基于网络药理学及分子对接技术构建中药复方调控网络模型探讨痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的作用机制.pdf

目的：基于网络药理学，结合分子对接技术，来探讨痛泻要方加味对溃疡性结肠炎（UC）产生治疗作用的物质基础及分子机制。方法：通过 TCMSP 数据库搜索痛泻要方加味所包含的全部化学成分及作用靶点，利用 Genecards、OMIM、TTD 及 DrugBank 4 个数据库获取 UC 的受体靶点，制作 Venny 图寻找药物和疾病的共有靶点；结合 Cytoscape 软件对中药复方调控网络进行可视化展示；在 STRING 数据库中寻找靶点蛋白图并构建网络核心；分析 GO 生物学过程和 KEGG 富集通路；并对核心蛋白进行 3D 结构的重建，实现 Vina 分子对接。结果：在 TCMSP 中获得痛泻要方加味的有效活性成分共 98 个，成分靶点 231 个，疾病基因 4 635 个，二者共有基因 161 个；GO 生物学过程主要涉及对脂多糖、抗生素、细菌来源分子、营养水平、氧化应激、活性氧、类固醇激素等反应，与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶等全酶复合物、转录因子等的活性、RNA 聚合酶 II 特异性及磷酸酶等酶的结合有关；KEGG 富集分析：与类固醇激素、精氨酸生物的合成，色氨酸、精氨酸、谷胱甘肽和脯氨酸代谢密切相关；黄芩甙元、山奈酚等成分可与AKT1蛋白受体进行高效对接，构象稳定。结论：痛泻要方加味成分复杂，对 UC 的治疗作用具有靶点多样、通路复杂、层次分明的特点；AKT1 等重点因子可作为治疗 UC 疗效的重要观测指标，为下一步临床验证奠定基础。关键词痛泻要方加味；溃疡性结肠炎；网络药理学；分子对接；作用机制中图分类号：R284 文献标志码：ADiscussion on the Network Model of TCM Compound Regulation Based on Network Pharmacology and Molecular Docking Technology Effect Mechanism of Tongxie Yaofang Adds Flavor on Ulcerative ColitisWANG Yan-ru1,AN Ming-wei2,TANG Yong2,WU Yun-xiang2,JIANG Ling-fang2,TANG Lu-wei1,WU Qing-ling21.Graduate School of Jiangxi University of Chinese Medicine,Nanchang 330004,China;2.Jiangxi Provincial Hospital of Chinese Medicine,Nanchang 330006,China.Abstract Objective:Based on network pharmacology and molecular docking technology,to explore the material basis and molecular mechanism of Tongxie Yaofang adds flavor on the therapeutic effect of ulcerative colitis.Methods:The TCMSP database was used to search all the chemical components and targets of Tongxie YaoFang,and the four databases of Genecards,OMIM,TTD and DrugBank were used to obtain the receptor targets of UC,and the Venny diagram was made to find the common targets of drugs and diseases.Combined with Cytoscape software,the regulation network of TCM compounds was sorted out and visualized.The protein map of target was found in the STRING database,and the network core was constructed.The GO biological process and KEGG enrichment pathway were analyzed.The 3D structure of the core protein was reconstructed to achieve Vina molecular docking.Results:A total of 98 active components,231 component targets and 4 635 disease genes were obtained from the TCMSP,including 161 genes