西藏4种杜鹃属植物内生真菌群落组成及多样性分析.pdf

西藏 4 种杜鹃属植物内生真菌群落组成及多样性分析王素娟1,常子惠2,张永娟1,卫波宁1,德 吉1(1.西藏大学理学院,西藏拉萨 850000;2.西藏自治区农牧科学院农业研究所,西藏拉萨 850000)摘要 目的挖掘西藏杜鹃花科杜鹃属植物内生真菌资源,研究米林杜鹃(Rhododendron mainlingense)、髯花杜鹃(R.anthopogon)、雪层杜鹃(R.nivale)和雪山杜鹃(R.aganniphum)内生真菌的群落组成及多样性。方法采用组织分离法对上述 4 种杜鹃的根、茎、叶和花内生真菌进行分离,用 ITS 分子标记方法进行菌株鉴定。结果西藏 4 种杜鹃属植物720 个组织块中分离得到 336 株内生真菌,这些真菌被鉴定为 2 门 5 纲 10 目 16 科 21 属 55 种。4 种杜鹃属植物内生真菌多样性指数无显著差异。雪山杜鹃(H=1.96,D=0.80)和雪层杜鹃(H=1.81,D=0.77)内生真菌 Shannon 多样性指数(H)和辛普森指数(D)高于髯花杜鹃(H=1.36,D=0.71)和米林杜鹃(H=1.17,D=0.65)内生真菌多样性。根、茎、叶、花不同部位内生真菌多样性也无显著差异。不同部位的 H和 D 指数分别为根部 H=2.63、D=0.86,茎 H=2.35、D=0.83,叶 H=2.26、D=0.80,花 H=2.23、D=0.83。结论研究结果为挖掘杜鹃中内生真菌资源和药效物质筛选研究提供了基础数据。关键词 杜鹃;内生真菌;群落组成;多样性中图分类号 Q948.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2023)11-0138-06doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.034 开放科学(资源服务)标识码(OSID):Analysis on the Community Composition and Diversity of Endophytic Fungi in Four Species of Rhododendron in TibetWANG Su-juan1,CHANG Zi-hui2,ZHANG Yong-juan1 et al(1.School of Science,Tibet University,Lhasa,Tibet 850000;2.Agricul-ture Research Institute,Tibet Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences,Lhasa,Tibet 850000)Abstract ObjectiveTo explore the endophytic fungal resources of Rhododendron genus in the Rhododendron family in Tibet,and to study the community composition and diversity of endophytic fungi in Rhododendron mainlingense,R.anthopogon,R.nivale and R.aganniphum.MethodThe endophytic fungi from roots,stems,leaves and flowers of four species were isolated using tissue isolation method and identified by ITS sequencing.ResultA total of 336 endophytic fungi were isolated from 720 tissues blocks of 4 species of Rhododendron plants in Tibet.These fungi were identified as 55 species belonging to 2 phyla,5 classes,10 orders,16 families,21 genera and 55 species.There was no sig-nificant difference in the diversity index of endophytic fungi among the four Rhododendron species.The diversity shannon index(H)and simp-son index(D)of endophytic fungi in R.aganniphum(H=1.96,D=0.80)and R.nivale(H=1.81,D=0.77)were higher than in R.an-thopogon(H=1.36,D=0.71)and R.mainlingense(H=1.17,D=0.65).There was no significant difference