黄金凤内生细菌的分离及其促生活性.pdf

第 41 卷 第 4 期2023 年 8 月四川农业大学学报Journal of Sichuan Agricultural UniversityVol.41 No.4Aug.2023黄金凤内生细菌的分离及其促生活性王梦雨，贾颜，李茜，李新艺，李文祥，黄海泉*，黄美娟*（西南林业大学园林园艺学院/国家林业和草原局西南风景园林工程技术研究中心/云南省功能性花卉资源及产业化技术工程研究中心/西南林业大学园林园艺花卉研发中心，昆明650224）摘要：【目的】探索黄金凤可培养内生细菌资源并筛选具有促生活性的菌株。【方法】以野生黄金凤为研究材料，采用3种分离处理和5种不同培养基对其内生细菌进行分离，并通过16S rRNA基因序列对分离得到的内生细菌进行鉴定；测定其ACC脱氨酶活性、产IAA能力、溶磷及产铁载体能力。【结果】从黄金凤中分离去重后获得39株内生细菌，分属于5个目、7个科和8个属，其中以100倍稀释悬浮法（X法）分离效果最佳，共获得6个菌属；最好的分离培养基为M-7培养基（5号培养基），共分离获得5个菌属。促生能力测定结果表明：39株内生细菌均具有产ACC脱氨酶能力，其中菌株SWFU195产ACC脱氨酶能力最强，为11.039 0 U/mg；27株内生细菌具产IAA的能力；24株具有溶磷能力；28株内生细菌具产铁载体能力；39株黄金凤内生细菌中有14株内生细菌同时具有溶磷、产ACC脱氨酶、产IAA和产铁载体能力。【结论】野生黄金凤植株中蕴藏着丰富的内生细菌资源及促生活性菌株，为野生黄金凤资源的保护利用及其促生活性菌株的开发应用提供了一定的基础数据和理论依据。关键词：黄金凤；内生细菌；分离；促生活性中图分类号：S681.1 文献标志码：A 文章编号：1000-2650（2023）04-0650-08Isolation of Endophytic Bacteria from Impatiens siculifer and Its Growth-Promoting ActivityWANG Mengyu，JIA Yan，LI Qian，LI Xinyi，LI Wenxiang，HUANG Haiquan*，HUANG Meijuan*（College of Landscape Architecture and Horticulture Sciences，Southwest Forestry University/Southwest Research Center for Engineering Technology of Landscape Architecture（State Forestry and Grassland Administration）/Yunnan Engineering Research Center for Functional Flower Resources and Industrialization/Research and Development Center of Landscape Plants and Horticulture Flowers，Southwest Forestry University，Kunming 650224，China）Abstract:【Objective】This paper aims to explore the resources of cultivable endophytic bacteria and screen the life-promoting strains in Impatiens siculifer.【Method】The endophytic bacteria of wild Impatiens siculifer were isolated by three isolation methods and five different culture media，and the isolated endophytic bacteria were identified by 16S rRNA-gene sequences.The activities of ACC deaminase，synthesis of IAA，the abilities of dissolving phosphorus and producing iron carrier were investigated.