CNAS-TRL-011：2020 轻工产品化学分析方法确认和验证指南.pdf

CNAS-TRL-011:2020 第 1 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 CNAS 技术报告技术报告 轻工产品化学分析方法确认和验证指南 轻工产品化学分析方法确认和验证指南 中国合格评定国家认可委员会 CNAS-TRL-011:2020 第 2 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 目录目录前言 . 3 1 范围 . 4 2 规范性引用文件 . 4 3 术语和定义 . 4 4 方法确认和验证要求 . 7 5 方法特性参数的确认和验证 . 10 6 方案设计与实施 . 17 附录 A 方法确认和验证技术路线图 . 20 附录 B 方法特性参数的典型评定方法及注意事项 . 21 附录 C 仪器分析方法开发步骤及条件参数优化注意事项 . 27 附录 D 轻工产品化学分析方法确认和验证实例 . 37 CNAS-TRL-011:2020 第 3 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 前言 本文件依据 CNAS-CL01检测和校准实验室能力认可准则 ，主要参考GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法确认和验证指南、GB/T 32465-2015 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求中关于化学分析方法确认和验证的要求，并结合轻工产品（玩具、家具、纺织品、电子电气产品、食品等）实验室化学分析方法确认和验证（以方法验证为主）的特性与操作实践经验而制定。 本文件主要用于规范认可实验室方法确认和验证活动，以确保认可实验室制定的方法确认和验证方案合理适用。 本文件从总体规则要求、方法特性参数的选择和评定方法、实验方案设计等方面提出和制定轻工产品化学分析方法确认和验证指南，并根据光谱和色谱类仪器的不同特点,给出方法特性参数的典型评定方法细则和注意事项，同时，对不同的常用仪器方法（UV-Vis、AAS、AFS、ICP、ICP-MS、XRF、GC、GC-MS、HPLC、HPLC-MS等），给出方法开发步骤及条件参数优化的注意事项，并提供了相关的典型实例。 本文件从操作层面上就实施方法给出指导性建议，所提供的方法特性参数评定方法并非是唯一可选的，仅供相关方参考，不是增加或减少认可准则要求和评审依据。 本文件的附录A、附录B、附录C、附录D为资料性附录。 本文件由中国合格评定国家认可委员会提出并归口。 本文件主要起草单位：广州海关技术中心、中国合格评定国家认可中心、广州质量监督检测研究院、 通标标准技术服务有限公司广州分公司、 北仑海关技术中心、 美泰玩具技术咨询 （深圳）有限公司。 本文件主要起草人：刘崇华、霍江莲、冼燕萍、余奕东、霍炜强、李丹、付冉冉、梁莹、吴妙玲。 CNAS-TRL-011:2020 第 4 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 轻工产品化学分析方法确认和验证指南轻工产品化学分析方法确认和验证指南 1 范围范围 本文件适用于从事轻工产品（玩具、家具、纺织品、电子电器产品、食品等）检测实验室的化学分析定量检测方法确认和验证，特别适用于化学痕量分析标准方法的实验室内方法验证。旨在指导相关认可实验室更科学、有效地开展方法确认和验证活动。 本文件也可为其他产品领域化学分析方法确认和验证提供指导。 本文件附录 A、附录 B、附录 C 和附录 D 分别提供了方法确认和验证技术路线图、方法特性参数的典型评定方法及注意事项、各类仪器分析方法开发步骤及条件参数优化的注意事项，以及具体轻工产品化学分析方法确认和验证实例，以供实验室参考使用。 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。 GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测 GB/T 27417-2017 合格评定 化学分析方法确认和验证 GB/T 32465-2015 化学分析方法验证确认和内部质量控制要求 ISO/IEC 指南 99:2007 国际计量学词汇基本和通用概念及相关术语 CNAS-CL01:2018 检测和校准实验室能力认可准则 3 术语和定义术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 方法确认方法确认 method validation 实验室通过试验，提供客观有效证据证明特定检测方法满足预期的用途。 