in the diversity of endophyt-ic fungi in different parts of roots,stems,leaves and flowers.The H index and D index in different tissues as follows:H=2.63,D=0.86 in roots,H=2.35,D=0.83 in stems,H=2.26,D=0.80 in leaves and H=2.23,D=0.83 in flowers.ConclusionThe research results pro-vide basic data for the exploration of endophytic fungal resources and screening of pharmacological substances in Rhododendron.Key words Rhododendron;Endophytic fungi;Community composition;Diversity基金项目 西藏自治区科技厅中央支持地方项目(XZ2020001YD0003C);2022 年中央支持地方高校专项(00060949)。作者简介 王素娟(1999),女,甘肃舟曲人,硕士研究生,研究方向:青藏高原生物多样性与进化生态学。通信作者,副教授,博士,从事青藏高原生物多样性与进化生态学研究。收稿日期 2022-11-30 杜鹃属(Rhododendron L.)是杜鹃花科(Ericaceae)植物,其中米林杜鹃(Rhododendron mainlingense)、髯花杜鹃(R.an-thopogon)、雪层杜鹃(R.nivale)和雪山杜鹃(R.aganniphum)主要分布于海拔 2 7005 800 m 的高山地区1。据文献记载2-4,杜鹃根、茎、叶、花和果均可入药,根部具有祛风止痛、消肿散瘀、止咳等功效,可用于治疗跌打损伤、风寒湿痹、癣疮;叶具有解毒、清热和止血的功效;花具有除湿祛风、化瘀止痛的疗效;果实具有祛风镇痛、平喘止咳、化瘀消肿等功效。杜鹃可用于治疗炎症相关的疾病,如支气管炎、风湿病、关节炎等。药用植物内生真菌是植物微生态系统中的重要组成部分,植物内生真菌是生活在植物细胞中或在其生活史某一时期生活在植物组织内,不引起植物发生明显病变的一类真菌5-8。有的内生真菌与植物生长密切相关,影响着植物种子的萌发,可促进植物生长和竞争力。有的内生真菌具有合成宿主次生代谢产物的能力9-12,同时植物真菌群落与寄主之间的相互作用是植物适应环境的重要因素13-14。自短叶红豆杉内生真菌中得到紫杉醇15以来,挖掘、筛选其他植物内生真菌药效物质已成为重要的研究方向。已有报道西藏米拉山雪层杜鹃中分离得到了 4 属内生真菌,分别为曲霉属(Aspergillus)、拟隐壳孢属(Cryptosporiopsis)、镰刀菌属(Fusar-ium)、壳多胞菌属(Stagonospora)16。但是,杜鹃种间内生真菌的差异和不同部位的内生真菌差异目前鲜见报道。该研究通过 ITS 分子标记方法对采集于西藏地区的 4 种杜鹃属植物的内生真菌进行鉴定与分析,比较不同种杜鹃之间内生真菌多样性,为挖掘杜鹃植物内生真菌资源以及筛选药效物质提供前期数据。1 材料与方法1.1 杜鹃花属植物内生真菌的样品采集 于 2021 年 68月在西藏不同地区采集杜鹃属全株新鲜植物,采样信息见表1。每个采样点选取新鲜健康植株 6 株,样品采集后放置于4 冰箱,待处理。1.2 杜鹃属植物内生真菌的分离纯化及保存 将采集的新鲜杜鹃植物的根、茎、叶、花用无菌水冲洗干净。用已灭菌的解剖刀将根、茎、叶和花所需部分切成小块,其中根部组织192 块、叶部组织 192 块、茎部组织 192 块、花部组织 144 块。在无菌条件下将切好的植物材料置于 75%乙醇浸泡 2 min 安徽农业科学,J.Anhui Agric.Sci.2023,51(11):138-143后,用无菌水冲洗 3 次,再用 1%次氯酸钠溶液浸泡 3 min 后,无菌水冲洗 3 次,然后将植物横截面贴入 PDA 培养皿(已加Amp 和 Kan 抗生素)中培养37 d。每隔1 d 观察,将植物组织块周围长出的不同菌落分离,接种到新的 PDA 固体培养基中,分离纯化 3 次,得到纯化的菌落。用组织块印迹法和无菌水检测法作为对照,来检验植株表面消毒情况。表 1 样品分布与采集信息Table 1 Sample distribution and collection information序号No.采样地Sampling site海拔Elevationm经度Longitude 纬度Latitude植物Plant分离组织Detachedtissue采集个体数Number ofsamples1拉萨墨竹工卡县日多乡4 250 921038294216米林杜鹃、雪层杜鹃根、茎、叶、花各 6 株2林芝色季拉山4 442923811293726髯花杜鹃、雪层杜鹃、雪山杜鹃(白花与红花)根、茎、叶、花各 6 株3日喀则亚东县帕里镇4 311890742274732雪层杜鹃根、茎、叶各 6 株4日喀则亚东县4 110890231273706 雪层杜鹃根、茎、叶各 6 株1.3 杜鹃属植物内生真菌的鉴定 通过改良的 CTAB 法17提取杜鹃属植物内生真菌的 DNA。