CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系.pdf

山东医药2023 年第 63 卷第 28 期CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系吴凯华1，葛丽丽2，熊爱为1，陈姝1，余敏敏11 南京市第二医院（南京中医药大学附属南京医院）妇科，南京210003；2 南京市妇幼保健院妇瘤科摘要：目的探讨着丝粒蛋白K（CENPK）、干扰素诱导核蛋白16（IFI16）表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系。方法选取行同步放化疗的106例中晚期宫颈癌患者宫颈癌组织，以同期40例因子宫脱垂或子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织为对照。免疫组织化学检测组织中CENPK、IFI16蛋白表达。比较不同临床病理特征中晚期宫颈癌患者 CENPK、IFI16蛋白表达差异。Kaplan-Meier方法分析 CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌预后的关系。Cox回归分析影响中晚期宫颈癌患者预后的影响因素。结果宫颈癌组织中CENPK、IFI16蛋白阳性表达率分别为70.75%（75/106）、67.92%（72/106），高于正常宫颈组织的10.00%（4/40）、15.00%（6/40），差异有统计学意义（P均0.05）。不同肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移中晚期宫颈癌患者癌组织中CENPK、IFI16表达比较差异有统计学意义（P均0.05）。CENPK阳性者5年累积生存率低于CENPK阴性者（P0.05），IFI16阳性者5年累积生存率亦低于CENPK阴性者（P0.05）。FIGO分期、淋巴结转移、CENPK阳性表达、IFI16阳性表达是影响中晚期宫颈癌患者预后的独立因素（P均0.05）。结论中晚期宫颈癌组织中CENPK、IFI16表达升高，二者表达与肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移有关，是影响患者不良预后的独立因素。关键词：中晚期宫颈癌；着丝粒蛋白K；干扰素诱导核蛋白16；预后doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.28.007 中图分类号：R737.33 文献标志码：A 文章编号：1002-266X（2023）28-0027-05Relationship between expression of CENPK and IFI16 and prognosis of patients with advanced cervical cancerWU Kaihua1，GE Lili，XIONG Aiwei，CHEN Shu，YU Minmin1 Department of Gynecology，The Second Hospital of Nanjing（Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine），Nanjing 210003，ChinaAbstract：Objective To investigate the relationship between the expression of centromere protein K（CENPK）and interferon-inducible nuclear protein 16（IFI16）and prognosis of patients with advanced cervical cancer.Methods Totally 106 cases of cervical cancer tissues from patients with advanced cervical cancer who underwent concurrent radiotherapy and chemotherapy were selected as the study subjects，while 40 normal cervical tissues in patients undergoing total hysterectomy due to uterine prolapse or uterine fibroids during the same period were used as controls.CENPK and IFI16 protein expression levels in tissues were detected by immunohistochemistry.We compared the difference in the expression of CENPK and IFI16 protein in advanced cervical cancer patients with different clinicopathological features.Kaplan-Meier method was used to analyze the relationship between the expression of