【Result】A total of 39 endophytic bacteria were obtained，belonging to 5 orders，7 families and 8 genera.The suspension method（X method）had the best separation effect，and a total of 6 genera were obtained.The best isolation medium was M-7 glycerol-asparagine medium（No.5 medium），and 5 genera were isolated.Based on the testing results of growth-promoting abilities，it showed that all 39 endophytic bacteria had the ability to produce ACC deaminase，and the strain SWFU195 had the highest ability to produce ACC deaminase among them，which was 11.039 0 U/mg；27 strains were capable of producing IAA；24 strains had phosdoi：10.16036/j.issn.1000-2650.202305238收稿日期：2022-11-04基金项目：云南省重大科技专项（202102AE090052）；国家自然科学基金项目（32060364、32060366、31860230、31560228）；云南省高校园林植物与观赏园艺科技创新团队（51700204）；云南省园林植物遗传改良与高效繁育博士生导师团队和云南省中青年学术和技术带头人培养项目（2018HB024）。作者简介：王梦雨，硕士研究生，E-mail：。*责任作者：黄美娟，博士，教授，博士生导师，主要从事园林植物研究，E-mail：；黄海泉，博士，教授，博士生导师，主要从事园林植物研究，E-mail：。第 4 期王梦雨，等：黄金凤内生细菌的分离及其促生活性phorus solubilization ability；28 strains had siderophore production capacity；Among 39 strains of endophytic bacteria，14 strains of endophytic bacteria also had phosphorus soluble，produce ACC deaminase，synthesis of IAA and produce iron carrier simultaneously.【Conclusion】Rich endogenous bacterial resources and life-promoting strains were found in I.siculifer，which provided certain basic data and theoretical basis for its development and utilization and its growth-promoting endophytic bacteria strains.Keywords:Impatiens siculifer；endophytic bacteria；isolation；growth-promoting activities在健康植物组织内定植，并与植物建立联合关系的微生物类群被称为植物内生细菌。在植物内生细菌的分离培养过程中，培养基中的营养物质是其进行生长的关键，使用不同类型的培养基有利于得到更丰富的微生物资源。已有研究证明不同培养基以及不同分离处理，会对得到的微生物数量产生影响，石松标等1选择3种不同培养基对红树林放线菌进行分离培养，分离结果表明，椰子汁海藻糖培养基分离到的菌属数量最多，是最理想的分离培养基；高磊等2对新疆药用植物牛至进行内生细菌分离，试验结果表明营养丰富的培养基，更利于获得多样性的内生细菌资源。培养基是内生细菌生长过程中主要的营养来源，不同成分的培养基，会对获得的菌属种类产生重要影响。同时，植物内生细菌可以通过调节植物内源激素或提供外源激素促进植物生长发育，利用具有促生活性的内生细菌促进农业生产和植物修复已成为研究热点之一。