血管内皮生长因子(VEGF)对皮肤癌发生与发展的调控.ppt

基 因 的 研 究 进 展2 23 31 1赵鑫鑫 文益阳文益阳 刘刘庆茹茹 何秋瑜何秋瑜 陈丽丽 韩燕燕燕燕1111级级研究研究研究研究 生一班生一班生一班生一班专业专业：病理学与病理：病理学与病理：病理学与病理：病理学与病理 生理学生理学生理学生理学1 1.血管内皮生长因子(VEGF)对皮肤癌发生与发展的调控2 2.n n在人类皮肤癌中，鳞状细胞癌的发病率居第二位，世界上每年有500,000人发病。n nDMBA/TPA（二羟甲基丁酸/对苯二甲酸）化学诱导小鼠皮肤癌，小鼠的鳞状细胞癌和人类极其相似。3 3.n n肿瘤的生长过程中，VEGF能够促进血管内皮细胞增殖从而增加肿瘤的血管密度，促进肿瘤生长。n n由于血管生成在皮肤鳞状细胞癌的发生发展有重要影响，由此推断，VEGF对皮肤癌的生长也有重要的促进作用。n nVEGF 血管生成 皮肤癌4 4.n n很多肿瘤生长过程中，血管微环境能够影响肿瘤干细胞（CSC）的功能。但是VEGF是否能够直接影响CSC的增殖，尚未有明确结论。n n n nVEGF VEGF 血管生成血管生成 CSCCSC 5 5.一.皮肤癌血管微环境中是否存在CSCs？n n在脑肿瘤中，血管微环境中存在CSC并能影响其功能，但皮肤癌血管微环境中是否存在CSC尚不明确。n n皮肤癌中的肿瘤上皮细胞（TEC）具有克隆性增殖潜能，并且TEC移植到免疫缺陷的小鼠后可形成肿瘤，因此可以推断TEC即为CSCs。6 6.为确定皮肤癌血管微环境是否存在CSCs，进一步通过免疫组织化学染色研究：n n三种 CSC markers:CD34+、Hmgan n免疫 TEC markers:K5、K14n n染色 EC markers:endoglin、CD31 CSC:CSC:肿肿瘤干瘤干细细胞胞 TEC:TEC:肿肿瘤上皮瘤上皮细细胞胞 EC EC：血管内皮：血管内皮细细胞胞7 7.n n皮肤癌的TEC可以显示CSC的markers CD34+,但内皮细胞没有显示CSC的markers CD34+,因此可以排除内皮细胞的影响，证明TEC即为皮肤癌里的CSC 血管微环境中存在CSC。8 8.二.VEGF对CSC的影响 以上实验已证明小鼠皮肤癌血管微环境 中存在CSC，并且现已知VEGF对血管 微环境的形成有重要影响，但VEGF对 CSC是否有直接影响尚未证实。9 9.（一）DC101封闭性阻断VEGFR2（二）皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因（三）皮肤癌小鼠模型里过表达VEGF1010.（一）DC101封闭性阻断VEGFR2 通过qRT-PCR、免疫荧光可以证明：VEGFR2存在于血管内皮细胞。1111.welcome to use these PowerPoint templates,welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experienceNew Content design,10 years experience DC101DC101是是VEGFR2VEGFR2的封的封闭闭性抗体，性抗体，强强烈抑制烈抑制肿肿瘤血管再生，瘤血管再生，DC101DC101作用于作用于皮肤癌小鼠模型，可皮肤癌小鼠模型，可见见内皮内皮细细胞增殖胞增殖显显著减少、著减少、肿肿瘤血管密度明瘤血管密度明显显降低，降低，CSCsCSCs的比例降低。的比例降低。1212.1313.n nVEGF阻断 血管生成 减少 CSC比 例降低n n阻断VEGF能通过减少血管生成使CSCs比例降低，但是VEGF是否能直接影响CSCs的某些基因的表达来直接调控其增殖尚需进一步证实。n nVEGF CSC？1414.n nqRT-PCR表明VEGFa在CD34+CSCs中的表达高于正常上皮细胞和CD34-CSCs。（二）皮肤癌小鼠模型里敲除Vegfa基因1515.n n为了探究 CSCs 分泌的VEGF是否调控皮肤CSCs的自我更新和分化，维持肿瘤的生长，该实验在已经建立皮肤癌的小鼠模型中敲除Vegfa基因，用抗癌药三苯氧胺处理一周后，大多数肿瘤已经萎缩到原来的60%,两周后大多数肿瘤完全消失。1616.n n在癌症的治疗的过程中，单纯的血管增生抑制剂并不能使已经建立的肿瘤完全消失，而上述实验中肿瘤完全消失，表明：Vegfa可以通过除促进血管增生以外的因素影响肿瘤生长。1717.VegfaVegfa基因的缺失基因的缺失导导致致TECsTECs（即（即CSCsCSCs）显显著减少，著减少，可以推断：可以推断：VEGFVEGF对对皮肤癌的皮肤癌的CSCsCSCs存在一定影响。存在一定影响。1818.n n从CSCs对称性细胞分裂与非对称性分裂来分析这种假设是否成立，对称性细胞分裂代表细胞正在进行自我更新，非对称性分裂表明肿瘤细胞的分化。1919.n n在肿瘤生长的过程中，大约40%的TEC处于对称性分裂（自我更新的状态）。但是在敲除VEGFa的小鼠皮肤癌模型里，处于增殖的TEC比例大幅度降低。因此VEGF对皮肤CSCs的增殖和自我更新有重要影响。2020.（三）皮肤癌小鼠模型里过表达Vegfan n在已经建立皮肤癌的小鼠模型里，特异性使TEC内Vegfa基因过表达，来研究VEGF的增加是否增加CSCs的自我更新能力。2121.n nVegfa基因过表达后，可见CSCs大量增殖，对称性细胞分裂的CSC比例增加。n n结果表明：VEGF可以通过增加CSC的自我更新，促进血管内皮细胞的增殖和血管密度的增加促进肿瘤的生长。2222.n nVEGF改变CSCs的自我更新和分化能力以及其分子机制，我们从基因水平研究获得：n n 1、regulate stemness:Sox、Hmgan n 2、proliferation:Ccnd1、Ccng1n n 3、通过血管微环境调控肿瘤细胞之 n nGenes 间的相互作用：Col1、Col3a1 n n 4、鳞状细胞癌中表达的基因：n n Krt13、Ano1 2323.n n在Vegfa基因过表达的皮肤癌小鼠模型中，很多基因表达增加，通过qRT-PCR、流式细胞仪分析、免疫荧光染色三种方法分析，大约50%的基因表达上调是由于Vegfa基因的过表达。因此，VEGF在转录水平影响相关基因以调控CSCs的自我更新和分化能力。2424.结论 1.VEGF1.VEGF可以通可以通可以通可以通过过促促促促进进内皮内皮内皮内皮细细胞增殖和血管再生促胞增殖和血管再生促胞增殖和血管再生促胞增殖和血管再生促进肿进肿瘤生瘤生瘤生瘤生长长。2.VEGF2.VEGF可以通可以通可以通可以通过过直接直接直接直接调调控控控控CSCsCSCs的的的的某些基因的某些基因的某些基因的某些基因的转录转录促促促促进肿进肿瘤生瘤生瘤生瘤生长长。2525.Thank you!2626.资料可以编辑修改使用学习愉快！课件仅供参考哦，实际情况要实际分析哈！感感谢您的您的观看看