基于溶出-液相在线联用系统研究藿香正气丸%28浓缩丸%29中两种成分体外释放行为.pdf

2023 年第 4 期23No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation基于溶出-液相在线联用系统研究藿香正气丸（浓缩丸）中两种成分体外释放行为汪海宣 程庆兵 郑 正 郑永连 陶俊钰*(合肥市食品药品检验中心，合肥 230088)摘 要：目的：探讨研究并建立藿香正气丸(浓缩丸)体外溶出测定方法，并对其溶出情况进行评价，为该品种的体外溶出评价提供依据。方法：采用溶出-液相联用方法测定藿香正气丸(浓缩丸)中橙皮苷和甘草酸铵两种目标成分的累积溶出量并绘制溶出曲线图，利用不同的数据模型对溶出数据进行模型拟合，确定藿香正气丸(浓缩丸)的最佳溶出模型。结果：在人工肠液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中，不同批次的藿香正气丸(浓缩丸)两种目标标成分溶出行为差异性较小，藿香正气丸(浓缩丸)中两种目标成分的溶出数据拟合结果略有不同，主要以Weibull模型最佳。结论：藿香正气丸(浓缩丸)在pH 6.8磷酸盐缓冲液中更有利于考察目标成分的溶出情况，该研究准确可靠，可用于藿香正气丸(浓缩丸)的质量控制，同时也为其质量一致性评价研究及工艺的分析改进提供了数据支撑。关键词：溶出-液相联用 藿香正气丸（浓缩丸）橙皮苷 甘草酸铵 溶出曲线 相似因子DOI:10.3969/j.issn.1001232x.2023.04.006Study on the in vitro release behavior of two components in Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills)by dissolution-liquid phase on-line coupled system.Wang Haixuan,Cheng Qingbing,Zhengzheng,Zheng Yonglian,Tao Junyu*（Hefei Food and Drug Inspection Center,Hefei 230088,China）Abstract:The article explores and establishes a method for determination of dissolution in vitro of Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills),and evaluates their dissolution status,so as to provide a basis for evaluation.The cumulative dissolution of hesperidin and ammonium glycyrrhizinate in Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills)is determined by dissolution-liquid chromatography,and the dissolution curves are drawn.The dissolution data are fitted by different data models to determine the best dissolution model for Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills).The results show that there is little difference in the dissolution behavior of the two target components in different batches of Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills)in artificial intestinal fluid and pH 6.8 phosphate buffer solution,and the Weibull model is the best.Huoxiang Zhengqi Pills(concentrated pills)in pH 6.8 phosphate buffer solution are more conducive to investigating the dissolution of target components.This study is accurate and reliable,and can be used for quality control of Huoxiang Zhengqi Pills(concentrated pills),and also provides data support for its quality consistency evaluation research and process analysis and improvement.Key words:Dissolution-liquid chromatography;Huoxiang Zhengqi pills(concentrated pills);Hesperidin;Ammonium glycyrrhizinate;Dissolution curve;Similarity factor基金项目：安徽省药品监督管理局科技创新项目（编号：AHYJ-KJ-202122）。