HDGF、Matriptase和β-catenin蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达.pdf

695GuangdongMedical JournalJun.2023,Vol.44,No.6广东医学2023年6 月第44卷第6 期HDGF、M a t r i p t a s e 和c a t e n i n 蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达*康朋朋，张红？衡水市人民医院病理科，2 检验科（河北衡水0 530 0 0）【摘要】目的研究肝癌衍生生长因子（HDGF）、跨膜丝氨酸蛋白酶（Matriptase）和连环蛋白（-catenin)蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达,探讨三者在子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用、可能机制及其相关性，并分析三种蛋白与患者临床病理资料之间的关系。方法去利用免疫组织化学方法检测HDGF、Matriptase和-catenin蛋白在116 例子宫内膜样腺癌组织及10 2 例增殖期子宫内膜组织中的表达，并运用SPSS19.0版软件处理数据，分析其是否有统计学意义及三者的相关性。结果果HDGF、M a t r i p t a s e 和-cate-nin蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达率分别为92.2%（10 7/116）8 4.5%（98/116）、8 7.9%（10 2/116），而在增殖期子宫内膜组织中的表达率分别为2 4.5%（2 5/10 2）、31.4%（32/10 2）、10.8%（10/10 2），差异有统计学意义（P0.05）;其中HDGF、M a t r i p t a s e 的表达与子宫内膜样腺癌患者的脉管侵犯、淋巴结转移相关（P0.05）;-catenin的表达与子宫内膜样腺癌患者的淋巴结转移相关（P0.05）；HDGF与Matriptase呈正相关（r=0.588,P=0.001）;H D G F与-catenin呈正相关（r=0.189,P=0.042）；Matriptase与-catenin呈正相关（r=0.207,P=0.026）。结论HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin在子宫内膜样腺癌中的高表达状态及三者之间的正相关关系促进了子宫内膜样腺癌的发生与发展，并与脉管侵犯、淋巴结转移等临床病理资料相关,提示对HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin蛋白的检测有助于子宫内膜样腺癌的精准诊断及有效评估患者的预后，并为临床靶向治疗提供新的方向。【关键词】IHDGF；M a t r i p t a s e；-catenin；子宫内膜样腺癌；免疫组织化学；淋巴结转移【中图分类号】R711.7;R364【文献标志码】AD0I:10.13820/ki.gdyx.20224870The expression of HDGF,Matriptase and -catenin in endometrial carcinoma.KANG Peng-peng*,ZHANGHong.*Department of Pathology,Hengshui Peoples Hospital,Hengshui 053000,Hebei,ChinaAbstractObjective To investigate the expression of HDGF,Matriptase and -catenin in endometrial carci-noma and proliferative endometrium tissues;and to explore their roles,possible mechanisms and correlation in the devel-opment of endometrial carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of HDGF,Matriptase and -catenin in 116 endometrial carcinoma tissues and 102 proliferative endometrium tissues,and SPSS19.0software was used to process the data.Results The expression rates of HDGF,Matriptase and -catenin in endometrialcarcinoma tissues were 92.2%(107/116),84.5%(98/116)and 87.9%(102/116),respectively;while in prolifera-tive endometrium tissues were 24.5%(25/102),31.4%(32/102)and 10.8%（10/10 2),r e s p e c t i v e l y;w h i l e t h