TB-RNA、TB-DNA、基因芯片技术检测BALF对儿童涂阴肺结核的早期诊断价值.pdf

.高文龙 林和 刘小宁 等.贝叶斯 回归方法评估患病率比的研究.中华流行病学杂志 ():.():.姜乾金 黄丽 卢抗生 等.心理应激:应对的分类与心身健康.中国心理卫生杂志 ():.王淑平 田艳茹 耿藏缺 等.耐药肺结核患者的心理行为特征及应对方式分析.河北医药 ():.杨秀琏 谢育红 徐琦 等.社区肺结核病人应对方式的调查研究.国际护理学杂志 ():.:.收稿日期:、基因芯片技术检测 对儿童涂阴肺结核的早期诊断价值严红梅 阮琰 陈晓红 毛文捷 陈芬 【摘要】目的 评估结核菌核糖核酸()、结核菌脱氧核糖核酸()、基因芯片技术检测支气管肺泡灌洗液()对儿童涂阴肺结核的早期诊断价值 方法 收集 年 月至 年 月于福建省福州肺科医院住院的 例 岁疑似涂阴肺结核患儿的 进行、基因芯片检测分析三种检测方法的诊断效能 结果诊断为肺结核 例非肺结核 例 以临床综合诊断()为金标准三种方法单独检测及联合检测 的敏感度分别为 、特异度分别为 、曲线下面积()分别为 、单独检测的敏感度与培养法()比较差异均无统计学意义(分别为 均 )联合检测的敏感度高于培养法及单独检测差异均有统计学意义(分别为 均 )三种方法检测的敏感度 明显高于痰差异均有统计学意义(分别为 均 )(:).(:).().().【】年全球新增儿童结核病 万占总病例数的 而我国 年上报的儿童病例仅占考虑存在严重的漏诊 肺结核确诊的金标准为病原学检测阳性抗酸杆菌()涂片阳性率低结核菌培养耗时长(周)均达不到临床早期、快速诊断的要求 儿童结核分枝杆菌()载菌量低自主排痰能力较差痰 涂片及培养常阴性 超过 的涂阴肺结核患者因未得到及时诊断治疗而预后不良 为有效降低儿童结核病的发病率和死亡率需寻找快速有效诊断肺结核的方法 的检出率以 最高 进行分子生物学检测的研究多集中在成人儿童的研究数据较缺乏 本研究利用、基因芯片三种分子生物学方法检测临床疑似涂阴肺结核患儿的 评估其诊断价值资料与方法 一、研究对象 选取 年 月至 年 月于福建省福州肺科医院住院的 例 岁疑似涂阴肺结核患儿作为研究对象其中男 例()女 例()年龄 月 岁平均年龄为()岁 以 临 床 综 合 诊 断()为 金 标 准 诊 断 肺 结 核 例()非肺结核 例其中细菌性肺炎 例()、支原体肺炎 例()、隐球菌肺炎 例()、支 气 管 扩 张 伴 感 染 例()、肺脓肿 例()、陈旧性肺结核并细菌感染及肺泡蛋白沉积症各 例(各 )、巨细胞病毒肺炎 例()纳入标准:经影像学检查患儿肺部存在阴影临床考虑疑似肺结核年龄 两周或伴咯血、发育迟缓等肺结核可疑症状 影像学检查提示肺部有疑似结核的改变 经抗结核治疗有效 排除其他肺部疾病 肺结核排除标准:有其他病原学(如细菌、病毒、支原体、真菌等)或病理学的依据 未经抗结核治疗临床症状好转复查影像学资料提示肺部病灶吸收 三、临床检测方法临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 所有患儿入院后均行痰送检(三次 涂片、基因芯片)、结核菌素试验(试验)、结核感染 细胞斑点试验、血结核抗体等及完善血常规、凝血全套、心电图等支气管镜术前检查在入院的 天内行支气管镜检查并收集进行 结核菌培养、和基因芯片检测(仪器或试剂盒分别购自美国 公司、中国上海仁度生物科技有限公司、广州达安基因股份有限公司、成都博奥晶芯生物科技有限公司)根据仪器或试剂盒的说明书进行操作 