2023 年第 4 期24No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation丸剂指原料药物与适宜的辅料制成球形或类球形的固体制剂，以其慢病缓治、峻药缓释、服用方便、易携带等特点成为古代重要制剂1。而依据其所含赋形剂的不同，又可将丸剂分为水丸、蜜丸、水蜜丸、浓缩丸、糊丸、蜡丸2。藿香正气丸是由广藿香、白术（炒）、陈皮、半夏（制）、厚朴（姜制）、甘草紫苏叶、白芷、茯苓、桔梗等13味中药提取制成的深棕色的浓缩丸,具有解表化湿、理气和中。用于外感风寒，内伤湿滞，头痛昏重，胸膈痞闷，脘腹胀痛，呕吐泄泻 3。目前，藿香正气丸（浓缩丸）的相关研究主要集中于含量测定4-6和临床研究等方面7-9，关于其体外释放和溶出行为少见相关报道研究。为更加全面研究藿香正气丸（浓缩丸）的体外释放和溶出行为，考察其生物利用度，以藿香正气丸（浓缩丸）中的有效成分橙皮苷和甘草苷为目标物，通过建立含量和溶出度的测定方法，并依据国家药品监督管理局颁布 普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则10,分别考察处方中橙皮和甘草的主要成分橙皮苷和甘草酸胺11，12的累计溶出量，考察不同批次在4种溶出介质中的溶出行为，做溶出曲线比较，拟合不同模型的溶出方程并进行评价，为藿香正气丸（浓缩丸）的质量评价提供一定的数据参考。1 材料与方法1.1 样品信息共收集到芜湖张恒春药业有限公司生产的藿香正气丸（浓缩丸）6批，见表1。表 藿香正气丸（浓缩丸）样品信息统计表编号批号有效期至生产企业A21060622024.05芜湖张恒春药业有限公司B21091412024.10芜湖张恒春药业有限公司C21022812024.03芜湖张恒春药业有限公司D22030512025.06芜湖张恒春药业有限公司E22032012025.06芜湖张恒春药业有限公司F22032612025.06芜湖张恒春药业有限公司1.2 对照品与试剂橙皮苷对照品，批号:110721-202019，用于含量测定，纯度为95.3%；甘草酸铵对照品，批号:110731-202122，用于含量测定，纯度为94.4%；对照品均来源于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈均为色谱纯，来源美国Fisher公司；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸、胰酶为分析纯；人工肠液为自制（取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1molL-1氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000mL）；色谱用水为超纯水机制备；实验用纯化水为自制。1.3 仪器XPE-205型分析用电子天平（瑞士梅特勒托利多科技有限公司）；自动在线溶出度液相联用系统（AOD-LC3100）:由UDT-812A-12型溶出仪（美国LOGAN公司）、WY 3100型高效液相色谱仪（安徽皖仪科技有限公司）和液相溶出联用平台组成；Milli-Q超纯水机（美国Millipore）。2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 混合对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品和甘草酸铵对照品各0.020g，分别置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含作为对照品贮备液，分别精密量取上述两种对照品贮备液适量置同一量瓶中，分别加甲醇依次稀释制成分别含橙皮苷为1.003、2.006、4.012、8.024、16.048gmL-1；甘草酸铵为0.508、1.016、1.524、2.032、3.048gmL-1的溶液作为标准曲线用对照品溶液。分别取橙皮苷和甘草酸胺对照品贮备液各2mL置同一100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为重复性试验用对照品溶液。2.1.2 供试品溶液的制备 取水、0.1molL-1盐酸溶液、人工肠液和pH 6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质，按溶出度与释放度测定方法第二法（桨法）（中国药典2020年版四部通则0931）操作，转速为100rmin-1，温度为37.0；取藿香正气丸（浓缩丸）8粒为一份，使用溶出-液相联用系统，分别在5、10、20、30、60、120、180分钟取样测试分析，每次取样5mL，同时补充同等温度和体积的溶出介质。2.1.3 含量测定用样品溶液的制备4 取藿香正气丸（浓缩丸）100粒，精密称定，求得平均粒重，研细，精密称取粉末1.0g，置具塞棕色三角瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声（功率1000W，2023 年第 4 期25No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation频率50kHz）60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。2.2 色谱条件色谱柱：C18柱（250mm4.6mm，5m）；以0.2%磷酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱：010min,A 95%；1030min，A 95%60%，3041min，A 60%95%，4150min，A 95%；流速为1.0mLmin-1；柱温为30；进样量为20L；检测波长：284nm，35分钟时切换至250nm。2.3 方法学考察2.3.1 专属性实验 取pH6.8磷酸盐缓冲液作为空白溶液，混合对照品溶液、含量测定用样品溶液和pH6.8磷酸盐缓冲液的样品溶出液按“2.2”项下方法测定，色谱图见图 1，空白溶液对测定无干扰。图1 HPLC 色谱图A.混合对照品溶液；B.含量测定用样品溶液；C.pH6.8磷酸盐缓冲液的样品溶出液；D.pH6.8磷酸盐缓冲液；E.橙皮苷对照品溶液；F.甘草酸铵对照品溶液2.3.2 线性关系的考察 取2.1.1项下标准曲线用对照品溶液，按2.2项下色谱条件进行测试分析，分别橙皮苷和甘草酸铵的浓度为（gmL-1）为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线并计算线性方程，橙皮苷和甘草酸铵的相关系数均大于0.995，表明该方法在考察的浓度范围内线性良好,结果见表2。表2 橙皮苷和甘草酸铵的线性方程和相关系数被测组分线性范围线性方程相关系数r橙皮苷1.003g16.048gy=9.5497x+1.76110.9995甘草酸铵0.508g3.048gy=19.834x+1.54860.99952023 年第 4 期26No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation2.3.3 仪器精密度试验 取“2.1.1”项下混合对照品溶液，连续进样分析6次，记录目标成分峰面积，测得橙皮苷和甘草酸铵峰面积的RSD分别为0.48%、0.57%，表明日内仪器精密度良好。连续测试5天，测得橙皮苷和甘草酸铵峰面积的RSD分别为0.72%、0.84%、表明5日间仪器精密度良好。2.3.4 重复性试验 取藿香正气丸（浓缩丸）（批号A）6份，按“2.1.2”项下方法制备4种溶出介质条件下的120分钟取样的溶液作为供试品溶液，测得橙皮苷和甘草酸铵峰面积的RSD分别为分别为2.79%、2.54%，表明该方法的重复性良好。2.3.5 稳定性试验 取“2.3.4”项下的4种溶出介质的供试品各1份，分别于0、2、4、8、12、24小时进样测定分析，测得橙皮苷和甘草酸铵峰面积的RSD分别为0.91%、0.75%，表明供试品24小时内稳定。2.3.6 加样回收率 精密称取藿香正气丸（浓缩丸）（批号A）细粉6份，每份0.50g，分别置50mL量瓶中，每份中分别加入橙皮苷贮备液0.2mL和甘草酸铵贮备液0.4mL，加甲醇30mL超声30分钟，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀；每份分别精密量取4组5mL分别置25mL量瓶中，分别用水、0.1molL-1盐酸溶液、人工肠液和pH6.8磷酸盐溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液按“2.2”项下色谱条件进样测试分析，记录橙皮苷和甘草酸铵的峰面积，分别计算回收率及RSD，结果见表3。表3 加样回收率结果(n=6)被测成分溶出介质样品含量（mg）加标量（mg）测定值（mg）平均回收率（%）RSD（%）橙皮苷水0.13450.20060.332198.11.10.1molL-1盐酸溶液0.13450.20060.328096.02.4人工肠液0.13450.20060.3408102.41.7pH6.8磷酸盐缓冲液0.13450.20060.3397101.91.2甘草酸铵水0.40260.40640.779393.51.90.1molL-1盐酸溶液0.40260.40640.771991.72.6人工肠液0.40260.40640.792196.71.6pH6.8磷酸盐缓冲液0.40260.40640.783594.61.42.3.7 含量的测定 按“2.1.3”项下方法制备6个批次的样品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测试分析，记录橙皮苷和甘草酸铵的峰面积，分别计算含量，结果见表4。表4 含量测定结果mg/g编号橙皮苷甘草酸铵A0.26580.7954B0.28940.6513C0.36870.5847D0.23830.6092E0.39150.4288F0.42060.71412.4 溶出行为曲线的绘制与评价参照相关文献13 指导原则 按“2.1”和“2.2”项下方法制备6批供试品溶液并测试分析，计算出各时间段的累计溶出量。以溶出时间（min）为横坐标，目标成分累计溶出量（%）为纵坐标，绘制两种被测目标成分的溶出曲线，见图2、图3。图2 藿香正气丸中橙皮苷在4种溶出介质中的溶出曲线2023 年第 4 期27No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation2.5 溶出模型拟合以批号为A的样品作进一步研究，采用模型依赖法零级释放方程F=k0(t-Tlag)、一级释放方程F=1001-Exp-k1(t-Tlag)、微波尔方程F=1001-Exp-(t-Ti)/、希古契扩散方程F=kH(t-Tlag)0.5、克罗斯迈耶佩帕斯方程F=kKP(t-Tlag)n、佩帕斯方程F=k1tm+k2t2m分别对两种被测成分在pH6.8磷酸盐缓冲液中释放行为进行拟合，结果见表5，各指标的拟合数据稍有差异，但是各拟合的趋势基本一致，主要以微波尔方程的数据模型最佳。