edifferences were statistically significant(P0.05).The expression of HDGF and Matriptase were correlated with vascularinvasion and lymph node metastasis,but not with age,histological grade,depth of invasion or clinical stage.The expres-sion of -catenin was correlated with lymph node metastasis,but not with age,vascular invasion,histological grade,depth of invasion or clinical stage.HDGF was positively correlated with Matriptase(r=0.588,P=0.001).HDCF waspositively correlated with -catenin(r=0.189,P=0.042).Matriptase was positively correlated with -catenin(r=0.207,P=0.026).Conclusion The high expression of HDGF,Matriptase and -catenin in endometrial carcinomatissues and their positive correlation promote the occurrence and development of endometrial carcinoma,and are correlatedto vascular invasion and lymph node metastasis;suggesting that the detection of HDGF,Matriptase and -catenin may behelpful to the accurate diagnosis of endometrial carcinoma and to evaluate the prognosis of patients.Key wordsHDGF;matriptase;-catenin;endometrial carcinoma;immunohistochemistry;lymph node metas-tasis*基金项目：河北省医学科学研究重点课题计划(2 0 18 1599)696Guangdong Medical JournalJun.2023,Vol.44,No.6广东医学2023年6 月第44卷第6 期子宫内膜样腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，且发病率逐年上升，与精神心理压力、作息规律及饮食结构有一定的关系。高发年龄大多在55岁左右,此时多处于围绝经期，激素水平的紊乱是可能的诱发因素。子宫内膜在雌孕激素的交替刺激下剥脱、重生，一旦激素水平异常，就会导致子宫内膜增生紊乱,若长期处于雌激素刺激下，子宫内膜会由增殖期子宫内膜、单纯增生性子宫内膜、复杂增生性子宫内膜、子宫内膜癌变的发展过程进展为子宫内膜癌。子宫内膜癌中最常见的类型是子宫内膜样腺癌,关于子宫内膜样腺癌的研究众多，包括各种基因蛋白的检测，本研究拟联合检测肝癌衍生生长因子（H D G F）、跨膜丝氨酸蛋白酶（Matriptase）和连环蛋白（-catenin）三种蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达,推测其相互作用机制,分析其与患者临床病理资料之间的关系及其相关性，从而达到对子宫内膜样腺癌患者的精准诊断及预后评估。1资料与方法1.1一般资料收集2 0 18 年1月至2 0 19年1月在我院行门诊刮宫及手术切除，并符合标准的子宫内膜样腺癌组织标本116 例（子宫内膜样腺癌组）和增殖期子宫内膜组织标本10 2 例（增殖期子宫内膜组）。初始选取的子宫内膜样腺癌组织标本共150例，其中不能进行实验检测的标本共34例，包括同时合并其他恶性肿瘤者8 例，子宫内膜浆液性癌10 例，手术前接受过放、化疗者7 例，家属不同意患者的蜡块标本进行实验操作9例，剩余116 例符合标准；初始选取的增殖期子宫内膜组织标本共132例，其中组织标本过小者10 例，合并子宫内膜息肉者9例,合并单纯性增生者7 例，合并其他肿瘤者4例，剩余10 2 例符合标准；以上选取的符合标准的病例均让家属签署了实验操作知情同意书。研究经衡水市人民医院医学伦理委员会审核通过(2 0 2 30 8 1)1.2试剂来源HDCF、M a t r i p t a s e 抗体购自美国Invitrogen公司，c a t e n i n 抗体购自北京中杉公司，SP试剂盒购自北京中杉公司。1.3免疫组织化学检测将符合标准的子宫内膜样腺癌及增殖期子宫内膜石蜡标本进行切片，厚度均为4m，玻片在6 0 烤台烤片30 min，进行二甲苯脱蜡、酒精梯度脱水各5min,PBS冲洗3次，每次5min。