in total.The biological process of GO mainly involves the reactions to lipopolysaccharides,antibiotics,bacteria-derived molecules,nutrient levels,oxidative stress,reactive oxygen species,steroid hormones,etc.,and is related to the activity of holoenzyme complexes such as cyclin-dependent protein kinases,transcription factors,and the binding of enzymes such as RNA polymerase II and phosphatase.KEGG enrichment analysis:It is closely related to the biosynthesis of steroid hormones and arginine,metabolism of tryptophan,arginine,glutathione and proline.Baicalein,Kaempferol and other components can efficiently dock with AKT1 protein receptor,and the conformation is stable.Conclusions:Tongxie Yaofang flavored-adding ingredients are complex,and its therapeutic effects on UC are characterized by diverse targets,complex pathways and distinct levels.AKT1 can be used as an important observation index affecting the efficacy of UC,laying a foundation for the next clinical verification.Key words Tongxie Yaofang Flavored-adding;Ulcerative Colitis;Network Pharmacology;Molecular Docking;Mechanism of Action78江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期中药研究溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）相当于中医学的“泄泻”“痢疾”“脏毒”及“肠澼”等范畴1-4。现代医学认为UC发病不仅跟遗传、免疫、感染及肠道菌群失调存在一定的关系，而且与情志因素密切相关5-6。有研究表明，情志发病所占比重越来越大7-9，情志与肝之疏泄密切相关，一旦肝木有病，则易乘脾土，脾运化受制，不能调理中焦，因此出现腹痛腹泻等主要症状。痛泻要方是脾虚肝旺泄泻的代表方，具有调和肝脾、祛湿止泻的功效。在临床工作中发现，患者病情常反复发作、腹痛难忍、腹泻难制，因此吾师常加入柴胡、香附、枳壳疏肝理气，辅以健脾祛湿的茯苓，构成痛泻要方加味，具体方药：白术 18g，白芍 12g，陈皮 9g，防风 6g，柴胡 9g，枳壳 6g，香附 9g，茯苓 9g，发挥扶土抑木之功效10-11。且现代药理学认为以上中药成分具有松弛胃肠平滑肌、抑制胃酸分泌、抗溃疡和抑菌的作用12。因此，本研究利用网络药理学及分子对接技术，分析痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的物质基础和分子机制，为下一步结合临床验证奠定理论基础。1 资料与方法1.1“痛泻要方加味”复方有效成分、作用靶点的获取及整理进入中药系统药理学技术（TCMSP）平台，自定义生物利用度 OB 30%，类药性指数 DL 0.18 为筛选条件，分别筛选出“Baishao”“Baizhu”“Chaihu”“Chenpi”“Fangfeng”“Fuling”“Xiangfu”及“Zhike”的有效活性成分，构建药物成分数据库，并利用该平台得到药物相关有效成分的作用靶点，构建靶点数据库。并对中药复方药物靶点进行整理，构建“allTargets”数据库，进入 uniprot 数据库，对靶点进行简化和 ID 转化。1.2 疾病基因筛选以“ulcerativecolitis”为关键词，运用 Genecards、OMIM、TTD 及 DrugBank 共 4 个数据库获取疾病“溃疡性结肠炎”的相关基因，整合数据取并集，构建Venn 图。1.3 药物、疾病基因的对接把药物靶点与疾病基因进行对接，绘制 Venn图，构建“Drug-Disease.txt”文件备用。1.4 中药复方调控网络模型构建与分析利用以上数据库自建“Network.txt”和“Node.txt”文件，并导入Cytoscape3.7.2 软件，构建可视化中药复方调控网络模型，并分析各节点之间的关系。