注：方法确认应当建立方法的性能特性和使用的限制条件，并识别影响方法性能的因素及影响程度，确定方法所适用的基质，以及方法的正确度和精密度。 3.2 方法验证方法验证 method verification 实验室通过核查，提供客观有效证据证明满足检测方法规定的要求。 注：在化学分析方法验证实际工作中，通常需要通过试验测定方法特性参数等方法来提供满足检测方法规定要求的证据；此外，某些规定的要求可能不直接来自检测方法标准，而来自其他相关的标准或指南文件。 3.3 定量方法定量方法 quantitative method 测定被分析物的质量或质量分数的分析方法，可用适当单位的数值表示。 3.4 筛选方法筛选方法 screening method 具有高效处理大量样品的能力，用于检测一种物质或一组物质在所关注的浓度水平上是否存 CNAS-TRL-011:2020 第 5 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 在的方法。 注：这些方法用于筛选大量样品可能的阳性结果，并用来避免假阴性结果。此类方法所获得的检测结果通常为定性结果或半定量结果。 3.5 关注浓度水平关注浓度水平 level of interest 对判断样品中物质或分析物是否符合法规规定和要求的有决定性意义的浓度（如：法规要求的物质限值） 。 3.6 选择性选择性 selectivity 测量系统按规定的测量程序使用并提供一个或多个被测量的测得的量值时，每个被测量的值与其他被测量或所研究的现象、物体或物质中的其他量无关的特性。 3.7 线性范围线性范围 linearity of calibration 对于分析方法而言， 用线性计算模型来定义仪器响应与浓度的关系， 该计算模型的应用范围。 3.8 检出限检出限 limit of detection, LOD 由给定量程序获得的测得的量值，其对物质中不存在某种成分的误判概率为 ，对物质中存在某种成分的误判概率为 。 即分析物质能在可靠将分析物测定信号区别于特定基体背景 （噪音）的最低浓度或量。 注 1：国际理论化学和应用化学联合会（IUPAC）推荐 和 的默认值为 0.05。 注 2：检出限往往分为两种：方法检出限和仪器检出限。 3.8.1 仪器检出限仪器检出限 instrumental detection limit, IDL 为用仪器可靠地将目标分析物信号从背景（噪音）中识别出来时分析物的最低浓度或量。 注：随着仪器灵敏度的增加，仪器噪音也会降低，相应 IDL 也降低。 3.8.2 方法检出限方法检出限 Mmethod detection limit, MDL 为用特定方法可靠地将分析物测定信号从特定基质背景中识别或区分出来时分析物的最低浓度或量。即用该方法测定出大于相关不确定度的最低值。 注 1：确定 MDL 时，应考虑到所有基质的干扰。 注 2： MDL 不应与仪器最低响应值相混淆。使用标准溶液信噪比可用来考察仪器性能但不适用于评定方法检出限 MDL。 3.9 定量限定量限 limit of quantification, LOQ 样品中被测组分能被定量测定的最低浓度或最低量，此时的分析结果应能确保一定的正确度和精密度。 注：与检出限（LOD）相类似，定量限（LOQ）也可以分成两个部分，仪器定量限和方法定量限。 3.9.1 仪器定量限仪器定量限 instrumental quantification limit, IQL 仪器能够可靠检出并定量被分析物的最低量。仪器定量限可定义为仪器能够对分析物进行可靠确认和定量的最低浓度值。 3.9.2 方法定量限方法定量限 method quantification limit, MQL 在特定基质中在一定可信度内，用某一方法可靠地检出并定量被分析物的最低量。方法定量 CNAS-TRL-011:2020 第 6 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 限可定义为在特定基体中在某一可信度内对分析物能进行可靠确认和定量的最低浓度值。 3.10 精密度精密度 precision 在规定条件下，对同一类似被测对象重复测量所得示值或测得的量值间的一致程度。 