 PBS 溶液配制成 2 mmol/L 的 Corilagin 母液。辛伐他汀药液：用 PBS 溶液配制成 10000 mol/L 的辛伐他汀母液。维生素 E 药液：用 PBS 溶液配制成 10000 mol/L的维生素 E 母液。药液均临用前稀释成所需浓度。1.2.2细胞鉴定（1）显微镜观察法：HUVECs 的细胞形态于倒置相差显微镜下观察并拍照；（2）免疫组织化学法：将消毒灭菌后的 0.5 cm0.6 cm盖玻片放置在 6 孔培养板内，并将 HUVECs 浓度调整为 1105 个/mL，按 2 mL/孔接种于 6 孔板内。培养至 HUVECs 融合 80%90%后，取出盖玻片。检测 HUVECs 的 VIII 因子、CD34的表达，分别分为实验组和阴性对照组 2 组，每组设 3 个复孔，按照免疫组化流程处理后，于荧光显微镜下观察，并拍照保存。1.2.3MTT 实验方法将计数后的上述 HUVECs接种于 96 孔板上，加入 MTT（5 mg/mL）孵育 4 h，再用三联液孵育 8 h 后，测定 570 nm 和 630 nm处的 OD 值。1.2.4复制 ox-LDL 诱导 HUVECs 细胞损伤用含 EDTA 的胰蛋白酶消化 HUVECs，经细胞计数调整浓度为 5104个/mL，100 L/孔接种到96 孔板内，培养 24 h。每次种板 4 块，分别用于探索HUVECs 的损伤时间：6 h、12 h、24 h、48 h，实验重复 3 次。每块板设正常对照组和 ox-LDL 组。正常对照组：加入等量的 PBS；ox-LDL 组：分别加入终浓度为10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70 mg/L、80 mg/L 的 ox-LDL。应用改良 MTT 法测定不同损伤浓度及时间条件下 ox-LDL 对 HUVECs 的损伤程度，以确定 ox-LDL 损伤 HUVEC 的适宜浓度及时间。1.2.5Corilagin 对 ox-LDL 诱导损伤的人脐静脉内皮细胞 HUVECs 保护作用观察用含 EDTA 的胰蛋白酶消化 HUVECs，经细胞计数调整浓度为5104个/mL，并以 100 L/孔接种到96 孔板内，培养 24 h。每次种板 6 块，重复 3 次，每块板上设 9 个组：正常组；模型组；阳性药组：（Vit E：10 mol/L、辛伐他汀：1 mol/L）；Corilagin 给药组（3.125、6.25、12.5、25、50 mol/L）。按照分组进行实验，根据改良 MTT 法测定细胞活力，评价 Corilagin 对 ox-LDL 损伤 HUVECs 的保护作用及其量-效/时-效关系。1.2.6RT-qPCR 检测ox-LDL 损伤的HUVECs 中MyD88、P65、TNF-、MCP-1 mRNA 的表达将细胞分成正常组，模型组，阳性药组（Vit E：10 mol/L、辛伐他汀：1 mol/L）；Corilagin 组：Corilagin（3.125、6.25、12.5、25、50 mol/L）一共9 个组。孵育 24 h，收集细胞提取总 RNA 进行RT-qPCR 定量检测，引物序列见表 1。表1引物序列Tab.1Primersequences基因名引物序列长度（bp）-actinF-CGTGCGTGACATCAAAGAGA178R-CAAGAAGGAAGGCTGGAAAAMyD88F-CTGGGGGCACTGTGGATT174R-CGCTGCTGGGGAGAAAACP65F-CAACCAAAACAGAGGGGATT160R-TTGTGACCAACTGAACGATATNF-F-CTCCTCACCCACACCGTC226R-AACACCCATTCCCTTCACMCP-1F-TGACCCCAAGAAGGAATG180R-GAGGTGGTTGTGGAAAAG1.2.7Western blot 检测ox-LDL 损伤的HUVECs及 VSMCs 中 MyD88、P65、TNF-、MCP-1 蛋白的表达实验分组同 1.2.6，细胞培养 24 h 后，按照分组加入对应的药物浓度，孵育 24 h，所有给药组给予 70 mg/L 的 ox-LDL，刺激 12 h，将各组细胞分别置于冰上充分研磨后提取总蛋白，总蛋白浓度用 BCA 蛋白检测试剂盒测定。蛋白质样品用 12%、15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后转移到聚偏二氟乙烯膜。用无蛋白快速封闭液封闭膜 20 min。将 PVDF 膜与一抗在 4 孵育过夜，用 TBST 洗涤 3 次后与二抗孵育 2 h。TBST 洗涤 3 次，用 Bio-Rad 凝胶成像系统显影、收集和分析靶蛋白的图像，采用ImageJ 软件统计数据。OHOHOHOHOHOHOHOHOHOHOHOOCH2OOOOOCCC图1Corilagin 的化学结构式Fig.1ChemicalstructureofCorilagin20昆明医科大学学报第 44 卷1.3统计学处理 xs实验数据采用“均值标准差（）”表示，并使用 SPSS 软件进行统计学分析。多组数据间的比较使用 One-way ANOVA 单因素方差分析法。方差齐时，使用 LSD 法进行组间两两比较，P 0.05 时各组间差异具有统计学意义。2结果2.1HUVECs 的鉴定2.1.1形态学鉴定倒置显微镜下显示，HUVECs细胞呈扁平的卵圆形、梭形、多角形，细胞均匀透亮，边界清晰，胞核清晰，呈圆形或椭圆形，有 23 个核仁。胞浆内含小颗粒，结构完整，符合血管内皮细胞的基本形态，见图 2A2B。