用通用引物 ITS1(5-TC-CG TAGGTGAACCTGCGG-3)和 ITS4(5-TCCTCCGCTTAT-TGATATGC-3)进行扩增。扩增条件:94 预变性 5 min,94 变性 45 s,52 复性 45 s,72 延伸 90 s,重复 35 次,72 延伸10 min,4 低温保存。将PCR 反应得到的产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后,送至生工生物工程(成都)股份有限公司进行测序,测序后获得的 ITS 序列在 NCBI 中用BLAST 进行同源性序列比对,以此进行内生真菌的鉴定。1.4 内生真菌群落多样性分析 通过 Shannon 多样性指数(Shannon-Weiner diversity index,H)、辛普森指数(Simpson,D)、均匀度指数(evenness,E)、定殖率(colonization rate,CR)、分离率(isolation rate,IR)和分离频率(isolation frequen-cy,IF)18-23分析杜鹃内生真菌的群落组成和多样性。该研究分别采用 R 语言、Origin 2021 和 Excel 软件对杜鹃属植物内生真菌进行分析和绘图。2 结果与分析2.1 杜鹃花属植物内生真菌种类 杜鹃属植物 720 个组织块中分离得到 336 株内生真菌,经过分子生物学鉴定,将 336株内生真菌鉴定为子囊菌门、毛霉菌门 2 门,毛霉菌纲、座囊菌纲、粪壳菌纲、散囊菌纲、锤舌菌纲 5 纲,10 目 16 科 21 属55 种(表 2)。表 2 杜鹃属植物内生真菌的种类Table 2 Types of endophytic fungi in Rhododendron plants门Phylum纲Class目 Order 科 Family 属 Genus 种Species分离频率IF%毛霉菌门Mucoromycota毛霉菌纲Mucoromycetes毛霉目Mucorales毛霉科 Mucoraceae放射毛霉属 Actinomucor雅致放射毛霉 Actinomucorelegans0.65毛霉属 MucorMucor sp.0.98子囊菌门Ascomycota座囊菌纲 Dothideomycetes格孢腔菌目Pleosporales格孢菌科Pleosporineae链格孢属 Alternaria 链格孢霉 Alternaria alternata 1.95多形性链格孢菌 Alternaria multiformis0.33极细链格孢菌 Alternaria tenuissima 0.98芸苔链格孢菌 Alternaria brassicae 0.33弯胞属 Curvularia膝曲弯孢 Curvularia geniculata0.33多孢菌科Pleosporineae附球菌属 Epicoccum黑附球菌 epicoccum nigrum 0.65隔孢假壳科Didymosphaeriaceae亚隔孢壳属 DidymellaDidymella sp.0.33枝孢霉目Cladosporiales枝孢霉科 Cladosporiaceae枝孢霉属 Cladosporium芽枝状枝孢 Cladosporium pseudocla-dosporioides 0.33粪壳菌纲Sordariomycetes炭角菌目Xylariomycetidae梨孢假壳科Apiosporaceae略氏端隔孢壳菌属 ApiosporaApiospora marii0.33炭角菌科 Xylariales炭球菌属 Daldinia 炭球菌 Daldinia concentrica 0.33轮层炭壳菌 Daldinia loculata0.65粪壳菌目Sordariales粪壳菌科 Sordariaceae脉孢菌属 Neurospora四孢脉孢菌 Neurospora tetraspora 0.33毛壳科Chaetomiaceae毛壳属 Chaetomium球毛壳霉 Chaetomium globosum0.33肉座菌目Hypocreales虫草菌科 Cordycipitaceae白僵菌属 Beauveria球孢白僵菌 Beauveria bassiana 29.64鳞翅虫草属 SamsoniellaSamsoniella alpina0.33肉座菌科Hypocreaceae木霉属 Trichoderma sp.