塞来昔布通过下调CyclinD1表达抑制肝星状细胞增殖及胶原分泌.pdf

塞来昔布通过下调 表达抑制肝星状细胞增殖及胶原分泌李文浩 廖 婷 黄家明基金项目:江西省卫计委基金(编号)的成果之一收稿日期:通讯作者:黄家明 (赣州市人民医院消化内科 江西赣州)摘要:目目的的 观察塞来昔布对肝星状细胞增殖及胶原分泌的影响 探讨塞来昔布抗肝纤维化的作用机制 方方法法 将体外培养的肝星状细胞分为正常组、模型组和治疗组 模型组细胞给予 刺激生长 治疗组细胞给予 刺激后加入塞来昔布治疗 采用 法检测肝星状细胞的增殖 放射免疫法检测、型胶原含量 法检测 蛋白表达 结结果果 能够显著刺激肝星状细胞增殖和分泌、型胶原蛋白 塞来昔布不仅能够抑制经 刺激的肝星状细胞的增殖 而且能够显著抑制肝星状细胞分泌、型胶原蛋白 塞来昔布抑制肝星状细胞 蛋白表达 结结论论 塞来昔布可能通过下调 蛋白表达抑制肝星状细胞的增殖和分泌胶原发挥抗肝纤维化的作用 关键词:塞来昔布 肝星状细胞 肝纤维化 细胞增殖 胶原蛋白 中图分类号:文献标识码:文章编号:()():/肝纤维化是指各种慢性因素所致损伤后在修复过程中肝脏细胞外基质异常增多和过度沉积的过程 在肝纤维化的发生过程中 肝星状细胞、肝细胞、内皮细胞、血小板源性生长因子()、转化生长因子()、肿瘤坏死因子()等多种细胞、细胞因子参与其中 其中肝星状细胞增殖和胶原分泌起核心作用 目前 在国内 仅有诸如扶正化瘀胶囊、鳖甲软肝片等少数几种中成药用于治疗肝纤维化 尚无一种化学药物批准用于肝纤维化的治疗 因此 研究一种能够在临床上用于治疗肝纤维化的化学药物具有重要意义很多科研单位在研究新型化学药物在肝纤维化中的作用 比如吡非尼酮、氟非尼酮等 实际上 一些在临床上使用的药物也不乏具有抗肝纤维化作用 塞来昔布是一种选择性的环氧化酶()抑制剂 研究表明塞来昔布在 诱导的大鼠肝纤维化模型中具有抗肝纤维化作用但有关它在抗肝纤维化作用机制尚不清楚 因此本研究通过观察塞来昔布对肝星状细胞增殖及分泌胶原的作用 探讨其抗肝纤维化的作用机制 材料和方法 材料四甲基偶氮唑蓝()购自美国 公司 培养基、胎牛血清和青霉素链霉素双抗购自美国 技术公司 购自美国 公司 胰蛋白酶购自 公司 型、型胶原放射免疫试剂盒购自北京北方生物技术公司 购自中国江莱生物科技有限公司 抗体购自美国 公司 塞来昔布购自辉瑞制药公司 肝星状细胞系购自青旗生物技术发展有限公司 方法 细胞培养肝星状细胞系贴壁生长在含胎牛血清、青霉素链霉素双抗的 培养基中 在、饱和湿度恒温培养箱中传代培养 用 胰酶 溶液消化细胞 传代 次 法检测细胞增殖 将对数生长期的肝星状细胞系用 胰酶 溶液消化后 用含 的 培养液将细胞制成/的 年第 期 九江学院学报(自然科学版)()(总第 期)(.)均匀细胞悬液 加入 孔板中(每孔)培养 后 将细胞分为正常组、模型组及治疗组(终 浓 度 为/、/、/)其中 在模型组及治疗组中加入 (终浓度为/)将细胞置入培养箱中培养 然后 在治疗组中加入含塞来昔布(终浓度为/、/、/)的 培养液 细胞培养、后取出 孔板 弃去培养基 于每孔中加入 在培养箱中放置 小时 吸出 加入 室温下放置 酶联免疫检测分析仪测定 值 放射免疫法检测、型胶原分泌 将对数生长期的肝星状细胞系制成/的细胞悬液 接种于 孔板中 将细胞分为正常组、模型组和治疗组(/)培养 后 弃去原有培养基 更换不含 的 