富硒小球藻提取物对小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用.pdf

收稿日期 基金项目 湖北省重点研发计划项目()第一作者简介 王雪儿女硕士研究生主要研究方向:食品毒理学通信作者汪兴平男博士教授主要研究方向:天然产物化学与产品开发论著基础研究富硒小球藻提取物对小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用王雪儿杨欣宇朱 婷朱于鹏袁 林莫开菊汪兴平.湖北民族大学生物科学与技术学院(湖北 恩施).恩施硒圣植物科技有限公司(湖北 恩施).湖北民族大学风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室(湖北 恩施)【摘要】目的 探究富硒小球藻提取物(含硒量/)对小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用 方法 只雄性 小鼠随机分为:对照组、模型组、联苯双酯药物组、无硒组、低硒组、中硒组、高硒组每组 只 预防试验中对照组和模型组每日灌胃/蒸馏水药物组灌胃./联苯双酯滴丸补硒组分别为富硒小球藻提取物.、.、./、无硒组为无硒破壁小球藻提取物./次/连续 末次灌胃 后对照组腹腔注射大豆油其余各组腹腔注射 大豆油溶液建立肝损伤模型注射剂量为/治疗试验先腹腔注射建立模型后进行灌胃 检测小鼠血清、酶含量、肝脏中抗氧化酶、脂质过氧化产物 染色观察小鼠肝脏组织病理学变化 结果 在预防实验中与模型组相比 组补硒的、降低明显低硒组 活性、中及高硒组 活性显著性增加(.)治疗试验中与模型组相比 组补硒组的、活性未见明显差异低、中硒组的 显著性降低 显著性增加(.)中、高硒组 活性显著性增加(.)结论 富硒小球藻提取物对急性肝损伤有一定的治疗和预防作用【关键词】富硒小球藻提取物急性肝损伤治疗预防【中图分类号】.【文献标识码】【文章编号】()(.)【】(/)././././.第 卷第 期(第 页)年 湖北民族大学学报医学版 ./.().()().【】近年来肝脏疾病的患病率不断上升自由基和活性氧引起的氧化损伤是主要发病机制 肝脏中脂质过氧化物的积累会导致活性氧的产生并放大作用引起炎性细胞浸润、肝细胞代谢及功能障碍诱发疾病甚至死亡 硒作为重要的抗氧化剂参与清除自由基和维持氧化还原平衡调节硒蛋白基因的表达如谷胱甘肽过氧化物酶()、硫氧还蛋白还原酶()对肝脏损伤有较好的预防和治疗作用 小球藻()是一种球状绿色微藻富含脂肪酸和蛋白质因其含有所有必需氨基酸且生长环境简单易于培养使得小球藻成为食品潜在的可持续原料 小球藻能够将外源性无机硒转化为低毒的还原性硒代谢物其主要存在形式为硒代蛋氨酸()可以赋予小球藻更高的营养价值 本实验通过评估肝功能指标、脂质氧化损伤标志物和组织形态学变化研究富硒小球藻提取物对急性肝损伤模型的预防保护及治疗作用以期能够为富硒小球藻提取物的开发提供理论依据 材料与方法.实验动物及原料 富硒小球藻提取物(硒含量为/)无硒破壁小球藻提取物由恩施硒圣植物科技有限公司提供 雄性 小鼠 级体质量 辽宁生长生物技术公司 动物合格证号(辽)联苯双酯滴丸万邦德制药集团金龙鱼大豆食用油购自湖北恩施享买乐超市(分析纯)国药集团丙氨酸氨基转移酶()测定试剂盒(法)天门冬氨酸氨基转移酶()测定试剂盒(天门冬氨酸底物法)潍坊三维生物工程集团有限公司超氧化物酶()、谷胱甘肽过氧化物酶()、丙二醛()试剂盒南京建成生物工程研究所 蛋白定量试剂盒万类生物科技有限公司.仪器与设备 型电子天平华志(福建)电子科技有限公司 智能高速冷冻离心机湖南赫西仪器装备有限公司 多功能酶标仪 型全自动生化分析仪日本东京医疗.动物分组与模型建立根据富硒小球提取物亚慢性毒性试验最大无作用剂量()为./(./以硒计)及预实验结果并参考滕杨的实验方法设计如下:预防组:选择 只雄性小鼠适应性饲养 周随机分成 组分别为:对照组()、模型组()、联苯双酯药物组()、无硒破壁小球藻提取物()、低硒组()、中硒组()、高硒组()每组 只其剂量分组及受试物种类见表 连续灌胃 末次灌胃 后对照组腹腔注射大豆油其余各组腹腔注射 大豆油溶液建立肝损伤模型注射剂量为按体质量 /禁食不禁水 后眼球取血颈椎脱臼处死小鼠 治疗组:动物数量、分组、灌胃剂量及模型建立操作与预第 期 湖北民族大学学报医学版 防组小鼠相同在适应期结束后对各组小鼠腹腔注射行建立肝损伤模型 注射 后再对各组小鼠灌胃受试物时间持续 末次灌胃后禁食不禁水 进行宰杀取样表 实验分组及灌胃剂量编号受试物以受试物计以硒计蒸馏水/蒸馏水联苯双酯滴丸./无硒破壁小球藻提取物./././富硒小球藻提取物././././.