CENPK，IFI16 proteins and the prognosis of patients.Cox regression analysis was used to analyze the prognostic factors affecting patients with advanced cervical cancer.Results The positive rates of CENPK and IFI16 proteins in the cancer tissues were 70.75%（75/106）and 67.92%（72/106），respectively，which were higher than those 10.00%（4/40）and 15.00%（6/40）of normal cervical tissues，with statistically significant differences（all P0.05）.The expression of CENPK and IFI16 in advanced cervical cancer tissues of patients with different maximum tumor sizes，FIGO staging，and lymph node metastasis showed statistically significant differences（all P0.05）.The 5-year cumulative survival rate of the CENPK positive group was significantly lower than that of the CENPK negative group，and the difference was statistically significant（P0.05）.The 5-year cumulative surviv基金项目：江苏省卫生健康委科研项目立项项目（M2020049）。第一作者简介：吴凯华（1978-），男，硕士研究生，副主任医师，主要研究方向为妇科肿瘤及妇科内分泌疾病的诊治。E-mail：wkhsl_通信作者简介：余敏敏（1967-），女，博士研究生，主任医师，主要研究方向为妇科肿瘤的诊治。E-mail:开放科学（资源服务）标识码（OSID）27山东医药2023 年第 63 卷第 28 期al rate of the IFI16 positive group was significantly lower than that of the CENPK negative group，and the difference was statistically significant（P0.05）.FIGO staging，lymph node metastasis，positive expression of CENPK in cancer tissues，and positive expression of IFI16 were independent factors for the prognosis of patients with advanced cervical cancer（all P0.05）.Conclusion The expression of CENPK and IFI16 increases in middle to late stage cervical cancer，and their expression levels are related to maximum tumor size，FIGO staging，and lymph node metastasis，which are independent factors affecting poor prognosis of patients.Key words：advanced cervical cancer；centromere protein K；interferon-inducible nuclear protein 16；prognosis宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，全球每年新发病例达60.4万例，死亡约34.2万例1。早期宫颈癌患者无明显症状，难以早期发现，明确诊断时已为中晚期阶段。虽然目前中晚期宫颈癌以同步放化疗为主，但由于肿瘤异质性，不同患者临床预后差异较大2。着丝粒蛋白K（CENPK）属于着丝粒蛋白家族成员，在细胞有丝分裂过程中募集到着丝粒，参与着丝粒的组装，调控有丝分裂过程中染色体分离3。近年发现，肝癌4、胃癌5等恶性肿瘤中CENPK表达上调能促进肿瘤恶性增殖及转移，是新的肿瘤促进因子。干扰素诱导核蛋白16（IFI16）是一种干扰素诱导蛋白，广泛参与细胞增殖、凋亡及激动机体固有免疫等生物学过程6。近年发现，IFI16能诱导肿瘤细胞中成纤维细胞生长因子1的表达，促进肿瘤细胞的恶性增殖及转移，导致肿瘤进展7。目前，关于CENPK、IFI16在中晚期宫颈癌组织表达与患者预后的关系研究较少。2015年1月2018年1月，我们利用免疫组化法检测中晚期宫颈癌组织中CENPK、IFI16表达，探讨与患者预后的关系。1 资料与方法 1.1临床资料选取2015年1月2018年1月南京市第二医院（南京中医药大学附属南京医院）诊治的106例中晚期宫颈癌患者，取其宫颈癌组织，均接受同步放化疗为主的综合治疗方案。