加工方法对不同产地青钱柳叶中黄酮类成分含量的影响.pdf

DCIENCE&TECHINOLOGY VISION科技视界加工方法对不同产地青钱柳叶中黄酮类成分含量的影响区崔素华梁枫丁伯平2 引张瑞（1.安徽中医药高等专科学校基础教学部药理教研室，安徽芜湖2.皖南医学院药学系药理教研室，安徽芜湖2 410 0 0)241000;摘要：为研究不同处理方法对不同产地青钱柳叶中绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素含量的影响，采用正交试验，选择干燥温度、干燥时间及粉碎粒径为正交试验设计的因素，得到30 个青钱柳样品；通过高效液相法（HPLC）对青钱柳叶中的绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素5种黄酮类成分进行定量分析。结果显示：（1）绿原酸：芜湖 九华山 黄山；（2）异皮苷：芜湖黄山 九华山；（3）皮素：黄山 芜湖 九华山；（4）山奈酚：芜湖 黄山 九华山；（5）山奈素：九华山 黄山 芜湖；（6）干燥温度50、干燥时间12 h、粉碎粒径6 0 目处理的芜湖青钱柳中绿原酸含量最高；（7）自然晾干的黄山青钱柳中异皮苷含量最高；（8）干燥温度90、干燥时间12 h、粉碎粒径40 目处理的黄山青钱柳中榭皮素含量最高；（9）干燥温度90、干燥时间16 h、粉碎粒径40目处理的芜湖青钱柳中山奈酚含量最高；（10）自然晾干的九华山青钱柳中山奈素含量最高。不同干燥温度、干燥时间及粉碎粒径对不同产地青钱柳叶中绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素含量有一定的影响。关键词：青钱柳；高效液相；绿原酸；异皮苷；皮素；山奈酚；山奈素引言青钱柳（Cyclocaryapaliurus）是双子叶植物纲胡桃科青钱柳属植物，也被称为甜茶树、青钱李、摇钱树等。它是我国特有的单种属植物，也是国家重点保护的濒危植物之一，属于国家二级保护树种，有植物界的大熊猫、医学界的第三棵树之称。中华本草及全国中草药汇编记载其青钱柳具有清热消渴解毒、祛风止痒、清浊降脂之功效，适用于皮肤瘙痒，糖尿病。自从2 0 13年10月，国家卫健委批准青钱柳叶作为新食品原料，对青钱柳的研究热度大大增加。青钱柳叶中主要含有的化学成分有黄酮类、三类、多糖类等，以黄酮类成分较为丰富。现代药理研究表明，青钱柳中黄酮类成分具有降血压、降血糖、抗菌、抗氧化等作用，而绿原酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、降糖降脂等活性 2-5。作者简介：崔素华，硕士，讲师，研究方向为药理学。基金项目：2 0 2 1年度安徽省高校优秀青年人才支持计划重点项目（gxyqZD2021148），2 0 2 0 年度安徽省教学研究项目（2 0 2 0 jyxm1064），2 0 19年度安徽中医药高等专科学校自然科学研究项目（ZRKXZ201906）。32科技视罗|Science&Technology VisionEXPERIMENTSCIENTIFIC科学实验研究发现，来源于不同采收地点的青钱柳叶中黄酮及三皂苷类成分含量存在一定的差异，但对不同产地中化学成分的差异研究甚少。因此，本文以九华山、黄山及芜湖的青钱柳叶为研究对象，采用HPLC法对不同干燥温度、干燥时间及粉碎粒径处理的青钱柳叶提取物（绿原酸、山奈素、山奈酚、皮素、异皮苷）进行定量分析，探讨不同处理方法对青钱柳中绿原酸、山奈素、山奈酚、榭皮素及异皮苷含量的影响。一、材料（一）药物与试剂2020年5月中旬一9月中旬采集安徽九华山、安徽芜湖、安徽黄山三地的青钱柳枝条中上部嫩叶，经安徽中医药高等专科学校李林华研究员鉴定为胡桃科青钱柳属植物青钱柳的干燥叶。对照品绿原酸（批号：190 510）、山奈素（批号：190320）、异皮苷（批号：190 7 11）、山奈酚（批号：190710）、皮素（批号：190 42 3）购自北京北纳创联生物技术研究院；色谱级乙腈、磷酸（美国TEDIA公司）、水为娃哈哈纯净水、甲醇等化学试剂为市售分析纯。（二）仪器与设备安捷伦12 6 0 型高效液相色谱仪（Agilent，U SA），DV215CD型Discovery电子天平（OhausCor-poration，USA），K Q 2 50 型超声波清洗仪（上海市昆山超声仪器有限公司），U-16K型台式离心机（Sigma，G e r ma n y）。