右美托咪定调节miR-711_GDNF信号轴对创伤性脑损伤大鼠认知障碍和神经损伤的影响.pdf

右美托咪定调节 miR-711/GDNF 信号轴对创伤性脑损伤大鼠认知障碍和神经损伤的影响汪晖渊宁夏医科大学 实验动物中心袁宁夏 银川 750004冤摘要院目的院探究右美托咪定渊Dex冤是否能够通过调节 miR-711/胶质细胞源性神经营养因子渊GDNF冤信号轴改善创伤性脑损伤渊TBI冤大鼠认知障碍和神经损伤遥方法院将大鼠按照随机数字表法分为假手术组渊Sham 组冤尧TBI 组尧Dex 组尧miR-NC 组尧miR-711 agomir 组尧miR-711 antagomir 组袁每组 10 只遥 采用脑损伤打击器自由落体打击袁建立 TBI 大鼠模型遥 结论院Dex 可能通过调控 miR-711/GDNF 信号轴减轻海马组织病理损伤袁抑制促神经元凋亡蛋白的表达袁改善 TBI 后认知障碍和神经损伤袁发挥脑保护作用遥关键词院右美托咪定曰miR-711曰胶质细胞源性神经营养因子曰创伤性脑损伤曰认知障碍曰神经损伤中图分类号院R96文献标志码院A文章编号院1008-4657(2023)04-0008-08收稿日期院2022-12-23作者简介院汪晖渊1991-冤袁男袁宁夏西吉人袁宁夏医科大学助理实验师袁主要研究方向院实验动物技术袁电子邮箱院遥0引言创伤性脑损伤渊traumatic braininjury,TBI冤是临床脑外科常见的中枢神经系统损伤性疾病袁是由于直接或间接暴力损伤脑部所致袁具有较高的致死率尧致残率咱1暂袁严重影响人类的生命健康遥 研究发现袁交通事故频发是导致 TBI 发生率逐渐增加的主要原因袁 其导致的神经功能障碍与认知功能障碍为患者生活以及家庭都造成沉重的负担咱2暂遥 TBI 主要分为原发性和继发性损伤袁原发性损伤不可逆袁可直接引起死亡咱3暂曰继发性损伤的发生机制复杂袁与氧化应激尧炎症反应以及神经元凋亡等多种病理活动有关咱4暂袁最终引起神经功能障碍与认知障碍咱5暂遥 因其发生机制尚不清晰袁临床上用于 TBI 后神经保护药物较少袁寻找及时有效的神经元修复手段与治疗方法是目前 TBI 的研究热点遥右美托咪定渊dexmedetomidine,Dex冤是一种高选择性中枢神经 琢2 肾上腺素受体激活剂袁广泛用于手术中的镇静止痛袁具有抗氧化应激尧改善炎症反应尧减少细胞凋亡等作用咱6-7暂遥 大量研究证实袁Dex 在脑缺血再灌注尧缺血缺氧以及脑出血等脑损伤中能够有效发挥神经保护作用咱8-9暂遥 研究发现袁Dex 能够通过减轻脑水肿尧减少神经元凋亡尧抑制自噬袁改善 TBI 大鼠学习与记忆功能障碍袁发挥脑保护作用咱10暂遥 近年来袁微小 RNA渊miRNA冤在脑损伤发生发展中的研究迅速发展袁并受到广泛关注遥研究发现袁Dex 通过调控miR-129-5p 对新生小鼠缺血缺氧性脑损伤治疗效果显著咱11暂遥 TBI 后 miR-711 水平显著上调袁引起神经元凋亡蛋白异常表达袁导致神经元死亡咱12暂遥胶质细胞源性神经营养因子渊glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF冤是一类多巴胺能神经营养因子袁能够保护多种神经元损伤咱13暂遥 采用生物信息学网站预测可知袁GDNF 的 3爷UTR 上具有 miR-711 的结合位点袁 猜测 GDNF 可能是 miR-711 的靶基因遥 本研究采用双荧光素酶报告基因实验验证GDNF 与 miR-711 的靶向关系袁并建立 TBI 大鼠模型袁探究 Dex 是否能够通过调节 miR-711/GDNF 信号第 38 卷第 4 期灾燥造.38 晕燥.4荆楚理工学院学报Journal of Jingchu University of Technology圆园圆3 年 8 月Aug.圆园圆38轴袁改善 TBI 后大鼠认知障碍袁保护神经损伤遥1材料1.1实验动物SPF 级雄性 SD 大鼠 60 只袁8 周龄袁体质量为 200耀220g袁购自中国医学科学院医学生物学研究所袁动物生产许可证号为 SCXK(滇)K2019-0002遥 实验前适应性饲养一周袁饲养条件为院温度 22耀25益袁湿度45%耀55%袁昼夜时长 12h:12h袁期间不控制饮水和采食遥实验过程严格按照实验动物管理条例进行袁符合野3R冶原则遥1.2实验药物与试剂Dex渊SC13911冤购自北京凯诗源生物科技有限公司曰miR-711 激动剂渊miR-711agomir冤尧miR-711 抑制剂渊miR-711antagomir冤及阴性对照物均购自广州锐博生物科技公司曰HE 