免疫检测的质量控制专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第二十一章临床免疫检验质量确保,免疫检测的质量控制,第1页,第一节 概述,一、与质量确保相关定义,二、试验方法诊疗效率评价,第二节 免疫检验质量控制标准,一、标本正确搜集及处理,二、标准化操作及流程,三、标准品和质控品应用,四、试验室环境、设施和设备,第三节 质量确保、室内质控和室间质评之间关系,免疫检测的质量控制,第2页,第四节 惯用免疫检验质量控制,一、免疫检验质量控制中惯用统计学方法选择,二、定性免疫检验,三、定量免疫检验,第五节 免疫检验室内质量控制数据处理,一、免疫检验质量确保意义,思索题,小结,免疫检测的质量控制,第3页,第一节 概述,为确保病人临床诊疗或临床试验研究有效性，临床试验室采取一系列有效办法证实其测定数据能够到达所确定质量标准，这就是质量确保内容。,免疫检测的质量控制,第4页,质量确保,(Quality Assurance,QA),为一产品或服务满足特定质量要求提供充分,可信性,所必要,有计划和系统办法,。,室内质量控制,（Internal Quality Control,IQC)由,试验室工作人员,，采取一定方法和步骤，连续评价本试验室工作可靠性程度。,一、与质量确保相关定义,免疫检测的质量控制,第5页,室间质量评价,（External Quality Assessment,EQA）为客观比较一试验室测定结果与靶值差异，由,外单位机构,客观地评价试验室结果，发觉误差并校正结果,免疫检测的质量控制,第6页,准确度,(accuracy),:待测物测定值与其真值一致性程度。,偏倚,(bias)待测物测定值与一可接收参考值之间差异。,免疫检测的质量控制,第7页,精密度,(precision),在一定条件下所取得独立测定结果之间一致性程度。,免疫检测的质量控制,第8页,准确度好试验，其精密度不一定好；,准确度差试验，其精密度则不一定差；反之亦然。,测定精密度与准确度之间关系,免疫检测的质量控制,第9页,重复性条件,(repeatability conditions)是指在短间隔时间内，在同一试验室对相同测定项目使用同一方法和同一仪器设备，由相同操作者取得独立测定结果条件。,免疫检测的质量控制,第10页,批,(Run)在相同条件下所取得一组测定。,均值,（Mean）,标准差（,Standard deviation,SD),变异系数,（Coefficient of variation,CV）,免疫检测的质量控制,第11页,正态分布,(Gaussian distribution),当一质控物用同一方法在不一样时间重复屡次测定，得到一个两头低，中间高，中为全部测定值均值，左右对称“钟形”曲线，又称高斯分布。,免疫检测的质量控制,第12页,正态分布基本统计学含义可用均数、标准差（s）和概率来说明。,免疫检测的质量控制,第13页,诊疗敏感性,（sensitivity of diagnosis）,是指将实际患病者正确地判断为阳性（真阳性）百分率。,诊疗特异性,（specificity of diagnosis）,是指将实际无病者正确地判断为阴性（真阴性）百分率。,二、试验方法诊疗效率评价,免疫检测的质量控制,第14页,诊疗效率,（efficiency of diagnosis）,是指能准确区分患者和非患者能力。,免疫检测的质量控制,第15页,阳性预测值,（positive predictive value,PPV）,是指特定试验方法测定得到阳性结果中真阳性比率。,阴性预示值,(negative predictive value,NPV),是指特定试验方法测定得到阴性结果中真阴性比率。,免疫检测的质量控制,第16页,第二节 免疫检验质量控制标准,免疫检测的质量控制,第17页,标本类型及采集容器,标本采集时间及患者准备,内源性干扰原因,外源性干扰原因,一、标本正确搜集及处理,免疫检测的质量控制,第18页,最惯用标本：,血液，包含血清、血浆和全血。唾液或尿液。,提议采取,真空采血管及蝶形针具,，以免直接接触血液。采集容器最好为一次性无菌密闭容器。,标本类型及采集容器,免疫检测的质量控制,第19页,标本采集时间及患者准备,激素和治疗药品,感染性病原体抗原、抗体,肿瘤标志物,特定蛋白,免疫检测的质量控制,第20页,内源性干扰原因,类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、本身抗体、溶菌酶、磷脂、药品小分子、总蛋白浓度等,免疫检测的质量控制,第21页,稀释标本,改变标识抗体,用变性IgG预先封闭标本中RF,测抗原,可加入还原剂如2-巯基乙醇去除RF,使用特异鸡抗体IgY作为标识或固相抗体,类风湿因子干扰排除,免疫检测的质量控制,第22页,补体干扰,固相抗体和标识二抗可抗体分子发生变构，从而其Fc段补体C1q结合位点被暴露出来，这么C1q就成为一个中介物将二者交联起来，从而出现假阳性结果。