气相色谱法药专家讲座.pptx

11-5分离条件选择分离条件选择 单独用柱效或选择性单独用柱效或选择性不能真实反应组分在不能真实反应组分在色谱柱中分离情况色谱柱中分离情况综合性指标综合性指标分离度分离度R一、色谱柱总分离效能指标一、色谱柱总分离效能指标分离度分离度Resolution,R气相色谱法药专家讲座第1页不一样分离度时色谱峰分离程度不一样分离度时色谱峰分离程度气相色谱法药专家讲座第2页概率概率P（%）u值值置信区置信区间间68.31=x95.52=x299.73=x3R=1 4分离分离 95.4%（tR2）R=1.5 6分离分离 99.7%（tR3）Rl.5 完全分离完全分离气相色谱法药专家讲座第3页假设假设k1=k2=k，W1=W2W二、色谱基本分离方程式二、色谱基本分离方程式气相色谱法药专家讲座第4页在实际应用中，往往用在实际应用中，往往用neff 代替代替n,处理上式可得处理上式可得柱效项柱效项柱选择项柱选择项柱容量项柱容量项气相色谱法药专家讲座第5页1.分离度与柱效关系分离度与柱效关系表表明明分分离离度度与与理理论论塔塔板板数数关关系系还还受热力学性质影响。受热力学性质影响。柱长柱长 R 即固定相一定，即固定相一定，但但 t R W n H 即制备一根性能优良柱子即制备一根性能优良柱子，并并在最优化条件下进行操作在最优化条件下进行操作 说明有效塔板数能正确地代表柱效能说明有效塔板数能正确地代表柱效能气相色谱法药专家讲座第6页2.分离度与分离度与选择性因子选择性因子关系关系R=0 这时这时n R=0 R显著显著 微小微小改变固定相改变固定相降低降低 Tc气相色谱法药专家讲座第7页3.分离度与容量因子关系分离度与容量因子关系假如设：假如设：当当k10时，随时，随k 增大，增大，R 增加是微乎其微。增加是微乎其微。普通取普通取k 为为210最宜！最宜！改变改变 改变改变Tc气相色谱法药专家讲座第8页4.分离度与分析时间关系分离度与分析时间关系设设当当k 在在25时，可在较短分析时时，可在较短分析时间，取得良好分离度间，取得良好分离度气相色谱法药专家讲座第9页怎样依据详细情况改进分离度？怎样依据详细情况改进分离度？n n 太小，两组分未分开太小，两组分未分开太小，两组分未分开太小，两组分未分开n n应改变固定相极性，降低柱温应改变固定相极性，降低柱温应改变固定相极性，降低柱温应改变固定相极性，降低柱温n nk k 太小，太小，太小，太小，n n 也太小，也太小，也太小，也太小，n n应增大固定液用量，降低柱温应增大固定液用量，降低柱温应增大固定液用量，降低柱温应增大固定液用量，降低柱温n nn n 太小，许多组分未分开太小，许多组分未分开太小，许多组分未分开太小，许多组分未分开n n应设法降低板高，提升柱效应设法降低板高，提升柱效应设法降低板高，提升柱效应设法降低板高，提升柱效怎样依据详细情况改进分离度？怎样依据详细情况改进分离度？气相色谱法药专家讲座第10页 在实际中，基本色谱分离方程式是很有用公式，它将在实际中，基本色谱分离方程式是很有用公式，它将 柱效、选择因子、分离度三者关系联络起来了，知道柱效、选择因子、分离度三者关系联络起来了，知道 其中两个指标，就可计算出第三个指标。其中两个指标，就可计算出第三个指标。5.基本色谱分离方程式应用基本色谱分离方程式应用气相色谱法药专家讲座第11页例例11-1.在采取相同固定液毛细管柱和填充柱上分离同一在采取相同固定液毛细管柱和填充柱上分离同一样品，欲到达相同分离度，为何毛细管柱比填充柱要求样品，欲到达相同分离度，为何毛细管柱比填充柱要求更高理论塔板数？更高理论塔板数？答：毛细管柱与填充柱本质区分之一是毛细管柱相比远高答：毛细管柱与填充柱本质区分之一是毛细管柱相比远高于填充柱相比。依据：于填充柱相比。依据：和和有有 所以，当所以，当、K 一定一定时时，在一定温度下，分离相同物，在一定温度下，分离相同物质质，到达相同分离度，因到达相同分离度，因为为毛毛细细管柱高管柱高值值，所需要理，所需要理论论塔板数塔板数比填充柱多。比填充柱多。气相色谱法药专家讲座第12页 例例11-2.有有一一根根1m长长柱柱子子，分分离离组组分分1和和2得得到到以以下下列列图图色色谱谱图图。图图中中横横坐坐标标l为为统统计计笔笔走走纸纸距距离离。若若欲欲得得到到R=1.2分分离离度，有效塔板数应为多少？色谱柱要加到多长？度，有效塔板数应为多少？色谱柱要加到多长？气相色谱法药专家讲座第13页解：解：若使若使R=1.2,所需塔板数所需塔板数所需柱长为所需柱长为L=2788/13291m=2.25m气相色谱法药专家讲座第14页例例11-3.某某GC色色谱谱柱柱相相比比为为20，载载气气流流速速为为6.0cm/s，柱柱理理论论塔塔板板高高度度为为0.60mm，组组分分A和和B在在该该柱柱上上分分配配系系数数比比为为1.1，组组分分分分配配系系数数为为120。问问当当两两组组分分达达完完全全分分离离时时，组组分分容容量量因因子子为为多多少少？柱柱理理论论塔塔板板数数为为多多少少？柱长是多少？组分保留时间是多少？柱长是多少？组分保留时间是多少？解：解：气相色谱法药专家讲座第15页三、分离操作条件选择三、分离操作条件选择1载气及其流速选择载气及其流速选择 实际流速稍高于最正确流速实际流速稍高于最正确流速 载气选择还要考虑与载气选择还要考虑与检测器检测器相适应相适应气相色谱法药专家讲座第16页 例例11-4.