染色试剂盒渊R3209冤购自北京康瑞纳生物科技有限公司曰TRIzol 试剂盒 渊CD-13433-ML冤 购自武汉纯度生物科技有限公司曰qPCRSYBRGreenMasterMix 荧光定量试剂盒渊MQ101-01/02冤购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司曰RIPA裂解液渊R0010冤尧BCA 蛋白检测试剂盒渊PC0020冤尧ECL 发光液渊PE0010冤均购自北京索莱宝生物技术有限公司曰GDNF 抗体渊ab28956冤尧Bcl-2 抗体渊ab196495冤尧Bax 抗体渊ab32503冤尧GAPDH 抗体渊ab181603冤尧山羊抗兔二抗渊ab6721冤均购自英国 Abcam 公司遥1.3实验仪器ZH-ZYQ 脑损伤打击器购自安徽正华生物仪器设备有限公司曰Morris 水迷宫装置购自广州吉妮欧生物科技有限公司曰NB2000 生物显微镜购自南京先纳光学仪器有限公司曰RTQ-960Pro 实时荧光定量PCR渊qRT-PCR冤仪购自杭州艾康生物技术有限公司曰MiulabGIS-500 凝胶成像分析系统购自杭州米欧仪器有限公司遥2方法2.1模型建立将大鼠按照随机数字表法分为假手术组渊Sham 组冤尧TBI 组尧Dex 组尧miR-NC 组尧miR-711agomir 组尧miR-711antagomir 组袁每组 10 只遥 除 Sham 组外袁其余组参考文献咱14暂采用脑损伤打击器自由落体打击袁建立 TBI 大鼠模型院大鼠腹腔注射戊巴比妥钠进行麻醉袁仰卧位固定于打击器上袁头部消毒备皮袁于颅骨正中开约 3cm 长的切口袁分离软组织暴露颅骨曰于矢状缝正中袁人字缝和冠状缝连接线中点的右 3mm处钻孔袁注意保持硬脑膜完好曰将打击垫放置在暴露的硬脑膜上袁进行打击曰之后进行止血消毒尧逐层缝合头皮遥 Sham 组 10 只大鼠仅开窗袁不做撞击处理遥2.2给药方法参照文献咱15暂袁Dex 组尧miR-NC 组尧miR-711agomir 组尧miR-711antagomir 组分别于造模前 10min 腹腔注射 Dex100滋g/kg遥造模结束后 miR-NC 组尧miR-711agomir 组尧miR-711antagomir 组立即进行对侧侧脑室 miR-NC尧miR-711agomir 和 miR-711antagomir 的注射袁每次 1nmol袁注射 5滋L遥Sham 组与 TBI 组给予等体积生理盐水进行注射遥2.3Morris 水迷宫实验评价各组大鼠认知功能给药结束后 48h袁参考文献咱16暂采用 Morris 水迷宫测试评价各组大鼠认知功能院放置水池袁保持温度为 22耀25益袁注水后将水池平均分为四个象限袁其中一个象限设置平台袁训练大鼠找到平台袁记录所需时间袁每日进行 4 次实验袁间隔 15s袁训练 4d 后袁移除平台袁记录逃逸潜伏期与经过原平台象限次数遥2.4神经功能评分咱14暂神经行为学评分院姿势异常渊0耀2 分冤尧耳廓反射渊0耀1 分冤尧角膜反射渊0耀1 分冤尧立体感受检测渊0耀1分冤尧放置反射渊0耀4 分冤尧翻正反射渊0耀3 分冤尧抓握反射渊0耀4 分冤袁总分 16 分袁评分越低提示行为学异常曰运动功能评分院行走试验渊0耀3 分冤尧平衡试验渊0耀6 分冤尧爬坡试验渊0耀2 分冤袁总分 11 分袁评分越低提示运动功能异常遥92.5HE 染色观察各组大鼠海马组织病理学变化麻醉并断颈处死大鼠袁分离海马组织袁部分组织置于多聚甲醛中固定袁制备常规石蜡切片袁随后采用常规二甲苯尧酒精脱蜡处理袁HE 染色袁封片袁置于显微镜下观察各组大鼠海马组织病理学变化遥2.6qRT-PCR 检测各组大鼠海马组织中 miR-711尧GDNFmRNA 表达采用 TRIzol 试剂盒提取海马组织总 RNA袁反转录合成 cDNA遥 按照 qPCRSYBRGreenMasterMix 荧光定量试剂盒说明书进行操作袁 采用 qRT-PCR 仪进行荧光定量 PCR 扩增遥 扩增条件为 95益预变性 3min袁95益变性 5s袁60益退火 30s袁72益延伸 30s袁共 45 个循环遥采用 2-驻驻Ct 法袁以 U6尧GAPDH 为内参袁计算 miR-711尧GDNFmRNA 相对表达量遥 qRT-PCR 所需引物序列见表 1遥表 1 qRT-PCR 