,固相抗体也会因为活化补体结合，封闭抗体抗原表位结合能力，而引发假阴性结果或结果偏低。,免疫检测的质量控制,第23页,补体干扰排除,56 30min加热可使标本中补体C1q灭活,使用特异鸡抗体IgY作为标识或固相抗体,免疫检测的质量控制,第24页,异嗜性抗体干扰,天然异嗜性抗体（IgG）可分为两类:,可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgGFab区域,可结合于小鼠、马、牛和兔IgGFC区表位，经过交联固相和标识单抗或多抗而出现假阳性反应。,免疫检测的质量控制,第25页,异嗜性抗体干扰排除,使用特异兔,F,(ab)2,片段,作为固相或标识抗体。,在标本或标本稀释液中加入过量动物Ig，封闭可能存在异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不一样时无效。,使用靶特异非Ig亲和蛋白（Affibody）替换固相或标识抗体之一。采取噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌,A蛋白（SPA）,联合文库人IgA结合亲和蛋白，用于IgA测定，不受异嗜性抗体影响。,使用特异鸡抗体作为固相和测定抗体。,免疫检测的质量控制,第26页,抗鼠Ig 抗体干扰,抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体免疫测定，可产生假阳性结果,免疫检测的质量控制,第27页,使用特异抗体F(ab)2片段作为固相或测定标识抗体。,在标本或标本稀释液中加入过量鼠Ig，封闭可能存在抗鼠抗体。,使用特异鸡抗体IgG作为固相和测定抗体。鸡IgG不与人抗鼠抗体反应,。,干扰排除可采取下述方法:,免疫检测的质量控制,第28页,本身抗体干扰,本身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等，能与其对应靶抗原结合形成复合物，在免疫测定方法中可干扰对应抗原抗体测定。,为防止以上情况出现，可在测定前用理化方法将其解离,。,免疫检测的质量控制,第29页,溶菌酶干扰,双抗体夹心法ELISA测定中，溶菌酶可在包被IgG和标识IgG间形成桥接，从而造成假阳性。去除溶菌酶或将其封闭，Cu,2+,离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶，预防其联接IgG。,免疫检测的质量控制,第30页,外源性干扰原因,溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、重复冻融,免疫检测的质量控制,第31页,标本溶血,注意防止出现严重溶血。,血红蛋白类似过氧化物活性，使反应显色,。,免疫检测的质量控制,第32页,标本被细菌污染,细菌生长，其所分泌一些酶可能会反抗原抗体等蛋白产生分解作用,细菌内源性酶如大肠杆菌-半乳糖苷酶本身会对用对应酶作标识测定方法产生非特异性干扰。,免疫检测的质量控制,第33页,标本贮存时间过长,标本在2,8下保留时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法免疫测定中会造成本底过深、甚至造成假阳性。,血清标本如是以无菌操作分离，则能够在28下保留一周，如为有菌操作，则提议冰冻保留。样本长时间保留，应在70以下。,免疫检测的质量控制,第34页,标本凝固不全,血液采集后，离心分离血清没有完全凝固，离出“血清”并非为完全血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，易造成假阳性结果,血液标本采集后，应使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶采血管或于采血管中加入适当促凝剂。,免疫检测的质量控制,第35页,冰冻保留标本防止重复冻融,重复冻融所产生机械剪切力将对标本中蛋白等分子产生破坏作用，从而引发假阴性结果。