肿瘤基因突变检测标本要求ppt课件.ppt

肿瘤基因突变检测标本病理评估合格的标本适用于EGFR基因突变检测建议采用灵敏度高的ARMS检测方法肺叶切除肺段切除血浆血清支气管镜活检细针穿刺活检支气管刷片胸水痰手术标本 活检标本血液学标本细胞学标本用于突变检测的标本1.Dacic S.Adv Anat Pathol 2008;15(4):241-247.2.Sequist LV,et al.Clin Cancer Res 2006;12(14S):4403s-4406s.3.Bai H,et al.J Clin Oncol 2009;27(16):2653-2659.肿瘤基因肿瘤基因突变检测突变检测标本类型标本类型冰冻组织冰冻组织外科手术标本：最好标本，可得高质量肿瘤DNA支气管镜、穿刺活检测标本：量少，但肿瘤DNA质量仍好固定包埋组织固定包埋组织外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，但DNA片段化支气管镜、穿刺活检测标本：可得肿瘤DNA量少且片段化细胞学标本细胞学标本胸水、肺泡冲洗液和痰液标本：肿瘤细胞含量不确定，通常很少血液标本血液标本血清、血浆标本：含肿瘤DNA，但含量不稳定，DNA片段化循环血肿瘤细胞：可得较高质量肿瘤DNA，但量很少不同类型标本处理方式不同类型标本处理方式新鲜组织标本新鲜组织标本：1、迅速低温放置，如有条件可放置-80或者液氮保存，如果没有条件可使用-20保 存，但是保存时间不宜太久；2、放入组织保存液中保存，组织保存液的能渗透0.5cm厚度的组织，因此用组织保存液保存时，建议组织不宜过大。核酸在组织保存液中 37 稳定存放1天，25 稳定存放一周，4 1个月或20 长期存放石蜡组织标本石蜡组织标本 1、手术、穿刺、活检标本等放入10%中性福尔马林中固定后制作成蜡块，可保存数年之久。(病理科常规处理样本方式)细胞学标本细胞学标本 1、胸水样本、心包积液、脑脊液等，建议在收到标本后两个小时内离心收集沉淀细胞进行检测，如来不及操作可离心后将沉淀冻存至-20保存，等使用时取出；亦可将沉淀包埋成蜡块后再切片检测；2、或者将样本直接放置4保存过夜再离心收集沉淀，可能会一定程度影响DNA的完整性，但一般不影响实验结果。细胞学标本建议涂片后经病理诊断含有肿瘤后在进行检测。血液标本血液标本 1、血液标本收集后使用EDTA抗凝，由于血浆、血清中游离核酸以及循环肿瘤细胞量极少，建议尽可能在收集标本后2小时内进行核酸提取，以避免核酸更深降解。标本通常较大，能提供足够的肿瘤组织用于检测标本可以是冰冻或福尔马林固定组织 手术标本标本接收、固定组织处理、石蜡包埋切片及H&E染色组织学观察支气管镜活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的ARMS检测方法细针穿刺活检标本较小通常是福尔马林固定、石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的ARMS检测方法细胞学标本细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少，需要采用灵敏度高的ARMS检测方法建议有条件的病理科制备细胞蜡块：处理流程：细胞学标本经离心处理后，常规福尔马林固定、处理及石蜡包埋即可制备细胞蜡块的好处：（1）便于长期保存；（2）方便用于EGFR基因突变的检测及其他分子生物学标记物的检测胸水或支气管刷片或痰液涂片、染色病理诊断液基细胞学病理诊断细胞蜡块，切片染色病理诊断四、胸水标本处理流程收集胸水50-500mL室温静置30分钟，吸去上清，剩余 5-50mL沉淀物室温250g离心10分钟，吸去上清低温保存酒精固定涂片福尔马林固定切片福尔马林固定的标本固定要及时，离体后即时处理1h固定液：10%中性缓冲福尔马林（新鲜配制）固定液的量：应为组织体积的10倍以上 固定时间：小组织6-12h，大标本6-48h冰冻标本组织离体后立即速冻1h标本的质量控制肺转移性肝细胞性肝癌未检测到肿瘤组织病理评估不达标样本导致EGFR突变检测呈阴性结果小细胞性肺癌肿瘤细胞太少4 例肺肿块切除标本EGFR突变检测呈阴性Rubbish In;Rubbish Out 选择正确、合适的肺癌组织，是保证突变检测成功第一步及重要的步骤诊断：确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌肿瘤量：确保有足够的肿瘤组织用于突变检测尽量保证200-400个肿瘤细胞对于技术成熟的实验室，可以尝试进行200个肿瘤细胞的标本检测5-10uM 10张切片能满足突变检测需求当细胞数较少时,可以适当增加切片数,以满足检测需求肿瘤比例：标识肿瘤丰富的区域，提高肿瘤细胞比例用于检测尽量去除非肿瘤组织及细胞，提高检测的敏感性不同敏感性的检测方法对肿瘤比例要求不一样测序法：10%ARMS法：1%标本的病理评估内容