所需引物序列表基因上游引物序列下游引物序列miR-7115爷-ACTTTGAGTCTCTCCTCAGGGTG-3爷5爷-TCTCCCCTCACTTACGTCTCTCCC-3爷GDNF5爷-CCAGTGACTCCAATATGCCTG-3爷5爷-CTCTGCGACCTTTCCCTCTG-3爷U65爷-CTCGCTTCGGCAGCACA-3爷5爷-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3爷GAPDH5爷-CCAATGTGTCCGTCGTGGATCT-3爷5爷-GTTGAAGTCGCAGGAGACAACC-3爷注院所有引物均由上海生工生物工程公司提供遥2.7双荧光素酶报告基因实验检测 miR-711 与 GDNF 的靶向关系应用 TargetScan 生物信息学预测网站渊http:/www.targetscan.org/冤预测发现袁miR-711 与 GDNF 具有潜在结合位点遥 采用双荧光素酶报告基因系统确定两者之间的靶向关系院将构建好的 GDNF 野生型质粒 渊GDNF-WT冤 与 GDNF 突变型质粒 渊GDNF-MUT冤 分别与 NC mimics 和 miR-711 mimics 共转染至HEK293T 细胞渊中科院细胞库提供冤中袁分别为 miR-NC 组尧miR-711 组遥 培养 48 h 后袁采用荧光素酶活性检测试剂盒检测各组萤火虫荧光素酶活性渊Fluc冤和海肾荧光素酶活性渊Rluc冤袁以 Fluc/Rluc 表示相对荧光素酶活性遥2.8 Western Blot 法检测各组大鼠海马组织 GDNF 以及神经元凋亡相关蛋白的表达海马组织中加入 RIPA 裂解液提取总蛋白袁采用 BCA 蛋白检测试剂盒检测总蛋白含量曰取 40 滋g 蛋白上样进行 SDS-PAGE 电泳袁将蛋白转移至 PVDF 膜上袁5%BSA 封闭 1 h袁TBST 洗膜袁加入 GDNF尧Bcl-2尧Bax尧GAPDH 一抗袁4益孵育过夜袁TBST 洗膜袁加入二抗袁室温孵育 1 h袁TBST 洗膜后采用 ECL 显影袁凝胶成像分析系统分析灰度值袁以 GAPDH 为内参袁计算目的蛋白的相对表达量遥2.9 统计学方法实验数据采用 SPSS22.0 统计学软件进行分析袁计量资料符合正态分布袁以渊 依 s冤表示遥 两组间比较采用 t 检验袁多组间比较采用单因素方差分析袁进一步两两比较采用 SNK-q 检验遥 以 P 约 0.05 为差异具有统计学意义遥3 结果3.1 Dex 对 TBI 大鼠认知功能的影响与 Sham 组比较袁TBI 组大鼠逃逸潜伏期明显延长袁经过原平台象限次数显著减少渊P约 0.05冤曰Dex 组大鼠逃逸潜伏期较 TBI 组显著缩短袁经过原平台象限次数显著增加渊P 约 0.05冤曰与 Dex 组比较袁miR-NC组大鼠逃逸潜伏期与经过原平台象限次数无显著差异 渊P跃 0.05冤曰 与 miR-NC 组比较袁miR-711 agomir组大鼠逃逸潜伏期明显延长袁经过原平台象限次数显著减少渊P 约 0.05冤袁miR-711 antagomir 组大鼠逃逸潜伏期明显缩短袁经过原平台象限次数显著增加渊P约 0.05冤遥 结果见表 2遥10表 2 各组大鼠逃逸潜伏期与经过原平台象限次数的比较渊x 依 s,n=10冤组别逃逸潜伏期渊s冤经过原平台象限次数渊次冤Sham 组13.87 依 1.2223.61 依 2.47TBI 组8.37 依 2.48a5.12 依 0.67aDex 组21.29 依 2.27b13.36 依 1.27bmiR-NC 组21.82 依 2.43b12.87 依 1.25bmiR-711 agomir 组25.42 依 2.31bcd9.22 依 0.76bcdmiR-711 antagomir 组17.63依1.64bcd17.41 依 1.52bcd注院与 Sham 组比较袁aP约 0.05曰与 TBI 组比较袁bP约 0.05曰与 Dex 组比较袁cP约 0.05曰与 miR-NC 组比较袁dP约 0.05遥 下同遥3.2 Dex 对 TBI 大鼠神经功能的影响与 Sham 组比较袁TBI 组大鼠神经行为学评分与运动功能评分均显著降低 渊P约 0.05冤曰 与 TBI 组比较袁Dex 组大鼠神经行为学评分与运动功能评分均显著提高渊P 约 0.05冤曰与 Dex 组比较袁miR-NC 组大鼠神经行为学评分与运动功能评分无显著差异渊P 跃 0.05冤曰与 miR-NC 组比较袁miR-711 agomir 组大鼠神经行为学评分与运动功能评分显著降低渊P约 0.05冤袁miR-711 antagomir 组大鼠神经行为学评分与运动功能评分显著提高渊P约 0.05冤遥 