肝细胞癌患者血清中G0S2表达及临床意义.pdf

肝细胞癌患者血清中 表达及临床意义 眉山市人民医院感染科 眉山市人民医院胃肠外科 四川眉山 眉山市人民医院输血科王小红，江甜甜，王 旭，雷 益【摘 要】目的 评估血清 开关基因（）作为肝细胞癌（）潜在生物标志物的诊断价值。方法采用实时荧光定量（）检测本院 年 月至 年 月 例 患者和 例健康对照的血清 水平。采用受试者工作特征（）曲线评价 在 的诊断效能。分析血清 水平与 患者临床病理特征的相关性。采用 风险比例回归模型分析影响 预后的独立危险因素。结果 患者的血清 水平低于健康对照（，）。表达水平与肿瘤分化程度（，）、分期（，）和淋巴结转移（，）有关。诊断 的曲线下面积为 （：，），最佳截断值为 ，敏感度和特异度分别为 和 。高表达组 患者的中位总生存期为 个月，高于 低表达组的 个月（，）。另外，肿瘤分化程度（，：，）、肿瘤最大径（，：，）和血清 表达水平（，：，）是影响 患者预后的独立危险因素。结论 患者血清 表达水平降低，可作为肝癌诊断的潜在血清生物标志物。【关键词】肝细胞癌；开关基因；临床病理；诊断；预后中图分类号：文献标识码：文章编号：（），【】（）（）（）（）（，），（，），（，）（，）（：，），（），（，）（，：，），（，）（，：，），【】；临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，肝细胞癌（，）是常见的恶性肿瘤，在世界范围内癌症相关死亡数仅次于肺癌排名第二，每年造成超过 万人死亡，具有持续的高发病率和高死亡率。的危险因素包括慢性乙型或丙型肝炎病毒感染、过度饮酒、代谢性肝病以及黄曲霉毒素、马兜铃酸暴露。尽管 生物标志物的发现取得了一定进展，但 患者的 年生存率不足，预后仍然不理想。因此，仍迫切需要挖掘新的有效生物标志物及治疗靶点。开关基因（，）在脊椎动物中特定表达，具有高度保守性并与其他蛋白缺乏同源性。有研究表明，能够抑制乳腺癌的癌性转化并诱导肿瘤细胞凋亡，其表达量还与胶质瘤的 恶性等级呈正相关。然而关于 在 中的表达模式及其预后评估价值尚不清楚。本研究通过回顾性分析 例 患者临床与预后数据，评判血清 在 中的预后价值及临床意义，现将结果报道如下。资料与方法 一般资料 收集本院 年 月至 年 月就诊的 患者 例，其中男性 例、女性 例，年龄范围 岁，中位年龄 岁；分化程度：高 例、中 例、低 例；分期：期 例、期 例；淋巴结转移 例、无淋巴结转移 例；远处转移 例、无远处转移 例。病例均经过影像学和病理组织学确诊且无放疗、化疗、生物免疫治疗及其他辅助治疗等抗肿瘤治疗史。排除高血压、心脏病、血液病、免疫系统疾病、糖尿病等代谢疾病及其他脏器恶性肿瘤疾病病例。本研究经本院医学伦理学委员会批准，且试验对象均知晓并签署知情同意书。收集 例 患者以及同期年龄性别匹配的体检门诊健康志愿者 例的空腹静脉血 ，在 内进行血清分离（，；，），取上层血清样本置于 超低温冰箱冷冻保存备用。数据集分析 表达在 共享数据库 平台（：）下载登录号为 数据集的基因芯片数据。芯片平台为，应用 基因阵列分析 例健康人外周血单个核细胞（，）与 例肝癌患者 基因表达谱。分析 基因（）的表达情况。主要试剂 血清总 提取试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，逆转录试剂盒 和荧光定量（）试剂盒 （）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司，引物购自生工生物工程（上海）股份有限公司。总 提取和 采用血清总 提取试剂盒提取血清总，根据试剂盒说明书利用 进行反转录 合成，采用 （）试剂盒进行 检测 的 相对表达量，反应条件：；个循环的 、。上游引物：，下游引物：；上游引 物：，下 游 引物：。以 为内参采用 表示 相对表达量。随访 对 例 病例进行定期随访，随访方式包括查询医院电子病案、门诊复查和电话随访等，随访截止日期为 年 月 日。总生存期（）的定义为患者确诊日期至末次随访日期或死亡日期。第一年内每月随访 次，第二年及第三年每 个月随访 次，之后每 个月随访 次。整个随访期间，名患者失访，例患者在随访期间因病死亡。统计学分析采用 版统计学软件进行统计分析。数据集 表达数据以均数标准差表示，组间比较采用 检验；血清 相对表达量偏态分布数据以中位数（四分位间距）表示，组间比较采用 秩和检验；表达量与 患者临床病理特征的相关性分析釆用检验；受试者工作特征（）曲线评价 预测 的临床价值；法绘制 患者生存曲线并行 检验；比例风险回归模型分析 的预后影响因素。以 为差异有统计学意义。结 果 生物信息学分析 在 患者 中的表达分析 数据集中 患者（）中 的表达情况。结果显示，与健康 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，对照（，）相比，在 患者 中表达显著下调（，）。见图。图 生物信息学分析 患者 中 的表达情况 在 血清中的表达 检测 例 患者血清 的表达情况。结果显示，血清 的 相对表达量不符合正态分布，采用 检验，显示 患者血清 相对表达水平 （，）低于健康对照 （，），差异有统计学意义（）。见图。图 分析 患者血清中 的表达情况 表达与 患者临床病理特征的关系 根据 相对表达水平的中位值（），将 患者分为 高水平组（）和 低水平组（）。