将玻片放入抗原修复液中进行抗原修复，PBS冲洗3次，每次5min；滴加一抗：HDGF抗体（1:10 0），M a t r i p t a s e 抗体（1:150），-catenin抗体（1:50），c-M y c 抗体（1:50），4冰箱过夜；次日取出进行PBS冲洗3次，每次5min；滴加二抗，37 温箱孵育40 min，取出进行PBS冲洗3次，每次5min；DAB染色1min，自来水冲洗3min；苏木精复染10s，自来水冲洗；进行梯度酒精及二甲苯浸泡各5min,中性树胶封片。免疫组织化学的结果由经验丰富的两名主治及以上医师进行判读，随机选取5个高倍视野，每个视野计数10 0 个细胞，阳性细胞数 50%评分为3；染色强度：浅黄色评分为1,棕黄色评分为2,棕褐色评分为3。最终的免疫组化结果评分为二者的乘机,将3分设为阴性表达，3分设为阳性表达。1.4统计学方法采用SPSS19.0版软件进行数据结果分析。计数资料比较采用检验，相关性分析采用Spearman相关性分析,P0.05为差异有统计学意义。2结果2.11HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin在子宫内膜样腺癌及增殖期子宫内膜组织中的表达HDGF染色主要定位于细胞核，在子宫内膜样腺癌组中的表达（10 7/116，92.2%）高于增殖期子宫内膜组（2 5/102,24.5%）；M a t r i p t a s e 染色主要定位于细胞浆，在子宫内膜样腺癌组中的表达（98/116,8 4.5%）高于增殖期子宫内膜组（32/10 2,31.4%）;-catenin染色主要定位于细胞膜，在子宫内膜样腺癌组织中的表达（10 2/116，8 7.9%）高于增殖期子宫内膜组（10/10 2，10.8%），差异均有统计学意义（P0.05）。见图1、表1。2.2HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin 的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系HDGF 和Matriptase 的表达与子宫内膜样腺癌患者的脉管侵犯、淋巴结转移相关（P0.05）;-catenin的表达与子宫内膜样腺癌患者的淋巴结转移相关（P0.05）。见表2。2.3HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin三者之间的相关性HDGF与Matriptase 呈正相关(r=0.588,P=0.001);HDGF与-catenin呈正相关（r=0.189,P=0.042);Matriptase 与-catenin 呈正相关(r=0.207,P=0.026)。见表3。3讨论子宫内膜样腺癌是女性常见的妇科恶性肿瘤，其发病率仅次于乳腺癌。子宫内膜样腺癌的发生与长期雌激素的刺激有一定关系，包括月经初潮过早、.697Guangdong Medical JournalJun.2023,Vol.44,No.6广东医学2023年6 月第44卷第6 期BCDF注：A:HDGF在增殖期子宫内膜组中的表达;B：H D CF在子宫内膜样腺癌组织中的表达；C:Matriptase在增殖期子宫内膜组中的表达;D：Matriptase在子宫内膜样腺癌组织中的表达;E:-catenin在增殖期子宫内膜组中的表达;F:-catenin在子宫内膜样腺癌组织中的表达图1HDCF、M a t r i p t a s e 和-catenin在子宫内膜样腺癌及增殖期子宫内膜组织中的表达（SP400）表1HDCF、M a t r i p t a s e 和-catenin在子宫内膜样腺癌及增殖期子宫内膜组织中的表达例HDGFMatriptase-catenin组别+P值+P值+P值子宫内膜样腺癌组11610790.00098180.000102140.000增殖期子宫内膜组102257732701092绝经期延迟、不孕以及多囊卵巢综合征等，其他危险因素包括年龄、肥胖、高血压、糖尿病和相关遗传性疾病等。子宫内膜增生是子宫内膜样腺癌的前驱病变,与单纯性增生或复杂性增生相比,非典型增生癌变的概率更高，非典型增生患者中约有30%40%发展为子宫内膜样腺癌。过去子宫内膜样腺癌的治疗以手术治疗为主，化疗为辅,近年来越来越多的基因被认知，分子靶向治疗成为了子宫内膜样腺癌患者的福音。本文研究了HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin三个指标在子宫内膜样腺癌患者中的表达，为临床靶向治疗提供方向。HDGF是一种肝素结合蛋白,最初是从Huh-7肝癌细胞的培养基中纯化出来的1,可以促进血管的增生。HDGF在多种肿瘤中均呈高表达状态,包括胆囊癌2 、胆管癌3、肺癌4。研究表明,DDX5通过调节HDGF诱导-catenin核蓄积并激活其下游效应物c-Myc来促进非小细胞肺癌中细胞增殖和肿瘤发生5,并且在非小细胞肺癌患者中,应用抗HDGF抗体治疗可以增强吉西他滨和贝伐单抗的抗肿瘤活性。