3.11 中间精密度中间精密度 intermediate precision 在一组测量条件下的测量精密度，这些条件包括相同的测量程序、相同地点并且对相同或相似的被测对象在一长时间段内重复测量，但可包含其它相关条件的改变。 3.12 灵敏度灵敏度 sensitivity 测量系统的示值变化除以相应被测量的量值变化所得的商。 注 1：测量系统的灵敏度可能取决于被测量的量值。 注 2：所考虑的被测量的量值变化宜大于测量系统的分辨力。 3.13 测量区间测量区间 measuring interval 在规定条件下，由具有一定的仪器的测量不确定度的测量仪器或测量系统能够测量出的一组同类量的量值。 注 1：测量区间的下限不应与“检出限”相混淆。 注 2：在某些领域，该术语也称“测量范围” ，考虑到化学分析实验室的使用惯例，在本文件中采用“测量范围“。同时，后面的描述也改为“测量范围” 。 3.14 重复性重复性 repeatability 在相同测量程序、相同操作者、相同测量系统、相同操作条件和相同地点，并在短时间内对同一或相类似的被测对象重复测量的一组测量条件下获得的测量精密度。 3.15 再现性再现性 reproducibility 在不同地点、不同操作者、不同测量系统，对同一或相类似被测对象重复测量的一组测量条件下获得的测量精密度。 3.16 自由度自由度 degrees of freedom 和的项数减去和中诸项数的约束数。 3.17 正确度正确度 trueness 无穷多次重复测量所得测得的量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。 3.18 偏倚偏倚 bias 系统测量误差的估计值。 3.19 准确度准确度 accuracy 被测量的测得的量值与其真值间的一致程度。 注 1：概念“测量准确度”不是一个量，也不给出量的数值。 注 2：属于“测量准确度”不宜用于表示“测量正确度” ， “测量精密度”不宜用于表示“测量准确度” ，尽管测量准确度与这两个概念有关。 注 3：测量准确度有时被理解为赋予被测量的测得的量值之间的一致程度。 3.20 稳健度稳健度 ruggedness CNAS-TRL-011:2020 第 7 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 实验条件变化对分析方法的影响程度。 注：这些条件在方法中规定，或根据规定稍加改动，包括样品种类、基质、保存条件、环境或样品制备条件等。所有在实践中可能影响分析结果的实验条件（例如：试剂稳定性、样品组成、pH、温度等）的任何变化都应当指明。 3.21 基质效应基质效应 matrix effect 样品中被分析物以外的组分对分析物的分析过程的干扰以及对分析结果的准确性的影响。 注：也叫基体效应。 3.22 回收率回收率 recovery 也称加标回收率，是指在样品（也可以是溶液样品）加入已知含量的分析物并在整个分析方法过程中测定，测定的结果减去原先未添加分析物的溶液测定结果并除以所添加浓度含量，则计算出的百分比数值。 3.23 样品空白样品空白 sample blank 不含目标分析物但仍含有与实际样品基本一致的基体的样品，按日常样品相同的检测方法进行检测获得的空白。 4. 方法确认和验证要求方法确认和验证要求 4.1 总体要求总体要求 4.1.1 实验室应对非标准方法、实验室制定的方法、超出预定范围使用的标准方法或其他扩充和修改过的标准方法进行方法确认。 注：当标准方法修改部分已经有充分的技术依据支撑，可直接对修改后的标准方法进行方法验证，但应特别留意所作修改对方法特性参数的影响。 （参见附录 A） 4.1.2 实验室应对标准方法（或经过技术确认且方法特性参数已知的非标准方法，如：知名技术组织发布的方法）进行验证。 4.1.3 方法确认通常应根据预期用途， 充分识别其方法特性参数要求， 通过参考相关的标准方法和文献资料，结合方法开发和条件优化试验，并通过特定的试验获得非标准方法的特性参数，对待确认方法能否合理满足预期用途进行确认。 方法的确认应重点关注其科学性。 附录 C 提供了各类仪器分析方法开发步骤及条件参数优化的注意事项。 4.1.4 方法验证通常需通过设计特定的试验获得方法在本实验室的方法性能参数， 并根据标准方法本身要求（含方法特性参数要求）和其他通用要求对其进行评定，用以证实该实验室在现有的设施设备、人员、环境等条件下，是否有能力正确运用该方法。方法的验证应重点关注其符合性。附录 B 给出了化学分析中方法特性参数的典型评定方法及注意事项。 4.2 人员要求人员要求 4.2.1 实验室应确保对实施方法确认和验证所需的人员能力，即确定检测人员是否具备所需的技能及能力，必要时应进行人员培训，经考核后授权。 