外周血T淋巴细胞亚群、CD147及VWF水平与短暂性脑缺血发作患者早期临床转归的关系.pdf

分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7论著基金项目：河北省中医药管理局中医药类科技计划项目（2021314）作者单位：1.河北省沧州中西医结合医院神经内科，河北，沧州 0610012.河北省沧州市中心医院神经内科，河北，沧州 061001通信作者：宋伟伟，Email：外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平与短暂性脑缺血发作患者早期临床转归的关系宋伟伟1刘景峰1段丽娟2张琳琳1袁雪梅1摘要 目的研究外周血 T 淋巴细胞亚群、细胞外基质金属蛋白酶诱导子（CD147）及血管性血友病因子（VWF）水平对短暂性脑缺血发作（TIA）患者的临床意义。方法选择河北省沧州中西医结合医院 2020 年 7 月至 2022 年 9 月期间诊治的 102 例 TIA 患者作为实验组，根据卒中风险系数 ABCD3I 评分表将 TIA 患者分为高危组、中危组、低危组，根据 TIA 患者发病 72 h 内是否发生脑梗死将患者分为脑梗死组（发生脑梗死）、无脑梗死组（未发生脑梗死），另选取 98 名健康志愿者作为对照组。分别比较实验组与对照组、不同危险程度 TIA 患者、不同早期临床转归 TIA 患者的外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147及 VWF 水平；采用 Spearman 分析该些指标与 TIA 患者脑梗死发生率的相关性。结果实验组 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于对照组，CD8+、CD147、VWF 水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）；三组不同危险程度 TIA 患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈现：高危组中危组中危组低危组，差异有统计学意义（P0.05）；脑梗死组 TIA 患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于无脑梗死组，CD8+、CD147、VWF 水平显著高于无脑梗死组，差异有统计学意义（P0.05）；Spearman 分析结果显示，TIA 患者脑梗死发生率与 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈负相关，与 CD8+、CD147、VWF 水平呈正相关（P0.05）。结论外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平与 TIA 患者早期临床转归有明显的关联，可作为 TIA 患者是否会发生脑梗死的重要评估指标。关键词 外周血 T 淋巴细胞亚群；CD147；VWF；短暂性脑缺血发作患者；早期临床转归Relationship between peripheral blood T lymphocyte subsets，CD147 and VWF levels andearly clinical outcome in patients with transient ischemic attackSONG Weiwei1，LIU Jingfeng1，DUAN Lijuan2，ZHANG Linlin1，YUAN Xuemei1（1.Department of Neurology，Cangzhou Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital，Cangzhou，Hebei，China，061001；2.Department of Neurology，Cangzhou Central Hospital，Cangzhou，Hebei，China，061001）ABSTRACTObjectiveTo study the clinical significance of peripheral blood T lymphocyte subsets，extracellular matrix metalloproteinase inducer（CD147）and von Willebrand factor（VWF）levels in patients with transient ischemic attack（TIA）.Methods102 TIA patients diagnosed and treated in CangzhouHospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine in Hebei Province from July 2020 to September 2022 were selected as the experimental group for research，according to the stroke risk coefficient ABCD3Iscoring table，TIA patients were divided into the highrisk group，the intermediaterisk group and the lowriskgroup，and according to whether cerebral infarction occurs within 72 hours of TIA patients，patients were divided into the cerebral infarction group（cerebral infarction occurred）and the noncerebral infarction group（cerebral infarction did not occur），and another 98 healthy volunteers were selected as the control group，and 1169分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7the peripheral blood T lymphocyte subsets，CD147 and VWF levels of the experimental group and the controlgroup，TIA patients with different risk levels，and TIA patients with different early clinical outcomes werecompared.Spearman was used to analyze the correlation between these indicators and the incidence of cerebralinfarction in TIA patients.ResultsCD3+，CD4+，CD4+/CD8+in the experimental group were significantlylower than those in the control group，and CD8+，CD147 and VWF levels in the experimental group were significantly higher than those in the