结果见表 3遥表 3 各组大鼠神经行为学评分与运动功能评分的比较渊x 依 s,n=10冤组别神经行为学评分运动功能评分Sham 组13.72 依 1.5610.26 依 0.64TBI 组5.26 依 0.73a4.35 依 0.49aDex 组10.23 依 0.95b6.22 依 0.74bmiR-NC 组10.27 依 1.02b6.47 依 0.63bmiR-711 agomir 组8.37 依 0.95bcd5.31 依 0.39bcdmiR-711 antagomir 组11.91 依 1.17bcd8.46 依 0.72bcd3.3 Dex 对 TBI 大鼠海马组织病理损伤的影响与 Sham 组比较袁TBI 后海马组织出现明显出血水肿袁组织中神经元排列紊乱袁细胞核固缩袁可见细胞变性曰与 TBI 组比较袁Dex 组大鼠海马组织病理损伤明显减轻曰与 Dex 组比较袁miR-NC 组病理结构的改变类似曰与 miR-NC 比较袁miR-711 agomir 组海马组织病理损伤加重袁神经元排列松散袁可见水肿变性袁miR-711 antagomir 组海马组织病理损伤显著改善遥 见图 1遥注院A 为 Sham 组曰B 为 TBI 组曰C 为 Dex 组曰D 为 miR-NC 组曰E 为 miR-711 agomir 组曰F 为 miR-711 antagomir 组遥图 1 各组大鼠海马组织病理学变化图渊HE,伊200冤11ABCDEFGDNFBcl-2BaxGAPDH3.4 Dex 对 TBI 大鼠海马组织中 miR-711尧GDNF mRNA 表达的影响与 Sham 组比较袁TBI 组大鼠海马组织中 miR-711 表达显著升高袁GDNF mRNA 表达显著降低 渊P 约0.05冤曰与 TBI 组比较袁Dex 组大鼠海马组织中 miR-711 表达显著降低袁GDNF mRNA 表达显著升高渊P 约0.05冤曰与 Dex 组比较袁miR-NC 组上述指标的变化无显著差异渊P 跃 0.05冤曰与 miR-NC 组比较袁miR-711agomir 组大鼠海马组织中 miR-711 表达显著升高袁GDNF mRNA 表达显著降低 渊P 约 0.05冤袁miR-711 an鄄tagomir 组大鼠海马组织中 miR-711 表达显著降低袁GDNF mRNA 表达显著升高渊P约 0.05冤遥 结果见表 4遥表 4 各组大鼠海马组织中 miR-711尧GDNF mRNA 表达的比较渊x 依 s,n=10冤组别miR-711GDNF mRNASham 组1.00 依 0.101.02 依 0.09TBI 组1.71 依 0.13a0.41 依 0.04aDex 组1.36 依 0.11b0.73 依 0.05bmiR-NC 组1.37 依 0.10b0.71 依 0.07bmiR-711 agomir 组1.52 依 0.15bcd0.58 依 0.06bcdmiR-711 antagomir 组1.21 依 0.13bcd0.85 依 0.07bcd3.5 miR-711 与 GDNF 的靶向关系根据生物信息学预测网站可知袁GDNF 的 3爷UTR 上存在 miR-711 的结合位点渊见图 2冤遥图 2 TargetScan 预测 miR-711 与 GDNF 3爷UTR 的结合位点双荧光素酶报告基因实验结果见表 5遥表 5 双荧光素酶报告基因实验结果渊x 依 s冤组别相对荧光素酶活性GDNF-WTGDNF-MUTmiR-NC 组1.02 依 0.101.01 依 0.10miR-711 组0.43 依 0.040.97 依 0.10t 值13.4180.693P值约 0.0010.504表 5 显示袁与 miR-NC 组比较袁miR-711 组转染 GDNF-WT 的细胞相对荧光素酶活性显著降低渊P约0.05冤袁转染 GDNF-MUT 的细胞相对荧光素酶活性无显著差异渊P跃 0.05冤遥3.6 Dex 对 TBI 大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 和 Bax 蛋白表达的影响与 Sham 组比较袁TBI 组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 蛋白表达降低袁Bax 蛋白表达升高渊P约 0.05冤曰与 TBI 组比较袁Dex 组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 