纳入标准：经病理检查明确诊断为宫颈癌；参考2009年国际妇产联盟（FIGO）分期为B期；初次诊治，既往无抗癌治疗病史；一般状况良好，生存质量卡氏评分90分；患者和家属对本研究知情并签署同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤；合并急性感染性疾病、自身免疫性疾病及精神障碍性疾病；同步放化疗期间死亡。患者年龄3478（63.47 5.27）岁；FIGO分期：B期36例，AB期50例，期20例；病理类型：鳞癌64例，腺癌28例，腺鳞癌14例；肿瘤最大径：0.05）。本研究经医院伦理委员会批准通过（2015-LS-ky025）。1.2宫颈癌组织中CENPK、IFI16表达检测采用免疫组化法检测组织中 CENPK、IFI16表达。留取宫颈癌患者活检术中获取的部分宫颈癌组织及对照组正常宫颈组织。常规组织固定包埋，切片后二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，柠檬酸缓冲液抗原热修复，100 水浴10 min，3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶 15 min，3%羊血清室温封闭 2 h。CENPK、IFI16 一抗 4 过夜（购自 Abcam，货号 ab236739、ab169788，稀释比1 200）。实验步骤按试剂盒说明书进行，试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，货号PV6000。镜下观察进行半定量染色评分，染色强度分为三个等级，无染色0分，浅黄色为1分，棕褐色为 2 分。染色面积评分三个等级，面积25%0 分，1 分面积为25%50%，面积50%2 分。将染色强度和染色面积评分相乘为免疫组化染色评分，2为阴性，2为阳性。1.3统计学方法采用SPSS22.0统计软件。计数资料以例（%）表示，组间比较采用 2检验。绘制Kaplan-Meier 曲线，采用 Log-Rank 检验分析不同CENPK、IFI16表达患者生存差异。单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析影响中晚期宫颈癌患者预后的因素。P0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1宫颈癌、正常宫颈组织中 CENPK、IFI16 表达比较宫颈癌组织中CENPK蛋白棕黄色阳性染色位于细胞质和细胞膜，IFI16蛋白棕黄色阳性染色位于细胞核。见图1。宫颈癌组织中CENPK、IFI16蛋白阳性表达率分别为 70.75%（75/106）、67.92%（72/106），高于正常宫颈组织的 10.00%（4/40）、15.00%（6/40），差 异 有 统 计 学 意 义（2分 别 为28山东医药2023 年第 63 卷第 28 期43.170，32.691，P均0.05）。2.2CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌患者临床病理特征的关系不同肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移中晚期宫颈癌患者癌组织中CENPK、IFI16表达比较差异有统计学意义（P 均0.05）。见表 1。2.3CENPK、IFI16表达对中晚期宫颈癌患者生存预后的影响106例中晚期宫颈癌患者随访过程中死亡 68 例，5 年总体生存率为 35.85%（38/106）。CENPK 阳性者和阴性者 5 年累计生存率分别为26.67%（20/75）、58.06%（18/31）。CENPK 阳性者5年累积生存率明显低于CENPK阴性者，差异有统计学意义（Log-Rank2=13.471，P0.05）。IFI16 阳性者和阴性者 5 年累计生存率分别为 25.00%（18/72）、60.61%（20/33）。IFI16阳性者5年累积生存率明显低于 CENPK 阴性者，差异有统计学意义（Log-Rank 2=22.721，P0.05）。见图2。2.4影响中晚期宫颈癌患者预后的多因素Cox回归分析结果106例中晚期宫颈癌患者随访5年，生存68例，为预后良好；死亡38例，为预后不良。以预后为因变量（1=死亡，0=存活），以年龄、分化程度、病理类型、肿瘤最大径、淋巴结转移、FIGO 分期、CENPK、IFI16为自变量进行多因素Cox回归分析。结果显示，FIGO分期期、淋巴结转移、CENPK阳性、IFI16阳性是影响中晚期宫颈癌患者不良预后的独立危险因素（P均0.05）。见表2。3 讨论 CENPK蛋白相对分子质量为31 kD，参与构成着丝粒，在真核生物染色体分离过程中发挥关键作用。近年研究表明，CENPK 的功能失调与膀胱癌、肝细胞肝癌等恶性肿瘤的进展有关，是潜在的预后相关肿瘤标志物8。本研究癌组织中 CENPK表达明显升高，与肿瘤最大径、FIGO 分期及淋巴表1CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌患者临床病理特征的关系 例（%）临床病理特征年龄 60岁 60岁肿瘤最大径（cm）0.050.050.050.050.050.050.050.050.05图1宫颈癌组织及正常宫颈组织中CENPK、IFI16表达（免疫组化，200）29山东医药2023 年第 63 卷第 28 期结转移有关，提示 CENPK 促进中晚期宫颈癌的进展。