4.2.2 实施方法确认的实验人员应了解和熟悉所确认的相关领域检测方法原理，具有较为丰富的检测经验和一定的方法开发经验，掌握影响方法特性参数结果的关键因素。 CNAS-TRL-011:2020 第 8 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 4.3 方法特性参数选择方法特性参数选择 4.3.1 方法确认方法确认 4.3.1.1 实验室在进行方法确认前，应充分识别其方法特性参数要求，并对具体要求做详细说明。如：明确检测对象特定的需求，包括样品的主要基体成分及特性、待测物质的主要特性、浓度含量水平（或相关限值） 、可接受的测量不确定度（或测量误差）需要。典型的化学定量分析需要确认的方法特性参数见表 1。 表 1 典型方法确认参数的选择 待评定性能参数 定量方法 检出限* 定量限 灵敏度 选择性 线性范围 测量范围 基质效应 精密度（重复性和再现性） 正确度 稳健度 测量不确定度(MU) 注 1：*表示在进行痕量分析是时需要确认此性能参数。 注 2：表示正常情况下需要确认的性能参数；表示正常情况下不需要确认的性能参数。 注 3：当已经确认检出限，定量限也可以省略；当已经确认线性范围，测量范围可以省略。 注 4：基质效应和稳健度确认通常不一定单独进行，可在对其他方法性能参数确认时加以考虑。 4.3.1.2 对于定量分析方法确认，至少需要评定方法正确度和测量精密度。而对于痕量分析，则需要增加考虑方法检出限和定量限。 4.3.1.3 如采用实验室间方法确认，参与实验室间方法确认的实验室，相关的或类似的检测项目建议通过 CNAS 认可或具有其他等同资质，并具有确认活动所需要的人员、设备和设施等资源。 4.3.1.4 某些修改内容技术风险较低情况下，对超出预定范围使用的标准方法或其他扩充和修改过的标准方法进行方法确认，可仅针对受影响的方法特性参数进行确认或者可与标准方法比对确认无需全面确认。但当修改后的样品方法检测的样品基质与标准方法适用范围内样品基质有着本质区别，则应全面确认。 4.3.2 方法验证方法验证 4.3.2.1 实验室在引入并使用标准方法前，应充分识别标准方法的规定要求，如人员、设施和环境、设备等硬件条件，还应通过试验证明结果的准确性和可靠性，如检出限和定量限、精密度、线性范围等方法特性指标。通常情况下，方法验证参数选择可参考表 2，并应同时满足相应的要 CNAS-TRL-011:2020 第 9 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 求。 表2 典型方法验证参数的选择及其要求 待评定性能参数 典型选择 一般要求 检出限* 不高于方法标准给出的检出限 定量限 不高于方法标准给出的定量限 灵敏度 选择性 线性范围 曲线线性相关系数满足标准规定或通用要求 测量范围 应覆盖方法的最低浓度水平（定量限）和关注浓度水平 基质效应 精密度（重复性和再现性） 精密度数据采用检验， 或优于标准方法给出的指标或满足化学分析通用要求 正确度 偏倚小于临界差（CD 值）或回收率优于标准方法给出的指标或满足化学分析通用要求 稳健度 测量不确定度(MU) 注 1：*表示在进行痕量分析是时需要验证此性能参数。 注 2：表示正常情况下需要验证的性能参数；表示正常情况下不需要验证的性能参数。 注 3：当标准方法没有特别规定的情况下，如已经验证检出限，定量限可以省略；当已经确认线性范围，测量范围可以省略。 注 4：基质效应验证通常不单独进行，可在对其他方法性能参数验证时加以考虑。 注 5：如果实验室已经对方法精密度和正确度进行验证，则可以不对测量不确定度进行验证。然而，对不确定度的评定可能是认可机构对实验室的专门要求（如：CNAS-CL01-G003:2019）。 CNAS-TRL-011:2020 第 10 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 4.3.2.2 定量分析方法验证过程中关键的参数应取决于方法的特性和可能测到的样品基质的检测范围，至少应测定正确度和精密度。对于痕量化学分析实验室，实验室还应确保获得适当的检出限和定量限。 4.3.2.3 当标准方法中已经对测量不确定度主要来源的值规定了限值， 并规定了计算结果的表示方式（或者如果标准方法中已确定并验证了结果的测量不确定度） ，则实验室只需证实相关关键影响因素已经按标准进行控制，无需重新评定测量不确定度。 