蛋白表达升高袁Bax 蛋白表达降低 渊P 约 0.05冤曰与Dex 组比较袁miR-NC 组上述蛋白的表达差异无统计学意义 渊P 跃 0.05冤曰 与 miR-NC 组比较袁miR-711agomir 组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 蛋白表达降低袁Bax 蛋白表达升高渊P 约 0.05冤袁miR-711 antagomir组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 蛋白表达升高袁Bax 蛋白表达降低渊P约 0.05冤遥 结果见图 3尧表 6遥注院A 为 Sham 组曰B 为 TBI 组曰C 为 Dex 组曰D 为 miR-NC 组曰E 为 miR-711 agomir 组曰F 为 miR-711 antagomir 组遥图 3 各组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 和 Bax 蛋白表达12表 6 各组大鼠海马组织中 GDNF尧Bcl-2 和 Bax 蛋白表达的比较渊x 依 s,n=10冤组别GDNFBcl-2BaxSham 组1.14 依 0.111.02 依 0.100.25 依 0.02TBI 组0.45 依 0.04a0.31 依 0.03a0.81 依 0.08aDex 组0.75 依 0.08b0.62 依 0.05b0.53 依 0.06bmiR-NC 组0.76 依 0.07b0.63 依 0.06b0.52 依 0.07bmiR-711 agomir 组0.61 依 0.06bcd0.54 依 0.04bcd0.67 依 0.07bcdmiR-711 antagomir 组0.89 依 0.09bcd0.77 依 0.07bcd0.39 依 0.03bcd4讨论由于颅脑结构的特殊性与功能重要性袁大部分 TBI 患者都会遗留长期神经功能障碍状态咱17暂遥 TBI 损伤主要是最初外力击打造成的原发性神经元和组织受损袁经过一系列继发性病理变化袁如炎性反应尧氧化应激尧细胞凋亡等导致大量神经元死亡袁最终导致神经元丢失袁造成不可逆的神经功能障碍咱18-19暂遥 因此袁TBI 发生后袁进行及时有效的治疗袁对 TBI 患者神经功能的修复具有关键意义遥 本研究通过采用改良自由落体法建立 TBI 模型袁Morris 水迷宫实验结果可知袁TBI 后大鼠认知功能出现明显障碍袁行为学与运动能力也明显降低袁海马组织中可见明显病变袁神经元水肿变性袁出现核固缩现象袁提示 TBI 模型建立成功袁大鼠认知功能出现障碍袁神经损伤现象发生遥 Dex 已被证实在缺血性脑损伤尧TBI 等疾病中能够抑制神经元凋亡袁发挥脑保护作用咱20-21暂遥 本研究结果显示袁Dex 干预后的 TBI 大鼠认知功能得到一定程度的改善袁海马组织病变减轻袁海马组织中 Bcl-2 蛋白表达明显上调袁Bax 蛋白表达下调袁提示 Dex 在 TBI 后神经损伤中发挥神经保护作用袁并可能与抑制神经元凋亡有关袁与李坪等咱15暂研究结果一致遥miRNA 是一类高保守的非编码单链 RNA袁具有调控生命活动的作用袁在中枢神经系统中参与神经细胞的生长与分化咱22暂遥 已有研究表明袁上调 miR-711 的表达袁引起 DNA 修复机制受阻袁诱导神经元凋亡袁引起神经退行性病变咱23暂遥GDNF 是一种生物活性极强的神经营养因子袁研究发现袁其能够通过抑制小胶质细胞活化和炎症反应袁减少神经元凋亡袁参与中枢神经系统神经元的存活与修复咱24暂遥 本研究结果显示袁TBI 大鼠海马组织中 miR-711 的表达明显增加袁GDNF mRNA 与蛋白表达均显著降低曰另外袁生物信息学网站预测与双荧光素酶报告基因实验证实 GDNF 是 miR-711 的靶基因袁提示 TBI 后 miR-711 表达上调袁抑制 GDNF 的表达袁引起神经损伤遥 Dex 干预后 TBI 大鼠海马组织中 miR-711 表达下调袁GDNF 表达上调袁提示 Dex 可能通过调控 miR-711/GDNF 信号轴发挥神经保护作用遥 另外袁本研究结果显示袁过表达 miR-711 可以显著逆转 Dex 对 TBI 大鼠的神经保护作用袁 抑制 miR-711 表达又可以进一步促进Dex 的神经保护作用袁证实 Dex 改善认知功能障碍袁减轻神经损伤袁可能与 miR-711/GDNF 信号轴有关遥综上所述袁Dex 能够有效改善 TBI 大鼠认知障碍袁减少神经元凋亡袁减轻神经损伤袁发挥脑保护作用袁可能通过调控 