刘雪菲等3对香石竹和百合的土壤与根系进行分菌，其中有10株内生菌具有产ACC脱氨酶能力，测定活性后选择了其中两株并在不同菌液浓度下对香石竹切花进行瓶插处理，结果发现处理组香石竹保鲜效果明显；冀玉良等4在豆科植物的根际土中分离得到了具ACC脱氨酶活性的菌株，并通过试验证明其对桔梗种子具有促进萌发的作用；邓振山等5使用稀释涂布的方法对巨菌草和白术内生菌进行分离鉴定并测定其促生活性，发现其内生菌具有溶磷、固氮、解钾与合成吲哚乙酸（IAA）的潜力；史应武等6在甜菜根部分离得到了1株对甜菜具有促生和增糖作用的内生细菌，用这株内生菌处理的甜菜其鲜重、株高和含糖率都有明显提升；梁志超等7通过试验证明内生解淀粉芽孢杆菌YN2014048对烟苗具有促生作用。由此可见，植物内生细菌在促进植物生长等方面起着重要作用。黄金凤（Impatiens siculifer）为凤仙花科凤仙花属植物，别名岩胡椒、纽子七和龙虾菜等，主要分布于西南以及江西、湖北和湖南等地，适合的生态环境为河边草丛或者林中阴湿地，黄金凤植株全草入药，具有祛风除湿、活血消肿、活血化瘀和清热解毒等功效，对急性炎性水肿和化学物质引起的疼痛也具有抑制作用。目前，黄金凤内生细菌的研究国内外还未见相关报道，开展对黄金凤植株内可培养内生细菌的分离鉴定和促生活性研究，为后续菌肥资源的开发利用提供理论依据。本研究选择野生黄金凤为试验材料，采用3种分离处理及5种不同分离培养基对黄金凤的根和茎进行内生细菌的分离、鉴定，并检测其产ACC脱氨酶能力、产IAA、铁载体和溶磷能力，进而筛选具有促生潜力的植物生长促生菌（plant growth promoting bacteria,PGPB），为后续植物内生细菌资源的开发与利用提供一定的基础数据和理论依据。1材料和方法1.1样品采集1.1.1植物材料本试验所用材料是从云南省西山风景区采集的6株野生黄金凤（Impatiens siculifer），选择1a生且长势相同株高均为65 cm左右的健康植株，采集后立即带回试验室并以其根茎部位为材料进行内生细菌的分离。1.2培养基使用本课题组前期试验研究效果较好的5种分离培养基进行内生细菌的分离。5种培养基分别为：（1 号）棉子糖-组氨酸培养基-丙酮酸钠培养基8；（2号）丙酸钠-天冬酰胺培养基9；（3号）YCED培养基（Yeast 0.3 g，Casein 0.3 g，Glycose 0.3 g，骨粉0.3 g，Agar 15 g，H2O 1 L，pH 7.4）；（4号）N-乙酰基培养基（N-乙酰基-D-葡萄胺 2 g，KH2PO4 0.2 g，K2HPO43H2O 0.8 g，MgSO47H2O 0.2 g，CaSO42H2O 0.1 g，微量盐1 mL，H2O 1 L，pH 7.4）；（5号）M-78培养基。YIM 38#纯化培养基8（麦芽膏（粉）5 g，酵母浸膏（粉）4 g，葡萄糖 4 g，琼脂 14 g，ddH2O 1 L，pH 7.2）；ADF 固体培养基（KH2PO4 4 g，葡萄糖 2 g，Na2HPO 6 g，葡萄糖酸2 g，MgSO47H2O 0.2 g，柠檬651四川农业大学学报第 41 卷 酸 2 g，ddH2O 1 L，Agar 14 g，pH 7.2）；TSB 培养基（大豆胨3 g，胰蛋白胨17 g，NaCL 5 g，K2HPO4 2.5 g，琼脂20 g，pH 7.2）。1.3内生细菌的分离、纯化和保藏1.3.1样品处理样品预处理：植物样品采集后立即进行清洗，用自来水先将黄金凤植物表面泥土冲洗干净，然后在超声波清洗器中反复清洗至水变清澈。消毒程序：将黄金凤根和茎切成0.7 cm左右的小段，首先用0.1%Tween消毒1 min，用70%的酒精处理30 s，然后使用有效氯含量为5%的次氯酸钠溶液对其浸泡5 min，再用2.5%硫代硫酸钠溶液进行10 min的处理，随后10%NaHCO3处理10 min，最后用无菌水冲洗45次。同时用最后一遍清洗样品的水在YIM 38#培养基和5种分离培养基上分别进行涂布并培养观察，无菌落生成则表明表面灭菌处理彻底。1.3.2内生细菌分离将表面灭菌处理合格的黄金凤根、茎组织样品打碎研磨，采用2种分离方法进行分菌，其中悬浮法选择了两种不同的稀释倍数处理：（1）粉状干撒（简称S法）：将研磨好的部分粉状试验材料取少许干撒在5种分离培养基上；（2）悬浮法：将取1 g粉状材料放入装有9 mL 0.1%Na4P2O710 H2O缓冲溶液的锥形瓶中，在37、200 r/min的振荡器上振荡，振荡10 次，每次 20 s，静置 1 min，取上清液分别进行100倍稀释和1 000稀释，每次用移液枪吸取50 L，分别涂布于5种培养基上，每种平板做4个重复并将平板放置在28 的培养箱里培养715 d，观察菌株菌落形态和颜色等特征进行挑选，在YIM 38#纯化培养基上接种挑选出的单菌落，进行纯化培养。