有研究报道，甲基化转移酶 ZC3H13 能促进CENPK mRNA N6 甲 基 腺 苷 修 饰，增 强 CENPK mRNA 的稳定性，在转录水平上调 CENPK 表达9。此外，肿瘤中CENPK能磷酸化激活磷脂酰肌醇3-激酶，促进下游 AKT 通路的激活，导致肿瘤过度增殖，而敲除 CENPK 表达后导致肿瘤细胞 G1期阻滞，细胞凋亡增加10。因此，中晚期宫颈癌中CENPK 表达上调作为一种促癌基因，促进肿瘤进展，是潜在预测预后的标志物。本研究证实，CENPK阳性中晚期宫颈癌患者预后较差。其原因一方面是 CENPK 阳性表达的中晚期宫颈癌恶性程度高，肿瘤细胞增殖及侵袭能力较强，导致肿瘤容易发生复发，导致患者预后不良11。另一方面，CENPK 表达上调能与 X 射线修复交叉互补蛋白 5相互作用，促进 DNA 损伤修复途径的激活，增强肿瘤细胞对放疗的抵抗性5。此外，CENPK 表达升高能与干性转录因子SOX6直接结合，促进-连环蛋白的表达和核转位，导致 Wnt/-连环蛋白信号传导的激活，促进 p53 的泛素化，增强肿瘤细胞干性及对顺铂或卡铂化疗药物的耐药性9。因此，CENPK 可作为评估中晚期宫颈癌患者预后的相关肿瘤标志物。IFI16 是 PYHIN 家族成员，结构上包括一个pyrin结构域和两个参与转录调控的DNA结合HIN结构域。功能上，IFI16 作为一种转录因子，是病毒免疫识别的关键分子，能启动炎症反应，在病毒感染防御、系统性红斑狼疮等疾病中发挥重要作用12-13。本研究中，中晚期宫颈癌组织中 IFI16 表达升高，与肿瘤最大径、FIGO 分期及淋巴结转移有关，提示 IFI16参与促进中晚期宫颈癌的发生发展。有学者报道，HPV DNA编码产生的E7蛋白能与宫颈癌细胞中 IFI16 相互作用，增强 IFI16 蛋白稳定性，抑制肿瘤细胞焦亡的发生，促进肿瘤免疫逃逸14。此外，体外细胞实验证实，IFI16 能激活干扰素基因刺激蛋白-TANK 结合酶 1 通路，激活下游核因子 B，核因子 B 与程序性死亡分子配体 1 启动子结合，促进程序性死亡分子配体 1 表达，导致肿瘤免疫逃逸，促进肿瘤进展15。本研究中，IFI16 阳性表达的中晚期宫颈癌患者预后较差。其原因可能是 IFI16 表达上调增强肿瘤细胞化疗耐药性及放疗抵抗的形成。研究表明，IFI16在阿霉素和紫杉醇耐药细胞系中的表达明显上调，其在耐药细胞系中的表达上调促进肿瘤复发和转移，导致患者不良预后16。此外，尚有学者在胶 质 瘤 中 发 现，着 丝 粒 蛋 白 ARPC1B 能 抑 制TRIM21 介导的 IFI16 降解，导致 IFI16 蛋白表达升高，IFI16 激活核因子 B 信号通路，从而促进间质性表型维持和放疗耐药性的形成17。因此，IFI16可作为中晚期宫颈癌患者预后评估肿瘤标志物。综 上 所 述，中 晚 期 宫 颈 癌 组 织 中 CENPK、IFI16 表达升高，二者表达与肿瘤最大径、FIGO 分期、淋巴结转移有关，共同参与促进中晚期宫颈癌的肿瘤进展。癌组织中CENPK阳性表达、IFI16阳性表达是影响中晚期宫颈癌患者预后的独立危险因素，有助于辅助临床医生评估中晚期宫颈癌患者的生存预后。但本研究样本量较小，有待今后扩大样本量进一步证实该结论。参考文献：1BUSKWOFIE A，DAVID-WEST G，CLARE C A.A review of cervical cancer：incidence and disparities J.J Natl Med Assoc，图2CENPK、IFI16表达对中晚期宫颈癌患者生存预后的影响表2多因素COX比例风险模型分析影响中晚期宫颈癌患者预后的因素因素淋巴结转移FIGO分期CENPKIFI160.4770.3970.6090.551SE0.1550.1220.1760.178Wald 29.47110.58911.9739.582P0.050.050.050.05HR1.6111.4871.8381.73595%CI1.1892.1831.1711.8891.3022.5961.2242.45930山东医药2023 年第 63 卷第 28 期2020，112（2）：229-232.2GADDUCCI A，COSIO S.Neoadjuvant chemotherapy in locally advanced cervical cancer：review of the literature and perspectives of clinical researchJ.Anticancer Res，2020，40（9）：4819-4828.3LI X，HAN Y R，XUEFENG X，et al.Lentivirus-mediated short hairpin RNA interference of CENPK inhibits growth of colorectal cancer cells with overexpression of Cullin 4A J.World J Gastroenterol，2022，28（37）：5420-5443.4WU S，CAO L，KE L，et al.Knockdown of CENPK inhibits cell growth and facilitates 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