四、统计学方法 使用 软件进行数据整理、统计分析计数资料以百分比表示采用卡方检验进行两组间比较 表示差异具有统计学意义一致性分析使用 检验 表示一致性差 表示一致性好 表示一致性极好绘制受试者工作特征()曲线计算 比较各方法的诊断效能 表示诊断价值较低 表示诊断价值极高结 果 一、以 为金标准三种方法检测 诊断涂阴肺结核的价值 以 为金标准 肺结核包含结核菌培养阳性及结核菌培养阴性病例 进行、和基因芯片检测三种方法单独检测及联合检测的敏感度分别为 (/)、(/)、(/)、(/)特异度分别为 (/)、(/)、(/)、(/)分别为、和基因芯片单独检测的敏感度与培养法敏感度 (/)比较差异均无统计学意义(分别为 均 )联合检测的敏感度较培养法及单独检测均高差异均有统计学意义(分 别 为 均 )联合检测的 均大于培养法及单独检测诊断价值较高(见表 和图)痰进行、和基因芯片检测三种方法检测的敏感度分别为 (/)、(/)、(/)特异度分别为 (/)、(/)、(/)分 别 为 、诊断价值较低(见表 和图)三种方法检测的敏感度 明显高于痰差异均有统计学意义(分别为 均 )二、以培养阳性为金标准三种方法检测 诊断涂阴肺结核的价值 以结核菌培养结果阳性为表 以 为金标准三种方法检测 例患儿的 诊断效能的比较检测方法肺结核(例)非肺结核(例)敏感度()特异度()()()()结核菌培养.(.)阳性()阴性().(.)阳性()阴性().(.)阳性()阴性()基因芯片.(.)阳性()阴性()三种方法联合.(.)阳性()阴性()临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期表 以 为金标准三种方法检测 例患儿的痰液诊断效能的比较检测方法肺结核(例)非肺结核(例)敏感度()特异度()()()().(.)阳性(例)阴性(例).(.)阳性(例)阴性(例)基因芯片.(.)阳性(例)阴性(例)图 以 为金标准三种方法诊断肺结核的 曲线:痰金标准诊断为非肺结核的患儿为阴性判断标准 进行三种方法单独检测及联合检测的敏感度分别为 (/)、(/)、(/)、(/)特异度分别为 (/)、(/)、(/)、(/)分别为 (/)、(/)、(/)、(/)分别为 (/)、(/)、(/)、(/)值分别为 、分别为 、单独检测与培养法均具有较好的一致性诊断价值较高联合检测与培养法具有极好的一致性诊断价值极高(见表 和图)讨 论 儿童结核病是儿童死亡的主要原因每年约占 岁以下儿童死亡人数的 左右 据估计超过 死于结核病的儿童都存在诊断和治疗不及时 儿童结核病由于 载菌量低病原学阳性率低诊断主要依据非特异性症状、结核病接触史、临床体征、试验和影像学为儿童结核病的诊断带来困难 许多 涂片阴性的标本通过分子生物学技术可以检测出 本研究中、基因芯片三种分子生物学诊断方法能提高涂阴肺结核患儿的病原学诊断率能早期快速准确诊断结核病 检测敏感度高、特异度强、能快速判读结果(至 小时)、污染少(在环境中容易降解)、反应稳定还能检测标本中是否存在活菌及对抗结核治疗效果进行监测 有学者对 例疑似肺结核的成年患者检测 结果显示 的敏感度()明显高于培养()及临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期表 以培养阳性为金标准三种方法检测 诊断效能的比较检测方法肺结核(例)培阳(例)培阴(例)非肺结核(例)敏感度()特异度()()()().(.)阳性(例)阴性(例).(.)阳性(例)阴性(例)基因芯片.(.)