control group，and the difference was statistically significant（P0.05）；CD3+，CD4+，CD4+/CD8+in the three groups of TIA patients with different risk levels showed：high riskgroup intermediate risk group intermediate risk group low risk group，and the difference was statistically significant（P0.05）.CD3+，CD4+，CD4+/CD8+of TIA patients in the cerebral infarction group were significantly lower than those in thenoncerebral infarction group，the levels of CD8+，CD147 and VWF in the cerebral infarction group were significantly higher than those in the noncerebral infarction group，and the difference was statistically significant（P0.05）.Spearman analysis showed that：the incidence of cerebral infarction in TIA patients was negativelycorrelated with CD3+，CD4+，CD4+/CD8+，and positively correlated with CD8+，CD147 and VWF levels（P0.05）。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者家属已签署知情同意书。实验组纳入标准：符合 TIA 患者的临床相关诊断标准7；经 CT 等影像学检测确诊为 TIA患者；发病时间8 h；两组排除标准：近 1 个月进行过抗凝药物治疗者；合并其他严重脏器功能疾病患者；存在血液系统疾病者。1.2方法采集所有研究对象安静空腹状态下的外周静脉血 6 mL，将其中 2 mL 血液离心（3 200 r/min，离心半径 8 cm）12 min 后将血清放置-80环境下保存，采用双抗体夹心法联合 CD147 检测试剂盒（规格：48T，上海臻科生物科技有限公司，国械注准20133401266）检测血清中 CD147 水平；再取 2 mL血液放置血凝管中，经离心（3 200 r/min，离心半径8 cm）12 min 后采用北京索莱宝科技有限公司提供的酶联免疫试剂盒检测血清中 vWF 水平；将剩余 2mL 血液放置抗凝试剂管中，经水平离心后去除上层清液，采用流式细胞仪（型号：Wmini52，上海聚慕医疗器械有限公司，国械注准 20212220174）联合直 1170分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7接免疫荧光染色法检测其中的外周血 T 淋巴细胞亚 群 情 况，最 终 在 高 倍 显 微 镜 下 观 察 CD3+、CD4+、CD8+情况，并计算 CD4+/CD8+结果。1.3观察指标对比两组外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147及 VWF 水平。对比不同危险程度 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平：采用卒中风险系数评估表 ABCD3I 对 TIA 患者安总初中危险度进行评估，该表总分 13 分，根据评分结果将 TIA 患者分为高危组（813 分，n=19）、中危组（47 分，n=47）、低危组（03 分，n=36）8。对比不同早期临床转归 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平：根据 急性脑梗死的欧洲治疗指南9判断 TIA 患者发病 72 h内是否发生脑梗死，并将患者分为脑梗死组（发生脑梗死，n=28）、无脑梗死组（未发生脑梗死，n=74）。分析外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147及 VWF 水 平 与 TIA 患 者 脑 梗 死 发 生 率 的 相关性。1.4统计学方法采用 SPSS 27.0 统计学软件分析数据，计量资料采用（xs）表示，组间比较采用 t 检验，多组比较采用 F 检验；采用 Spearman 分析外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平与脑梗死发生率的相关性；均以 P0.05 为差异具有统计学意义。2结果2.1两组外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF水平比较实验组 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于对照组，CD8+、CD147、VWF 水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。见表 1。2.2不同危险程度 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平比较不同危险程度 TIA 患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈 现：高 危 组 中 危 组 中危组低危组，差异有统计学意义（P0.05）。见表 2。组别实验组对照组t 值P 值n10298CD3+（%）30.429.5772.375.4637.870.001CD4+（%）19.638.4651.424.3333.250.001CD8+（%）28.737.6412.962.2119.6570.001CD4+/CD8+（%）1.490.131.760.259.640.001CD147（g/L）6.421.632.410.5623.0790.001VWF（U/L）213.4824.13119.5716.4632.0260.001表 1两组外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平（xs）Table 1T lymphocyte subsets，CD147 and VWF levels in peripheral blood betweeen the two groups（xs）组别高危组中危组低危组F 值P 值n194736CD3+（%）21.836.03ab28.738.42a37.1611.5718.250.008CD4+（%）9.685.19ab18.338.62a26.5810.4323.750.009CD8+（%）32.578.97ab29.165.72a26.143.157.950.001CD4+/CD8+（%）0.740.14ab1.340.22a2.080.32194.980.001CD147（g/L）8.592.07ab6.871.42a4.691.0349.430.002VWF（U/L）225.3227.59ab215.4323.44a204.6917.035.670.043表 2不同危险程度 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平（xs）Table 2T lymphocyte subsets，CD147 and VWF levels in peripheral blood of TIA patients with different risk levels（xs）注：与低危组比较，aP0.05；与中危组比较，bP0.05。