二、方法(一)正交试验在前期文献调研及预试验基础上，选择干燥温度（A）、干燥时间（B）及粉碎粒径（C）为正交试验设计的因素，采用L9（34）正交表，正交试验的水平因素见表1。采用正交试验，得到30 个青钱柳样品，样品信息见表2。表1正交试验水平因素表因素水平干燥温度(A)/15028340表2青钱柳样品信息干燥温度干燥时间粉碎粒径样品编号产地(A)/S1九华山S2九华山S3九华山S4九华山S5九华山S6九华山S7九华山S8九华山S9九华山S10九华山S11黄山S12黄山S13黄山S14黄山S15黄山S16黄山S17黄山S18黄山S19黄山S20黄山干燥时间(B)/h701260(B)/h901690129085016501250870167087012自然晾干自然晾干501650125087016701270890169012908粉碎粒径(c)/目901680(c)/目604080806040406060806040408060604080Science&Technology Vision|科技视界33SCIENCEANTECHINOLOGY VISION科技视界续表样品编号S21S22S23S24S25S26S27S28S29S30（二）青钱柳叶样品中主要成分的定量分析1.样品溶液制备取青钱柳叶粉末约0.3g，置于15mL具塞离心管中，精密加入10 mL80%甲醇，室温下超声提取（2 50 W，50kHz）1h 后离心（40 0 0 r/min）10 m in，取上清液过0.45um微孔滤膜得到续滤液，备用。2.对照品溶液制备精密称定绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚、山奈素对照品适量，分别置于5个10 mL棕色量瓶中，以80%甲醇溶液定容至刻度，精密量取5个对照品溶液适量混合于同一10 mL量瓶中，涡旋震荡2 min，以8 0%甲醇定容至刻度，置4冰箱中储存，备用。3.色谱条件色谱柱为 ZO R BAX Eclipse XDB-C18(150mm4.6mm，3.5m）；流动相为0.3%甲酸水溶液（A）及0.3%甲酸乙腈（B），梯度洗脱程序如下：0 15min，2 0%40%B；1535m i n，40%95%B；流速0.7 mL/min，柱温35，检测波长2 10 nm、36 0 n m，进样量10 L。三、结果干燥温度干燥时间粉碎粒径产地(A)/芜湖50芜湖50芜湖50芜湖70芜湖70芜湖70芜湖90芜湖90芜湖90芜湖(B)/h161281612816128自然晾干(c)/目806040408060406080（一）不同产地青钱柳中绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素含量比较（1）绿原酸：芜湖 九华山 黄山；（2）异皮苷：芜湖 黄山 九华山；（3）榭皮素：黄山 芜湖 九华山；（4）山奈酚：芜湖黄山 九华山；（5）山奈素：九华山 黄山 芜湖。见表3。（二）不同处理方法对不同产地青钱柳中绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素含量的影响1.九华山干燥温度90、干燥时间16 h、粉碎粒径6 0 目处理的青钱柳中绿原酸含量最高；干燥温度7 0、干燥时间16 h、粉碎粒径40 目处理的青钱柳中异皮苷含量最高；干燥温度90、干燥时间16 h、粉碎粒径6 0 目处理的青钱柳中皮素含量最高；干燥温度90、干燥时间16 h、粉碎粒径6 0 目处理的青钱柳中山奈酚含量最高；自然晾干的青钱柳中山奈素含量最高。2.黄山干燥温度90、干燥时间12 h、粉碎粒径40 目处理的青钱柳中绿原酸含量最高；自然晾干的青钱柳中异皮苷含量最高；干燥温度90、干燥时间12 h、粉碎粒径40 目处理的青钱柳中皮素含量最高；自然晾干的青钱柳中山奈酚含量最高；干燥温度50、干燥时间16h、粉碎粒径8 0 目的青钱柳中山奈素含量最高。3.