阳性(例)阴性(例)三种方法联合.(.)阳性(例)阴性(例)图 以培养阳性为金标准三种方法检测 诊断肺结核的 曲线涂片()特异度为 本研究 检测 的敏感度及特异度与培养法()相仿与其他学者在 例 岁涂阴疑似肺结核患者中进行 检测 的研究结论一致 有学者进行的一项 分析显示以培养阳性作为标准灵敏度及特异度分别为、本研究结果与其相仿即以培养阳性为金标准敏感度 特异度 值 与培养法具有较好的一致性 为 与具有极高诊断价值的 临界值()极为接近提示 检测对肺结核具有相对较高的诊断价值 有研究将 用于检测肺外标本(病灶的脓液或手术切除组织)敏感度()高于培养()特异度为 检测同样有敏感度及特异度高、快速(小时判断结果)、低污染、高度自动化等优势但无法判断 的存活 有研究显示 检测 的敏感度()与结 核 菌 培 养()相仿 本研究中 检测 敏感度 及 特 异 度 与 培 养 法()相类似敏感度与其他学者对 例涂片阴性肺结核患者的 进行 检测的敏感度()相仿 以培养阳性为金标准敏 感 度 特 异 度 值 与培养法具有较好的一致性 检测与结核菌培养对肺结核的诊断具有同等的效能但时间上却有明显的优势 为 同样接近具有极高诊断价值的 临界值()提示 检测对肺结核具有相对较高的诊断价值 有学者将 用 于 检 测 尿 液 敏 感 度()高于培养()和涂片()特异度 基因芯片检测拥有高特异性、高通量、快速、高生物安全性等特点可直接检测多种标本(包括痰、胸水、脓液、引流物、尿液、穿刺物等)而不必进行 的培养 基因芯片检测对 及 的鉴定一致率高(分别为 和 )能快速(小时内)判断是否存在 或 感染判断利福平()、异烟肼()耐药性与药敏试验符合率 高(分 别 为 和 )有 学者用基因芯片诊断肺结核敏感度()及临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期特异度()均高与培养法一致性好 本研究发现基因芯片检测 的敏感度与培养法()比较相仿特异度达 以培养阳性为金标准基因芯片检测 敏感度特异度 值 与培养法具有较好的一致性 为 同样与具有极高诊断价值的 临界值()极为接近提示基因芯片检测对肺结核具有相对较高的诊断价值 基因芯片能迅速(小时内)判断耐药性尽早根据基因芯片耐药结果调整方案有助于提高患者的症状改善率、影像学吸收率及痰菌转阴率对控制结核传染起着重大作用 本研究发现各方法检测 的灵敏度明显高于痰(、)各方法检测 的 均大于检测痰液的 (、)以 为标本时各方法单独检测的 均极为接近有较高诊断价值的 临界值()而以痰液为标本时各方法的 均明显低于 故 比痰液具有更高的诊断价值特异度无明显差别 是利用支气管镜根据影像学直接定位到病变的肺段甚至亚段进行生理盐水灌洗回收 含量更高还可以避免口咽部其他定植菌的污染在细菌学阴性及无痰肺结核患儿中有更高的阳性率一项纳入 病例的大样本研究同样认为 诊断肺结核比痰更具有优势 本研究利用三种方法联合检测 以 为金标准敏感度 高于培养法及单独检测(、)特 异 度 具有较高的诊断价值以培养阳性为金标准联合检测的敏感度()及特异度()均高 值 与培养法具有极好的一致性 最大()具有极高的诊断价值 有学者联合 及 检测 用于诊断 涂片阴性肺结核敏感度为 均高于培养法()及单独检测()或()能快速早期诊断涂阴肺结核与本研究结论一致 有学者联合使用、基因芯片检测胃液的敏感度 为 联 合 检 测 痰 液 的 敏 感 度 为 本研究联合检测 的敏感度低于该学者的研究考虑与以下因素有关()研究对象不同本研究的对象为 