,免疫检测的质量控制,第36页,试剂准备、标本搜集、测定方法和仪器操作写出,“标准操作程序”(SOP),二、标准化操作及流程,免疫检测的质量控制,第37页,标准品和质控品分类,标准品和质控品基本条件,三、标准品和质控品应用,免疫检测的质量控制,第38页,标准品和质控品分类,标准品即含量确定处于一定基质中特征明确物质。,标准品分级:,一级标准品,为国际标准品,二级标准品,为国家标准品,二级标准品,为商品校准品,免疫检测的质量控制,第39页,临床免疫检验试验室应有充分合理空间、良好照明、空调及湿度维持设备,试验室仪器设备应保养良好，试验用具要到达对应要求,。,四、试验室环境、设施和设备,免疫检测的质量控制,第40页,第三节 质量确保、室内质控,和室间质评之间关系,免疫检测的质量控制,第41页,IQC仅覆盖标本搜集、试验室测定过程和结果汇报及其解释分析步骤；而EQA还包含一个较大范围试验室活动，诸如在标本接收中样本处理可靠性，以及测定结果汇报和解释。QA覆盖了更宽范围活动，最为主要是标本搜集、结果汇报和解释阶段。QA还应评价试验汇报发出周期（及时性）、完整性和简练性。试验室工作质量确保在确保患者治疗质量上有主要意义。,免疫检测的质量控制,第42页,第四节 惯用免疫检验质量控制,免疫检验质量控制中惯用统计学方法选择,定性,免疫检验,定量,免疫检验,免疫检测的质量控制,第43页,统计学质量控制:使用室内质控物与临床常规标本同时检测，然后依据室内质控物测定结果，采取统计学原理方法判断所进行临床常规标本测定是否在控一个质量控制办法。,一、免疫检验质量控制中惯用统计学方法选择,免疫检测的质量控制,第44页,统计学质控特点,检验误差有两类：一是,系统误差，,一是,随机误差,。,系统误差通常表现为质控物测定均值漂移，是由操作者所使用仪器设备、试剂、标准品或校准物出现问题而造成，这种误差能够经过前述办法方法加以控制，是能够排除。,随机误差则表现为测定SD增大，主要是由试验操作人员操作等随机原因所致，其出现难以完全防止和控制。,免疫检测的质量控制,第45页,统计学质控功效就是发觉误差产生及分析误差产生原因，采取办法给予防止。,开展统计质量控制前，应将能够控制误差产生原因尽可能地加以控制，这不不过做好室内质控前提，也是确保常规检验工作质量先决条件。,免疫检测的质量控制,第46页,基线测定,最正确条件下变异（Optimal conditions variance,OCV）和常规条件下变异（Routine conditions variance,RCV）；,当RCV与OCV靠近，或小于2 OCV时，则RCV是能够接收。以上为批间变异。,批内变异测定；,室内质控物测定准确度评价。,免疫检测的质量控制,第47页,临床免疫检测质控图选择、绘制及质控结果判断,Levey-Jennings质控图方法,也称Shewhart质控图，是由美国Shewhart 于1924年首先提出，并用于工业产品质量控制。,二十世纪五十年代初，Levey-Jennings将其引入临床检验质量控制。经Henry和Segalove改良，即为当前惯用Levey-Jennings质控图。,免疫检测的质量控制,第48页,免疫检测的质量控制,第49页,(1),统计学含义:,稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1个结果超出2SD（95.5%可信限）程度；在1000个测定结果中超出3SD（99.7%可信限）结果不多于3个。如以3s为失控限，假失控概率为0.3%。,免疫检测的质量控制,第50页,(2)对待质控品应如对待病人标本一样同等对待，不能进行特殊处理，在每批病人标本测定同时测定质控品，将所得结果标在质控图上，质控品在控时，方能汇报该批病人标本测定结果，质控品失控时，说明测定过程存在问题，不能汇报病人标本结果，应处理存在问题，并重新测定在控后方能汇报；,免疫检测的质量控制,第51页,（3）当使用一个以上浓度质控品想在同一张质控图描点时，则质控图上均值和s可不标详细数据，而仅以和s表示；,（4）若以均值2s为失控限，假失控概率太高，通常不能接收；以均值3s为失控限，假失控概率低，但误差检出能力不强。,免疫检测的质量控制,第52页,质控图统计,质控结果,日期,试剂,质控物批号和含量,测定者姓名等。,免疫检测的质量控制,第53页,通常质控规则以符号,A,L,来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限测定值个数，L为控制限，通惯用均值或均值13SD来表示。,当质控测定值超出控制限L时，即该批测定判为失控。