DB41∕T 2102-2021 多胎绵羊妊娠酮血症防治技术规程.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 43 41 河南省地方标准 DB41/T 21022021 多胎绵羊妊娠酮血症防治技术规程 2021 - 01 - 26 发布 2021 - 04 - 25 实施 河南省市场监督管理局 发 布 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由河南省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：河南农业大学、河南省畜牧总站、浚县中鹤牧业有限公司、安阳市畜禽改良站。 本文件主要起草人：陈其新、姜义宝、韩帅斌、李晓静、王京、郭吉利、曹攀、李书举、宁洋洋、王赛赛、杨慧霞、徐泽君、王献伟、程关胜、康绍华、肖莹莹、张继文、刘旭乐、马慧、李慧慧。 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 1 多胎绵羊妊娠酮血症防治技术规程 1 范围 本文件规定了多胎绵羊妊娠酮血症防治的术语和定义、发病原因、发病特点、临床症状、剖检、诊断与防治。 本文件适用于绵羊养殖场以及兽医工作者对多胎绵羊妊娠酮血症的诊断与防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 YY/T 0014 半自动生化分析仪 WS/T 350 血清葡萄糖测定参考方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 绵羊妊娠酮血症 Ovine Pregnancy ketosis，OPK 又叫绵羊妊娠毒血症（Ovine Pregnancy Toxemia），是妊娠后期母羊碳水化合物及挥发性脂肪酸代谢紊乱、胎儿营养需求与母体营养供应失衡所致的一种代谢紊乱性疾病，以低糖（血糖，肝糖原）、高酮体(酮血、酮尿)、代谢性酸中毒、肝脏脂肪浸润以及临床上表现神经症状、躺卧等为主要特征。 3.2 酮体 ketone body; acetone body 脂肪酸在肝脏中氧化分解产生的中间产物-羟基丁酸、乙酰乙酸及丙酮。 3.3 血液生化指标 blood biochemical indices 包括血液酮体、 血清葡萄糖、 血清钙含量以及血清天门冬氨酸氨基转移酶、 丙氨酸氨基转移酶活性。 4 发病原因 群体因素 4.1 OPK常见于怀双羔或多羔的绵羊。群体性营养不良可能诱发该病，饲养方式改变也会使该病发病率升高。肝片吸虫等寄生虫感染严重时会引起母羊肝功能损坏，可能诱发OPK。其它应激因素，如恶劣的天气条件、抓羊、接种疫苗、突然更换日粮、群体性营养过剩等，都可能是该病的诱因。 个体因素 4.2 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 2 过肥和过瘦的绵羊都易发生OPK。一些疾病，如严重跛足、阴道脱垂、内分泌紊乱、瘤胃酸中毒、低血钙等，都可能影响母羊食欲，诱导OPK的发生。 5 发病特点 OPK主要危害饲养管理不当的妊娠后期（110 d145 d）母羊。发病羊一般均为怀双羔或多羔者，怀多羔的母羊发病率会骤升。 进口肉用种绵羊的杂交后代比国内纯种多胎性地方品种羊更容易发病。 该病发生无明显季节性，但冬、春发病相对较多。 6 临床症状 病羊通常体况较差，迅速消瘦，乳腺发育不良，腹部膨胀比较明显。初期病羊精神倦怠，离群索居。进而肌肉功能紊乱，姿势异常，肌肉紧张性、平衡和运动能力逐渐丧失，双目失明，呼出气体带有明显的酮臭味。神经肌肉功能紊乱包括头部肌肉微微颤抖、耳和唇部抽搐，部分羊可能表现惊厥。到后期，病羊姿势异常，出现角弓反张姿势，不时磨牙，常仰头弓背卧在圈舍角落处，最后卧地不起，逐渐陷于昏迷状态，呼吸困难，并在3 d4 d后死亡。幸存的母羊常发生难产。即使成功产羔，新生羔羊也会因宫内发育迟缓，生后难以成活。 7 剖检 病羊尸体通常极度消瘦，子宫内可见两个或多个胎羔。尸检可见的主要病理变化为肝、肾及肾上腺脂肪变性。肝脏高度肿大，边缘钝化，质地脆弱，呈土黄色或柠檬黄色，胆囊肿大，充满黄绿色水样胆汁。