橘绿木霉 Trichoderma citrinoviride 1.63 里氏木霉 Trichoderma reesei 0.98 侧耳木霉 Trichoderma pleuroticola0.33多孢木霉 Trichoderma polysporum 0.33接下表93151 卷 11 期 王素娟等 西藏 4 种杜鹃属植物内生真菌群落组成及多样性分析续表 2门Phylum纲Class目Order 科Family 属Genus种Species分离频率IF%麦角菌科Clavicipitaceae绿僵菌属 Metarhizium金龟子绿僵菌 Metarhizium anisopliae0.65间座壳菌目Diaporthales黑腐皮壳科 Valsaceae壳囊孢属 CytosporaCytospora salicacearum0.33Cytospora tritici0.33锥毛壳目Coniochaetales锥毛壳科Coniochaetaceae锥毛壳属 ConiochaetaConiochaeta sp.0.65散囊菌纲 Eurotiomycetes散囊菌目Eurotiales发菌科Trichocomaceae曲霉属 Aspergillus冠突曲霉 Aspergillus cristatus 0.33黑曲霉 Aspergillus niger 23.45诺米亚曲霉菌 Aspergillus nomia0.33 多育曲霉 Aspergillus proliferans0.33 土曲霉 Aspergillus terreus 1.95塔宾曲霉菌 Aspergillus tubingensis 3.91杂色曲霉 Aspergillus versicolor 0.65百岁兰曲霉菌 Aspergillus welwitschiae 0.33青霉属 Penicillium沙门柏干酪青霉 Penicillium camemberti 1.63产黄青霉 Penicillium chrysogenum 3.91二元青霉菌 Penicillium dipodomyicola1.95菲姆青霉菌 Penicillium fimorum0.33光孢青霉 Penicillium glabrum 1.30Penicillium goetzii0.33灰黄青霉 Penicillium griseofulvum 3.26奥尔森青霉 Penicillium olsonii 1.63波兰青霉 Penicillium polonicum 1.63产红青霉 Penicillium rubens 0.33小刺青霉 Penicillium spinulosum 0.65亚紫青霉 Penicillium subrubescens0.65托姆青霉菌 Penicillium thomii 2.93 荨麻青霉 Penicillium urticae1.30威 灵 顿 青 霉 菌 Penicillium welling-tonense 0.33普通青霉菌 Penicillium commune 0.33 小本青霉 Penicillium onobense 0.33铅色青霉 Penicillium lividum 0.33皮落青霉 Penicillium crustosum 0.33篮状菌属 Talaromyces黄篮状菌 Talaromyces flavus 0.33 嗜松篮状菌 Talaromyces pinophilus0.65锤舌菌纲LeotiomycetesLeotiomycetes incertae sedis假散囊菌科Pseudeurotiaceae 假散囊菌属Pseudeurotium Pseudeurotium sp.0.332.2 杜鹃花属植物不同组织内生真菌的群落组成 从图 1可以看出,4 种杜鹃属植物根部组织 192 块中分离出 93 株内生真 菌,隶 属 于 13 属,其 优 势 属 为 曲 霉 属 Aspergillus(40.86%)、白僵菌属 Beauveria(19.35%)和青霉属 Penicilli-um(16.13%)。茎部组织 192 块中分离出 94 株内生真菌,其优势属为曲霉属(37.23%)、白僵菌属(25.53%)和青霉属(25.53%)。叶部组织 192 块分离出 80 株内生真菌,其优势属为 白 僵 菌 属(38.75%)、青 霉 属(28.75%)和 曲 霉 属(21.25%)。花组织 144 块中分离出 69 株内生真菌,优势属为曲 霉 属(33.33%)、白 僵 菌 属(30.43%)和 青 霉 属(23.19%)。研究结果还发现根部组织特有属为锥毛壳属 Coniochae-ta(2.15%)、弯胞属 Curvularia(1.08%)、炭球菌属 Daldinia(4.30%)、脉孢菌属 Neurospora(1.08%)、鳞翅虫草属 Sam-soniella(1.08%)、篮状菌属 Talaromyces(3.21%)和壳囊孢属Cytospora(2.15%)。茎组织特有属为略氏端隔孢壳菌属 Ap-iospora(1.06%)和假散囊菌属 Pseudeurotium(1.06%)。叶组织特有属为枝孢霉属 Cladosporium(1.25%)、亚隔孢壳属Didymella(1.25%)和绿僵菌属 Metarhizium(2.50%)。花组织特有属为毛壳属 Chaetomium(1.45%)。4 种杜鹃属植物根、茎、叶、花组织内生真菌优势种都是曲霉属、白僵菌属和青霉属(图2)。