溶液同步化处理细胞 同步化 小时后 在模型组和治疗组中加入 (终浓度为/)置入培养箱中继续培养 然后在治疗组中加入含塞来昔布(终浓度为/)的 培养液 培养 后 收集培养上清液 用放射免疫法检测、型胶原蛋白含量 法检测 蛋白表达 将细胞分为正常组、模型组和治疗组(/)各组细胞相应处理后 收集培养皿中肝星状细胞用预冷的 液冲洗 次 加入 裂解液吹打混匀 提取细胞总蛋白 经电泳、转膜后放入脱脂奶粉溶液中封闭 加入 稀释后的 抗体 孵育过夜 用 液洗一抗后加入 兔二抗 室温孵育 洗膜 次 加入电化学发光液显色后 在自动显影机中曝光、显影 应用 软件分析各组细胞中 蛋白相对表达量 统计分析计量资料采用 表示 运用 统计软件进行分析 采用单因素方差分析 为有统计学差异 结果 塞来昔布对肝星状细胞增殖的影响通过 法分析塞来昔布对肝星状细胞增殖的影响 与正常组比较 刺激、及 后 模型组的 值均显著增加()加入不同浓度(/、/、/)塞来昔布处理后 治疗组的 值较模型组显著降低()见表 表 塞来昔布对肝星状细胞增殖的影响(值)组别正常组 模型组 治疗组(/)治疗组(/)治疗组(/)注:与正常组比较 与模型组比较 塞来昔布对、型胶原蛋白分泌的影响用放射免疫法检测、型胶原蛋白含量法来分析塞来昔布对胶原蛋白分泌的影响 与正常组比较 模型组的、型胶原显著增加()与模型组比较 治疗组的、型胶原显著降低()见表、图 表 塞来昔布对、型胶原蛋白分泌的影响组别 型胶原(/)型胶原(/)正常组 模型组 治疗组(/)注:与正常组比较 与模型组比较 图 塞来昔布对、型胶原蛋白分泌的影响注:与正常组比较 与模型组比较 塞来昔布对 蛋白表达的影响通过 法检测塞来昔布对 蛋白表达的影响 结果显示 与正常组比较 模型组的 蛋白表达显著增加()九江学院学报(自然科学版)年第 期与模型组比较 治疗组(/)的 蛋白表达显著降低()见图、图 正常组 模型组 治疗组(/)图 检测 蛋白表达图 检测 表达的影响与正常组比较 与模型组比较 讨论肝星状细胞在 等细胞因子的刺激作用下活化后发生表形转化 在 等的刺激作用下不断增殖和分泌以、型胶原蛋白为主的细胞外基质、型胶原蛋白的大量分泌和降解减少导致细胞外基质在肝脏内不断沉积 引起肝小叶结构重建 最终发展为肝硬化 因此 抑制肝星状细胞的增殖和胶原分泌在抗肝纤维化中具有重要作用 是一种能够显著刺激细胞增殖的细胞因子 在各种损伤因素的作用下 肝细胞、巨噬细胞()等细胞可释放大量的 等细胞因子 促使静息状态的肝星状细胞活化为肌成纤维样细胞 并且不断增殖和分泌、型胶原蛋白 该实验中 选择 刺激肝星状细胞增殖造模 在 的刺激作用下 模型组肝星状细胞的增殖数量较正常组显著增加 并且分泌的、型胶原蛋白数量也较正常组显著增加说明 刺激肝星状细胞造模成功塞来昔布是一种选择性的环氧化酶 ()抑制剂 在临床上广泛用于解热镇痛作用 塞来昔布可以通过 依赖和非依赖途径参与疼痛、炎症反应、细胞增殖、血管增生、肿瘤发生等重要生理和病理过程的调节 研究表明 慢性肝纤维化病人肝脏组织上调表达 使用 抑制剂塞来昔布可以降低 表达水平 在实验中 结果表明塞来昔布可以显著抑制经 刺激的肝星状细胞增殖 说明塞来昔布可能通过抑制肝星状细胞的增殖来发挥抗肝纤维化的作用、型胶原是肝纤维化形成过程中的起主要作用的细胞外基质、型胶原蛋白的合成增加 降解减少是肝纤维化形成的基础 