2.3不同早期临床转归 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平比较脑梗死组 TIA 患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于无脑梗死组，CD8+、CD147、VWF 水平显著高于无脑梗死组，差异有统计学意义（P0.05）。见表 3。2.4外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平与 TIA 患者脑梗死发生率的相关性分析Spearman 分析结果显示，TIA 患者脑梗死发生率与外周血 T 淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD4+/CD8+）呈负相关，与 CD8+、CD147、VWF 水平呈正相关（P0.05）。见表 4。3讨论TIA 发病持续时间较短，患者通常在发病 60min 内恢复正常，故入院检查时大部分患者的临床症状消失。尽管 TIA 对患者机体带来的是可逆性损伤，但美国国立卒中协会仍提议 TIA 应遵循立 1171分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7组别脑梗死组无脑梗死组t 值P 值n2874CD3+（%）17.215.1435.4210.938.4500.001CD4+（%）9.884.9623.329.876.8490.001CD8+（%）33.498.1626.934.307.0700.001CD4+/CD8+（%）0.320.111.930.3722.5880.001CD147（g/L）11.972.384.321.0422.6420.001VWF（U/L）245.3529.87201.4220.138.5460.001表 3不同早期临床转归 TIA 患者外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平（xs）Table 3Peripheral blood T lymphocyte subsets，CD147 and VWF levels in patients with TIA with different early clinicaloutcomes（xs）指标CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+CD147VWF脑梗死发生率r 值-0.436-0.5170.498-0.6130.5720.529P 值0.050.050.050.050.050.05表 4外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF 水平与TIA 患者脑梗死发生率的相关性分析Table 4Correlation analysis of Tlymphocyte subsets，CD147 and VWF levels in peripheral blood and theincidence of cerebral infarction in TIA patients即治疗原则。研究显示，部分 TIA 患者会发生继发性脑梗死，而脑梗死致残率、死亡率高，严重影响患者生命安全及生活质量10。故精准预测 TIA患者脑梗死的发生情况，是目前 TIA 的重点研究方向。外 周 血 T 淋 巴 细 胞 亚 群 主 要 包 括 CD3+、CD4+、CD8+细胞，可有效监测不同状态下患者的免疫功能情况，对临床治疗、研究及预后评估均有指导作用。俞璐等11的动物研究试验结果表明，外周血 T 淋巴细胞亚群的改变会影响脑血管疾病动物模型的预后情况。本文结果显示，实验组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于对照组，其CD8+明显高于对照组，与王园等12研究结果相符。提示 TIA 患者免疫功能降低。CD3+是一类蛋白复合物质，可将活化信号转导至 T 细胞，进而参与 T 淋巴细胞识别抗原的过程；CD4+作为辅助 T细胞能直接介导其他免疫细胞的活性，刺激机体的免疫应答，而 CD4+调节抗原呈递细胞后，可为CD8+提供抗原信号，进而被活化形成成熟的细胞毒性 T 细胞，引发机体的定向免疫疫应，诱导细胞的凋亡。本文结果显示，不同危险程度 TIA 患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈现高危组中危组中危组低危组；脑梗死组 TIA 患者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于无脑梗死组，其 CD8+高于无脑梗死组；TIA 患者脑梗死发生率与 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈负相关，与 CD8+、CD147、VWF 水平呈正相关；与谷晓林等13所得结论基本一致。推测其原因为，在正常状态下，淋巴细胞共同协调参与机体免疫应发，维持机体平衡；而当机体损伤后，免疫功能受到一定影响，导致 CD3+减少；而 CD4+减少与 CD8+增加可能与辅助性 T 细胞减少、抑制性 T 细胞增加造成机体免疫调节发生紊乱有关；随着 TIA 病情的严重程度增加，机体免疫系统进一步紊乱，进而刺激 CD8+介导机体炎性反应的发生，提高了脑梗死的风险。另一方面，研究显示 CD147 的表达对动脉粥样硬化存在潜在影响。而 VWF 可有效反映血管内皮细胞的状态，对脑梗死的发生有一定监测作用14。本文研究结果显示，实验组 CD147、VWF 水平高于对照组；不同危险程度 TIA 患者CD147、VWF 水平呈现：高危组中危组低危组；脑梗死组 TIA 患者 CD147、VWF 水平显著高于无脑梗死组，且 Spearman 分析得出 TIA 患者脑梗死发生率与 CD147、VWF 水平呈正相关，与高鹏举等15结论一致。推测其原因为，血管内皮细胞损伤后会刺激 VWF 的生成，导致血液中 VWF 水平水平升高，而 VWF 水平的升高会进一步介导血小板发生凝集，诱导机体发生脑梗死；另外，当机体发生处于应激状态时，C 反应蛋白能促进粥样硬化斑块的形成，同时也会刺激炎性细胞中的 CD147因子表达，导致血清中 CD147 水平升高。综上，外周血 T 淋巴细胞亚群、CD147 及 VWF水平与 TIA 患者早期临床转归有明显的关联，可作为TIA患者是否会发生脑梗死的重要评估指标。参考文献1屈战利，王运峰，杨旭，等.血清可溶性 CD40L 和 CD147 水平与短暂性脑缺血发作早期临床转归的相关性研究 J.标记免疫分析与临床，2021，28（7）：12021205+1211.（下转第 1177 页）1172分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.76Filipovich AH，Chandrakasan S.Pathogenesis of Hemophagocytic LymphohistiocytosisJ.Hematol Oncol Clin 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