新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选.pdf

年月四川大学学报(自然科学版)J u l 第 卷第期J o u r n a l o fS i c h u a nU n i v e r s i t y(N a t u r a lS c i e n c eE d i t i o n)V o l N o 新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选师云凡,鞠壮,丁显平,(四川大学生命科学学院,成都 ;特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室,南川 )摘要:为寻找新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂,本文以S A R S C o V 主蛋白酶为研究对象,通过计算机辅助药物筛选方法初步筛选出 个潜在抑制剂并进行体外酶活测试其中,野黄岑素对S A R S C o V 主蛋白酶的I C 为()m o l/L,没食子儿茶素没食子酸酯抑制S A R S C o V 主蛋白酶的I C 为()m o l/L最后,将两种天然产物与主蛋白酶进行分子动力学模拟发现没食子儿茶素没食子酸酯和野黄岑素与新型冠状病毒主蛋白酶结合时的复合物RM S D都在 附近,说明两个天然产物与新型冠状病毒主蛋白酶结合较为稳定,可以作为新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂或先导化合物关键词:新型冠状病毒主蛋白酶;基于结构的虚拟筛选;没食子儿茶素没食子酸酯;野黄岺素;分子动力学模拟中图分类号:Q ;R 文献标识码:AD O I:/j 收稿日期:基金项目:四川省科技厅项目(J D S )作者简介:师云凡(),女,河南安阳人,硕士研究生,研究方向为计算机辅助药物设计 E m a i l:q q c o m通讯作者:丁显平 b r a i n d i n g s c u e d u c nS c r e e n i n go fn a t u r a l p r o d u c t i n h i b i t o r s t a r g e t i n gS A R S C o V m a i np r o t e a s eSH IY u n F a n,J UZ h u a n g,D I NGX i a n P i n g,(C o l l e g eo fL i f eS c i e n c e s,S i c h u a nU n i v e r s i t y,C h e n g d u ,C h i n a;J o i n tK e yL a bo fS i c h u a n&C h o n g q i n g,B i o r e s o u r c eR e s&U t i l i z a t,N a n c h u a n ,C h i n a)A b s t r a c t:T os c r e e nn a t u r a lp r o d u c ti n h i b i t o r st a r g e t i n gt h eS A R S C o V m a i np r o t e a s e,t h i sp a p e rt a k e s t h em a i np e o t e a s e so fS A R S C o v a s t h e r e s e a r c ho b j e c t,a n d p o t e n t i a l i n h i b i t o r sw e r ep r e l i m i n a r i l ys c r e e n e db yc o m p u t e r a i d e dd r u gs c r e e n i n gm e t h o da n d t e s t e d f o r e n z y m e a c t i v i t y i nv i t r o Am o n gt h e m,t h e I C o fs c u t e l l a r i na g a i n s tS A R S C o V m a i np r o t e a s ew a s()m o l/LT h eI C o f()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t ea g a i n s tS A R S C o V m a i np r o t e a s ew a s()m o l/L F i n a l l y,m o l e c u l a rd y n a m i c ss i m u l a t i o n sw e r ep e r f o r m e do nt h et w on a t u r a lp r o d u c t sa n d M p r o I tw a sf o u n dt h a t t h eRM S Do f t h ec o m p l e x e so f()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t ea n dS c u t e l l a r e i nw i t h M p r ow a sa r o u n d ,i n d i c a t i n gt h a t t h et w on a t u r a lp r o d u c t sw e r es t a b l e i nb i n d i n gw i t hM p r oa n dc o u l db eu s e da s i n h i b i t o r so r l e a