尿素测定方法.doc

实 验 十 七
实验名称：尿素的测定
实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理
实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒
实验原理：
尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。
操作方法：
1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液
2、按下列顺序加入各试剂
单位ml 空白 标准 样本
蒸馏水 0.01 — —
样本 － － 0.01
标准液 － 0.01 －
工作液 1.0 1.0 1.0
3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA
实验现象与数据：记录ΔA
结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标 （8.32 mmol/l）
参考范围：1.7-8.3mmol/l
临床意义：
实 验 十 八
实验名称：血清尿酸的测定
实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理
实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计
实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。
操作方法：
按以下步骤操作
单位ml 标准 测定 空白
样本 － 0.025 －
标准液 0.025 － －
蒸馏水 － － 0.025
酶试剂 1.0 1.0 1.0
混匀 37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A
实验现象与数据：记录各管的A
结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标 （357μmol/l） 参考值：男202－416μmol/L，女 142-339μmol/L
临床意义：
思考题：P223 第2题