1.3.3内生细菌纯化和保藏将全部平板放置于28 培养715 d，待菌落长出后，根据菌落形态、颜色和质地等特征挑取单菌落于YIM 38#培养基上，经反复划线纯化得到纯培养物，然后挑取单菌落接种于YIM 38#暂时保存，并在牛奶管、甘油管中长期保存。1.4内生细菌DNA提取、16S rRNA的基因序列分析与分类归属内生细菌的DNA提取参考Li W.J.等10的方法进行。将检测获取的16S rRNA 基因序列，提交至GenBank数据库中，利用NCBI进行相似性比对，选取同源性较高已有分类地位的典型菌株的 16S rRNA基因序列，采用MEGA7.0构建系统发育树，具体序列分析方法参照Li W.J.等10的方法进行。1.5菌株 ACC 脱氨酶活性、铁载体及溶磷能力测定具有ACC脱氨酶活性的菌株筛选：将39株内生细菌置于纯化培养基上进行7 d的培养，挑取单菌落转接在以ACC为唯一氮源的ADF培养基上，接种后在28 的恒温培养箱中进行57 d的培养，长出的菌落即为含ACC脱氨酶活性的菌株。ACC脱氨酶活性值测定时，在OD540条件下代入-丁酮酸标准曲线，计算每分钟ACC脱氨酶分解ACC产生的-丁酮酸的物质量，即为1个单位的酶活力；悬浮液中的蛋白质含量采用考马斯亮蓝G-250法测定，用单位酶活力除以总蛋白质量得出的活力比，来表示内生细菌的ACC脱氨酶活性。ACC脱氨酶活性及铁载体和溶磷能力的具体测定方法参照梁妍8。1.6产IAA菌株的筛选及活性测定将分离得到的内生细菌接种于含有色氨酸的TSB培养基中进行振荡培养，培养结束后离心取其上清液进行 IAA 检测，溶液变为粉红色即表示有IAA 产生，越红说明产 IAA 越多，每组实验重复3次；在OD530条件下测定菌株反应液的数值，具体方法参考G.Santoyo等11的方法。2结果与分析2.1黄金凤可培养内生细菌的分离本试验使用3种分离处理及5种分离培养基从黄金凤的根和茎中分离得到内生细菌，并对其进行测序和比对，去除重复后共获得39株黄金凤内生细菌，分属于7个科和8个属。如图1所示，其分别为微球菌属（Micrococcus）、甲基杆菌属（Methylobacterium）、尼尔菌属（Niallia）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus）和假单胞菌属（Pseudomonas）均占总菌株数的2.56%（1株）；寡养单胞菌属（Stenotrophomonas）占菌株数的7.69%（3株）；赖氨酸芽孢杆菌属（Lysinibacillus）占菌株数的12.82%（5株）；芽孢杆菌属（Bacillus）占比最高，是66.67%（26株）为优势菌属。运用NCBI 的 BLAST 选取各个属中同源性高的模式菌株，以Trametes hirsuta strain为外群与黄金凤内生细菌构建系统发育树(图1)。2.2不同分离方法对黄金凤内生细菌资源分离的影响如表2所示，不同分离方法对黄金凤内生细菌的分离效果有明显差异。本试验共分离得到了39株652第 4 期王梦雨，等：黄金凤内生细菌的分离及其促生活性图1基于16S rRNA的黄金凤内生细菌及其同源菌株构建的系统发育树Figure 1The phylogenetic tree constructed by 16S rRNA-based endophytic bacteria from Impatiens siculifer and their homologous strains.表2不同分离方法获得的黄金凤内生细菌数量比较Table 2Endophytic bacteria obtained via different separation methods from Impatiens siculifer科FamiliesBacillidaePseudomonadaceaeCaryophanaceaeMicrococcaceaeMethylobacteriaceaeLysobacteraceaePaenibacillaceae菌株总数菌属数菌属所占比例/%菌属Genus nameBacillusNialliaPseudomonasLysinibacillusMicrococcusMethylobacteriumStenotrophomonasPaenibacillus不同分离方法Different isolation methodsS12002000115338X10112012017675 Z400110107450菌株数No.of strains261151131菌株所占比例Ratio of all/%66.702.562.5612.822.562.567.692.56注：粉状干撒法（简称S法）；100倍稀释悬浮法（简称X法）；1 000倍稀释悬浮法（简称Z法）。