,惯用1,3S,质控规则，其中1为原式中A，3s为原式中L，表示均值3s，其确切含义为：在质控测定值中，假如有一个测定值超出均值3s范围，即可将该批测定判为失控。,质控规则表示方式,免疫检测的质量控制,第54页,符 号,定 义,1,2S,一个质控测定值超出2s控制限。,1,3S,一个质控测定值超出3s控制限。,2,2S,两个连续质控测定值同时超出+2s或2s控制限。,R,4S,同一批测定中，两个不一样浓度质控物测定值之间,差值超出4s控制限。,4,1S,四个连续质控测定值同时超出+1s或1s控制限。,7,T,七个连续质控测定值展现一个向上或向下趋势变,化。,10,X,十个连续质控测定值同时处于均值（X）同一侧。,惯用质控规则符号及定义,免疫检测的质量控制,第55页,Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法,Westgard多规则质控方法即是将前述多个质控规则同时应用进行质控判断方法。,最初惯用有六个质控规则，即1,2S,、1,3S,、2,2S,、R,4S,、4,1S,和10,X,，其中1,2S,规则作为告警规则。,1,3S,和R,4S,规则反应是随机误差。2,2S,、4,1S,和10,X,反应是系统误差，系统误差超出一定程度，也可从1,3S,和R,4S,规则反应出来。,免疫检测的质量控制,第56页,在Levey-Jennings质控图方法基础上产生，含有Levey-Jennings 质控图方法优点，可经过相同质控图来进行分析。,假失控和假告警概率低。,误差检出能力增强。,免疫检测的质量控制,第57页,累积和(CUSUM)质控方法,累积和(CUSUM)质控方法于1977年由Westgard等提出,对系统误差有很好测出能力。,免疫检测的质量控制,第58页,免疫检测的质量控制,第59页,“即刻法”质控方法,“,即刻法”实质是一个统计学方法,即Grubs异常值取舍法。,只要有3个以上数据即可决定是否有异常值存在。,免疫检测的质量控制,第60页,已知,弱阳性质控,:每次测定都应最少带一个已知弱阳性对照，从而有利于判断临床标本检测结果是否有效。,阴性质控,:必需,二、定性免疫检验质量控制,免疫检测的质量控制,第61页,定量免疫检验方法通常需要使用全自动免疫分析仪，因为其对测定结果要求有准确量值，所以在测定时须用校准品对仪器进行校准.,室内质控则应选择特定试剂盒或方法测定范围内高、中和低三种浓度质控品，以监测对不一样浓度标本测定改变。,三、定量免疫检验质量控制,免疫检测的质量控制,第62页,第五节 免疫检验,室内质量控制数据处理,免疫检测的质量控制,第63页,IQC,可确保每次测定与确定质量标准一致。,EQA,实施，将有力地促进临床免疫检验标准化。,一、免疫检验质量确保意义,免疫检测的质量控制,第64页,1.与质量确保相关定义有哪些，各自含义是什么？,2.免疫检验质量控制标准是什么？,3.作为标准品和质控品基本条件是什么？二者有哪些联络和区分？,4.室间质量评价概念及意义。,5.OCV和RCV概念。,6.惯用免疫检验质量控制方法有哪些？,7.质量确保、室内质量控制和室间质量评价之间关系。,8.临床免疫学检测中常见干扰原因有哪些？,9.免疫检验质量确保意义。,10.试验方法诊疗效率评价指标有哪些？各自含义是什么,？,思索题,免疫检测的质量控制,第65页,与质量确保相关定义主要有：质量确保，室内质量控制，室间质量评价，准确度，偏倚，精密度，重复性条件，批，均值，标准差，变异系数，正态分布；与试验方法诊疗效率评价相关定义有：诊疗敏感性，诊疗特异性，诊疗效率，阳性预测值，阴性预示值。,在免疫测定中，试剂准备、加样、温育、洗板、显色（或测定信号激发）和测定等每一步骤均对测定结果都可能会产生较大影响，全部试验技术人员在进行相关测定时，必须严格按对应SOP进行操作。,小结,免疫检测的质量控制,第66页,标准品定值测定方法可使用参考方法，标准品值溯源从一级标准值传递到最终试验所使用校准物过程通常由几个校准步骤组成，包含标准品和测定方法、缓冲液及其基质、稀释控制、最终止果统计学评价和质量控制等。,临床免疫检测质控图选择、绘制及质控结果判断包含Levey-Jennings质控图方法，Levey-Jennings质控图结合Westgard多规则质控方法，累积和质控方法，“即刻法”质控方法。,免疫检测的质量控制,第67页,IQC仅覆盖上述各步中测定分析步骤；而EQA则除了监测测定分析步骤外，还包含一个较大范围试验室活动，诸如在标本接收中样本处理可靠性，以及测定结果汇报和解释。QA覆盖了更宽范围活动，最为主要是标本搜集、结果汇报和解释阶段。,免疫检测的质量控制,第68页,