抑制、型胶原蛋白的合成能够发挥抗肝纤维化的作用各种抗肝纤维化药物都可以不同意程度的抑制肝脏内、型胶原蛋白的分泌 研究结果表明塞来昔布可以显著降低肝星状细胞分泌、型胶原蛋白 因此 塞来昔布可以通过抑制肝星状细胞分泌胶原蛋白发挥抗肝纤维化的作用细胞的增殖是受细胞周期蛋白()细胞周期蛋白依赖激酶()、细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子()等细胞周期调节因子调控的精细过程 细胞周期蛋白包括、等 它们是细胞通过/期检查点的必须调节者 它们与相应的 结合形成、等复合物后 磷酸化 蛋白 释放转录因子 启动细胞增殖相关基因的转录 推动细胞通过限制点从 期进入 期 进而促进细胞增殖 当细胞周期蛋白 和 的表达受抑制时 细胞的增殖受阻 在塞来昔布可以显著抑制经 刺激的肝星状细胞增殖的基础上 进一步研究塞来昔布抑制肝星状细胞增殖的机制 酶联免疫研究结果显示 塞来昔布显著抑制 和 的表达表明塞来昔布可能通过抑制 和 的表达来调控肝星状细胞的增殖研究表明塞来昔布可以通过激活/信号通路 抑制血管紧张素 诱导心肌细胞肥大 塞来昔布可以激活/信号通路抑制人肺腺癌细胞增殖 此外 塞来昔布也可以抑制选择性环氧化酶、受体型酪氨酸磷酸酶 的表达 因此 塞来昔布可以通过多靶点调节信号通路 研究表明塞来昔布可以下调肝星状细胞 表达、降低、型胶原蛋白分泌 但是 有关塞来昔布抑制肝星状细胞的增殖和分泌的具体信号通路尚不清晰 仍有待进一步研究总之 该研究结果表明塞来昔布可能通过下调 蛋白表达抑制肝星状细胞的增殖和分泌胶原发挥抗肝纤维化的作用 但是 有关塞来昔布抑制肝星状细胞的增殖和分泌的具体信号通路仍有待进一步研究参考文献:.第 期 李文浩 等:塞来昔布通过下调 表达抑制肝星状细胞增殖及胶原分泌 ():.():.():.():.田丰 王琳 张亚杰.选择性环氧合酶 抑制剂塞来昔布对大鼠肝纤维化的作用.世界华人消化杂志 ():.():.():.():.:.():.():.潘洁 舒建昌.环氧合酶 在肝病中的作用及机制的研究进展.胃肠病学和肝病学杂志 ():.():.:()().():.():.郑香妮 侯敏.塞来昔布对血管紧张素诱导的心肌肥大及/通路的影响.中国老年学杂志 ():.叶玉兰 刘单 邓述恺.塞来昔布联合培美曲塞对人肺腺癌 细胞株增殖、凋亡及/信号通路相关蛋白的影响.中国现代医学杂志 ():.许小兵 郭美霞 金鑫鑫 等.塞来昔布抑制血管内皮细胞迁移的实验研究.医学研究生学报 ():.().(下转第 页)九江学院学报(自然科学版)年第 期烈刺激性咳嗽、外周血 不高 早期肺部体征不明显 而影像学肺部受累 要考虑 感染可能 并进行 检测 尽早干预 及时应用大环内脂类药物 减少重症难治性病例发生参考文献:闫超 孙红妹 赵汉青 等.北京地区 年间住院患儿肺炎支原体感染流性特征分析.中华实用儿科临床杂志 ():.中华人民共和国国家卫生健康委员会.儿童社区获得性肺炎诊疗规范(年版).():.国家卫生计生委合理用药专家委员会儿童用药专业组.中国儿童肺炎支原体感染实验室诊断规范和临床实践专家共识(年).中华儿科杂志 ():.陈莉莉 刘金荣 赵顺英 等.常规剂量甲泼尼龙治疗无效的儿童难治性肺炎支原体肺炎的临床特征和治疗探讨.中华儿科杂志 ():.().:.(责任编辑 胡安娜)(上接第 页).(责任编辑 胡安娜)九江学院学报(自然科学版)年第 期