Note：Powder dry scattering method（S method for short）；100-fold dilution suspension method（X method for short）；1 000-fold dilution suspension method（Z method）.653四川农业大学学报第 41 卷 内生细菌，其中不同培养基分离得到的菌株数占比从 高 到 低 为：悬 浮 法 100 倍 稀 释（简 称 X 法）（43.59.）粉状干撒法（简称S法）（38.46）悬浮法1 000倍稀释（简称Z法）（17.95）。100倍稀释悬浮法获得了6个不同菌属的17株黄金凤内生细菌，综合分离得到的内生细菌来看，芽孢杆菌属和赖氨酸芽孢杆菌属的内生细菌在每种分离方法中都能获得，是此次分离内生细菌的优势菌属。此次分离中尼尔菌属、甲基杆菌属和假单胞菌属的内生细菌只从100倍稀释悬浮法中获得，微球菌属内生细菌仅在1 000倍稀释悬浮法中分离得到，类芽孢杆菌属内生细菌仅在粉状干撒法中获得。2.3不同分离培养基对黄金凤内生细菌资源分离的影响不同培养基对黄金凤内生细菌的分离效果有明显差异性，如表3所示，5号和1号培养基的分离效果更为理想，5号培养基获得5个菌属、1号培养基获得4个菌属。本次分离中，尼尔菌属、甲基杆菌属和类芽孢杆菌属的内生细菌只在5号培养基中得到；假单胞菌属内生细菌、微球菌属内生细菌都仅在1号培养基中获得；芽孢杆菌属内生细菌在每种培养基中都能得到。2.4黄金凤内生细菌促生活性分析2.4.1黄金凤内生细菌产ACC脱氨酶能力对分离得到的黄金凤内生细菌进行了酶活性测定，测定结果表明39株内生细菌均具有产ACC脱氨酶活性的能力，SWFU195 菌株活性最高，为11.039 0 U/mg，SWFU39 菌株活性最低，为 0.104 7 U/mg，SWFU78、SWFU84、SWFU96、SWFU167、SWFU45、SWFU198和SWFU160活性依次为3.867 7、1.513 6、1.264 4、1.135 9、1.177 4、1.079 5和1.062 2 U/mg，其余菌株活性处于较低水平，差异显著。2.4.2黄金凤内生细菌产铁载体能力分离得到的内生细菌中，有28株内生细菌的菌落边缘都产生淡黄色光晕，说明具有产铁载体的能力，其中微球菌属、尼尔菌属和甲基杆菌属均筛选到1株，各占产铁载体菌株总数的3.57；赖氨酸芽孢杆菌属和寡养单胞菌属各筛选得到3株，分别占总比例的10.71；芽孢杆菌属筛选得到19株，占总比例的70.67.86。2.4.3黄金凤内生细菌溶磷能力内生细菌的溶磷结果初筛发现，有 6 个属的24株内生细菌具有溶磷的能力，分别属于：假单胞菌属、赖氨酸芽孢杆菌属、尼尔菌属、微球菌属、寡养单胞菌属和芽孢杆菌属。39 株内生细菌中有21株内生细菌同时兼具产ACC脱氨酶能力、产铁载体以及溶磷能力，占菌株总数的53.85。2.4.4黄金凤内生细菌产IAA能力通过产IAA能力测定发现，39株黄金凤内生细菌中有27株内生细菌具有产生IAA能力，其中芽孢杆菌属 SWFU39 菌株的 IAA 浓度最高，为 1.996 0 mg/mL；而赖氨酸芽孢杆菌属中的SWFU5菌株IAA浓度最低，为1.748 3 mg/mL；其他菌株的IAA活性在1.891 01.752 3 mg/mL之间。黄金凤39株内生细菌中有14内生细菌同时兼具产ACC脱氨酶、IAA以及溶磷和铁载体能力。表3不同培养基获得的黄金凤内生细菌数量比较Table 3Endophytic bacteria obtained via different culture medium from Impatiens siculifer科FamilyBacillaceaePseudomonadaceaeCaryophanaceaeMicrococcaceaeMethylobacteriaceaeLysobacteraceaePaenibacillaceae菌株总数菌属数菌属所占比例/%菌属Genus nameBacillusNialliaPseudomonasLysinibacillusMicrococcusMethylobacteriumStenotrophomonasPaenibacillus不同分离培养基Different isolation medium17012100011 450 2300000104225 310001001012 3 37.504300200005225 53100011175 62.50菌株数No.of strains261151131菌株所占比例Ratio of all/%66.672.562.5613.162.562.567.692.56654第 4 期王梦雨，等：黄金凤内生细菌的分离及其促生活性3讨论本试验以野生黄金凤为材料，选用5种分离培养基和3种分离处理对黄金凤内生细菌资源进行研究，筛选后得到39株内生细菌，分属于7个科和8个属，其中芽孢杆菌属为优势菌属。