沉默HDGF可以逆转子宫内膜样698GuangdongMedical JournalJun.2023,Vol.44,No.6广东医学2023年6 月第44卷第6 期表2HDCF、M a t r i p t a s e 和-catenin的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系例HDGFMatriptase-catenin临床病理参数n+一P值+一P值+一P值年龄50岁343220.6272860.6832860.23550岁827577012748组织学分级高-中分化857780.27071140.6397690.418低分化31301274265临床分期I、期777160.9856890.1106980.435I、I V 期39363309336浸润肌层深度1/2肌层797450.40069100.21469100.7761/2肌层37334298334脉管侵犯有221660.0001480.0031750.088无949138410859淋巴结转移有201640.0241370.0081370.001无969158511897表3HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin三者之间的相关性Matriptase-catenin+一值P值+一值P值HDGF+97100.5880.00196110.1890.0421863-catenin+89130.2070.026一95腺癌细胞的侵袭和转移，敲低HDGF会使子宫内膜样腺癌细胞中c a t e n i n 的表达及其下游信号失活6 ,这些数据表明HDCF可以通过-catenin及其下游信号促进子宫内膜样腺癌的侵袭与转移，并且是预后不良的独立因素。Matriptase，在新生儿的发育、组织学稳态和肿瘤进展中起着至关重要的作用7 。在酸性的细胞外微环境（ECM）中，Matriptase的自我激活作用大大增强8-9 活化的Matriptase可以激发多种信号因子，包括尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）,H D G F和蛋白酶激活受体2（PAR-2)10,并与乳腺癌,前列腺癌,卵巢癌,子宫癌,宫颈癌,结肠和皮肤癌的进展相关 ,表明Matriptase可能是与癌症增殖和转移有关的许多其他信号途径的触发因素。研究显示，在神经干细胞与脑内皮细胞之间的相互作用中，MatriptaseM CA M 信号通路起到了非常重要的作用。神经干细胞表面的Matriptase通过与脑内皮细胞表面的MCAM结合，启动了p38MAPK系列途径，活化的p38MAPK和下游的-catenin均可诱导包括IL-6在内的趋化因子的表达12 ,从而促进相邻的神经干细胞分化为神经元13-catenin在许多生物的发育和体内平衡过程中发挥着至关重要的作用，是钙黏着蛋白的黏附连接中必不可少的结构成分，也是Wnt信号传导的因子。-catenin结构和信号特性的不平衡通常会导致疾病和癌症的发生。在没有Wnt信号刺激的情况下，-catenin通常维持在较低水平。Wnt信号刺激后,-catenin 降解的减少导致-catenin 积累增多,并启动其靶基因的转录,包括c-Myc、M M P-7、VEGF和MET等，这些靶基因高度参与许多蛋白质的调控,与维持细胞的正常功能有关，而过度激活后，就会引起细胞增殖的失控14。因此必须严格控制-catenin降解与激活之间的平衡,该途径的失调在癌症的进展以及可能的癌症发展中起重要作用。本研究显示,HDGF、M a t r i p t a s e 和-catenin子编辑：王冰）699Guangdong Medical JournalJun.2023,Vol.44,No.6广东医学2023年6 月第44卷第6 期宫内膜样腺癌组中均呈高表达状态，显著高于其在增殖期子宫内膜组中的表达;HDGF和Matriptase的表达与子宫内膜样腺癌患者的脉管侵犯、淋巴结转移相关,-catenin的表达与子宫内膜样腺癌患者的淋巴结转移相关；且HDGF、M a t r i p t a s e 和-cate-nin在子宫内膜样腺癌组织中的表达均呈正相关。根据相关研究及本文研究推测，子宫内膜样腺癌患者自身的微环境改变后，Matriptase活化增强，活化的Matriptase可以激活HDGF,HDCF通过减少-catenin的降解，增加-catenin的蓄积，进而激活下游的靶基因，促进子宫内膜样腺癌的发生、发展，并增强子宫内膜样腺癌的侵袭与转移。这些结果证实HDGF,Matriptase，和-catenin可能形成一个信号通路，通过促进子宫内膜癌的侵袭,转移和化疗耐药性来促进子宫内膜癌的发生和发展。迄今为止，已经开发了多种HDCF、M a t r i p t a s e的抑制剂作为潜在的抗癌剂，包括小分子抑制剂,基于肽的抑制剂和单克隆抗体。Matriptase联合HDGF靶向治疗可能是治疗子宫内膜样腺癌的有效治疗选择。由于时间、精力有限，本次实验研究的标本量偏少,虽然形成了一定的研究结果，但仍存在局限性，之后会加大实验标本，提升研究的准确度及可靠性。利益相关声明：本文所有作者不存在利益冲突。作者贡献说明：康朋朋负责设计试验、实施研究、起草论文、采集数据、统计分析、论文撰写；张红负责文献检索、采集数据、原始结果的整理与分析、审阅论文内容、修订论文。