GB 31656.12-2021 食品安全国家标准 水产品中青霉素类药物多残留的测定 液相色谱－串联质谱法.pdf

食品安全国家标准水产品中青霉素类药物多残留的测定液相色谱-串联质谱法50中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX67.050CCS X31656.122021National food safety standardDetermination of Penicillin multi-residues in aquatic products byliquid chromatography-tandem mass spectrometry methodGB2021?09?16发布2022?02?01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部代替GB/T 229522008G B 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分: 标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件代替G B/T 河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、 氨苄西林、 哌拉西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 萘夫西林、 双氯西林残留量的测定液相色谱串联质谱法 , 与G B/T 相比, 除结构调整和编辑性改动外, 主要技术内容变化如下:a)更改了标准的适用范围( 见, 年版的) ;b)增加了阿洛西林和甲氧西林的测定( 见表、 附录A表A ) ;c)更改了定量方法( 见 , 年版的 ) ;d)更改了部分测定步骤( 见, 年版的) ;e)增加了固相萃取和超滤管离心的净化步骤( 见 ) ;f)更改了方法的检出限和定量限( 见 , 年版的) .本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: 年首次发布为G B/T ; 本次为第一次修订.G B 食品安全国家标准水产品中青霉素类药物多残留的测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了水产品中青霉素类药物残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法.本文件适用于鱼、 虾、 鳖和海参等水产品可食组织中阿莫西林、 氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林和甲氧西林单个或多个药物残留量的测定.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 水产品抽样规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试料中残留的青霉素类药物, 用乙腈水溶液提取, 固相萃取柱净化, 液相色谱串联质谱测定, 内标法定量.试剂与材料除另有规定外, 所有试剂均为分析纯, 水为符合G B/T 规定的一级水. 试剂 乙腈(CHC N) : 色谱纯. 甲酸(HC OOH) : 色谱纯. 溶液配制 乙腈水溶液: 取乙腈 mL、 水 mL, 混合. 乙腈水溶液: 取乙腈 mL、 水 mL, 混合. 甲酸水溶液: 取甲酸 L, 加水稀释至 mL. 甲酸乙腈溶液: 取甲酸 L, 加乙腈稀释至 mL. 标准品 青霉素类药物: 阿莫西林、 氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林和甲氧西林, 含量均 , 具体内容见附录A. 内标: 阿莫西林 d、 氨苄西林 d、 青霉素G d、 萘夫西林 d, 含量均 , 具体内容见附录A. 标准溶液制备 青霉素标准储备液( m g/m L) : 取青霉素类药物标准品约 m g, 精密称定, 用 乙腈水溶液溶解并稀释定容至 m L, 配制成浓度均为 m g/m L的标准储备液. 避光保存, 有效期d. 内标储备液( m g/mL) : 取内标标准品约 m g, 精密称定, 用 乙腈水溶液溶解并稀释定G B 容至 m L, 配制成浓度均为 m g/mL的内标储备液. 避光保存, 有效期d. 混合标准中间液( g/mL) : 分别精密量取青霉素标准储备液适量, 用水稀释制成阿莫西林、 氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林和甲氧西林浓度均为 g/mL的混合标准溶液.避光保存, 有效期d. 内标工作液( g/mL) : 分别精密量取内标储备液适量, 用水稀释制成阿莫西林 d、 氨苄西林d、 青霉素G d、 萘夫西林 d浓度均为 g/mL的内标工作液.避光保存, 有效期d. 材料 通过式反相混合型亲水亲脂固相萃取柱: m g/mL, 或相当者. 超滤管: k D, mL.仪器与设备 液相色谱串联四极杆质谱仪: 配电喷雾离子源. 分析天平: 感量 g和 g. 高速冷冻离心机. 固相萃取装置. 超声波清洗仪. 组织匀浆机. 涡旋混合器. 氮吹仪.试料的制备与保存 试料的制备按G B/T 附录B的要求制样.a)取均质的供试样品, 作为供试试料;b)取均质的空白样品, 作为空白试料;c)取均质的空白样品, 添加适宜浓度的标准工作液, 作为空白添加试料. 试料的保存 以下保存,个月内进行分析检测.测定步骤 提取取试料 g( 准确至 g) , 加内标工作液 L, 静置 m i n, 加 乙腈水溶液mL, 涡旋混合m i n, 超声 m i n, r/m i n离心m i n, 取上清液, 残渣加 乙腈水溶液mL重复提取一次, 合并上清液, 用 乙腈水溶液稀释至 mL, 备用. 净化取 乙腈水溶液约m L润洗固相萃取柱, 弃去流出液, 取备用液 m L过柱, 保持流速为滴 /s,收集流出液, 氮气吹至少于 m L, 加水定容至 m L, 用超滤管以 r/m i n离心 m i n, 取滤液, 供液相色谱串联质谱测定. 