已已知知一一色色谱谱柱柱在在某某温温度度下下速速率率方方程程A=0.08cm;B=0.65cm2/s;C=0.003s,求求最最正正确确线线速速度度u 和和最最小小塔塔板板高高H.解解:u最正确最正确(0.65/0.003)1/214.7cm/sH最小最小0.08+2(0.650.003)1/20.17cm气相色谱法药专家讲座第17页普通标准是：普通标准是：在使最难分离组分有尽可能好分离前提下，在使最难分离组分有尽可能好分离前提下，采取适当低柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。采取适当低柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。Tc C H B H Tc tR 2.柱温选择柱温选择在实际工作中普通依据样品沸点来选择柱温。在实际工作中普通依据样品沸点来选择柱温。注意：注意：柱温不能高于固定液最高使用温度柱温不能高于固定液最高使用温度气相色谱法药专家讲座第18页 程序升温程序升温宽沸程宽沸程样品样品(混合物中高沸点组分与混合物中高沸点组分与低沸点组分沸点之差称为低沸点组分沸点之差称为沸程沸程)程序升温好处：程序升温好处：改进分离效果改进分离效果 缩短分析周期缩短分析周期 改进峰形改进峰形 提升检测灵敏度提升检测灵敏度气相色谱法药专家讲座第19页11-6.分析方法分析方法一、定性分析一、定性分析利用保留值定性利用保留值定性利用两谱联用定性利用两谱联用定性 利用标准品直接对照定性利用标准品直接对照定性利用文件值对照进行定性利用文件值对照进行定性双柱定性双柱定性 利用相对保留值定性利用相对保留值定性 利用加入标准品增加峰高定性利用加入标准品增加峰高定性 气相色谱法药专家讲座第20页气相色谱法药专家讲座第21页峰高加入法峰高加入法进样量进样量“低低”气相色谱法药专家讲座第22页例例11-5.由乙酸正丁酯在阿皮松由乙酸正丁酯在阿皮松L柱上流出曲线柱上流出曲线（柱温（柱温100）测得调整保留距离为：乙酸正）测得调整保留距离为：乙酸正丁酯丁酯310.0mm，正庚烷，正庚烷174.0mm，正辛烷，正辛烷373.4mm，求乙酸正丁酯保留指数。，求乙酸正丁酯保留指数。解：解：已知已知n=7即乙酸正丁酯保留指数为即乙酸正丁酯保留指数为775.6。在与文件值对照时，。在与文件值对照时，一定要重视文件值试验条件，如固定液、柱温等。而一定要重视文件值试验条件，如固定液、柱温等。而且要用几个已知组分进行验证。且要用几个已知组分进行验证。气相色谱法药专家讲座第23页GC-MS整机外观图气相色谱法药专家讲座第24页二、定量分析二、定量分析（一）定量校正因子（一）定量校正因子相对校正因子相对校正因子（二）定量分析方法（二）定量分析方法1归一化法（归一化法（normalizationmethod）气相色谱法药专家讲座第25页2.外标法（外标法（externalstandardmethod）工作曲线法工作曲线法（外标一点法）（外标一点法）3.内标法（内标法（internalstandardmethod）内标物内标物 关键是按要求选择关键是按要求选择4.内标标准曲线法内标标准曲线法(internalstandardandstandardcurvemethod)（内标对照法）（内标对照法）气相色谱法药专家讲座第26页1.气相色谱是以气相色谱是以 为流动相，流动相又称为流动相，流动相又称 ，按操作形，按操作形式属于式属于 色谱，分离机理是基于物质在色谱，分离机理是基于物质在 和和 两相两相间间 不一样而到达分离。不一样而到达分离。2.在色谱分析中，用两峰间距离来表示色谱柱在色谱分析中，用两峰间距离来表示色谱柱 ，两峰间，两峰间距离越距离越 则色谱柱则色谱柱 越好，组分在固液两相上越好，组分在固液两相上 性质相差越大。性质相差越大。3.在气相色谱中，可适当提升在气相色谱中，可适当提升 ，加大，加大 ，减小，减小 ，使用，使用 气为载气方法到达快速，高效分离目标。气为载气方法到达快速，高效分离目标。选择选择1.在下述气相色在下述气相色谱谱定性方法中，最可靠是（定性方法中，最可靠是（）A.用文件用文件值对值对照定性照定性B.比比较较已知物与未知物保留已知物与未知物保留值值定性定性C.把已知物加入待把已知物加入待测组测组分中，利用峰高增加方法定性分中，利用峰高增加方法定性D.改改变变色色谱谱柱柱温柱柱温进进行定性行定性E.用两根极性完全不一用两根极性完全不一样样柱子定性柱子定性填充填充气相色谱法药专家讲座第27页选择选择1.气相色谱分析中，在色谱柱子选定以后，首先考虑色谱条气相色谱分析中，在色谱柱子选定以后，首先考虑色谱条件是（件是（）A.载气流速载气流速B.柱温柱温C.进样量进样量2.在气相色谱分析中，为了测定以下组分，宜选取哪种检测在气相色谱分析中，为了测定以下组分，宜选取哪种检测器？器？（1）中药材中残留含氯农药；（）中药材中残留含氯农药；（）（2）丙酮中微量水；（）丙酮中微量水；（）（3）化学药品中残留微量乙醇。（）化学药品中残留微量乙醇。（）A热导检测器热导检测器B氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器C电子捕捉检测器电子捕捉检测器气相色谱法药专家讲座第28页