肾脏肿大，颜色灰白而发软，皮质部呈棕土黄色，布满红色小点，髓质部呈棕红色，有红色放射状条纹。肾上腺肿大，皮质部质地发脆，呈土黄色，髓质部呈紫红色。右心室呈现高度扩张，冠状沟有出血斑点，心肌呈棕黄色，质地稍脆。肺脏膨胀，肺尖高度气肿，膈叶瘀血水肿，气管及支气管空虚。大脑的软脑膜有清亮液体，丘脑白质有散在出血点。消化器官通常没有明显变化。 8 诊断 临床诊断 8.1 主要根据妊娠母羊的病史和临床表现进行诊断。若在妊娠后期（特别是110 d145 d）内，观察到妊娠绵羊出现精神沉郁、 食欲不振、 离群独处、 呼出酮臭味气体、卧地不起等症状， 可初步诊断为OPK。剖检时，实质性器官（特别是肝脏）脂肪浸润以及在子宫内发现双胎或多胎等都是重要的辅助性诊断依据。 实验室诊断 8.2 8.2.1 血液酮体检测 8.2.1.1 Rothera 氏法尿酮和血清酮体定性检查 尿样采集：待病羊排尿时，立即用洁净青挥素小瓶接取3 mL5 mL,保存待检。 血样采集与血清制备：在病羊颈静脉中1/3区域，用75%酒精棉球消毒皮肤，使用10 mL一次性注射器采取血样5 mL。将采集的血样加入无抗凝剂的玻璃试管中，将采血管倾斜静置30 min45 min。待血液完全凝固后，用移液器将血清移入储存管，暂存于4冰箱，在4 h48 h内完成测定。 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 3 检查方法：取亚硝酸铁氰化钠3 g、硫酸铵100 g、无水碳酸铵50 g，混匀，研细，备用。检查时，取混合粉末少许放在玻片上，加血清或尿液2滴3滴，立即出现紫红色即为酮体阳性反应。在定性后，可按8.2.1.3、8.2.1.4进行定量检测。 8.2.1.2 试纸条法尿酮定性/半定量检查 牛尿酮用试纸条（urine ketone test strips for cow，哈罗德（北京）科技有限公司），主要检查尿液中乙酰乙酸。采集尿液，手持试纸条终端，将试纸条浸入在尿液样本中1 s。然后将试纸条从容器中取出，用吸水纸除去多余的尿液，放置60 s。最后将出现的颜色与比色卡进行比较，读取结果。 不含酮的正常尿液呈阴性，即测试结果显示负号阴性（Neg.）。如果尿中有酮体，试纸的颜色会逐渐变成紫色，颜色越深说明尿酮含量越高（图1）。在5 mg/dl尿酮（约0.5 mmol/L）时，对应于血液-羟丁酸1.4 mmol/L。尿酮检测试纸条达到4 mmol/L时（深红色阳性结果），其对应血液-羟丁酸3.0 mmol/L。 图1 尿酮测定比色卡 8.2.1.3 试条法血酮定量检测 试条法血酮（-羟丁酸）定量检测操作步骤见附录A。 8.2.1.4 试剂盒法血酮定量检测 试剂盒法血酮（-羟丁酸）定量检测操作步骤见附录B。 8.2.1.5 血酮生理性/病理性参考值 健康妊娠后期（110 d145 d）母羊血液-羟丁酸浓度为0.15 mmol/L0.16 mmol/L，95%生理性参考值范围为0.46 mmol/L。 妊娠后期 （110 d145 d） 发病母绵羊血液-羟丁酸为4.63 mmol/L1.26 mmol/L，95%病理性参考值范围为2.16 mmol/L7.10 mmol/L。 8.2.2 其它病理生化指标测定 8.2.2.1 血样采集及制备 同8.2.1.1。 8.2.2.2 血清生化指标测定方法 8.2.2.2.1 血清 GLU：血清葡萄糖含量按 WS/T 350 规定的方法进行测定。 8.2.2.2.2 血清 Ca：血清钙含量按世界卫生组织推荐的邻甲酚酞络合铜法测定。 8.2.2.2.3 血清 AST：血清谷草转氨酶活性采用试剂盒（IFCC 法）进行测定。 8.2.2.2.4 血清 ALT：血清丙氨酸氨基转移酶活性采用试剂盒（IFCC 法）进行测定。 8.2.2.3 生理性常值与病理性参考值 生理性常值与病理性参考值见表1。 