米林杜鹃中分离出41 株内生真菌,分为 4 属,分别为链格孢属(Alternaria)、曲霉属、白僵菌属和青霉属;髯花杜鹃分离出 67 株内生真菌,分为 5属,分别为链格孢属、曲霉属、白僵菌属、青霉属和篮状菌属;雪层杜鹃分离出 119 株内生真菌,分为 10 属,分别为放射毛霉属(Actinomucor)、链格孢属、曲霉属、白僵菌属、青霉属、附球菌属(Epicoccum)、绿僵菌属、毛霉属(Mucor)、鳞翅虫草属和木霉属(Trichoderma);雪山杜鹃分离出 99 株内生真菌,分为 17 属,分别为链格孢属、略氏端隔孢壳菌属、曲霉属、白僵041 安徽农业科学 2023 年菌属、枝孢霉属、锥毛壳属、弯胞属、毛壳属、壳囊孢属、炭球菌属、亚隔孢壳属、青霉属、脉孢菌属、假散囊菌属、附球菌属、毛霉属和木霉属。4 种杜鹃属植物根、茎、叶、花组织内生真菌的特有属共有 12 属,分别是枝孢霉属、锥毛壳属、弯胞属、炭球菌属、亚隔孢壳属、绿僵菌属、脉孢菌属、假散囊菌属、鳞翅虫草属、篮状菌属、毛壳属和壳囊孢属。在根部组织中,链格孢属和篮状菌属为髯花杜鹃的特有属,锥毛壳属、弯胞属、炭球菌属、附球菌属、脉孢菌属和壳囊孢属为雪山杜鹃的特有属,鳞翅虫草属为雪层杜鹃特有属;在茎部组织中,放射毛霉属为雪层杜鹃特有属,链格孢属、略氏端隔孢壳菌属、毛霉属和假散囊菌属为雪山杜鹃的特有属;在叶部组织中,放射毛霉属、链格孢属、略氏端隔孢壳菌属、绿僵菌属和木霉属为雪层杜鹃特有属,枝孢霉属、亚隔孢壳属为雪山杜鹃的特有属;在花组织中,毛霉属为雪层杜鹃特有属,毛壳属为雪山杜鹃的特有属。注:A.根;B.茎;C.叶;D.花。Note:A.Root;B.Stem;C.Leaf;D.Flower.图 1 杜鹃不同组织内生真菌的群落组成Fig.1 Community composition of endophytic fungi in different tissues of Rhododendron 从表 3 可以看出,杜鹃属植物不同组织部位的定殖率分别为茎 92.71%、根 91.15%、花 90.97%、叶 90.63%,分离率分别为茎 48.96%、根 48.44%、花 47.92%、叶 41.67%。2.3 杜鹃属植物内生真菌的多样性分析 4 种杜鹃属植物多样性分析结果(表 4)显示,Shannon 多样性指数(H)从大到小依次为雪山杜鹃雪层杜鹃髯花杜鹃米林杜鹃,多样性最高的是雪山杜鹃,最低的是米林杜鹃。辛普森指数(D)从大到小依次为雪山杜鹃雪层杜鹃髯花杜鹃米林杜鹃。将多样性数据进行显著性差异分析,P 值为 0.40,说明 4 种杜鹃属植物内生真菌无显著差异。2.4 杜鹃属植物不同组织内生真菌的多样性分析 从杜鹃属植物不同组织部位(根、茎、叶、花)的多样性指数(表 5)可以看出,Shannon 多样性指数(H)从大到小依次为根茎叶花,多样性最高的是根,最低的是花。辛普森指数(D)从大到小依次为根茎=花叶。将多样性数据进行显著性差异分析,P 值为 0.39,说明 4 种杜鹃属植物不同组织内生真菌无显著差异。3 讨论该研究对西藏 4 种杜鹃属植物 720 个组织块进行分离得到 336 株内生真菌,鉴定为 21 属 55 种。根、茎、叶和花组织中优势属都有曲霉属、白僵菌属和青霉属。其中曲霉属和青霉属为许多药用的草本植物和木本植物的优势种9。有研究报道,青霉属、曲霉属、木霉属、链格孢属等在亮毛杜鹃(R.microphyton Franch)根际内生真菌中存在,其中青霉属是14151 卷 11 期 王素娟等 西藏 4 种杜鹃属植物内生真菌群落组成及多样性分析注:A.米林杜鹃;B.髯花杜鹃;C.雪层杜鹃;D.雪山杜鹃。Note:A.R.mainlingense;B.R.anthopogon;C.R.nivale;D.R.aganniphum.图 2 4 种杜鹃属植物不同组织内生真菌的相对丰度热图Fig.2 Heat map of relative abundance of endophytic fungi in different tissues of four Rhododendron species表 3 不同分离组织部位杜鹃内生真菌的定殖率和分离率Table 3 Colonization rate and isolation rate of endophytic fungi of Rhododendron species in different isolated tissues部位Part组织块数Number of tissues detected有菌组织块数Number of tissues colonized by fungi分离菌株数Number of isolates定殖率CR%分离率IR%分离频率IF%根 Root1921759391.1548.4427.68茎 Stem1921789492.7148.9627.98叶 Leaf1921748090.6341.6723.81花 Flower1441316990.9747.9220.54表 4 杜鹃属植物内生真菌的多样性指数Table 4 Diversity index of endophytic fungi from Rhododendron plant植物 Plant物种数Species numberH指数H indexD 指数D indexE 指数E index米林杜鹃 R.mainlingense41.170.650.84雪层杜鹃 R.nivale211.810.770.60髯花杜鹃 R.anthopogon51.360.710.84雪山杜鹃 R.aganniphum171.960.800.69优势属24;青霉属、木霉属在杜鹃种(R.simsii)根部内生真菌中发现,且为优势属25。