1.5 PPI 蛋白互作网络构建及网络核心的查找将“Drug-Disease.txt”基 因 上 传 STRING 数据库，将 organism 局限于 Homosapiens，进一步构建蛋白相互作用网络图（PPI），并隐藏脱落的基因。在Cytoscape3.7.2 软件中打开该网络图，安装NetworkAnalysis 插件构建网络核心，重构子网络，并进行简化。1.6 生物学过程和信号通路富集分析在 GO 和 KEGG 富集分析下，来描述基因功能及获得显著富集的信号通路，从而进一步探讨“痛泻要方加味”治疗溃疡性结肠炎的生物学过程及主要的信号通路，并构建网络核心。1.7 分子对接 结合以上得到的蛋白核心基因，搜寻所对应的中药成分，下载各个成分的小分子配体 2D 结构，在 ChemOffice 软件中生成能量优化后的 3D 结构。在 UniProt 数据库中搜索核心基因，找到相对应的蛋白 ID，在 RSCBPDB 数据库中寻找该蛋白 ID，下载大分子 3D 结构，保存为 PDB 格式，利用 PyMOL 软件对蛋白进行去水分子和小分子配体。在 AutoDockTools 软件中打开蛋白受体文件，并进行加氢，把蛋白受体和小分子配体都转化成pdbqt 格式；并对对活性口袋进行确定；最后运行AutoDockVina 软件对以上 2 个 pdbqt 文件进行分子对接，在 PyMOL 软件中进行可视化分析。2 结果2.1“痛泻要方加味”复方有效成分、作用靶点的获取及整理在 TCMSP 中获得痛泻要方加味的有效活性成分为豆甾醇（stigmasterol）、黄芩素（baicalein）、槲 皮 素（quercetin）、升 麻 酸（cimicifugicacid）、川陈皮素（nobiletin）、表小檗碱（epiberberine）等共 98 个，成分靶点共 1238 个；进入 uniprot 数据库，利用Strawberry-perl软件，得到231个靶点简称。见表 1。表1 痛泻要方加味药物活性成分NumberMolIdMolnameOB 30%DL 0.181MOL00191011alpha,12alpha-epoxy-3beta-23-dihydroxy-30-norolean-20-en-28,12beta-olide64.770.382MOL001918paeoniflorgenone87.590.373MOL001919(3S,5R,8R,9R,10S,14S)-3,17-dihydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-2,3,5,6,7,9-hexahydro-1H-cyclopentaaphenanthrene-15,16-dione43.560.5379陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验中药研究（续表 1）NumberMolIdMolnameOB 30%DL 0.184MOL001921Lactiflorin49.120.805MOL001924paeoniflorin53.870.796MOL001925paeoniflorin_qt68.180.407MOL001928albiflorin_qt66.640.338MOL001930benzoylpaeoniflorin31.270.759MOL000211mairin55.380.7810MOL000358beta-sitosterol36.910.7511MOL000359sitosterol36.910.7512MOL000422kaempferol41.880.2413MOL000492(+)-catechin54.830.2414MOL00002012-senecioyl-2E,8E,10E-atractylentriol62.400.2215MOL00002114-acetyl-12-senecioyl-2E,8E,10E-atractylentriol60.310.3116MOL00002214-acetyl-12-senecioyl-2E,8Z,10E-atractylentriol63.370.3017MOL000028-Amyrin39.510.7618MOL000033(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-17-(2R,5S)-5-propan-2-yloctan-2-yl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopentaaphenanthren-3-ol36.230.7819MOL0000493-acetoxyatractylone54.070.2220MOL0000728-ethoxyatractylenolide1.080.0021MOL001645linoleylacetate42.100.2022MOL002776baicalin40.120.7523MOL000449stigmasterol43.830.7624MOL000354isorhamnetin49.600.3125MOL000422kaempferol41.880.2426MOL0045