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 4 表1 健康羊与 OPK 羊血清生化指标参考值 指标 健康羊 OPK 羊 平均值 95%生理性 参考值范围 平均值 95%病理性 参考值范围 血清 GLU/mmol/L 2.270.39 1.503.03 0.870.55 1.95 血清 Ca/mmol/L 2.270.39 1.503.03 1.930.30 1.342.52 血清 AST/U/L 73.8413.47 47.47100.27 115.3625.80 64.79165.93 血清 ALT/U/L 19.886.00 8.1231.64 26.873.58 19.8533.89 确诊 8.3 根据发病特点、 临床症状可作出初步诊断， 经实验室诊断予以确诊。 符合6或7的症状， 且按8.2.1.3或8.2.1.4定量检测血酮2.16 mmol/L，或者8.2.1.2试纸条法尿酮定性/半定量检查结果达到4 mmol/L以上时 （图1中阳性结果3以上）， 确定为临床型OPK羊。符合6或7的大部分症状，且按8.2.1.3或8.2.1.4定量检测血酮在2.16 mmol/L0.46 mmol/L，或按8.2.1.1血酮检测结果为阳性，或按8.2.1.2试纸条法尿酮定性/半定量检查为图1中的阳性结果1和阳性结果2时，定为OPK亚临床型病羊。 9 防治 防治原则 9.1 防治总原则是“以防为主，治疗为辅”。OPK主要见于母羊妊娠后期，预防重点在于改善母羊妊娠后期的营养、合理分群、加强运动、尽量减少各种应激等方面。但是，即使能做到早期诊断，OPK的治疗效果一般也不很理想。目前主要是对症治疗，即补糖、保肝、解毒。 预防方法 9.2 9.2.1 维持妊娠后期营养均衡 妊娠后期胎羊生长发育十分迅速， 羔羊出生重的60%80%是在妊娠最后1个半月时期取得的。 因此，必须保证充足、 均衡的营养供给。 在妊娠的最后6周， 要给多胎妊娠母羊饲喂足量的优质粗饲料和精料，日粮营养水平要比单胎妊娠母羊高25%以上。 9.2.2 加强妊娠后期管理 可根据怀羔羊数目不同，对妊娠母羊进行适当的分群，以便进行适宜饲养管理。在产羔前4周6周测量母羊血酮浓度，可准确地评估母羊的营养状况。加强舍饲母羊的管理，每只妊娠母羊所占漏粪地板羊舍面积不应低于1.4 m2，运动场面积不低于3 m25 m2。每天保证运动2 h左右，以增加母羊体质。应尽量减少各种应激，以避免OPK发生。 9.2.3 补饲 RPC 和 RPM 9.2.3.1 单独补饲 RPC 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 5 在妊娠110 d至分娩前补饲RPC（胆碱有效含量为50%，过瘤胃率85%），每只6 g/d，每天分2次饲喂。对于中等饲养管理条件下的多胎母羊群，单独补饲RPC可使母羊群体OPK发病率降低13%，血酮水平降低34%，血糖水平升高18.5%。 9.2.3.2 同时补饲 RPC 和 RPM 在妊娠110 d至分娩前，给每只妊娠母羊补饲RPC（胆碱有效含量为50%，过瘤胃率85%）6 g/d和RPM（过瘤胃率85%，小肠吸收率95%）2 g/d5 g/d，可产生良好的协同效应。 治疗方法 9.3 每天2次静脉注射50%葡萄糖，用量为1 mL/kg体重2 mL/kg体重；或静脉注射20%葡萄萄10 mL/kg体重，配合肌肉注射胰岛素。也可口服丙酸钠2 g/kg体重，连用7 d，或口服丙二醇或甘油1 mL/kg体重，每日2次3次，持续2 d10 d。 肌内注射0.2 mg/kg体重0.4 mg/kg体重的醋酸可的松或静脉注射氢化可的松0.2 mg/kg体重0.4 mg/kg体重，也可肌肉注射氢化泼尼松1.5 mg/kg体重,辅之以静脉注射葡萄糖及钙、磷、镁制剂。 为缓解低血钙，可将1.2 mL/kg体重的硼葡萄糖酸钙多点皮下注射，同时静脉注射复合维生素B或维生素B1、葡萄糖液。若同时补充钙、磷，疗效会更好。 为纠正酸中毒，可静脉注射碳酸氢钠。若胎羔死亡或流产，可对母羊进行抗生素治疗。 在139 d妊娠至分娩前，可注射0.4 mL/kg0.5 mL/kg体重的地塞米松，24 h左右可诱导母绵羊分娩。 治愈标准 9.4 母羊临床症状消失，采食量恢复正常水平；生理指标恢复正常，即定量检测结果血酮含量 0.46 mmol/L， 血糖浓度1.50 mmol/L， 血钙1.50 mmol/L， 血清AST100.27 U/L， 血清ALT31.64 U/L。 