TBI 后大鼠海马组织 miR-711/GDNF 信号轴的表达实现遥 这为临床上使用 Dex 作为TBI 的新治疗手段提供了新的实验基础遥 但 TBI 病理机制复杂袁本实验仅对认知障碍尧组织损伤以及神经元凋亡相关蛋白表达进行了初步检测袁其他机制还需进一步进行探索遥参考文献院咱1暂 Silverberg N D袁Iaccarino M A袁Panenka W J袁et al.Management of concussion and mild traumatic brain injury:a synthesis ofpractice guidelines咱J暂.Arch Phys Med Rehabil袁2020袁101渊2冤院382-393.咱2暂 Shin M K袁V佗zquez R E袁Koh Y袁et al.Reducing acetylated tau is neuroprotective in brain injury咱J暂.Cell袁2021袁184渊10冤院2715-2732.咱3暂 林淑君袁张玉娟袁林吉欢袁等.针刺对创伤性脑损伤大鼠神经损伤的影响咱J暂.针刺研究袁2019袁44渊1冤院19-24.咱4暂 Liu Zaiming袁Chen Qianxue袁Chen Zhibiao袁et al.RIP3 deficiency protects against traumatic brain injury 渊TBI冤 through sup鄄pressing oxidative stress袁inflammation and apoptosis:dependent on AMPK pathway咱J暂.Biochemical and Biophysical Re鄄search Communications袁2018袁499渊2冤院112-119.13咱5暂 Arneson D袁Zhang Guanglin袁Ying Zhe袁et al.Single cell molecular alterations reveal target cells and pathways of concussivebrain injury咱J暂.Nature Communications袁2018袁9渊1冤院3894.咱6暂 Fang Hua袁Li Huafeng袁Yang Miao袁et al.MicroRNA-128 enhances neuroprotective effects of dexmedetomidine on neonatalmice with hypoxic-ischemic brain damage by targeting WNT1咱J暂.Biomedicine&Pharmacotherapy袁2019袁113院108671.咱7暂 Wang Kun袁Wu Mengge袁Xu Jian袁et al.Effects of dexmedetomidine on perioperative stress袁inflammation,and immune func鄄tion:systematic review and meta-analysis咱J暂.British Journal of Anaesthesia袁2019袁123渊6冤院777-794.咱8暂 Shi Yanyan袁Peng Xiaohong袁Li Xia袁et al.Neuroprotective role of dexmedetomidine pretreatment in cerebral ischemia injuryvia ADRA2A-mediated phosphorylation of ERK1/2 in adult rats咱J暂.Experimental and Therapeutic Medicine袁2018袁16渊6冤院5201-5209.咱9暂 Wu Jin袁Vogel Todd袁Gao Xiang袁et al.Neuroprotective effect of dexmedetomidine in a murine model of traumatic brain injury.咱J暂.Scientific Reports袁2018袁8渊1冤院4935.咱10暂 冀翔宇袁张丽娜袁刘然袁等.右美托咪定后处理对大鼠创伤性脑损伤后脑保护作用及其机制咱J暂.中华实验外科杂志袁2020袁37渊9冤院1627-1630.