参考文献1Nakamura H,Kambe H,Egawa T,et al.Partial purification andcharacterization of human hepatoma-derived growth factor J.Clin Chim Acta,1989,183(3):273-284.2Li M,Shen J,Wu X,et al.Downregulated expression of hepato-ma-derived growth factor（H D G F)r e d u c e s g a l l b l a d d e r c a n c e rcell proliferation and invasionJ.Med Oncol,2013,30(2):587.3Liu Y,Sun J,Yang G,et al.Downregulation of the expression ofHDCF attenuates malignant biological behaviors of hilar cholangio-carcinoma cellsJ.Mol Med Rep,2015，12(3)：47 13-4719.4Fu Q,Song X,Liu Z,et al.miRomics and proteomics reveal amiR-296-3p/PRKCA/FAK/Ras/c-Myc feedback loop modu-lated by HDGF/DDX5/-catenin complex in lung adenocarcino-maJ.Clin Cancer Res,2017,23(20):6336-6350.5Guturi KK,Sarkar M,Bhowmik A,et al.DEAD-box proteinp68 is regulated by beta-catenin/transcription factor 4 to main-tain a positive feedback loop in control of breast cancer progressionJ.Breast Cancer Res,2014,16(6):496.6Tang J,Shi H,Li H,et al.The interaction of hepatoma-derivedgrowth factor and beta-catenin promotes tumorigenesis of synovialsarcomaJ.Tumour Biol,2016,37(8):10287-10301.7Tanabe LM,List K.The role of type II transmembrane serine pro-tease-mediated signaling in cancerJ.FEBS J,2017,284(10):1421-1436.8Ko CJ,Huang CC,Lin HY,et al.Androgen-induced TMPRSS2activates matriptase and promotes extracellular matrix degradation,prostate cancer cell invasion,tumor growth,and metastasis J.Cancer Res,2015,75(14):2949-2960.9Cheng TS,Chen WC,Lin YY,et al.Curcumin-targeting peri-cellular serine protease matriptase role in suppression of prostatecancer cell invasion,tumor growth,and metastasis J.CancerPrev Res(Phila),2013,6(5):495-505.10 Tseng IC,Xu H,Chou FP,et al.Matriptase activation,an earlycellular response to acidosisJ.J Biol Chem,2010,285(5):32613270.11 Uhland K.Matriptase and its putative role in cancerJ.Cell MolLife Sci,2006,63(24):2968-2978.12 Tung HH,Lee SL.Neural Transmembrane Protease and Endothe-lial Gs Protein Activation in Cell Contact-dependent Signaling be-tween Neural Stem/Progenitor Cells and Brain Endothelial CellsJ.J Biol Chem,2012,287(27):22497-22508.13 Ottone C,Krusche B,Whitbyet A,et al.Direct cell-cell con-tact with the vascular niche maintains quiescent neural stem cellsJ.Nat Cell Biol,2014,16(11):1045-1056.14 Habib MZ,Ebeid MA,Faramawy YE,et al.Effects of lithiumon cytokine neuro-inflammatory mediators,Wnt/-catenin sig-naling and microglial activation in the hippocampus of chronic mildstress-exposed ratsJ.Toxicol Appl Pharmacol,2020,399:115073.（收稿日期：2 0 2 2-11-12