内生细菌普遍存在于大多数植物中，但会因品种、生境等因素影响分离得到内生细菌的数量，张珣等12从葡萄叶片中筛选出43株内生细菌，分属于5个属，其优势菌属为芽孢杆菌属；邵红等13从野生春兰根部组织中分离得到了5个不同属的43株内生细菌，芽孢杆菌属（Bacillus）是优势菌属；苗永美等14采用7种培养基从石豆兰中分离得到39株内生细菌；杨琦等15从苎麻根部分离得到12株内生细菌。以上试验结果表明不同植物材料或不同环境因素对内生细菌菌群分布都存在影响，具有一定的差异性或相关性。因此，影响黄金凤内生细菌的多样性因素有待进一步研究。从黄金凤中分离获得内生细菌菌属数量的表现为5号1号3号2号=4号培养基；X法Z法S法，由此看出不同分离培养基和不同分离处理对获得内生细菌的结果存在差异性，这可能是由于不同菌株生长需求不一致，植物内生细菌分离培养时，培养基是细菌生长的营养来源，分离得到内生细菌的数量和种类在一定程度上都会受到其培养基种类的影响16。孙磊等17发现营养贫乏的R2A培养基对春兰根的内生细菌分离效果较好，这主要是由于春兰根生长的环境营养相对贫乏，贫营养的培养基更适合其内生细菌的生长；而吴庆珊等18通过试验发现，有大量碳源的培养基可以更好地提高金钗石斛内生细菌分离的多样性，这充分说明了不同的分离培养基会对菌属多样性产生一定的影响。本试验分离的尼尔菌属、微球菌属、假单胞菌属和甲基杆菌属内生细菌仅能从部分培养基中分离获得，原因可能是其培养基中含有丰富的碳源成分，与黄金凤的生长环境相吻合，利于其内生细菌的生长。因此，不同植物材料的内生细菌进行分离时，不同的分离培养基和分离处理有利于获得更加丰富的内生细菌资源。植物内生细菌可以对寄主植物体内的激素（如乙烯和生长素）进行调节，通过产生ACC脱氨酶、IAA等来促进植物生长发育。代金霞等19获得了具有ACC脱氨酶促生功能的根系菌株，并通过接种后发现其对柠条幼苗的生物学指标有显著提高；侯俊杰等20采用具有ACC脱氨酶活性的芽孢杆菌进行盆栽实验，结果表明具ACC脱氨酶活性的芽孢杆菌对桉树幼苗生长具有促进作用；冯丹等21从南方红豆杉根际土壤中分离得到一株产ACC脱氨酶的促生细菌CLY07，通过试验发现其对南方红豆杉有促生作用；刘鲁峰等22从甘蔗中分离得到可以产生IAA的枯草芽孢杆菌B9，回接试验结果证明，该菌株可以提高甘蔗的株高、叶绿素等指标，促进甘蔗生长；李培根等23分离得到具有合成IAA能力的阿氏芽孢杆菌，能够提高马铃薯产量；常慧萍等24将产IAA的细菌制成菌液浸种，浸泡过的小麦幼苗根长和对照相比增加了17.50。葛春晖等25在黄瓜根部分离得到了具IAA活性的内生细菌，菌株SGM7产IAA能力最强，产量为23.59 mg/mL，通过黄瓜盆栽实验证明，接种内生细菌后黄瓜株高、茎粗显著增加分别较CK而言增加了25.4和7.08；于淼等26分离得到1株高效解磷菌，通过试验证明其对番茄生长具有明显的促进作用。本试验对筛选得到的 39 株黄金凤内生细菌进行产 ACC 脱氨酶能力、产IAA能力、产铁载体以及溶磷能力活性的测定，发现芽孢杆菌属中具促生活性的菌株所占比重较大，其中SWFU195菌株的ACC脱氨酶促生活性图4筛选菌株的ACC脱氨酶活性Figure 4ACC deaminase activity of the isolated strains655四川农业大学学报第 41 卷 高于其他菌株，为11.039 U/mg，39株内生细菌中有14株兼具产ACC脱氨酶、产IAA、铁载体和溶磷能力；同时，殷小冬等27和杨晓燕等28的研究表明芽孢杆菌属微生物能够转化土壤中的难溶性磷，是微生物菌肥研制的重要类群，可以有效地用于植物病虫害防治。