检验分析 患者血清 表达与临床病理特征的关系。结果显示，血清 表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤个数、感染和远处转移均无关，与肿瘤分化程度（，）、分期（，）和淋巴结转移（，）有关，具体表现为：低分化患者 水平低于中、高分化患者；期患者 水平低于 期患者；发生淋巴结转移患者 水平低于未发生淋巴结转移患者。见表。表 血清 表达与 临床病理特征的关系临床病理参数高水平（）低水平（）性别 女 男年龄（岁）分化程度 中、高 低肿瘤最大径（）肿瘤个数 单个 多个 感染 无 有 分期 、淋巴结转移 无 有远处转移 无 有 血清 表达对于 的诊断价值曲线评估结果显示，血清 诊断 的曲线下面积为 （：，），其最佳截断值为 ，敏感度为 ，特异度为，约登指数为 。见图。血清 表达与 患者 关系随访时间范围 个月，中位随访时间为 个月。法绘制 患者生存曲线，分析 低表达组和 高表达组患者的生存差异。结果显示，患者中位 为 个月，临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，图 血清 表达诊断 的 曲线 高表达组 患者中位 为 个月，优于 低表达组的 个月（，）。见图。影响 患者 的因素分析 纳入性别、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤个数、感染、淋巴结转移和远处转移变量，构建多因素 比例风险模型。结果显示，肿瘤分化程度（，：，）、肿 瘤 最 大 径（，：，）和 表 达 水 平（，：，）是影响 患者 的独立危险因素。见表。图 患者不同 表达水平的生存曲线表 影响 患者 的因素分析变量单因素分析多因素分析（）（）性别（男 女）（）年龄（岁 岁）（）分化程度（中高 低）（）（）肿瘤最大径（）（）（）肿瘤个数（单个 多个）（）感染（无 有）（）分期（、）（）淋巴结转移（无 有）（）远处转移（无 有）（）表达（低 高）（）（）讨 论 是一种常见的消化系统恶性肿瘤，其特征是侵袭性生长和早期转移，由于其早期症状不明显，许多 患者在确诊时已发展至晚期阶段。针对高危人群的系统筛查对于早期诊断十分必要。目前，甲胎蛋白是 患者最常用的生物标志物，然而其敏感性和特异性不令人满意，尤其是对于早期疾 病。本 研 究 首 先 利 用 平 台 分 析 数据集 芯片表达谱，筛选发现 在 患者 中表达下调。利用 法检测 例 患者及 例健康志愿者的血清 表达水平，结果显示 表达趋势一致。基因编码一种在物种之间高度保守的、由 个氨基酸组成的小片段碱性蛋白质，仅存在于脊椎动物中，在低等生物中无同系物，最初在人外周血单核细胞 期至 期过渡期间被发现表达激活。在棕色脂肪组织和白色脂肪组织中均过度表达，其中央疏水结构域与机体组织中关键的脂肪分解酶脂肪甘油三酯脂肪酶相互作用，并抑 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，制甘油三酯水解酶活性，调节脂肪细胞中脂滴大小，调节脂肪稳态、能量平衡和产热。也与免疫调节有关，其在自身免疫性疾病患者中分离的外周血和骨髓来源的单核细胞中的表达增加。越来越多的学者开始关注 在肿瘤研究中的作用与意义。早期 已被证实与 作用并促进肿瘤细胞的凋亡。被确定为腹主动脉瘤的新型生物标志物，其表达与中性粒细胞、活化和静息肥大细胞、和 巨噬细胞、调节性 细胞、静息树突状细胞等有关。作为乳腺癌的肿瘤抑制因子下调 活性，并且增强该通路抑制剂的治疗敏感性。等发现胶质瘤中 表达随着 分级的增加而提高，且复发性胶质瘤组织中 表达高于其初诊水平。另外，在肾上腺癌、胶质瘤、肺癌等多种肿瘤中发现受到基因启动子甲基化表观遗传沉默，。前期有学者发现 过度表达抑制肝细胞中脂肪酸氧化过程，引起肝脏持续性脂肪变性，促进肝胰岛素抵抗。截至目前，在肝癌中的研究十分稀缺。本研究将 患者临床病理特征数据与血清 表达量进行相关性分析，结果显示 低表达患者的肿瘤分化程度更低、分期更严重、更易出现淋巴结转移；同时 曲线评估血清 具有较好的 诊断价值；分析显示血清中 低表达者的生存期更短、预后更差；进一步多因素分析显示血清 水平是影响 患者预后的独立危险因素。目前血清 指标在肿瘤应用相关研究较为缺乏，与侵入性检测手段相比，血液检测特点是无创、便捷，还可以进行实时追踪检测，前景更加广泛。本研究仍存在许多局限性。本研究收集了 例 病患及 例健康志愿者作为对照，样本规模存在限制，今后研究中可考虑纳入生信分析，并进一步增大样本量，设置试验集和验证集。另外，基于本项研究结果，今后可考虑 与传统生物标志物的联合诊断，以及 与 复发及治疗反应的探究，进一步提高 在 中的临床价值。综上所述，本研究发现 中血清 水平下调，其水平与患者分化程度、分期及淋巴结转移有关，且 是 患者不良预后的影响因素。本研究结果为 作为潜在的 诊断候选标志物提供一定理论支持。参考文献 ，：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，（）：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，：收稿日期：；修回日期：临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 ，