图3 藿香正气丸中甘草酸铵在4种溶出介质中的溶出曲线表5 pH6.8磷酸盐缓冲液中释放模型拟合被测组分模型拟合方程相关系数r橙皮苷零级释放方程F=0.403（t-95.722）0.7065一级释放方程F=1001-Exp-0.048(t-3.674)0.9865微波尔方程F=1001-Exp-(t-2.362)1.219/79.6050.9953希古契扩散方程F=8.456(t+4.835)0.50.7965克罗斯迈耶佩帕斯方程F=39.137(t-8.317)0.190.9831佩帕斯方程F=6.881t0.718-0.121t1.4360.8949甘草酸铵零级释放方程F=0.404（t-18.822）0.7041一级释放方程F=1001-Exp-0.052(t-3.478)0.9881微波尔方程F=1001-Exp-(t-1.131)1.361/191.0580.9957希古契扩散方程F=8.573(t+6.575)0.50.7901克罗斯迈耶佩帕斯方程F=36.786(t-7.482)0.2030.9200佩帕斯方程F=7.5t0.704-0.139t1.4080.9499注：F-累计溶出量；t为累计溶出时间3 讨论由于藿香正气丸（浓缩丸）成分复杂，在pH6.8磷酸盐缓冲液中溶出成分较多，以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相组成，进行梯度洗脱，最终达到良好的分离效果；考虑到浓缩丸的溶散特性，对溶出转速进行选择，依据指导原则 的要求，确定转速为100rpm；参考说明书中的用法用量确定每份溶出的样品取样量为8丸。实验发现以水和0.1molL-1盐酸溶液时为溶出介质时，目标成分体外溶出行为存在明显差异；以pH6.8磷酸盐缓冲液及人工肠液为溶出介质时，对橙皮苷和甘草酸铵体外释放效果良好，无显著差异；各种溶出介质在120 min溶出达到平衡，两种指标成分的溶出呈现同步性。目前代表药物生物等效性的评价试验主要采用溶出度检测和生物效价评价14，丸剂辅料的性质影响药物的释放崩解1，同时基于原药材不同产地、不同种植环境，含量有较大的差异12，使制剂有效成分含量及溶出过程有所差异，需要分别测定每批次目标成分的含量来评价其溶出度。为保证批次间的藿香正气丸（浓缩丸）的生物等效性，本方法对藿香正气丸（浓缩丸）中两种目标成分的溶出曲线进行研究，探索使用体外溶出实验来评价中药传统丸剂的质量，以求更加全面、客观、准确地反映了该制剂的体外溶出情况，为其质量控制、工艺改进及质量一致性评价提供数据支撑。参考文献1 刘立伟,董毅智,李玉坤，等.传统丸剂历史沿革、科学内涵及丸剂二次开发的发展构想J.北京中医药大学学报，2022,245(6):571-577.2023 年第 4 期28No.4 Jul.2023分析仪器Analytical Instrumentation2 毛雪,赵鑫,郭艳.蜜丸的制备工艺及质量标准研究J.检验医学与临床，2019,24(16):3710-3712.3 国家药典委员会.卫生部颁药品标准中药成方制剂第 7 册 S.北京:人民卫生出版社,1998：205.4 余俊,赵磊,徐正洋，等.高效液相色谱法同时测定藿香正气丸(浓缩丸)中甘草苷、橙皮苷含量J.中国药品标准，2022,23(6):633-637.5 罗吉,林佩贤.HPLC法测定加味藿香正气丸(大蜜丸)中橙皮苷的含量J.广东化工，2021,48(11):147-148.6 张永志,佟玲,李东翔，等.UPLC法同时测定藿香正气滴丸中7个化学成分J.沈阳药科大学学报，2015,32(11):848-881.7 李文华.藿香正气丸治疗急性肠胃炎的临床疗效J.中国卫生标准管理，2020,11(20):131-133.8 段佩佩,麦中娴,严海芳，等.藿香正气丸联合诺氟沙星治疗急性胃肠炎的效果观察J.临床医学工程.2021,28(2):171-172.9 宋业朋.藿香正气丸联合磷酸铝凝胶治疗急性肠胃炎的临床疗效及对降低炎症反应的影响J.中国现代药物应用，2022,16(6):203-205.10 国家食品药品监督管理总局.普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则EB/OL.2015-02-05.https:/ 温宝莹,韩雪,张秀权，等.广陈皮黄酮类主成分分析及其代谢转化研究J.药学学报，2023,58(01):193-200.12 吴涓江,罗昱,罗江溢,等.基于HPLC特征图谱及主要成分含量等方法对不同产地甘草进行质量评价J.湖南中医杂志,2022,38(9):175-192.13 Yong Zhang,Meirong Huo,Jianping Zhou,et.DDSolver:An Add-In Program for Modeling and Comparison of Drug Dissolution ProfilesJ.The AAPS journal,2010,12(3):263-271 DDSolver:An Add-In Program for Modeling and Comparison of Drug Dissolution ProfilesJ.The AAPS Journal,2010,12(3):263-271.14 赵桉熠,倪凤燕,陈彭月，等.以一致性为核心的中成药质量研究现状及优质评价新模式探讨J.中国中药杂志,2020,45(15):3740-3748.收稿日期：2023-02-20作者简介：汪海宣，男，本科，副主任药师，主要从事药品检验与质量分析，Email：。*通讯作者：陶俊钰，女，主任药师，主要从事药品检验与质量分析，Email：。