洁净室浮游菌检测标准操作规程.doc

GMP质量管理（9） 文件编号：ZL/SOP/ZK/02300
洁净室浮游菌检测标准操作规程

文件名：洁净室浮游菌检测标准操作规程
文件编号：ZL/SOP/ZK/02300
制定人：
日期： 年 月 日
文件类型：工作标准
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日期： 年 月 日
版 次：第一版
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日期： 年 月 日
印 数：共5份
生效日期： 年 月 日
颁发部门：综合办公室
分发至： 质量副总经理、质量管理部、QC检验室、综合办公室
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修订号
修订人
批准日期
生效日期
原 因 及 目 的

⒈ 目的：建立浮游菌检测的标准操作程序，用以规范员工的检测操作。
⒉ 范围：适用于公司内部生产洁净区内的浮游菌检测工作
⒊ 责任：生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行负责。
⒋ 检测依据：GB/T16293—1996（医药工业洁净室浮游菌的测试方法）。
⒌ 内容：
5.1 器具与材料
5.1.1 浮游菌采样器
5.1.2 真空抽气泵
5.1.3 培养皿
5.1.4 普通肉汤培养基
5.1.5 恒温培养箱
5.2 测试步骤
5.2.1 测试前，仪器、培养皿表面必须严格消毒。
5.2.1.1 采样品在进入被测前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被 测房间内。
5.2.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。
5.2.1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，于用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
5.2.1.4 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的及外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。
5.2.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
5.2.2 采样程序
5.2.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5分钟，并调好流量、转盘转速。
5.2.2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。
5.2.2.3 置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵、转动定时器，根据采样量设定采样时间。
5.2.3 培养
全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
在30～35℃培养箱中培养，时间不少于48小时。
每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定 3只培养皿作对照培养。
5.2.4 菌落计数
5.2.4.1 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，看是否有遗漏。
5.2.4.2 若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
5.3 注意事项
5.3.1 采样器的采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。
5.3.2 采样管严禁渗漏，内壁应光滑。
5.3.3 采样管的长度应根据测点的高度定，尽量减少弯曲。
5.3.4 使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
5.3.5 操作时应防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。
5.3.6 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
5.3.7 由于细菌各类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或下面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
5.4 测试规则
5.4.1 测试状态
5.4.1.1 浮游菌测试前，被测试洁净室 （区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
5.4.1.2 浮游菌测试前，被 测试洁净室（区）已经过消毒。
5.4.1.3 测试状态有静态和动态 两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
5.4.2 测试人员
5.4.2.1 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。
5.4.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2 人。
5.4.3 测试时间
5.4.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
5.4.3.2 对非单向流，如10000级，及其以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
5.4.4 浮游菌浓度计算
5.4.4.1 采样点数量及其布置
5.4.4.1.1 最少采样点数目：浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，具体情况见下表。

最少采样点数目
面积
洁净级别
100
10000
100000
验证
监测
验证
监测
验证
监测
<10
2～3
1
2
1
2
——
≥10＜20
4
2
2
1
2
——
≥20＜40
8
3
2
1
2
——
≥40＜100
16
4
4
1
2
——
≥100＜200
40
——
10
——
3
——
≥200＜400
80
——
20
——
6
——
400
160
——
40
——
13
——
注：（1）表中的面积，对于100级的单向流洁净室（包括层流工作台），指的是送风口表面积；对于10000级、100000非单向流洁净室，指的是房间面积。
（2）日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定。
5.4.4.1.2 采样点的位置
5.4.4.1.2.1 对每个100级洁净操作区域（如层流罩、层流工作台），可在离药物敞开口处30cm处设测点。
5.4.4.1.2.2 对每个10000级洁净工作区域（如药物开口工作区）可在工作面处设测点。
5.4.4.1.2.3 送风口测点位置离开送风面30cm左右。
5.4.4.1.2.4 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
5.4.4.2 最小采样量
采样量根据日常检测及环境验证定，每次最小采样量见下表。
最小采样量
洁净度级别
采样量，L∕次
日常监测
环境验证
100级
600
1000
10000级
400
500
100000级
50
100
5.4.4.3 采样次数：每个采样点一般采样一次。
5.4.5 采样注意事项
5.4.5.1 对于单向流功送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。
5.4.5.2 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。
5.4.5.3 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。
5.5 记录：对测试情况进行记录（房间温度、相对湿度、压差及测试状态等）。
5.6 结果计算
用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
每个测点的浮游菌平均浓度的计算见下式。
菌落数
平均浓度（个∕m3）= —————
采样量

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