983,5,6,7-tetramethoxy-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)chromone31.970.5927MOL004609areapillin48.960.4128MOL013187cubebin57.130.6429MOL004624longikaurinA47.720.5330MOL004628octalupine47.820.2831MOL004644sainfuran79.910.2332MOL004648troxerutin31.600.2833MOL004653(+)-anomalin46.060.6634MOL004702saikosaponinc_qt30.500.6335MOL004718spinasterol42.980.7636MOL000490petunidin30.050.3137MOL000098quercetin46.430.2838MOL000359sitosterol36.910.7539MOL004328naringenin59.290.2140MOL0051005,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one47.740.2741MOL005815Citromitin86.900.5142MOL005828nobiletin61.670.5243MOL000011(2R,3R)-3-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-5-methoxy-2-methylol-2,3-dihydropyrano5,6-h1,4benzodioxin-9-one68.830.6644MOL01173011-hydroxy-sec-o-beta-d-glucosylhamaudol_qt50.240.2745MOL011732anomalin59.650.6646MOL011737divaricatacid87.000.3247MOL011740divaricatol31.650.3848MOL001941Ammidin34.550.2249MOL011747ledebouriellol32.050.5150MOL011749phelloptorin43.390.2851MOL0117535-O-Methylvisamminol37.990.25王艳茹等：基于网络药理学及分子对接技术构建中药复方调控网络模型探讨痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的作用机制80江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期中药研究（续表 1）NumberMolIdMolnameOB 30%DL 0.1852MOL002644Phellopterin40.190.2853MOL000359sitosterol36.910.7554MOL000173wogonin30.680.2355MOL000358beta-sitosterol36.910.7556MOL001494Mandenol42.000.1957MOL001942isoimperatorin45.460.2358MOL003588Prangenidin36.310.2259MOL007514methylicosa-11,14-dienoate39.670.2360MOL013077Decursin39.270.3861MOL000273(2R)-2-(3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R)-3,16-dihydroxy-4,4,10,13,14-pentamethyl-2,3,5,6,12,15,16,17-octahydro-1H-cyclopentaaphenanthren-17-yl-6-methylhept-5-enoicacid30.930.8162MOL000275trametenolicacid38.710.8063MOL0002767,9(11)-dehydropachymicacid35.110.8164MOL000279Cerevisterol37.960.7765MOL000280(2R)-2-(3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R)-3,16-dihydroxy-4,4,10,13,14-pentamethyl-2,3,5,6,12,15,16,17-octahydro-1H-cyclopentaaphenanthren-17-yl-5-isopropyl-hex-5-enoicacid31.070.8266MOL000282ergosta-7,22E-dien-3beta-ol43.510.7267MOL000283Ergosterolperoxide40.360.8168MOL000285(2R)-2-(5R,10S,13R,14R,16R,17R)-16-hydroxy-3-keto-4,4,10,13,14-pentamethyl-1,2,5,6,12,15,16,17-octahydrocyclopentaaphenanthren-17-yl-5-isopropyl-hex-5-enoicacid38.260.8269MOL0002873beta-Hydroxy-24-methylene-8-lanostene-21-oicacid38.700.8170MOL000289pachymicacid33.630.8171MOL000290poricoicacidA30.610.7672MOL000291poricoicacidB30.520.7573MOL000292poricoicacidC38.150.7574MOL000296hederagenin36.910.7575MOL000300dehydroeburicoicacid44.170.8376MOL003044chryseriol35.850.2777MOL000354isorhamnetin49.600.3178MOL0035428-Isopentenyl-kaempferol38.040.3979MOL000358beta-sitosterol36.910.7580MOL000359sitosterol36.910.7581MOL0040271,4-Epoxy-16-hydroxyheneicos-1,3,12,14,18-pentaene45.100.2482MOL004053Isodalbergin35.450.2083MOL004058khell33.190.1984MOL004059khellolglucoside74.960.7285MOL010489resivit30.840.2786MOL004068rosenonolactone79.840.3787MOL004071hyndarin73.940.6488MOL004074stigmasterolglucoside_qt43.830.7689MOL004077sugeonylacetate45.080.2090MOL000422kaempferol41.880.2491MOL000449stigmasterol43.830.7692MOL000006luteolin36.160.2593MOL000098quercetin46.430.2894MOL013381marmin38.230.3195MOL002341hesperetin70.310.2796MOL000358beta-sitosterol36.910.7597MOL004328naringenin59.290.2198MOL005828nobiletin61.670.5281陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验中药研究3 疾病基因筛选在 4 个数据库中得到疾病基因共 4635 个,整合各数据取并集，构建图 1。图1 疾病基因筛选韦恩图4 药物、疾病基因的对接把药物靶点与疾病基因进行对接，并绘制图 2，可知共有基因 161 个。图2 药物靶点与疾病基因对接韦恩图5 中药复方调控网络模型的构建与分析利用制图软件，构建可视化中药复方调控网络模型。其中左侧部分是各个中药的成分靶点，如大红色全圆表示白芍的成分基因，绿色为柴胡，橙色为香附，紫色为枳壳，深蓝色为白术，浅蓝色为茯苓，不同颜色的饼图代表各对应中药的共有成分靶点。右侧部分代表疾病与药物共有的 161 个靶标，靶标大小是由度值来决定的，度值越大，面积越大，相关性越大。见图 3。图3 中药复方调控网络模型6 PPI 蛋白互作网络图的构建及网络核心的查找在数据库中构建 PPI 蛋白互作网络图采取 highconfidence（0.700）为简化条件，并对 PPI 中的所有靶点蛋白进行排序，截取 Count 值前 30 个为关键性靶点并制作柱状图，并筛选出网络核心。见图4、图 5、图 6。7 生物学过程和信号通路富集分析利用程序包对得到的靶点蛋白进行 GO 富集分析，根据富集的显著性，截取每个功能的前 10 个构建气泡图和柱状图，纵坐标表示 GO 功能的名称，气泡图横坐标表示富集在该 GO 上基因数目或比例，颜色代表富集的显著性，颜色越红，表示网络图4 PPI蛋白互作网络图王艳茹等：基于网络药理学及分子对接技术构建中药复方调控网络模型探讨痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的作用机制82江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期中药研究图5 关键靶点蛋白柱状图图6 网络核心蛋白图基因在该 GO 上富集越显著。见图 7、图 8。同方法进行 KEGG 通路富集，构建图形，并挑选 hsa00380（色氨酸代谢）通路，绘制通路图。见图 9、图 10、图 11。8 分子对接 配体与受体结合的构象越稳定，所需结合能量越低。