咱11暂 Zhou Xiumin袁Liu Jie袁Wang Ying,et al.Silencing of long noncoding RNA MEG3 enhances cerebral protection of dexmedeto鄄midine against hypoxic-ischemic brain damage in neonatal mice by binding to miR-129-5p咱J暂.Journal of Cellular Biochem鄄istry袁2018袁120渊5冤院7978-7988.咱12暂 Sabirzhanov B袁Stoica B A袁Zhao Z袁et al.miR-711 upregulation induces neuronal cell death after traumatic brain injury咱J暂.Cell Death&Differentiation袁2016袁23渊4冤院654-668.咱13暂 dAnglemont de Tassigny X,Pascual A,L佼pez-Barneo J.GDNF-based therapies,GDNF-producing interneurons,and trophicsupport of the dopaminergic nigrostriatal pathway.Implications for Parkinsons disease咱J暂.Front Neuroanat袁2015袁9:10.咱14暂 林晨袁陈闯.三七总皂苷对创伤性脑损伤大鼠神经元凋亡的保护作用咱J暂.中华全科医学袁2021袁19渊6冤院932-935.咱15暂 李坪袁李晓文袁王艳雪袁等.右美托咪定通过 SIRT1 信号通路抑制脑损伤大鼠神经元凋亡咱J暂.神经解剖学杂志袁2020袁36渊6冤院612-618.咱16暂 Hu Hongqiang袁Shu Mangqiao袁Xue Fen袁et al.Sirt1 mediates improvement of isoflurane-induced memory impairment follow鄄ing hyperbaric oxygen preconditioning in middle-aged mice咱J暂.Physiology&Behavior袁2018袁195院1-8.咱17暂 Pavlovic D袁Pekic S袁Stojanovic M袁et al.Traumatic brain injury:neuropathological袁neurocognitive and neurobehavioral se鄄quelae咱J暂.Pituitary袁2019袁22渊3冤院270-282.咱18暂 童汝有袁董黎明.三白草木脂素对创伤性脑损伤大鼠神经保护作用及 Nrf2-ARE 信号通路的影响咱J暂.新中医袁2020袁52渊6冤院1-4.咱19暂 Saeb S袁Azari H袁Mostafavi-Pour Z袁et al.9-cis-Retinoic acid and 1袁25-dihydroxy vitamin D3 improve the differentiation ofneural stem cells into oligodendrocytes through the inhibition of the notch and Wnt signaling pathways咱J暂.Iranian Journal ofMedical Sciences袁2018袁43渊5冤院523-532.咱20暂 Teng Lu袁Chen Weiguang袁Yin Changyou袁et al.Dexmedetomidine improves cerebral ischemia-reperfusion injury in rats viaextracellular signal-regulated kinase/cyclic adenosine monophosphate response element binding protein signaling pathway咱J暂.World Neurosurgery袁2019袁127院624-630.咱21暂 Zhang Manhe袁Zhou Xiumin袁Cui Jianzhong袁et al.Neuroprotective effects of dexmedetomidine on traumatic brain injury:In鄄volvement of neuronal apoptosis and HSP70 expression咱J暂.Molecular medicine reports袁2018袁17渊6冤院8079-8086.