据此推测，本试验分离得到的具高活性的表5黄金凤PGPB主要促生能力比较Table 5Comparison of main promoting ability of PGPB from Impatiens siculifer菌株编号Strain serial number1951441007810651301601141101861879672198174113151204194132211674539191847542343818414510320971581201菌属Genus nameBacillusPseudomonasStenotrophomonasLysinibacillusLysinibacillusLysinibacillusLysinibacillusLysinibacillusMicrococcusNialliaPaenibacillusMethylobacteriumStenotrophomonasStenotrophomonasBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusBacillusACC脱氨酶活性ACC deaminase activity/(Umg-1)11.039 00.641 12.548 93.867 70.627 10.498 30.532 91.062 20.217 90.519 90.242 60.946 41.264 40.719 71.079 50.613 50.332 60.681 40.487.00.614 10.110 80.279 51.135 91.177 40.104 70.881 91.513 60.361.01.184 70.227 50.499 20.523 10.584 20.160 10.338 50.838 40.877 61.518.00.297 1IAA浓度IAA concentration/(mgmL-1)1.885 1-1.877 1-1.748 3-1.799 21.752 2-1.771 2-1.775 21.870 11.770 21.786 21.835 2-1.753 21.874 11.799 21.9961.797 21.832 11.899 11.786 21.880 1-1.845 11.782 2-1.753 21.794 21.787 21.829 21.778 2产铁载体Siderophore detection+-+-+-+-+-+-+溶磷能力Ability of phosphorus solubilization+-+-+-+-+-+-+-+-+注：“+”代表具有产铁载体和溶磷能力；“-”代表不具有产IAA能力、产铁载体能力和溶磷能力。Note：+represents the ability to produce iron carriers and dissolve phosphorus；-indicates that it does not have the ability to produce IAA，the ability to produce iron carrier and the ability to dissolve phosphorus.656第 4 期王梦雨，等：黄金凤内生细菌的分离及其促生活性内生细菌可能对植物生长有显著促生作用，为后续黄金凤内生细菌促生应用奠定了基础。由于在土壤中铁的可溶性较低，植物难以将其直接吸收利用，因此铁元素也是限制植物生长的因素之一。但植物内生细菌产生的铁载体，可以作为增溶作用于铁或有机化合物中的金属元素，增强对铁的利用。本试验从黄金凤中分离的内生细菌中有28株可产生铁载体。贾颜等29对螃蟹脚分离得到的内生细菌检测发现有10株可产生铁载体，这一结果可能与植物种类和植物生长环境不同有关。在本研究分离得到的内生细菌中芽孢杆菌属的菌株促生活性较高，推测其也具有相似的促生和生防作用，但其应用效果还需进一步验证。综上所述，本试验分离得到的内生细菌均具有较高的促生活性，为本研究后续试验奠定基础的同时，还为内生细菌和植物互作关系以及抗病机理方面的研究提供了理论依据。参考文献：1 石松标，杨立芳，姜明国，等.广西北部湾茅尾海红树林生境放线菌分离培养基的比较 J.微生物学通报，2018，45（11）：2331-2340.2 高磊，刘永红，马金彪，等.新疆药用植物牛至内生细菌多样性与抗菌活性 J.微生物学通报，2021，48（4）：1140-1150.3 刘雪菲.含ACC脱氨酶的PGPR菌株分离及其对香石竹切花保鲜效果的研究 D.昆明：西南林业大学，2012.4 冀玉良，李丹，罗嘉凡.ACC脱氨酶活性菌的分离及其对桔梗的促生作用 J.商洛学院学报，2021，35（2）：33-40.5 邓振山，李买平，郝雷，等.巨菌草内生细菌多样性及其促生特性 J.草地学报，2019，27（5）：1213-1221.6 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