2.1.2免疫学鉴定内皮细胞的特异性蛋白 CD34、因子既是胞浆蛋白也是胞膜蛋白。通过免疫化学鉴定结果表明，阴性对照细胞形态完整，背景清晰均匀，而阳性组细胞边界清晰，呈棕红色，胞浆和胞膜边缘颜色更深，细胞核明显，见图 3A。HUVEC 因子的阳性表达，见图 3B；CD34 阳性表达，进一步证实培养的细胞为 HUVECs，见图 3D。2.2OX-LDL 刺激 HUVECs 损伤模型寻找最佳的 ox-LDL 刺激 HUVECs 损伤模型的条件。结果显示，随着 ox-LDL 浓度的增加，OD 值下降，说明 ox-LDL 对 HUVECs 具有损伤作用。与正常对照组比较，刺激 6 h，70 mg/L 和 80AB图2HUVECs 形态学鉴定（A100，B400）Fig.2MorphologicalidentificationofHUVECs（A100，B400）ABCD图3免疫组化法检测 HUVECs 细胞、CD34 因子表达（400）Fig.3ImmunohistochemicaldetectionoffactorVIII.andCD34expressioninHUVECscells（400）A：因子阴性对照组；B：因子阳性组；C：CD34 阴性对照组；D：CD34 阳性组第 10 期陶代菊，等Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 细胞损伤的保护作用及对MyD88 信号通路表达的影响21mg/L 浓 度 的 ox-LDL 明 显 损 伤 了 HUVECs（P 0.01）；刺激 12、24、48 h，6080 mg/L 浓度的ox-LDL 明显损伤 HUVECs（P 0.01）。因此，笔者最终选取终浓度为 70 mg/L 的 ox-LDL 刺激HUVECs 12 h 作为复制 ox-LDL 损伤 HUVECs 模型的最佳条件，见图 4。2.3Corilagin 对 ox-LDL 损伤 HUVECs 的保护作用与正常对照组比较，ox-LDL 损伤模型组的细胞活力明显降低（P 0.01）；与模型比较，孵育12 h，6.2550 mol/L 的 Corilagin 处理组的细胞活力明显提高，25 mol/L 的 Corilagin 保护作用最明显，细 胞 活 力 较 模 型 组 提 高 50%，50 mol/L 的Corilagin 组细胞活力与 25 mol/L 组基本持平（P 0.01）；孵育 24 h，3.12550 mol/L 的 Corilagin处理组的细胞活力明显提高，25 mol/L 的Corilagin组细胞活力最高，接近正常组水平（P 0.01）；孵育 48 h，仅 25 mol/L 和 50 mol/L 的 Corilagin 处理组的细胞活力明显提高，较模型组提高 30%（P 0.01），见图 5。这表明，Corilagin 能对 ox-LDL 损 伤 的 HUVECs 具 有 保 护 作 用，其 中 以25 mol/L 和 50 mol/L 的浓度效果最显著。2.4Corilagin 对ox-LDL 损伤HUVECs 中MyD-88、P65、TNF-、MCP-1 mRNA 表达的影响与正常对照组比较，ox-LDL 模型组的 MyD88、NF-kB、TNF-、MCP-1mRNA 的表达量显著升高（P 0.01）。与 ox-LDL 模型组比较，不同浓度Corilagin（12.5 mol/L、25 mol/L、50 mol/L）组和阳性药组（辛伐他汀、维生素 E）的 MyD88、P65、MCP-1、TNF-mRNA 的表达量均显著降低（P 0.05），见图 6。以上结果表明，Corilagin 可抑制ox-LDL 诱 导 HUVECs 的 HUVECs 损 伤 中 的MyD88、P65、TNF-、MCP-1 的 mRNA 表达。2.5Corilagin 对ox-LDL 损伤HUVECs 中MyD-88、P65、TNF-、MCP-1 蛋白表达的影响与正常对照组比较，ox-LDL 模型组 MyD88、P65、TNF-、MCP-1 蛋白表达均显著升高（P 0.01）。与模型组比较，Vit E 10 mol/L、辛伐他汀 1 mol/L 组和不同浓度 Corilagin（12.5 mol/L、25 mol/L、50 mol/L）组 MyD88、P65、TNF-、MCP-1 蛋白表达均出现显著降低（P 0.05），见图 7。以上结果显示，Corilagin 可抑制 ox-LDL 损ACDB6 h12 h24 h48 h0.200.150.100.05ox-LDL 10 mg/Lox-LDL 20 mg/Lox-LDL 30 mg/Lox-LDL 40 mg/Lox-LDL 50 mg/Lox-LDL 60 mg/Lox-LDL 70 mg/Lox-LDL 80 mg/L00.250.200.150.100.050OD 差值OD 差值OD 差值OD 差值正常ox-LDL 10 mg/Lox-LDL 20 mg/Lox-LDL 30 mg/Lox-LDL 40 mg/Lox-LDL 50 mg/Lox-LDL 60 mg/Lox-LDL 70 mg/Lox-LDL 80 mg/L正常ox-LDL 10 mg/Lox-LDL 20 mg/Lox-LDL 30 mg/Lox-LDL 40 mg/Lox-LDL 50 mg/Lox-LDL 60 mg/Lox-LDL 70 mg/Lox-LDL 80 mg/L正常ox-LDL 10 mg/Lox-LDL 20 mg/Lox-LDL 30 mg/Lox-LDL 40 mg/Lox-LDL 50 mg/Lox-LDL 60 mg/Lox-LDL 70 mg/Lox-LDL 80 mg/L正常*0.30.20.100.40.30.20.10 xs图4ox-LDL 对 HUVECs 损伤模型的复制（，n=6）xsFig.4ReplicationofHUVECsdamagemodelbyox-LDL（，n=6）A：OX-LDL 刺激 6 h 对 HUVECs 细胞的影响；B：OX-LDL 刺激 12 h 对 HUVECs 细胞的影响；C：OX-LDL 刺激 24 h 对HUVECs 细胞的影响；D：OX-LDL 刺激 48 h 对 HUVECs 细胞的影响。