4.3.2.4 当标准方法中规定的部分仪器参数不适用于实验仪器时（或标准中缺乏部分仪器参数） ，实验室应对有关方法条件进行细化或者调整，通过一定的仪器条件优化实验，选取适合本型号仪器的仪器工作条件，并编制作业指导书。 4.3.2.5 当标准中含有多种方法的，应对本实验室选用的方法逐一进行验证。 注：典型的多种方法，可能包含多种不同的前处理方法或多种不同的仪器方法。 4.3.2.6 当标准方法适用于多种检测对象时， 应对本实验室应用的不同类型基质样品逐一进行验证。 4.3.2.7 对于标准方法的验证，必要时可参加能力验证或开展实验室间比对。 4.4 文件化要求文件化要求 4.4.1 在进行方法确认和验证时，实验室应做好相关记录，包括用于确认和验证结果、所获得结果的方法和程序，以及方法是否满足非标方法的预期用途和标准方法要求的结论。 4.4.2 实验室应编制相关方法确认和验证报告， 报告中宜包含目的、 待确认的非标方法作业指导书或待验证的标准方法编号、方法摘要、所用的仪器和标准物质、方法特性参数评定过程（含实验设计、使用的样品基质类型、数据统计、判定依据） 、以及最终结论、审核及批准人员、报告日期等关键要素。 4.4.3 相关报告和记录应存档并确保在需要时，如：报告限量的设定、内部质量控制结果评价所规定限值的确定等有关数据能正确得到利用。 4.4.4 对于非标方法确认，一般应同时制定如下文件： a) 方法的作业指导书； b) 方法的编制说明； c) 实验室间或不同专家给出的方法确认报告； d) 使用该方法出具的典型报告。 5 方法特性参数的确认和验证方法特性参数的确认和验证 5.1 选择性选择性 5.1.1 在对某些的选择性不太好的检测技术方法、 基质成分复杂的样品痕量杂质检测等干扰风险较的高方法确认过程中均应更加关注考察其选择性。 5.1.2 在进行方法确认过程中，应当根据预期用途样品范围，采用多种不同类型的含量已知的代表性样品来证实方法的选择性，所用的样品种类从单纯的目标分析物标准溶液到具有复杂基体的实际样品，也可用不同基体类型的空白实际样品。 CNAS-TRL-011:2020 第 11 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 5.1.3 当方法需要对多种目标物进行定量时，则应考虑对目标物之间是否存在干扰进行确认。 5.1.4 在进行方法验证过程中， 由于标准方法制定方已经进行过确认， 通常所建立的标准方法具有较好的选择性，可不对方法选择性进行验证。但当方法适用检测对象种类繁多或样品基质成分复杂，且难以通过全部样品基质或其他参数进行干扰试验时，使用标准方法的实验室仍需根据自身样品情况选择某些特定的样品对方法选择性进行验证。 5.1.5 实验室可联合使用但不限于下述方法检查干扰： a) 分析一定数量的代表性空白样品（不含待测定物质的实际样品） ，检查在目标分析物出现的区域是否有干扰（信号、峰等） ，所选空白样品尽量考虑不同基体类型； b) 对有参考值的实际样品进行分析或在代表性空白样品中添加一定浓度的有可能干扰分析物定性和/或定量的物质； c) 当有实验室有对同类样品的其他已获认可的具有可比性的标准方法或公认的检测方法，也可通过实验室内部方法比对来检查。 注 1：实验室分析员需要利用知识和经验对干扰物进行排查。 注 2：添加干扰物浓度范围应与实际样品中可能会碰到的浓度水平相当。 5.2 检出限和定量限检出限和定量限 5.2.1 需要评定检出限（需要评定检出限（LOD）和定量限（）和定量限（LOQ）的情况）的情况 应根据标准方法的要求或者实验室的预期目的来决定是否进行检出限和定量限的确认，通常情况下，当分析物浓度远大于 LOQ 时，没有必要评定方法的 LOD 和 LOQ。但是对于那些浓度接近于 LOD 与 LOQ 的痕量和超痕量检测，并且报告为“未检出”时，或需要利用检出限或定量限进行风险评定或法规决策时，实验室应确定 LOD 和 LOQ。不同的基质类型可能需要分别评定LOD 和 LOQ。由于 LOD 和 LOQ 有一定的倍数关系（通常 LOQ 为 LOD 的 2-5 倍） ，某些情况下可能仅评定 LOD 和 LOQ 其中之一进行评定。 注：通常方法特性参数的确认和验证主要是对方法检出限和方法定量限的评定，而对非仪器检出限和仪器定量限的评定。 5.2.2 检出限的评定检出限的评定 确定检出限的方法很多，常用方法如下： a) 空白标准偏差法评定 LOD 即通过分析大量的样品空白或加入最低可接受浓度的样品空白来确定 LOD。 独立测试的次数应不少于 10 次（n10） ，计算出检测结果的标准偏差（s） ，计算方法参见表 3。 