dc o m p o u n d so fM p r o i nS A R S C o V K e y w o r d s:M p r oo f S A R S C o V ;S t r u c t u r e b a s e dv i r t u a l s c r e e n i n g;()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e;S c u t e l l a r e i n;M o l e c u l a rd y n a m i cs i m u l a t i o n 第 卷四川大学学报(自然科学版)第期引言 年 月底,中国武汉报告了一例不明原因肺炎病例,随后世界上各个国家相继报告类似症状病例,后经研究表明,这是一种新型冠状病毒导致的肺炎疫情,由于波及范围之广,因此被称为大流行病(P a n d e m i c)测序结果显示,新型冠状病毒与S A R S C o V具有 的序列一致性,由此被世界卫生组织命名为S A R S C o V ,由S A R S C o V 引起的疾病称为C OV I D 新型冠状病毒为属类冠状病毒,具有较大的单股正链R NA,其基因组含约 个核苷酸,从 端依次编码两种多聚蛋白和四种结构蛋白,中间穿插编码几种辅助蛋白两种多聚蛋白被病毒中两种主要的蛋白酶类胰凝乳蛋白酶和类木瓜蛋白酶切割成 种非结构蛋白,其中,类木瓜蛋白酶负责n s p、n s p 和n s p 的切割,而类胰凝乳蛋白酶则负责后 种非结构蛋白的切割,这 种非结构 蛋 白 发 挥 各 自 作 用 从 而 促 进 病 毒 的 复 制 和表达 类胰凝乳蛋白酶也被称作主蛋白酶,由于主蛋白酶在多种冠状病毒中具有较强的保守性,并且目前没有已知的人类半胱氨酸蛋白酶与其具有相似的切割位点,因而成为治疗新型冠状病毒的一个理想靶点,尽管目前全球已经大范围内接种疫苗,但与该病毒导致的疾病相关问题还远远没有解决,许多抗体药物被研发出来也被批准但只能临床应用于危重症患者,也有相关主蛋白酶抑制药物如P a x l o v i d被F D A批准用于新型冠状病毒患者的治疗,但正有研究表明单一药物使用可能会造成病毒一些突变体耐药,因此新的抑制剂需要被开发以应对此次大流行病,随着结构生物学和生物信息学等学科的不断发展,计算机辅助药物筛选与设计在当下展现了极大的优势,在较短时间内筛选出S A R S C o V 主蛋白酶的有效抑制剂,将有利于后续药物设计与改进,为新 型冠状病毒 的治疗提供 理论基础 和新思路材料与方法 材料文中所涉及的天然产物购买于上海陶术公司;新型冠状病毒主蛋白酶抑制剂筛选试剂盒(增强型)、DM S O和全黑 孔细胞 培 养 板 购 自 于 碧云天 方法 S A R S C o V 主蛋白酶变种序列和结构比对于N C B I上下载S A R S C o V 突变株B 、B 、P、B 、B A、B A 、B A、B A 的核苷酸序列;利用E x P A S y T r a n s l a t eT o o l将核苷酸序列转化为氨基酸序列;在D NA MAN中载入氨基酸序列,点击S e q u e n c eA l i g n m e n t M u l t i p l eS e q u e n c eA l i g n m e n t,添加氨基 酸序列,点 击P r o t e i n,进 行 快 速 比 对之 后 利 用R C S BP D B数据库中的P a i r W i s eS t r u c t u r eA l i g n m e n t模块进行了结构对比评估野生型主蛋白酶的突变型主蛋白酶差异从R C S BP D B数据库中下载 U (K R、)、T V X(P H、)和 R NK(),利用P y m o l处理蛋白,去除水分子和配体,进行蛋白结构对比,突出展示活性口袋叠合构象 验证基于虚拟筛选模型可靠性从R C S BP D B数据库下载 L U 结构,用P y m o l处理去除水分子和配体,保留蛋白单体,W 结构则是去除蛋白和水,保留X 配体结构,再用A u t o d o c kT o o l对蛋白进行加氢计算电荷操作,接着对X 进行探测可旋转键操作,之后均保存为p d b q t格式,以文献所查阅新型冠状病毒主蛋白酶活性氨基酸作为中心创建对接盒子,盒子具体信息为c e n t e r_x 、c e n t e r_y 、c e n t e r_z 、s i z e_x 、s i z e_y 和s i z e_z 利用Q v i n a 对X 和主蛋白酶进行分子对接,所选用的e x h a u s t i v e n e s s为,对接模式为种,能量差为对接完成之后,利用P y m o l对比X 打 分 最 高 的 对 接 结 构 和 晶 体 结 构,并 计 算 其RM S D,天然产物数据库准备天然产物数据库(L )中的小分子配体是由陶术公司用D i s c o v e r yS t u d i o中的l i g p r e p模块经O P L S e力场优化后的 Ds d f格式,用O p e n b a b e l将其转化为p d b q t格式备用 类药筛选在基于结构虚拟筛选之后,选出亲和力小于k c a l/m o l的化合物,合并其s d f结构,将其提交到A DME T l a b 网站上,根 据 MW 、l o g S、l o g P、l o g D、n HA、n HD、C a c o P e r m e a b i l i t y、F u、C L等指标筛选化合物 第期师云凡,等:新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选第 卷 F R E T酶活抑制实验酶活抑制实验是根据试剂盒生产商说明书来执行,初步筛选时化合物终浓度为 m o l/L在添加底物之前,主蛋白酶和化合物先在 