标准曲线的制备精密量取混合标准中间液、 内标工作液适量, 用水配制成青霉素类药物浓度为g/L、g/L、 g/L、 g/L、 g/L、 g/L和 g/L的混合标准工作液, 其中青霉素内标溶液浓度均为 g/L.以测得特征离子质量色谱峰外标和内标峰面积比值为纵坐标、 对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线, 求回归方程和相关系数.G B 测定 液相色谱参考条件a)色谱柱:C 色谱柱( mm mm, m) , 或性能相当者;b)柱温: ;c)流速: mL/m i n;d)进样量: L;e)流动相:A为 的甲酸水溶液,B为 的甲酸乙腈溶液.梯度洗脱条件见表.表流动相梯度洗脱条件时间m i nAB 质谱参考条件a)离子化模式: 电喷雾离子源(E S I) , 多反应监测(MRM) , 正离子模式;b)喷雾电压: k V;c)气帘气压力: MP a;d)碰撞气压力: MP a;e)离子源温度: ;f)碰撞室入口电压: V;g)碰撞室出口电压: V;h)驻留时间: m s;i)离子源G a s : MP a;j)离子源G a s : MP a;k)多反应监测母离子、 子离子、 解簇电压和碰撞能量见表.表多反应监测母离子、 子离子、 解簇电压和碰撞能量目标化合物母离子m/z子离子m/z解簇电压V碰撞能量e V阿莫西林 a 氨苄西林 a 青霉素G a 青霉素V a 苯唑西林 a 氯唑西林 a 萘夫西林 a G B 表( 续)目标化合物母离子m/z子离子m/z解簇电压V碰撞能量e V双氯西林 a 哌拉西林 a 阿洛西林 a 甲氧西林 a 阿莫西林 d 氨苄西林 d 青霉素G d 萘夫西林 d a为定量碎片离子. 测定法 定性测定在同样测试条件下, 试料溶液中青霉素类药物的保留时间与标准工作液中青霉素类药物的保留时间之比, 偏差在 以内, 且检测到的相对离子丰度, 应与浓度相当的标准溶液相对丰度一致.其允许偏差应符合表的要求.表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度 允许偏差 定量测定取试料溶液和混合标准工作溶液等体积进样测定, 作单点或多点校准, 以色谱峰面积定量, 按内标法计算, 其中阿莫西林以阿莫西林 d为内标, 氨苄西林以氨苄西林 d为内标, 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林和双氯西林以青霉素G d为内标, 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林和甲氧西林以萘夫西林 d为内标.标准溶液及试料溶液中青霉素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述液相色谱质谱条件下, 标准溶液中特征离子质量色谱图见附录B. 空白试验取空白试料, 除不加标准溶液外, 采用相同的测定步骤进行平行操作.结果计算和表述试料中青霉素类药物的残留量按标准曲线或公式() 计算.XAA iSCSCiSVVAiSASC iSVm()式中:X 试料中被测物质残留量的数值, 单位为微克每千克(g/k g) ;CS 标准工作溶液中被测物质浓度的数值, 单位为纳克每毫升(n g/mL) ;CiS 试料溶液中内标浓度的数值, 单位为纳克每毫升(n g/mL) ;C iS 标准工作溶液中内标浓度的数值, 单位为纳克每毫升(n g/mL) ;A 试料溶液中被测物质的峰面积;A iS 标准工作溶液中内标的峰面积;G B AiS 试料溶液中内标的峰面积;AS 标准工作溶液中被测物质的峰面积;V 试料溶液浓缩后定容体积的数值, 单位为毫升(mL) ;V 试料提取液体积的数值, 单位为毫升(mL) ;V 试料提取液过柱体积的数值, 单位为毫升(mL) ;m 试料质量的数值, 单位为克(g) . 检测方法的灵敏度、 准确度和精密度 灵敏度本方法的检出限: 氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林、 甲氧西林均为g/k g, 阿莫西林为 g/k g.本方法的定量限: 氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林、 甲氧西林均为g/k g, 阿莫西林为 g/k g. 准确度本方法中氨苄西林、 青霉素G、 青霉素V、 苯唑西林、 氯唑西林、 双氯西林、 萘夫西林、 哌拉西林、 阿洛西林和甲氧西林添加浓度为g/k g g/k g, 阿莫西林添加浓度为 g/k g g/k g的回收率均为 . 精密度本方法批内相对标准偏差 , 批间相对标准偏差 .G B 附录A( 资料性)青霉素类药物的英文名称、 分子式和C A S号 种青霉素类药物的英文名称、 分子式和C A S号见表A .表A 种青霉素类药物的英文名称、 分子式和C A S号化合物英文名称分子式C A S号阿莫西林Am o x i c i l l i nC H NOS 氨苄西林Am p i c i l l i nC H NOS 青霉素GP e n i c i l l i nGC H NOS 青霉素VP e n i c i l l i nVC H NOS 苯唑西林O x a c i l l i nC H NOS 氯唑西林C l o x a c i l l i nC H C l NOS 双氯西林D i c l o x a c i l l i nC H C lNOS 萘夫西林N a f c i l l i nC H NOS 哌拉西林P i p e r a c i l l i nC H NOS 阿洛西林A z l o c i l l i nC H NOS 甲氧西林M e t h i c i l l i nC H NN a OS G B 附录B( 资料性)目标化合物特征离子质量色谱图目标化合物特征离子质量色谱图见图B .图B 青霉素类药物混合标准溶液特征离子质量色谱图( g/L)31656.122021GBGB31656.122021书 书 书1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?