表 3 定量检测中 LOD 的表示方法 试验方法 LOD 的表示方法 1）样品空白独立测试 10 次* 样品空白平均值+3s 2）加入最低可接受浓度的样品空白独立测试 10 次* 0+3s *：仅当空白中干扰物质的信号值高于样品空白值的 3s 的概率远小于 1%时适用。 CNAS-TRL-011:2020 第 12 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 注 1：“最低可接受浓度”为在所得不确定度可接受的情况下所加入的最低浓度； 注 2：假设实际检测中样品和空白应分别测定，且通过样品浓度扣减空白信号对应的浓度进行空白校正。 注 3：独立测试是指结果是在不受到以前同样或类似样品测试结果的影响的测试。 样品空白值的平均值和标准偏差均受样品基质影响，因此最低检出限也因受样品基质种类的影响而不同。如果利用此条件进行符合性判定时，需要定期用实际检测数据更新相关数据。 b) 信噪比法评定 LOD 对于定量方法来说，由于仪器分析过程都会有背景噪音，常用的方法就是利用已知低浓度的分析物样品与空白样品的测量信号进行比较，确定能够可靠检出的最小的浓度。典型的可接受的信噪比是 2:1 或 3:1。 c) 目视评价法评定 LOD 目视评价法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约 7次的独立测试，通过绘制阳性（或阴性）结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阈值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。 5.2.3 定量限的评定定量限的评定 LOQ 的确定主要是从其可信性考虑，如：测试是否基于法规要求、目标测量不确定度和可接受准则等。通常建议将空白值加上 10 倍的重复性标准偏差作为 LOQ，也可以 3 倍的 LOD 或高于方法确认中使用正确度评定中最低加标量的 50%作为 LOQ。如为增加数据的可信性，LOQ 也可用 10 倍的 LOD 来表示。 5.3 测量范围测量范围 方法的测量范围通常应满足以下条件： a) 方法的测量范围应覆盖方法的最低浓度水平（定量限）和关注浓度水平； b) 至少需要确认方法测量范围的最低浓度水平（定量限） 、关注浓度水平和最高浓度水平的正确度和精密度，必要时可增加确认浓度水平； c) 若方法的测量范围呈线性，也可通过线性范围的评定来验证测量范围。 5.4 线性范围线性范围 5.4.1 线性范围通常可参照相关国家标准或国际标准，尽量满足如下要求： a) 采用校准曲线法定量，一般应具有 6 个校准点（包括空白） 。对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于 0.98。对于准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.995； b) 校准用的标准点应尽可能均匀地分布在关注的浓度范围内并能覆盖该范围； c) 浓度范围一般应覆盖样品中可能涉及的分析物浓度或关注浓度的 50%150%，如需做空白时，则应覆盖关注浓度的 0150%； d) 应充分考虑可能的基质效应影响，排除其对校准曲线的干扰。实验室应提供文献或实验 CNAS-TRL-011:2020 第 13 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 数据， 说明目标分析物在溶剂中、 样品中和基质成分中的稳定性， 并在方法中予以明确。通常各种分析物在保存条件下的稳定性都已有很好的研究， 监测保存条件应作为常规实验室确认系统的一部分。对于缺少稳定性数据的目标分析物，应提供能分析其稳定性的测定方法和确认结果。 5.4.2 若在所考察的浓度范围之内不能呈现所期待的线性关系，则应设法消除导致线性差的因素，或者限制（缩小）浓度的范围以确保其线性。 5.4.3 在满足一般应用要求前提下， 曲线的标准浓度范围不宜过宽， 因其测量的不确定度亦会随着浓度范围变广而增加。 5.5 基质效应基质效应 5.5.1 当方法确认过程中存在基体干扰时，应通过在典型样品前处理好的消解液或萃取液中添加标准溶液进行识别。对不同基体类型样品溶液应分别识别，每种基体类型样品溶液一般应重复测定至少 2 次。 注：在对方法选择性进行方法确定时，通常应包括考虑基体效应影响。基质效应的确认可能与方法选择性确认同时进行。 