下孵育 m i n来证抑制剂和蛋白的结合测I C 时化合物终浓度梯度分别为、和 m o l/L 分子动力学模拟利 用g r o m a c s中 的p d b g m x处理蛋白结构,力场采用Am b e r S B利用R E S P _O R C A s h脚本生成小分子的R E S P 电荷,之后利用S o b t o p生成 小分子拓 扑结构 ;合并小分子和蛋白质的拓扑信息,生成十二面体盒子,水模型为T I P P,添加S P C 水和四个钠离子中和体系;能量最小化收敛在 k J/m o l/n m内;n v t位置限制性模拟设定为在 p s内从K上升到 K,随后持续 p s,温度耦合方式为V r e s c a l e;n p t位置限制性模拟设定为 p s,温度耦合方式为V r e s c a l e,压力耦合方式为B e r e n s d e n;最后放开位置限制,进行正式模拟,温度耦合方式不变,压力耦合方式变为P R 模拟完成之后,提取复合物的RM S D信息,分析天然产物与蛋白酶结合位点结果 S A R S C o V 突变株主蛋白酶序列和结构对比首先,笔者对比了S A R S C o V 突变株主蛋白酶的氨基酸序列,D NAMAN对比结果显示突变株序列一致性为 ,如图所示,主蛋白酶只在两个位置出现了突变,一个突变是K R,另一个突变是P H图新型冠状病毒突变株主蛋白酶序列对比F i g S e q u e n c ea l i g n m e n to fm a i np r o t e a s e so fS A R S C o V m u t a n t s在P y m o l中叠合三种突变蛋结构,突出展示活性口袋,如图所示活性口袋的微小差异几乎可以忽略不计 P a i r W i s eS t r u c t u r eA l i g n m e n t结果显示 R NK和 U (K R)之间的RM S D为,TM s c o r e为 ,而这两个评价值在 R NK和 T V X(P H)之 间 分 别 为 和 RM S D结果表征为两个结构之间的距离差异,而TM s c o r e是用来检测两个蛋白质结构相似性的指标,主要考虑蛋白质整体折叠情况总之,这些结果在一定程度上反映了S A R S C o V 突变株主蛋白酶的保守性图新型冠状病毒主蛋白酶结构对比F i g S t r u c t u r ea l i g n m e n to fm a i np r o t e a s e so fS A R S C o V 虚拟筛选模型可靠性评估在正式虚拟筛选之前,我们利用P y m o l对比了X 的晶体结构和用Q v i n a 进行对接的结构,如 图所 示晶 体 结 构 和 对 接 结 构 之 间 的RM S D为 ,相当于一个原子大小因此,基于结构的虚拟筛选模型是准确可靠的图虚拟筛选模型可靠性评估蓝色为晶体结构,绿色为对接结构F i g R e l i a b i l i t ye v a l u a t i o no fv i r t u a l s c r e e n i n gm o d e lC y a n:c r y s t a l s t r u c t u r e,G r e e n:d o c k i n gs t r u c t u r e 基于结构的虚拟筛选和类药筛选结果在天然产物数据库中,我们从 种化合物中筛选出 种结合能小于k c a l/m o l的化合物,接着我们利用A DME T l a b 软件根据l o g S 、l o g P、l o g D 、MW 、T P S A 、n HA、n HD、C a c o P e r m e a b i l i t y 、P P B、C L等条件从 种化合物中筛选出了 种天然产物,如表所示 第 卷四川大学学报(自然科学版)第期表基于结构的虚拟筛选结果T a b R e s u l t so f s t r u c t u r e b a s e dv i r t u a l s c r e e n i n gN a m eC A Sl o gSl o gPl o gD MWV i n as c o r e/(k c a l/m o l)B e n z o y l p a e o n i f l o r i n C h r y s i n O g l u c u r o n i d e AMA R O G E N T I N E t o p o s i d e M o r i n S c u t e l l a r e i n P o l y d a t i n I s o l i q u i r i t i g e n i n M e t h o x a t i nd i s o d i u ms a l t D a u n o r u b i c i nh y d r o c h l o r i d e ()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e M a g n o f l o r i n e T o p o t e c a n D i o s b u l b i nB R h a p o n t i n M a g n o f l o r i n e i o d i d e 酶活抑制结果分析首先,我们测试了 种天然产物在终浓度为 m o l/L时对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制效果,如图所示,()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e与S c u l l a r e i n在 m o l/L时对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制率几乎达到了 ,与阳性对照E b e s e l e n抑制率一致,而其它天然产物在 m o l/L时对新型冠状病毒主蛋白酶有一定抑制效果,尽管不太明显,也无法排除这些天然产物在其它方面会对新型冠状病毒产生一定抑制效果图酶活抑制实验结果F i g R e s u l t so f e n z y m ea c t i v i t y i n h i b i t i o n接着我们详细测试了()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e、S c u l l a r e i n两者对新型冠状病毒主蛋白酶的半数抑制浓度I C,数据经G r a p h p a dP r i s m 处理后,显示()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e对新型冠状病毒主蛋白酶的I C 为()m o l/L,而S c u l l a r e i n的这个值为()m o l/L,从结果中还发现,()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e在 m o l/L时对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制效果也达不到 ,最大抑制率为,而S c u l l a r e i n在 m o l/L时对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制率就达到了 分子动力学模拟结果根据分子动力学模拟轨迹,我们消除了主蛋白酶的平动和转动,以蛋白质骨架为基准,提取了复合物的RM S D,蛋白骨架相对于其本身的RM S D趋势与复合物RM S D趋势一致,因此此处仅展示两个复合物RM S D结果()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e与S A R S C o V 主蛋白酶复合物在 n s的分子动力学模拟中RM S D平均值为 ,S c u t e l l a r e i n与主蛋白酶复合物RM S D平均值为 ,从结果可以看出,这两个天然产物与新型冠状病毒主蛋白酶结合都较为稳定 第期师云凡,等:新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选第 卷图()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e和S c u t e l l a r e i n对新型冠状病毒主蛋白酶的半数抑制浓度F i g ()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t ea n dS c u t e l l a r e i n i n h i b i th a l fo f t h ec o n c e n t r a t i o no fS A R S C o V M p r o图复合物RM S D结果F i g R e s u l t so f c o m p l e x e sRM S D此外,我们分析了新型冠状病毒主蛋白酶与两种天然产物抑制剂的主要结合位点,如图所示()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e的 羟 基 与 主 蛋 白 酶 的A s n 残基形成了氢键,其六元杂环上与羧基相连的H与G l n 形成了碳氢键,属于非极性键,其上一个苯环与G l u 形成了 阴离子相互作用,另 一 个 苯 环 与H i s 形 成 了 堆 积,与A r g 形成了酰胺 堆叠相互作用如图所示,S c u t e l l a r e i n中 与 六 元 碳 环 相 连 的 苯 环 与A s n 形成了 孤电子对相互作用,而G l u 可能与苯环或其旁边的六元碳环存在 阴离子相互作用,六元碳环可能与L e u 存在酰胺 堆叠作用或者碳氢键相互作用,六元碳环上的一个羰基可能还与S e r 或者H i s 形成了氢键图()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e与新型冠状病毒主蛋白酶的 D和 D相互作用F i g Da n d Di n t e r a c t i o nb e t w e e n()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t ea n dM p r o 第 卷四川大学学报(自然科学版)第期图S c u t e l l a r e i n与新型冠状病毒主蛋白酶的相互作用F i g Da n d Di n t e r a c t i o nb e t w e e nS c u t e l l a r e i na n dM p r o讨论本研究筛选出了针对新型冠状病毒主蛋白酶的两种天然产物抑制剂,所筛选到的两种天然产物与新型冠状病毒主蛋白酶已知抑制剂黄岑素和黄岑苷相比,提供了氢键受体和配体位置的多样性,而与一些非共价抑制剂X 和ML 相比,其功效范围更广根据研究结果可知,新型冠状病毒主蛋白酶中的G l u 残基与两种天然产物都形成了 阴离子相互作用,提示我们在药物设计中需要关注芳香环的位置总之这些结果为新型冠状病毒主蛋白酶抑制剂的发现和设计提供了新的思路在上述结果中我们提到筛选到的 种天然产物尽管有些对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制效果不是很好,但不能排除它们在其他方面所起的作用事实上,我们也在虚拟筛选得到的结果中针对新型冠状病毒类木瓜蛋白酶进行了虚筛,结果显示有些天然产物可能对新型冠状病毒类木瓜蛋白酶有潜在的抑制作用研究表明()G a l l o c