芜湖干燥温度50、干燥时间12 h、粉碎粒径6 0 目处理的青钱柳中绿原酸含量最高；干燥温度7 0、干燥时间12 h、粉碎粒径8 0 目处理的青钱柳中异皮苷含量最高；干燥温度90、干燥时间12 h、粉碎粒径6 0 目处理的青钱柳中皮素含量最高；干燥温度90、干燥时间16 h、粉碎粒径40 目处理的青钱柳中山奈酚含量最高；干燥温度7 0、干燥时间16 h、粉碎粒径40 目的青钱柳中山奈素含量最高。见表3。34科技视|Science&TechnologyVisionEXPERIMENTSCIENTIFIC科学实验表3各青钱柳样品中5种成分含量测定结果（mg/g，n=3）四、讨论样品编号绿原酸异皮苷皮素山奈酚山奈素S10.899S20.584S30.275S40.260S50.238S60.256S70.403S80.306S90.300S100.273S110.209S120.174S130.169S140.179S150.244S160.316S170.297S180.307S190.343S200.326S210.942S221.158S230.712S240.725S251.035S260.580S270.591S280.545S290.480S300.199本实验采用正交试验，选择干燥温度、干燥时间及1.4060.1321.0740.1312.8070.1302.8170.0872.1590.0752.9300.0873.4580.0753.2930.0762.8770.0962.8890.08619.3100.2309.2910.1238.4980.1130.0997.3417.9549.7559.3208.65711.73012.80412.77012.97716.52818.43918.71918.00618.25317.53017.46416.5280.1200.1070.1050.0810.0690.0720.0820.0770.0820.0790.1510.1170.0770.0770.1240.0930.1350.0990.1510.0840.2150.1290.2580.1330.2380.1240.1130.0680.1230.0750.1240.0790.1610.0990.1720.0970.1510.0920.1810.1990.2220.1390.2020.1330.1130.0790.1090.1050.1050.1200.1080.1150.1220.1190.1100.1350.0530.0890.0660.0740.0560.0560.0680.0620.0600.0770.0340.0360.0400.0450.0350.0430.0400.0410.0330.040粉碎粒径为正交试验设计的因素，得到30 个青钱柳样品；通过高效液相法（HPLC）对青钱柳叶中的绿原酸、异皮苷、榭皮素、山奈酚及山奈素5种黄酮类成分进行定量分析。结果显示芜湖产地的青钱柳叶中绿原酸、异皮苷及山奈酚含量最高，黄山产地的青钱柳叶中皮素含量最高，九华山产地的青钱柳叶中山奈素含量最高；干燥温度50、干燥时间12 h、粉碎粒径6 0 目处理的芜湖青钱柳中绿原酸含量最高；自然晾干的黄山青钱柳中异皮苷含量最高；干燥温度90、干燥时间12 h、粉碎粒径40 目处理的黄山青钱柳中皮素含量最高；干燥温度9 0、干燥时间16 h、粉碎粒径40 目处理的芜湖青钱柳中山奈酚含量最高；自然晾干的九华山青钱柳中山奈素含量最高。说明不同干燥温度、干燥时间及粉碎粒径对不同产地青钱柳叶中绿原酸、异皮苷、皮素、山奈酚及山奈素含量有一定的影响。参考文献1国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草：第二册 M.上海：上海科学技术出版社，1999：37 0-37 1.2聂小华，吴聪聪，林胜利，等.青钱柳中活性物质及其功能特性研究进展 J.浙江工业大学学报，2 0 2 2，50（2）：2 2 2-227.3李俊秀，廖夏云，赵立春，等.青钱柳黄酮类成分不同提取方法及药理活性研究 J.中国民族民间医药，2 0 2 0，2 9（5）：17-26.4李俊，梁晓琴，常燕玲，等.青钱柳的化学成分及药理活性研究进展 JJ.广西师范大学学报（自然科学版），2 0 2 2（4）：1-2 6.5邹荣灿，吴少锦，张妮，等.青钱柳的分布、化学成分及药理作用研究进展 J.中国药房，2 0 17，2 8（31）：4449-4451.Science&Technology Vision|科技视罗35