按照上述步骤，以结合能-5.0kcal/mol，筛选出结合性较好的活性成分，可知黄芩甙元、山奈83陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验中药研究图7 GO富集分析（柱状图）图8 GO富集分析（气泡图）王艳茹等：基于网络药理学及分子对接技术构建中药复方调控网络模型探讨痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的作用机制84江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期中药研究图9 KEGG富集分析（柱状图）图10 KEGG富集分析（气泡图）图11 KEGG富集通路图（以色氨酸代谢通路为例）酚、汉黄芩素、柚皮苷及槲皮素可与 AKT1 蛋白受体进行高效对接，结合能低，构象稳定。见图 12。9 讨论现代方剂学对于经典方痛泻要方的研究较透彻13-14。现代药理学研究发现：白术含内酯类、挥发油及多糖类等多种成分，具有调节免疫、调节胃肠道及保护神经等多种药理作用15。在抑郁症小鼠模型的研究中发现，该成分可能通过抑制 NLRP3 炎症小体的激活机制参与抗抑郁活动16。白芍的主要成分有白芍总甙、芍药内酯等，主要对细胞、体液的免疫调节和巨噬细胞功能产生作用，有研究发现该中药成分能够影响白介素、85陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验中药研究图12 分子对接图白三烯等介质的产生，作用于风湿性关节炎等的治疗中；此外，白芍在胃肠道、心血管及各类痛症均有运用17-18。防风的主要成分有升麻苷、香豆素、有色原酮等，对中枢神经系统和肝代谢酶产生作用19。陈皮成分具有抗炎、抗癌、抗氧化、降血脂、解痉平喘、心血管保护及肠道平滑肌双向调节等功效20。柴胡抗炎退热的作用与肾上腺皮质的合成及糖皮质激素的分泌存在较为密切的联系，同时具有中枢神经抑制作用，相关动物研究验证了该成分抗抑郁及脑内神经递质调节的作用21。茯苓包含有茯苓多糖及其衍生物、茯苓素等化学成分，具有抗肿瘤、提高人体免疫力、抗诱变、抗衰老、利尿等作用，在小鼠免疫功能实验中，茯苓多糖能纠正 Th1 细胞到 Th2 细胞的漂移，证明了该成分的机体保护作用22。枳壳具有调节胃肠运动、降血压、抗肿瘤、免疫调节等作用23，香附化学成分复杂、药理作用广泛，具有止痛、抗炎、镇静和解热的功效，在腹痛及肠道疾病中应用广泛24。通过图 3 中药复方调控网络的建立，发现痛泻要方加味的有效活性成分复杂多样，本次研究主要分析与治疗靶点联系最密切的成分。如豆甾醇，可以预防结肠癌、卵巢癌等癌的发生；研究发现，富含植物甾醇的饮食可能通过竞争肠道吸收而抑制胆固醇的吸收并降低机体血清胆固醇的水平25。黄芩素在体内的药动学研究表明该成分在胃肠道易被吸收，生物利用度高，不仅可以清除氧自由基，还可以抑制多种肿瘤细胞的生长，尤其是消化系统，可以诱导结肠癌和胃癌细胞的凋亡26。槲皮素参与氧化应激、干扰素-血管紧张素-醛固酮系统和活化氧介导的下游信号的调节，能够抑制血小板聚集和 5-HT 释放，对 ADP、凝血酶和 PAF 诱导的血小板聚集有明显抑制性，因此能抑制促癌剂的作用27。异鼠李素是槲皮素的直接衍生物，能够抑制相关促炎因子或与炎症相关的通路来发挥抗炎作用，缓解和治疗炎症诱发的反流性食管炎等疾病，如在消化系统中，该成分可通过抑制相关炎症因子、MPO 表达，阻断 NF-kB 和P38MAPK 信号通路，增强 HO-1 的表达来减轻反流性食管炎对黏膜的损害28。川陈皮素的药理学研究发现具有抗病原微生物、抗过敏等作用，在胃肠疾病的溃疡、炎症等抑制方面运用广泛29。关于表小檗碱的药理研究较单一，主要认为其具有较强的抗氧化活性，能够抑制醛糖还原酶来降低机体血糖30。柚皮苷具有抗多种病原微生物、抗过敏、抗溃疡、改善局部微循环和营养供给等多种生物学活性和药理作用31。在 PFOS 诱导小鼠肝王艳茹等：基于网络药理学及分子对接技术构建中药复方调控网络模型探讨痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎的作用机制86江西中医药大学学报 2023 年 8 月第 35 卷第 4 期中药研究损伤的研究中，柚皮苷通过抑制氧化应激、炎症反应和肝细胞凋亡来缓解肝损伤，且该生物活动与增加 Nrf2 表达和抑制 NF-kB 的激活密切相关32。木犀草素药理活性多样，有研究表明该成分能够抑制巨噬细胞磷酸化，抑制转录因子 NF-kB 的活性，抑制脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞产生细胞因子 IL-6，TNF-；还具有抑制 PDE、抗 SARA、HIV 病毒特性33；最新研究表明在糖尿病的防治方面作用明显。其他成分的研究也在火热进行中，但不及前几种成分分析的透彻，值得进一步深究。结合 PPI 蛋白网络来看，痛泻要方加味与溃疡性结肠炎的联系紧密，药物与疾病的共有作用靶标高达 161 个，最终筛选出 15 个靶点。MAPK1、MAPK3、MAPK8 和 MAPK14 同属于 MAPK 家族，是信号从细胞表面传到至细胞核内部的重要传递者，调控着细胞的生长、增殖、转化、凋亡、对环境的应激适应、炎症反应等多种中药的细胞生理和病理过程，是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，把胞外信号经受体、转录因子等信号网络传递到胞内，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥着关键作用34。