a t e c h i ng a l l a t e大多来源于绿茶,为 多 酚 物 质,具 有 抗 炎 抗 氧 化 作 用,而S c u t e l l a r e i n为菊科植物灯盏花中的黄酮类物质,在抗感染抗菌等方面发挥重要作用由于新型冠状病毒会引起人体炎症因子的释放,而这两种天然产物既是新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂,又是良好的抗炎杀菌药物,因此值得后续研究,参考文献:A n d e r s o nE M,G o o d w i nE C,V e r m a A,e ta lS e a s o n a lh u m a nc o r o n a v i r u sa n t i b o d i e sa r eb o o s t e du p o nS A R S C o V i n f e c t i o nb u tn o ta s s o c i a t e dw i t hp r o t e c t i o nJ C e l l,:M o u s a v i z a d e hL,G h a s e m iS R e v i e wa r t i c l eg e n o t y p ea n dp h e n o t y p eo fC OV I D :t h e i rr o l e si np a t h o g e n e s i sJJ M i c r o b i o lI mm u n o l,:WHO C o r o n a v i r u sD i s e a s e(C OV I D )D a s h b o a r dE B/O L h t t p s:/c o v i d w h o i n t/Y o s h i m o t oFK T h ep r o t e i n so f s e v e r e a c u t e r e s p i r a t o r ys y n d r o m ec o r o n a v i r u s (S A R SC o V o rn C OV ),t h ec a u s eo fC OV I D JP r o t e i nJ,:M a l i kJA,M u l l aA H,F a r o o q iT,e t a lT a r g e t sa n d s t r a t e g i e s f o r v a c c i n e d e v e l o p m e n t a g a i n s tS A R S C o V JB i o m e d P h a r m a c o t h e r,:Z h uZ,L i a n X,S u X,e ta lF r o m S A R Sa n dME R St oC OV I D :ab r i e f s u mm a r ya n dc o m p a r i s o no fs e v e r ea c u t er e s p i r a t o r yi n f e c t i o n sc a u s e db yt h r e eh i g h l yp a t h o g e n i ch u m a nc o r o n a v i r u s e sJR e s pR e s,:W a n gH,H eS,D e n gW,e t a l C o m p r e h e n s i v e i n s i g h t si n t ot h ec a t a l y t i c m e c h a n i s m o fm i d d l ee a s tr e s p i r a t o r ys y n d r o m e C l i k ep r o t e a s ea n ds e v e r ea 第期师云凡,等:新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选第 卷c u t er e s p i r a t o r ys y n d r o m e C l i k e p r o t e a s eJA C SC a t a l,:M o d yV,H oJ,W i l l sS,e t a l I d e n t i f i c a t i o no f c h y m o t r y p s i nl i k ep r o t e a s e(C L P r o)i n h i b i t o r sa sp o t e n t i a l a n t i S A R S C o V a g e n t sJ C o mm u nB i o l,M a r z iM,V a k i lM K,B a h m a n y a rM,e t a l P a x l o v i d:m e c h a n i s m o fa c t i o n,s y n t h e s i s,a n di ns i l i c os t u d yJ B i o m e dR e s I n t,:H e i l m a n nE,C o s t a c u r t aF,M o g h a d a s iSA,e t a lS A R S C o V C L p r om u t a t i o n ss e l e c t e di naV S V b a s e ds y s t e mc o n f e r r e s i s t a n c e t on i r m a t r e l v i r,e n s i t r e l v i r,a n dG C J S c iT r a n s lM e d,:e a b q T r o t tO,O l s o nAJ A u t o D o c kV i n a:i