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 6 A A 附录A （资料性） 试条法定量测定妊娠母羊血酮水平 A.1 检测原理 绵羊血酮包括三种化合物，其中丙酮占2%，乙酰乙酸占20%，-羟丁酸占78%。本法主要是通过检测血液中-羟丁酸的含量来表示其酮体含量。试条表面的-羟丁酸脱氢酶可催化血液中-羟丁酸与NAD反应生成乙酰乙酸，而氧化型辅酶I则被还原成为还原型辅酶I。生成的还原型辅酶I在340 nm处有最大吸收峰，其吸光度值与样品-羟丁酸的含量呈正相关。 A.2 材料和方法 A.2.1 材料 5 mL含乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，采血针，怡成TNN型奶牛血酮快速检测仪，TNN-1型奶牛血酮试条。 A.2.2 方法 A.2.2.1 血样采集 A.2.2.1.1 使用 EDTA 作为抗凝剂制备抗凝血采血管，加入血样后抗凝剂终浓度在 3.7 mol/L5.4 mol/L 间。 A.2.2.1.2 加入血样占抗凝管的 4/5,使血样与抗凝剂充分混合。 A.2.2.1.3 采血针必须为一次性使用产品，也不能使用碘酒消毒，以免引起数值偏高。 A.2.2.1.4 采集血液样品后尽快测试。 A.2.2.2 上机测定 先打开血酮体测试仪，调整校正码与试条包装上校正码一致。进入“插入”状态后，将试条插入到仪器内。待仪器显示“进血”字样时，将采集到的血样通过试条反应区上、下虹吸孔自然吸入到反应区。30 s倒计时结束后，读取结果。 A.3 判定标准 判定标准见表A.1。 表A.1 试条法定量测定血酮结果判定标准 -羟丁酸 结果判定 2.16 mmol/L 临床型OPK 2.16 mmol/L0.46 mmol/L 亚临床型OPK 0.46 mmol/L 正常妊娠母羊 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 7 B B 附录B （资料性） 试剂盒法定量测定妊娠母羊血酮水平 B.1 检测原理 通过检测血液中-羟丁酸的含量来确定酮体含量。基本原理同A.1。 B.2 材料与方法 B.2.1 材料 5 mL采血管，采血针，-羟丁酸（D3-H）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），移液枪，1.5 mL离心管，自动/半自动生化分析仪。其中半自动生化分析仪的使用应遵守YY/T 0014的规定。 B.2.2 方法 B.2.2.1 血样采集 采集绵羊颈静脉血样。样品为新鲜静脉EDTA抗凝全血，采集后直接测试。确保采血针首次使用，不能使用碘酒消毒，以免引起数值偏高。 B.2.2.2 上机测定 B.2.2.2.1 先打开自动/半自动生化分析仪。 B.2.2.2.2 输入上机参数：主波长为 340 nm，反应方法为两点终点法，反应温度为 37，反应方向设为向上，校准类型定为线性。 B.2.2.2.3 反应体系：在 1.5 mL 离心管内，分别准备空白对照管、标准管以及样品测定管。各管内反应体系组成见表 B.1。 表B.1 血酮测定反应体系组成 成分 空白 标准 样品测定 双蒸水 10 - - 标准品 - 10 - 血清样本 - - 10 试剂一 240 240 240 试剂二 60 60 60 B.2.2.2.4 混匀，读取吸光度 A1，置 37孵育 5 min，读取吸光度 A2。 B.2.2.2.5 计算样品测定管-羟丁酸浓度：A=A1-A2， -羟丁酸（mmol/L）=(测定A 值-空白A 值)/(标准A 值-空白A 值)*标准品浓度（mmol/L） 。 B.2.3 判定标准 判定标准见表B.2。 河南省地方标准公共服务平台 DB41/T 21022021 8 表B.2 试剂盒法定量测定血酮结果判定标准 -羟丁酸 结果判定 2.16 mmol/L 临床型 OPK 2.16 mmol/L0.46 mmol/L 亚临床型 OPK 0.46 mmol/L 正常妊娠母羊 河南省地方标准公共服务平台