5.5.2 若萃取液或消解液添加标准溶液测出的结果要较单纯标准溶液 （仅含简单溶剂， 无样品基体）测出的结果有显著差异，则应考虑基体的存在对仪器的响应有抑制或增强的影响。实验室可通过分析基质标准物质、改变基质成分含量、与其他参考方法进行比等方法对基质效应进行确认。 注：当基质效应显著影响分析结果时，应通过基体匹配、基质分离或稀释、干扰校正等方法降低或消除。 5.5.3 在研究基体对仪器响应的影响时， 可通过配制加入基质和不含有基质两套浓度一致的系列标准溶液分别绘制校准曲线，以考察这两个曲线斜率是否存在显著性差异。若不存在显著性差异，如：曲线斜率偏差小于 10%，则认为不需要对基体影响进行校正。 注：标准加入法不能对所添加基体的影响进行消除。 5.6 准确度准确度 一般情况下，准确度涵盖正确度和精密度，即：方法准确度的评定包含考察系统误差（评定正确度）和随机误差（评定精密度） 。 5.6.1 正确度正确度 5.6.1.1 正确度差意味着存在系统误差，一般用偏倚表示。最理想的偏倚评定是利用样品的基质匹配且浓度相近的有证标准物质（CRMs）进行测试。若无法获得 CRMs，则需要寻找可替代的物质来评定。采用基体与待测样品的基体类似，有足够可靠的参考值的标准物质（RMs）来评定也是一个好的选择。经过多个合作实验室协同试验测定获得的特性值的样品可以用于此目的。 5.6.1.2 在条件允许下，应尽可能采用覆盖浓度测试范围的不同试样评定偏倚。当一个方法不能如预期在整个测试范围获得一致的偏倚时（如非线性校准曲线） ，则需要对不同浓度水平的样品进行测定 （至少对高或低含量测试） 。 否则， 实验室应证明在整个测试范围之内具有相同的正确度。 注：如使用 CRMs 证明了方法在某一浓度水平的正确度，并不代表该方法在整个线性范围内各个浓度水平下均有相似的正确度。 CNAS-TRL-011:2020 第 14 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 5.6.1.3 如果无法获得合适 CRMs 或 RMs，则偏倚只能通过在基质空白(或者含有目标物的实际样品)中加入一系列浓度的目标物所得回收率来评定。即：将已知浓度的分析物加到样品中，按照预定的分析方法进行检测，测得的实际浓度减去原先未添加分析物时样品的测定浓度，并除以所添加浓度的百分率。回收率（R）可通过如下公式计算： R=(C1-C2)/C3100%.（1） 其中：C1 是指加标之后测定的浓度；C2 是指加标之前测定的浓度；C3 是指添加目标物后的理论浓度。 在采用回收率来评定方法正确度时应重点考虑以下影响因素： a) 不同浓度水平回收率有所差异，方法回收率的偏差范围可参考表 4 进行评价。 表 4 方法回收率偏差范围 b) 应特别注意的是，100%的回收率并不一定意味着好的正确度，但差的回收率则一定意味着有偏倚。某些情况下，实验室只能依赖于加标来评定其偏倚。在这种情况下，可利用已知偏倚的国际或国家认可的参考方法来评定另一种方法的偏倚， 或者利用两种方法按照相关测试程序对多种基质或浓度的典型样品进行测定，并用 t-检验（t-test）对分析方法间的偏倚显著性进行评定。 c) 通常情况下宜在方法的尽可能早期步骤， 如称样时添加目标物标准溶液进行方法回收率试验，以获得方法全程回收率，若向经过前处理后的样品萃取液或消解液添加，则所获得的回收率仅考察仪器检测方法的正确度。 注：比较萃取或消解前和萃取或消解后回收率结果比对表明在样品前处理过程中的目标物的损失情况。 5.6.1.4 实验室应尽可能参加包括采用实际样品或与本实验室日常检测样品类型相同或相似的样品的能力验证，以进一步确认或验证方法的正确度。 浓度水平范围（p） 允许偏差范围 10%p100% 95%102% 1%p10% 92%105% 0.1%p1% 90%108% 0.01%p0.1% 85%110% 10mg/kgp0.01% 80%115% 1mg/kgp10mg/kg 75%120% 0.1mg/kgp1mg/kg 80%110% p0.1 mg/kg 60%120% 注：方法回收率除了与浓度水平相关，受目标物质特性、样品基质的类型、测试方法本身和实验室操作等多个因素的影响影响。在标准方法没有具体规定的情况下，该表给出的方法回收率偏差范围仅作为参考。 CNAS-TRL-011:2020 第 15 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 5.6.2 精密度精密度 5.6.2.1 概述概述精密度用于表述在重复性条件下的重复性和再现性条件下的再现性。