涂片阴性的患儿这些患者通常累及肺野较少且病灶多局限在外周支气管镜操作未能完全到达感染病灶 含量减少()在室温保存时间过长标本经支气管镜灌洗回收、分装、运送等过程常超过 小时有可能发生 降解从而影响了 核酸的检出 但本研究最有意义的结果是在培养阴性的 例肺结核患儿中 有 例()通过联合检测检出故联合检测可明显提高儿童结核的病原学诊断率 本研究检测 共有 例假阳性 例诊断为细菌性肺炎的患儿 检测假阳性 例诊断为支原体肺炎及 例诊断为陈旧性肺结核并细菌感染的病例 检测假阳性 例假阳性病例随访 个月经影像学复查均未发现活动性肺结核病灶考虑可能在内清洗消毒、分装标本、检验操作等过程中出现了污染及肺结核患者经治愈后体内 死亡但仍能检出 本研究不足之处:由于支气管镜检查为侵入性操作限制了其在重症患者中的应用但已有研究显示分子生物学技术检测尿液、胸水、脓液、穿刺物、引流物、手术标本、胃液等均具有较好的诊断效果各方法均有假阳性和假阴性应综合各项检查结果对患者进行综合诊断同时使用三种方法检测 敏感度最高但费用比较高可联合其中 种方法检测综合考虑各因素以 联合基因芯片检测性价比高(可同时判断 活性及、耐药性)本研究未进行基因芯片的耐药性分析在以后的研究中可进行基因芯片耐药性与药敏结果进行对比分析 总之、基因芯片三种方法检测 可快速诊断涂阴肺结核联合检测可以提高儿童涂阴肺结核的病原学诊断率具有较高的早期诊断价值参考文献 .:.:临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期 .:.():.戴广明 王芬 曹廷明 等.实时荧光定量 检测不同结核标本及联合玻璃珠磨菌法检测价值的初步研究.中国防痨杂志 ():.中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.肺结核诊断:/.:/./.:.():.:.():.:.:./.():.:.樊亚丽 漆沄 孙欣荣 等.探讨肺泡灌洗液结核杆菌、培养、涂片检查及结核感染 细胞斑点试验在肺结核诊断中的价值.临床研究 ():.姜婧 刘家起 高晶晶 等.恒温扩增实时检测技术检测肺泡灌洗液对痰涂片阴性肺结核的快速诊断价值 分析.现代预防医学 ():.():.何家花 余成强 李步荣 等.、.和 平行检测在肺结核诊断中的应用价值.检验医学与临床 ():.李知慧 吴祥兵 灌洗液结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测、结核分枝杆菌培养及脱氧脱氧核糖核酸检测在肺结核诊断中的应用价值分析.中国基层医药 ():.王燕波 胡阳 宋宁 等.支气管镜在菌阴肺结核诊断中应用价值.临床肺科杂志 ():.():.李崇斌 尹航 方鹏 等.种结核分枝杆菌检测方法在不典型肾结核早期诊断中的应用价值比较.国际流行病学传染病学杂志 ():.董启珍 赵承杰 吴晓茹.基因芯片技术在新发涂阳肺结核患者结核杆菌菌种鉴定及药敏试验中的应用.中华医院感染学杂志 ():.孙桂英 赵刚 高胜利 等.联合基因芯片检测在老年肺结核诊断中的应用.中国老年学杂志 ():.童涌 宋群 童照威.耐药基因芯片技术对耐药结核患者早期诊治价值的研究.浙江医学 ():.:.:.袁瑛 明湘虹 郑宏 等.技术与荧光定量 在痰涂片阴性肺结核诊断中的价值研究.临床肺科杂志 ():.王莲芝 张晶 李莹莹 等.三种分子诊断技术对儿童肺结核的诊断价值.中国防痨杂志 ():.收稿日期:临床肺科杂志 年 月 第 卷第 期