子囊菌和木霉属在马缨杜鹃(Rho-dodendron delavayi)内生真菌中被报道,其中子囊菌为优势菌群26。曲霉属、拟隐壳孢属、镰刀菌属和壳多胞菌属在西藏米拉山雪层杜鹃的内生真菌中被分离发现16。该研究发现4 种杜鹃属植物内生真菌共有类型为曲霉属、青霉属、链格孢属、白僵菌属。其中白僵菌属在其他杜鹃属植物内生真菌鉴定中鲜见报道。表 5 不同分离组织部位杜鹃内生真菌的多样性指数Table 5 Diversity index of endophytic fungi from different tissues of Rhododendron部位Part物种数Species numberH指数H indexD 指数D indexE 指数E index根 Root292.630.860.78茎 Stem242.350.830.74叶 Leaf212.260.800.74花 Flower182.230.830.77241 安徽农业科学 2023 年 于洪佳等27研究报道青霉属和曲霉属具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、抗氧化、杀虫、免疫调节等功效。曲霉属和青霉属都有生物碱类、聚酮类、萜类、肽类、固醇类和脑苷脂类等化合物28。从枝孢霉属的次级代谢产物中分离出甾醇、倍半萜类、生物碱类、二酮哌嗪、芳香酸等化合物29。篮状菌属的次级代谢产物有萜类、生物碱类、聚酮类、聚酯类、醌类和甾体类,具有抗菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤活性、生物防治和产生酶活等作用,在食品、环境、农业和医药等方面发挥了重要作用30。毛壳属真菌代谢产物的主要类型为细胞松弛素类和唑啉酮两大类,包含细胞松弛素、唑啉酮类、二酮哌嗪类、色原酮、蒽醌等结构类型,表现出抗微生物、抗氧化、免疫抑制等生物活性,具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒等作用31。综上所述,该研究对西藏地区不同种杜鹃属植物的不同组织内生真菌进行分离鉴定,发现种间真菌多样性差异不明显,同种植物不同部位内生真菌差异不明显,说明 4 种内生真菌组成相似,且优势属都有曲霉属、白僵菌属和青霉属。该研究结果为下一步内生真菌代谢产物研究提供基础。参考文献1 中国科学院青藏高原综合考察队.西藏植物志:第3 卷M.北京:科学出版社,1983:552-562.2 伍志辉.羊踯躅根(丸)治疗类风湿性关节炎一例探讨J.中国药业,1996,5(9):42-43.3 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010 年版 一部S.北京:中国医药科技出版社,2010:210.4 陈冀胜,郑硕.中国有毒植物M.北京:科学出版社,1987:216-239.5 STONE J K,BACON C W,WHITE J F,Jr.An overview of endophytic mi-crobes:Endophytism definedM/BACON C W,WHITE J.Microbial en-dophytes.Boca Raton:CRC Press,2000:3-29.6 SMITH S E,READ D J.Mycorrhizal symbiosisM.San Diego:Academi Press,2008:419-4577 郭顺星.药用植物内生真菌研究现状和发展趋势J.菌物学报,2018,37(1):1-13.8 宁祎,李艳玲,李媛,等.桃儿七茎叶组织内生真菌多样性J.生态学报,2017,37(15):5157-5166.9 谭小明,周雅琴,陈娟,等.药用植物内生真菌多样性研究进展J.中国药学杂志,2015,50(18):1563-1580.10 UPSON R,READ D J,NEWSHAM K K.Nitrogen form influences the re-sponse of Deschampsia antarctica to dark septate root endophytesJ.My-corrhiza,2009,20(1):1-11.11 程茂高,乔卿梅,魏志华,等.中药材仓储害虫及其绿色防控技术研究进展J.中药材,2016,39(8):1917-1921.12 FRANTZESKAKIS L,DI PIETRO A,REP M,et al.Rapid evolution in plant-microbe interactions-a molecular genomics perspective 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