单个实验室通常使用实验室内再现性或中间精密度等术语来表示其再现性精密度。对于标准方法的验证，通常仅在应用该方法的实验室内进行，可仅对方法重复性进行验证；如标准方法提供了中间精密度数据，实验室最好能同时进行中间精密度的验证。对于非标方法的确认，则宜同时对方法重复性和再现性进行确认。 实验室内方法验证或方法确认获取精密度试验设计应特别注意： a) 为获得正常操作条件下方法的精密度， 实验室应在标准方法或作业指导书规定的日常样品测试条件下进行测试，测试样品为日常分析的典型样品，样品准备和前处理应与正常操作一致，试剂、测试设备、分析人员和操作均要实际测试的情况一致； b) 测定精密度数据的样品应尽量采用含有待测物质且足够均匀的实际样品进行测量。 如果无法获得均质材料则应通过人工制备模拟样品进行评定； 注：由于方法精密度通常反映包括样品前处理和仪器分析全部测定流程的完整分析方法的波动，所选取样品应该尽可能选择方法适用范围规定的日常样品，简单基体标准溶液样品重复测定数据一般无法反映样品前处理过程的影响，仅能反映仪器精密度。 c) 精密度会随着分析物浓度的变化而变化，因而需要在多个浓度点进行测定（其中应包含测试范围内最低浓度） 。对于可疑基体产生的影响，测定多个浓度点显得尤为必要。当分析物浓度很低，其重复测定结果波动可能相对较大，如：超过平均值的 50%，此时，应调查精密度较差可能的原因。对于某些测试，可能只对数据使用者的特别显著的一个或两个浓度进行评定，如产品质量控制要求或法规限值对应的浓度水平； d) 对于单一实验室的方法确认， 获取实验室再现性测量精密度的最佳方式是对实验室的某一个相同的样品和 CRMs 或 RMs 在正常条件下进行长期独立测定。这种条件下获得的精密度即为实验室内再现性测量精密度。如果精密度试验是在对不同样品、不同时间分别重复进行，且每组数据之间没有显著性差异，则这些数据将用于计算合并标准偏差，用于评价方法再现性； e) 如果测试方法是用于对一系列样品类型进行测定， 如不同分析物样品基质， 则精密度的评定需要选择每个类型代表性的样品进行测定。 5.6.2.2 重复性重复性a) 重复性可用标准偏差（s） 、方差（s2）等表示，通常需要在重复性条件下进行足够的重复测试次数数据统计计算获得； b) 重复性体现了测量结果短期变化， 同样也适用于评定在单一批次分析中重复测定可能存在的差异。然而，重复性可能会低估在长期正常条件下测量结果的分散性； c) 重复性的测定通常在自由度至少为 6 的情况下测定。如：对一个样品测定 7 次；或对 2个样品，每个样品测定 4 次；或对 3 个样品，每个样品测定 3 次。仪器重复性可通过对 CNAS-TRL-011:2020 第 16 页 共 80 页 发布日期：2020 年 4 月 20 日 校准曲线中标准溶液、加标溶液进样测定 7 次，然后计算平均值、标准偏差。进样应按随机顺序进行以降低偏差； d) 方法重复性可通过准备不同浓度的样品（可采用实际样品，也可采用添加了所需分析物的实际样品） ， 然后在较短的时间间隔内由同一个分析员进行分析测定， 并计算平均值、标准偏差和相对标准偏差。得到的标准偏差 s 除以平均值后的百分率即得到测试结果变异系数（CV 值） ，不同含量测试结果的实验室内变异系数（CV 值）可参考表 5 进行评价。 表5 实验室内变异系数 被测组分含量 实验室内变异系数，% 0.1mg/kg 15 1mg/kg 11 10 mg/kg 7.5 100 mg/kg 5.3 1000 mg/kg 3.8 1% 2.7 10% 2.0 100% 1.3 5.6.2.3 再现性再现性 a) 与重复性类似，再现性也可表示为标准偏差（s） 、方差（s2）等表示，通常需要在再现性条件下进行足够的测试次数数据统计计算获得。如：使用同一标准方法对同一样品的某个参数由不同分析员、不同设备在不同时间内，或者在不同实验室间进行测定； b) 与重复性类似，再现性的测定通常在自由度至少为6的情况下测定； c) 与重复性类似，方法的再现性通常随分析物浓度降低而变差； d) 再现性标准偏差可通过一系列多个样品获得， 或多个系列测定结果的合成标准偏差进行计算。 5.7 稳健度稳健度 5.7.1 方法稳健度（耐变性的量度）是在对实验条件发生小变化情况结果不被影响的程度，研究方法条件变化对方法性能的响应影响。方法稳健度的确认是为了更好的确认继而控制那些能够导致测试结果变化的影响因素，用以更好地提高方法的准确度，指示方法在正常使用情况下的可靠性。 5.7.2 确认化学分析方法稳健度时，首先可选择样品预处理、净化、分析过程等可能影响检测结果的因素（包括试剂