与正常组相比，*P 0.01。22昆明医科大学学报第 44 卷ACB0.40.30.20.10OD 差值0.60.40.20OD 差值0.40.50.30.20.10OD 差值12 h48 h24 h#*ModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LV E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LV E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LV E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/L xs图5Corilagin 对 OX-LDL 损伤 HUVECs 的保护作用（，n=6）xsFig.5ProtectiveeffectofCorilaginonOX-LDL-damagedHUVECs（，n=6）A：Corilagin 对 OX-LDL 损伤 HUVECs 作用 12 h 对细胞活力的影响；B：Corilagin 对 OX-LDL 损伤 HUVECs 作用 24 h 对细胞活力的影响；C：Corilagin 对 OX-LDL 损伤 HUVECs 作用 48 h 对细胞活力的影响。与正常组相比，#P 0.01，与模型组相比，*P 0.01。ModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LAB864208106420#*Relative MyD88 mRNA expression(2ct)CD86420Relative MCP-1 mRNA expression(2ct)86420Relative TNF-mRNA expression(2ct)Relative P65 mRNA expression(2ct)xs图6Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 P65、MCP-1、MyD88 和 TNF-的 mRNA 表达的影响（，n=6）xsFig.6EffectofCorilaginonmRNAexpressionofP65，MCP-1，MyD88andTNF-inOX-LDL-inducedHUVECs（，n=6）A：不同浓度 Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 MYD88 mRNA 表达的影响；B：不同浓度 Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 P65 mRNA 表达的影响；C：不同浓度 Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 MCP-1mRNA 表达的影响；D：不同浓度 Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 TNF-mRNA 表达的影响。与正常组相比，#P 0.01，与模型组相比，*P 0.05，*P 0.01。第 10 期陶代菊，等Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 细胞损伤的保护作用及对MyD88 信号通路表达的影响23伤的 HUVECs 中 MyD88、P65、TNF-、MCP-1蛋白表达。3讨论AS 病程复杂，涉及脂质代谢紊乱和免疫细胞向动脉壁募集等病理过程。他汀类药物是治疗血脂异常的一线药物，具有降低 LDL-C 的功效，然而，部分人对他汀类药物不耐受，且不良反应较多，限制其使用13，因此，寻找安全有效的抗AS 药物是医药学界急需解决的问题。血管内皮细胞是参与 AS 发生发展的关键细胞之一，研究选用 HUVECs 细胞系，通过鉴定发现该细胞符合血管内皮细胞的形态特征并且高表达血管内皮细胞特异性蛋白 CD34 和，提示该细胞系确为 HUVECs。目前普遍认为血管内皮细胞的氧化损伤是 AS 发展的始动环节，采用 ox-LDL 诱导后笔者发现 6080 mg/L 浓度的 ox-LDL作用 12 h 可使 HUVECs 损伤明显，因此本研究选择 75 mg/L 浓度的 ox-LDL 作用 12 h 为造模条件。在前期研究中笔者已经发现了 Corilagin 抗 AS 的作用，本实验中进一步在细胞水平评价了不同时-效/量-效的 Corilagin 对 ox-LDL 损伤 HUVECs 的保护作用，结果显示，Corilagin 在 12、24、48 h以 浓 度 依 赖 的 方 式（3.125、6.25、12.5、25、50 mol/L）提高细胞活力，表明 Corilagin 对 ox-LDL 损伤 HUVECs 具有保护作用。