检测项目 在剖解前记录其体质量摘眼球取血/离心 收集血清血生化指标测定、按相应试剂盒说明书测定 之后剖检小鼠观察肝脏病变状况并称重计算肝占比(肝占比 肝质量/体质量)部分肝脏使用多聚甲醛固定用于后续病理切片制作观察其组织形态 剩余肝脏组织按照质量()体积()加入生理盐水在冰水浴中研磨/离心 取上清液获得 的肝脏匀浆用于肝脏蛋白、及、活性的测定操作方法根据相应试剂盒说明书.统计学处理采用 .统计分析软件计量资料采用均数标准差()表示进行单因素 分析和多样本分析以.为差异有统计学意义 结果.预防组的结果.肝占比及病理观察 与对照组相比模型组的肝占比显著增加()对照组的肝细胞排列紧密细胞核正常未见炎症反应而模型组有中性粒细胞渗出肝细胞排列紊乱出现坏死结构丧失与模型组相比药物组的肝占比显著降低()切片显示肝细胞排列紧密炎症明显改善无硒组肝占比显著升高(.)其切片显示有明显的损伤与模型组相似中、低硒组肝占比有所下降高剂量组显著升高(.)不同表示差异显著(.)图 预防组肝组织肝占比及 染色结果(染色).血清中、酶活力 与对照组相比模型组血清、活性显著增加(.)与模型组相比药物组血清、活性显著性降低()见图 低、中硒组降低酶活性效果明显与联苯双酯差异不显著(.).肝组织中、活性、含量比较 与对照组相比模型组 活性显著降低至最小 活性次小()不同表示差异显著()图 预防组小鼠血清中、活力比较且最高(.)低、中、高硒组 显著性降低(.)且随剂量增加降低效果越强 活性增加低硒组显著增加(.)活性增加且随剂量增强而增强中硒及高硒组具有显著性(.)见图.治疗组实验结果.肝占比及病理观察比较 与对照组相比模型组的肝占比显著性增加(.)但切片显示损伤程度小于模型组炎症现象有所改善无硒组肝脏比显著性增加(.)不同表示差异显著(.)不同表示差异显著(.)但是血清中、基本低于模型组、高于药物组见图.肝组织中、活性、含量比较 与对照组相比模型组的 显著性增大且最高 及 活性显著性降低()与模型组相比药物组 个指标均表现出显著性差异(字母相同表示差异不显著(.)不同表示差异显著()图 治疗组小鼠血清中、活力比较)在低、中、高硒组干预后低、中硒组的 显著性降低()显著性增加()中、高硒组 活性显著性增加(.)不同表示差异显著(.)图 治疗组小鼠肝组织中 含量、活性比较 讨论在 诱导的急性肝损伤模型中在进入机体后代谢为 和 与细胞成分、氧反应抑制了脂蛋白的分泌导致脂肪变性引发脂质过氧化分解破坏细胞膜结构导致细胞凋亡、坏死、肝脏损伤甚至引发癌症 和 是肝损伤的标志物血清中、含量反映了肝脏的损伤程度 升高则表明损伤程度达到了细胞器水平 是脂质过氧化中最具诱变性的产物且 在多个细胞过程中发挥关键作用并且可以通过促进分子内或分子间蛋白质与 交联参与二次有害反应进一步加深细胞损伤 因此肝组织中 的含量间接反应了 诱导肝损伤的严重程度 而机体中抗氧化酶系统如 和 酶可以抵抗自由基及 引起的膜损伤、细胞坏死和癌变本研究中 诱导肝损伤均表现在、和 升高而对氧化损伤起保护作用的、抗氧化作用酶系统的活性均降低但是经过富硒小球藻的预防和治疗其、低于模型组和无硒小球藻组高于联苯双酯组同时、均高于模型组和无硒小球藻组低于联苯双酯组说明小球藻提取物对小鼠肝损伤的保护作用来自于硒但是其效果逊于医用药物联苯双酯硒的抗氧化防御主要是通过参与 硒蛋白的合成 多项实验发现补硒可能通过增加 水平来有效减少氧化应激和炎症补硒同样促进 酶活性 肝组织切片也说明肝脏炎症改善与硒相关 此外预防组中、值均高于治疗组这可能是因为小鼠接触 的时间不同导致的 在预防实验中小鼠于 注射后第剖杀测定各项指标而治疗组小鼠在 注射后经过 的小球藻提取物、联苯双酯药物的干预及自身机体解毒后剖杀指标得到修复因此预防实验中的指标均高于治疗组综上所述富硒小球藻提取物通过提高抗氧化酶活性和降低脂质过氧化物来预防和修复 对肝脏造成的急性损伤 整体来看预防试验中中剂量富硒小球藻提取物在消除 降低转氨酶活性提高抗氧化酶活性 方面都取得最佳的预防急性肝损伤效果在治疗试验中富硒小球藻提取物一定的治疗效果参考文献 .:.():.():.:.()():.():.:.:.():.(下转第 页)湖北民族大学学报医学版 第 期 关键靶基因筛选得到了 个上调 靶基因 个下调 靶基因:、目前关于成人 的相关基因研究较少上述基因可能为其发病的关键基因值得进一步的研究综上所述本研究通过生物信息学方法分析 表达谱芯片数据得到可能与成人 相关的、基因和信号通路 其中上调 、下调 和 信号通路的激活等可能在成人 的发生发展过程中起着重要作用 此外筛选出的 个关键预测靶基因在 的作用有待进一步研究参考文献 .:.():.:.():.():.(/):.().:.():.:.():.:.:.():.责任编辑:牟冬生(上接第 页).():.:.():.():.():.().():.责任编辑:牟冬生第 期 湖北民族大学学报医学版