咱22暂 Jiang Qiyong袁Zhang Zhaohua袁Sun Ying袁et al.MiR-24 protects against ischemia-induced brain damage in rats via regulatingmicroglia polarization by targeting Clcn3咱J暂.Neuroscience Letters袁2021袁759院135998.咱23暂 Sabirzhanov B袁Makarevich O袁Barrett J P袁et al.Irradiation-induced upregulation of miR-711 inhibits DNA repair and pro鄄motes neurodegeneration pathways咱J暂.International Journal of Molecular Sciences袁2020袁21渊15冤院5239.咱24暂 刘芳袁毛志蓉袁邓莉袁等.GDNF 基因修饰的 NSCs 移植对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究咱J暂.中国临床解剖学杂志袁2020袁38渊4冤院408-413.14Research on the Effect and Mechanism of YeastPulp in Straw CompostingFANG Huazhou,HU Liping,MO Shasha,HUANG Xiaomei,GONG Yujie,XIA Ziyue渊Faculty of Bioscience Engineering,Jingchu University of Technology,Jingmen 448000,China冤Abstract院In order to study the application effect of yeast culture in the production of organic fertilizer,the crop straw compost鄄ing experiments were carried out with different carbon-nitrogen(C/N)ratios,using urea as the control and yeast pulp instead of ureaas the nitrogen source,respectively.The results showed that the fermentation temperature,main nutrients and organic matter con鄄tent,seed germination rate of the experiments with C/N ratio of 10:1,20:1,30:1,40:1 using yeast pulp as nitrogen source were high鄄er than those of the control using urea as nitrogen source.The experiments with C/N ratio of 20:1 and 30:1 using yeast pulp as nitro鄄gen source were the most obvious,which the former showed better fermentation temperature,and the latter showed higher germina鄄tion rate.In conclusion,the application of yeast pulp instead of urea in the production of organic fertilizer such as straw compost ismore effective,and it is appropriate to take the C/N of 30颐120颐1.Key words院yeast pulp曰crop straw曰aerobic composting曰nitrogen source咱责任编辑院许