炎 性 反 应 贯 穿 AS 发 生 发 展 的 全 过 程，MyD88 是 TLR 信号转导通路的关键靶标，在炎症反应中发挥着重要作用，它通过调控胞浆募集下游的肿瘤坏死因子受体相关因子-6（tumor-necrosisfactor receptor associated factor，TRAF-6），诱 导TNF-和 MCP-1 等炎症因子的表达。Zhu 等14研究发现抑制巨噬细胞中 TLR4/MyD88/P65 信号通路后小鼠 AS 出现转归，表明以 MyD88 衔接的炎症反应通路对 AS 的进展具有重要调控作用。HUVECs 作为研究内皮细胞功能调节的模型系统，常应用于血管形成、AS 斑块的研究15。本研究以 MyD88、P65、TNF-和 MCP-1 为研究靶标，通过 RT-qPCR 和 Western blot 技术检测 CorilaginABModelModel+Vit EModel+Simvastatin502512.56.253.125NormalModel+CorilaginMYD88P65MCP-1TNF-actin33KD65KD13KD17KD42KDMyD88 protein expression(lAMyD88:lA-actin)1.51.00.50CDEP65 protein expression(lAP65:lA-actin)1.51.00.50MCP-1 protein expression(lAMCP-1:lA-actin)1.51.00.50TNF-protein expression(lATNF-:lA-actin)1.51.00.50#*ModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/LModelNormalCor 3.125 mol/LCor 6.25 mol/LCor 12.5 mol/LCor 25 mol/LCor 50 mol/LVit E 10 mol/LSimvastatin 1 mol/L xs图7Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 P65、MCP-1、MyD88 和 TNF-的蛋白表达的影响（，n=3）xsFig.7EffectofCorilaginonproteinexpressionofP65，MCP-1，MyD88andTNF-inOX-LDL-inducedHUVECs（，n=3）A：Western blot 检测 Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 P65、MCP-1、MyD88 和 TNF-的蛋白表达的影响；B：Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 MYD88 蛋白表达的影响；C：Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 P65 蛋白表达的影响；D：Corilagin 对 OX-LDL 诱导的 HUVECs 中 MCP-1 蛋白表达的影响；E：Corilagin 对 OX-LDL 诱导的HUVECs 中 TNF-蛋白表达的影响。与正常组相比，#P 0.01；与模型组相比，*P 0.05，*P 0.01。24昆明医科大学学报第 44 卷对 ox-LDL 诱导的损伤 HUVECs 模型中上述因子的表达的影响，在模型组中，MyD88、P65、TNF-和 MCP-1 的表达均明显上调，而 Corilagin 组中这些指标的表达均得到了显著逆转。综上所述，Corilagin 对ox-LDL 损伤的HUVECs的保护作用可能是通过下调 MyD88 基因的表达，抑制 p65、炎性因子 TNF-和趋化因子 MCP-1的表达来实现的。本研究没有采用 MyD88 抑制剂佐证 Corilagin 通过下调 MyD88 信号通路发挥抗AS 作用，因此，在接下来的研究中，笔者将使用 MyD88 抑制剂在动物-细胞水平进一步验证Corilagin 的作用机制，为 Corilagin 临床用于防治AS 提供理论和实验依据。参考文献 Shah P K.Inflammation，infection and atherosclerosisJ.Trends Cardiovas Med，2019，29（8）：468-472.1Sharma T，Romeo F，Mehta J L.LOX-1:Implications inatherosclerosis and myocardial ischemiaJ.Excli J，2022，21（1）：273-278.2Gao W，Liu H，Yuan J，et al.Exosomes derived from ma-ture dendritic cells increase endothelial inflammation andatherosclerosis via membrane TNF-mediated NF-BpathwayJ.J Cell Mol Med，2016，20（12）：2318-2327.3Xiong X，Lu W，Zhang K，et al.Pterostilbene reduces en-dothelial cell apoptosis by regulation of the Nrf2-mediatedTLR-4/MyD88/NF-B pathway in a rat model of athero-sclerosisJ.Exp Ther Med，2020，20（3）：2090-2098.4Chen T，Luo 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