MYC 基因家族及其产物是涉及细胞增殖和凋亡的转录因子，参与细胞永生化、去分化和转化等生物过程，在多种癌症中均呈现高表达状态35。TP53、CDKN1A 是细胞周期调控因子，通过调控细胞周期相关蛋白的合成在细胞增殖和凋亡方面发挥着重要作用，研究发现该因子的突变能够促进肿瘤细胞的增殖、迁徙和侵袭，促进肿瘤细胞的生成代谢，预示着不良的后果36。RB1 具有抗氧化、清除体内自由基及对抗细胞凋亡的作用，能够保护过氧化氢诱导的细胞衰老，减少氧化应激和炎症能够逆转高糖诱导的细胞衰老，在呼吸科及心血管科应用广泛。FOS 功能较单一，在肠道内能够增殖有益菌，使有益菌占有绝对的优势，抑制肠内有害菌的生长，减少内毒素，同时对肠粘膜细胞和肝具有保护作用。从 2610 个 GO 功能富集分析的结果来看：痛泻要方加味治疗溃疡性结肠炎主要涉及对脂多糖、抗生素、细菌来源分子、营养水平、氧化应激、活性氧、类固醇激素等的反应，与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶等全酶复合物、转录因子等的活性、RNA 聚合酶 II 特异性及磷酸酶等酶的结合有关。以上生物学过程多方面、多维度的激发痛泻要方加味的作用靶点对溃疡性结肠炎的受体靶点产生化学作用，实现能量的传递，以达到对病理状态的纠正与调整。通过对图 9 和图 10KEGG 信号通路的分析，可知痛泻要方加味对溃疡性结肠炎产生作用的信号通路主要与类固醇激素的合成、色氨酸代谢、精氨酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢、谷胱甘肽代谢密切相关。色氨酸在机体内的代谢主要通过 2 条途径：犬尿氨酸途径和 5-羟色氨途径，其中 5-羟色氨途径的一小部分色氨酸在小肠中不被吸收，可以在大肠微生物的作用下而发生降解。另外 5-羟色胺可以产生很多生物活性物质而备受关注：机体细胞在色氨酸羟化酶的作用下将色氨酸转化为5-羟色胺酸，又在 5-羟色胺酸脱羧酶作用下脱去CO2生成 5-HT，实际上，5-HT 不仅仅只由大脑神经元产生，该信号系统在全身广泛分布，甚至连淋巴也有分布，具有调节胃肠道运动和感觉、产生内脏高敏感性、参与免疫应答、促炎和改善精神心理状态等作用，参与多种胃肠道疾病的发生发展37-39，其缺乏与肠道动力障碍相关。AKT1 靶点是在疾病与药物的共有靶点中联系最为密切的，因靶标蛋白的柱状图中显示 AKT1 的Count 值最高，且核心靶点的筛选中也有该靶点的存在，意味着该靶点极有可能是痛泻药方加味治疗溃疡性结肠炎的关键性靶点，因此将此靶点与小分子配体进行对接。可知黄芩甙元、山奈酚、汉黄芩素、柚皮苷及槲皮素可与 AKT1 蛋白受体进行高效对接，结合能低，构象稳定。AKT/蛋白激酶 B 信号作用通道调控细胞增殖、生长和代谢，参与包括细胞凋亡和葡萄糖代谢在内的细胞过程。研究表明，P13/AKT 信号传导通路与细胞因子的调控和释放密切相关，此通路激活后，活化的 AKT 可以增加NF-kB 的磷酸化，进一步激活 NF-kB，促进更多炎性因子的转录，进而引起一系列炎性反应和黏膜损伤，加重溃疡程度40。AKT1 与肿瘤细胞增殖和凋亡调节密切相关，此指标升高，意味着疾病恶化的可能性加大。通过本次网络药理学研究，能够分析出痛泻要方加味治疗 UC 的主要活性成分及作用靶点，挖掘出所参与的生物过程和借助的信号通路，验证了痛泻要方加味具有调节胃肠动力、参与免疫调节、参与炎症反应、解热镇痛、恢复大肠正常传导功能及防止溃疡恶变等作用；筛选出 5-HT、AKT1 等因子可作为后期临床验证的观测指标。参考文献1叶子茵,肖书渊,李增山,等.中国炎症性肠病病理诊断专家指导意见 J.中华炎性肠病杂志,2021,5(1):E1.2汪青楠,李娟梅,倪瑶,等.中医治疗溃疡性结肠炎的研究进展 J.吉林中医药,2019,39(9):1251-1255.3RubinDT,HartA,PanaccioneR,etal.Ulcerativecolitisnarrative87陈颖等：彭涛从少阳论治胃癌前病变经验中药研究globalsurveyfindings:communicationgapsandagreementsbetweenpatientsandphysiciansJ.InflammBowelDis,2021,27(7):1096-1106.4BhambhvaniHP,ZamoraA.DeeplearningenabledclassificationofMayoendoscopicsubscoreinpatientswithulcerativecolitisJ.EurJGastroenterolHepatol,2021,33(5):645-649.5ChenP,XuHY,TangH,etal.Modulationofgutmucosalmicrobiotaasamechanismofprobiotics-basedadjunctivetherapyforulcerativecolitisJ.MicrobBiotechnol,2020,13(6):2032-2043.6黄艳,邓松华.肖振球教授治疗溃疡性结肠炎的经验 J.广西中医药,2020,43(5):56-57.