m p r o v i n g t h es p e e da n da c c u r a c yo fd o c k i n g w i t han e ws c o r i n gf u n c t i o n,e f f i c i e n to p t i m i z a t i o na n d m u l t i t h r e a d i n gJ JC o m p u tC h e m,:A l h o s s a r yA,H a n d o k oSD,M uYG,e t a l F a s t,a c c u r a t e,a n d r e l i a b l e m o l e c u l a r d o c k i n g w i t hQ u i c k V i n aJ B i o i n f o r m a t i c s,:X i o n gG,WuZ,Y i J,e t a lA DME T l a b:a ni n t e g r a t e do n l i n ep l a t f o r mf o ra c c u r a t ea n dc o m p r e h e n s i v ep r e d i c t i o n so fA DME Tp r o p e r t i e sJN u c l e i cA c i d sR e s,:L u T,C h e n F WM u l t i w f n:A m u l t i f u n c t i o n a lw a v e f u n c t i o na n a l y z e rJ JC o m p u tC h e m ,:N e e s eF S o f t w a r eu p d a t e:t h eO R C Ap r o g r a ms y s t e m,v e r s i o n JW I R E sC o m p u t M o lS c i,:e L u T S o b t o p,V e r s i o n(d e v )E B/O L h t t p:/s o b e r e v a c o m/s o f t/S o b t o p W e n gY,N a i KSR,D i n g e l s t a d,e ta lM o l e c u l a rd y n a m i c sa n d i ns i l i c om u t a g e n e s i so nt h er e v e r s i b l ei n h i b i t o r b o u n dS A R S C o V m a i np r o t e a s ec o m p l e x e sr e v e a l t h er o l eo f l a t e r a l p o c k e t i ne n h a n c i n gt h el i g a n da f f i n i t yJ S c iR e p,:M a h m u dS,U d d i nM A,P a u lG K,e t a lV i r t u a ls c r e e n i n ga n d m o l e c u l a rd y n a m i c ss i m u l a t i o ns t u d yo fp l a n t d e r i v e dc o m p o u n d st oi d e n t i f yp o t e n t i a l i n h i b i t o r so f m a i np r o t e a s ef r o m S A R S C o V JB r i e fB i o i n f o r m,:K n e l l e rD W,L iH,G a l a n i eS,e t a l S t r u c t u r a l,e l e c t r o n i c,a n de l e c t r o s t a t i cd e t e r m i n a n t sf o ri n h i b i t o rb i n d i n gt os u b s i t e sS a n dS i nS A R S C o V m a i np r o t e a s eJ JM e dC h e m,:K o e b e r l eA,W e r zOM u l t i t a r g e t a p p r o a c h f o r n a t u r a lp r o d u c t s i n i n f l a mm a t i o nJ D r u gD i s c o vT o d a y,:L u oL,Y a n gJ,W a n gC,e ta lN a t u r a lp r o d u c t sf o r i n f e c t i o u sm i c r o b e sa n dd i s e a s e s:a no v e r v i e wo fs o u r c e s,c o m p o u n d s,a n dc h e m i c a ld i v e r s i t i e sJS c iC h i n aL i f eS c i,:引用本文格式:中文:师云凡,鞠壮,丁显平新型冠状病毒主蛋白酶天然产物抑制剂的筛选J四川大学学报:自然科学版,:英文:S h iYF,J uZ,D i n gXP S c r e e n i n go f n a t u r a l p r o d u c t i n h i b i t o r s t a r g e t i n gS A R S C o V m a i np r o t e a s eJ JS i c h u a nU n i v:N a tS c iE d,: