17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析.pdf

世 界 农 药Vol.45 No.8World PesticideAug.2023作者简介：王国强(1997)，男，山西忻州人，研究方向：农药剂型研发及质检。E-mail：wangguoqiangsino-。通信作者：张小军(1977)，男，山西吕梁人，博士，研究员，研究方向：农药剂型研发及使用技术。E-mail：zhangxiaojunsino-。收稿日期：2023-06-27。3617%烯草酮烯草酮乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析王国强，李彦飞，张 凯，冯泽腾，张小军(中农立华生物科技股份有限公司，北京 100052)摘要：建立一种对 17%烯草酮乙羧氟草醚乳油中的有效成分同时进行分离和测定的正、反相高效液相色谱方法，并考察正、反相高效液相色谱法对烯草酮与乙羧氟草醚的检测差异。正相方法采用 Syncronis Silica 不锈钢柱和紫外检测器，在波长 230 nm 条件下，以二氯甲烷-正己烷-冰乙酸(28702，体积比)为流动相，对试样中烯草酮和乙羧氟草醚的含量进行分离和定量分析；反相方法采用安捷伦 SB-C18不锈钢柱和紫外检测器，在波长 230nm条件下，以乙腈-1%冰乙酸水溶液(8020，体积比)为流动相，对试样中烯草酮和乙羧氟草醚的含量进行分离和定量分析。正相方法中烯草酮和乙羧氟草醚的标准偏差分别为 0.02 和 0.04，相对标准偏差分别为 0.18%和 0.76%，平均回收率分别为 99.64%和 99.24%，线性相关系数均为 0.999 5；反相方法中烯草酮和乙羧氟草醚的标准偏差分别为 0.03 和 0.01，相对标准偏差分别为 0.29%和 0.14%，平均回收率分别为 98.36%和 99.49%，线性相关系数分别为 0.999 5 和 0.999 3。2 种方法均重现性好、准确度高、分离效果好，均适用于该混配制剂中烯草酮和乙羧氟草醚的定量分析和质量控制。关键词：烯草酮；乙羧氟草醚；高效液相色谱；分析中图分类号：TQ450.7文献标志码：A文章编号：1009-6485(2023)08-0036-06DOI：10.16201/10-1660/tq.2023.08.07Analysis of clethodim benzofluorfen 17%EC by HPLCWANG Guoqiang,LI Yanfei,ZHANG Kai,FENG Zeteng,ZHANG Xiaojun(Sino-Agri Leading Biosciences Co.,Ltd.,Beijing 100052,China)Abstract:Normal phase method and reversed phase method for separation and quantitative analysis of simultaneousdetermination in clethodimbenzofluorfen 17%EC was established by HPLC.At the same time,the detection differencesbetween clethodim and benzofluorfen by normal phase method and reversed phase HPLC method.Normal phase HPLCmethod using Syncronis Silica-C18column as stainless steel pillar stuffed,UV wavelength 230 nm,the mixture solution ofdichloromethane-n-hexane-glacial acetic acid(28:70:2,by vol)as the mobile phase by HPLC.Reversed phase HPLCmethod using Agilent SB-C18column as stainless steel pillar stuffed,UV wavelength 230 nm,the mixture solution ofacetonitrile-1%acetic acid(AC)aqueous solution(80:20,by vol)as the mobile phase by HPLC.The results showed that,under the normal phase condtion,the standard deviations of clethodim and benzofluorfen were 0.02 and 0.04,the relative技术创新第 8 期王国强等：17%烯草酮乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析37standard deviations were 0.18%and 0.76%,the average recoveries were 99.64%and 99.24%,and the linear correlationcoefficients between the concentrations of clethodim or benzofluorfen and their responding values were all 0.999 5,respectively.Under the reversed phase condtion,the standard deviations of clethodim and benzofluorfen were 0.03 and0.01,the relative standard deviations were 0.29%and 0.14%,the average recoveries were 98.36%and 99.49%,and thelinear correlation coefficients were 0.999 5 and 0.999 3,respectively.The methods have several advantages such as goodreproducibility,high accuracy and separation,and it is suitable for quantitative analysis and quality control of clethodimand benzofluorfen in the mixture formulation.Keywords:clethodim;benzofluorfen;HPLC;analysis烯草酮(clethodim)是由日本住友化学公司和美国 Chevron 公司在 1987 年联合开发研制的一种高效、安全、高选择性的环己烯酮类除草剂1，可用于防除大多数一年生及多年生的禾本科杂草，且对双子叶作物安全。施药后，禾本科杂草茎叶会将该除草剂迅速吸收并传导至分生组织及茎尖，分生组织的活性被抑制，细胞被破坏分裂，最终导致杂草死亡2。烯草酮主要登记用于棉花、花生、大豆、烟草、油菜及果园等阔叶田防除硬草、早熟禾、马唐、看麦娘、牛筋草、狗尾草、野燕麦和稗草等一年生禾本科杂草3。乙羧氟草醚(benzofluorfen)是由美国罗姆哈斯公司开发的一种三氟甲基二苯醚类除草剂，具有杀草谱广、活性高、毒性低等特点4，施药后，被杂草吸收进入植物细胞内，在光照条件下，与细胞内的分子氯反应，生成对细胞具有毒性的化合物四吡咯，积聚后会使植物细胞膜完全消失，然后引起细胞内含物渗漏，最终导致杂草死亡。乙羧氟草醚主要登记用于小麦、大麦、花生、大豆、甘蔗及稻田防除婆婆纳、繁缕、苘麻、猪秧秧和荠菜等阔叶杂草5。近年来，烯草酮与乙羧氟草醚的复配，弥补了单剂的缺陷，降低了农民的使用成本，得到各公司广泛推广使用，但有关复配剂中 2 者有效成分同时测定的方法未见报道6-9。基于此，本文采用高效液相色谱法开展了正、反相 2 种同时检测 17%烯草酮乙羧氟草醚乳油中烯草酮和乙羧氟草醚的定量方法研究，旨在为该混配制剂提供一定的技术支撑。1 1 材料与方法材料与方法1.11.1 仪器与试剂仪器与试剂AL204 型电子分析天平(精度为 0.000 1 g，梅特勒-托利多仪器有限公司)；TU-1901 型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；Agilent 1220 型高效液相色谱仪配紫外检测器和色谱工作站(安捷伦科技有限公司)；KQ-500DE 型数控超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)。冰乙酸和丙酮(分析纯)，国药集团化学试剂有限公司；二氯甲烷和正己烷(HPLC 级)，西班牙萨劳 Scharlau 有限公司；超纯水，实验室自制；乙腈(HPLC 级)，赛默飞世尔科技有限公司；烯草酮锂盐标样(质量分数 99.1%)和乙羧氟草醚标样(质量分数 99.5%)，北京勤诚亦信科技开发有限公司；17%烯草酮乙羧氟草醚乳油(12%烯草酮+5%乙羧氟草醚)，实验室自制。1.21.2 色谱条件色谱条件正向色谱法：液相色谱柱：Syncronis Silica 不锈钢柱(150 mm4.6 mm，内装 5 m C18填充物)(赛世 界 农 药第 45卷38默飞世尔科技有限公司)；流动相：二氯甲烷-正己烷-冰乙酸(28702，体积比)；流量：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：230nm；进样体积：5.0L。在上述色谱操作条件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留时间分别约为 5.9、18.2 min(图 1)。反相色谱法：液相色谱柱：Agilent ZORBAXSB-C18不锈钢柱(250 mm4.6 mm，内装 5 m C18填充物)(美国安捷伦科技公司)；流动相：乙腈-1%冰乙酸水溶液(8020，体积比)；流量：1.0mL/min；柱温：室温；检测波长：230nm；进样体积：5.0L。在上述色谱操作条件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留时间分别约为 11.9、13.9 min(图 1)。图 1混标及试样的高效液相色谱图1.31.3 溶液的配制溶液的配制1.3.1 标样溶液的配制称取烯草酮锂盐标样各0.05g(精确至0.0002g)，乙羧氟草醚标样各 0.02 g(精确至 0.000 2 g)，分别置于 50 mL 容量瓶中，正相方法用流动相溶解并定容至刻度，反相方法用先用 3 滴冰乙酸和少量丙酮溶液振摇使之溶解后，再用丙酮溶液定容至刻度，然后均摇匀，脱气后备用。1.3.2 试样溶液的配制称取 17%烯草酮乙羧氟草醚乳油各 0.4 g(精确至 0.000 2 g)，分别置于 50 mL 容量瓶中，正相方法用流动相溶解并定容至刻度，反相方法用丙酮溶解并定容至刻度，然后均摇匀，脱气后备用。1.41.4 测定测定在上述操作条件下，正相方法和反相方法均待仪器基线稳定后，连续进样数针标样溶液，当相邻0510152025时间/min乙羧氟草醚5.983烯草酮18.201300250200150100500-50-100mAU乙羧氟草醚5.989烯草酮锂盐18.2060510152025时间/min300250200150100500-50-100mAU混标正相法试样正相法混标反相法试样反相法0510152025时间/min0510152025时间/min400350300250200150100500mAUmAU乙羧氟草醚11.967烯草酮锂盐13.980400350300250200150100500乙羧氟草醚11.976烯草酮13.990第 8 期王国强等：17%烯草酮乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析392 针标样峰面积的相对变化小于 1.5%时，按照进样次序为标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行分离和测定。1.51.5 计算计算试样中烯草酮(或乙羧氟草醚)的质量分数 X(%)按下式计算：100(%)2112mAPmAX式中：A1为标样溶液中烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)平均峰面积值；A2为试样溶液中烯草酮(或乙羧氟草醚)平均峰面积值；m1为烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；P 为标样中烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)的质量分数(%)；烯草酮锂盐折算为烯草酮的系数为 0.983；2 2 结果与讨论结果与讨论2.12.1 流动相的选择流动相的选择在 17%烯草酮乙羧氟草醚乳油有效成分质量分数检测中，正相方法和反相方法分别通过不断的调整流动相中二氯甲烷、正己烷、冰乙酸和甲醇、乙腈、0.1%冰乙酸水溶液的不同配制比例，观察样品峰型变化和保留时间，依次进行筛选。最终检测结果表明，正相检测在流速 1.0 mL/min，二氯甲烷-正己烷-冰乙酸的体积比为 28702 时；反相检测在流速 1.0 mL/min，乙腈-1%乙酸水溶液的体积比为 8020 时，烯草酮和乙羧氟草醚的出峰时间相对适中，出峰峰型尖锐对称无拖尾，分离效果好且能较好的满足分析要求。2.22.2 检测波长的选择检测波长的选择利用紫外可见分光光度计分别对乙羧氟草醚和烯草酮锂盐标样溶液在 190400 nm 波长下进行紫外扫描，得到关于乙羧氟草醚和烯草酮锂盐的最大吸收波长与相关浓度响应值的紫外吸收光谱图(图 2)。经验证，乙羧氟草醚和烯草酮锂盐在波长为 230 nm 时均有较大紫外吸收，得到较好的峰型且能够使主峰与杂质峰更好的分离。因此，最后选定本分析方法的检测波长为 230 nm。图 2 烯草酮锂盐及乙羧氟草醚的紫外吸收谱图2.32.3 分析方法的线性相关性分析方法的线性相关性根据 1.3 节方法分别配制系列质量浓度烯草酮锂盐和乙羧氟草醚标准溶液，采用上述 2 种方法分别测定峰面积，每个质量浓度样品进样 3 次。以烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)的进样质量浓度(x)为横坐标，以烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)的峰面积(y)为纵坐标做图，得烯草酮锂盐(或乙羧氟草醚)的线性相关曲线。其正相线性方程分别为：y烯草酮锂盐=5 276.7x+烯草酮锂盐乙羧氟草醚220240260280300320340360380波长/nm4003002001000mAU4003002001000220240260280300320340360380波长/nmmAU世 界 农 药第 45卷40480.21，y乙羧氟草醚=7 072.1x+38.402；相关系数分别为：r2烯草酮锂盐=0.9995，r2乙羧氟草醚=0.999 5；其反相线性方程分别为：y烯草酮锂盐=5 433.4x+318.53，y乙羧氟草醚=7 699.6x+21.846；相关系数分别为：r2烯草酮锂盐=0.9995，r2乙羧氟草醚=0.9993，说明 2种方法在测定范围内均呈现良好的线性范围。2.42.4 方法的精密度方法的精密度从同一批 17%的烯草酮乙羧氟草醚乳油样品中分别准确连续称取 5 个试样，分别采用上述 2 种方法进行分析，结果见表 1。正相检测中烯草酮和乙羧氟草醚标准偏差分别为 0.02 和 0.04，变异系数分别为 0.18%、0.76%；反相检测烯草酮和乙羧氟草醚标准偏差分别为 0.03 和 0.01，变异系数分别为 0.29%、0.14%。说明 2 种方法的精密度都能很好满足工业分析的定量要求。表 1分析方法的精密度试验结果方法有效成分重复平均值/%标准偏差变异系数/%12345正相法烯草酮/%12.0212.0212.0612.0212.0012.020.020.18乙羧氟草醚/%5.055.095.055.145.055.080.040.76反相法烯草酮/%11.8311.8711.8511.9211.8811.870.030.29乙羧氟草醚/%5.045.055.065.065.045.050.010.142.52.5 方法的准确度方法的准确度准确称取 5 个 17%烯草酮乙羧氟草醚乳油试样，均加入一定量的烯草酮锂盐标样和乙羧氟草醚标样，按照上述条件进样分析，并计算其回收率，结果见表 2。正反相结果均显示烯草酮和乙羧氟草醚的平均回收率均较高，符合分析标准。表 2分析方法的准确度试验结果有效成分正相法反相法序号理论量/mg实测量/mg回收率/%平均回收率/%理论量/mg实测量/mg回收率/%平均回收率/%烯草酮112.0912.0099.2699.6412.0911.8898.2698.36212.0812.13100.4112.0211.8998.92312.1512.0999.5112.0511.8698.42412.0511.9899.4211.9911.7598.00512.1412.0999.5912.0511.8398.17乙羧氟草醚15.035.06100.60100.085.065.0499.6099.4925.055.0399.605.015.02100.2035.085.10100.395.135.0999.2245.025.0199.805.075.0299.0155.065.06100.005.045.0199.403 3 结结论论本文采用高效液相色谱法建立了 2 种能够同时测定烯草酮和乙羧氟草醚混配制剂中的有效成分的定量分析方法。2 种检测方法各有优劣，其中正相谱图与反相谱图相比杂峰更少一些；而反相条件下，计算所得的烯草酮的含量结果偏低，但均在允许范围内。2 种方法分离效果良好，方法的准确度和精密度均较高，且简单高效易操作，因此均可用第 8 期王国强等：17%烯草酮乙羧氟草醚乳油高效液相色谱分析41于烯草酮和乙羧氟草醚复配制剂的质量控制，具有较强的实用价值和可行性。参考文献1张一宾.环己烯酮类除草剂的品种、市场及发展J.世界农药,2016,33(6):26-28.2张秀珍.烯草酮在我国的登记情况J.山东农药信息,2012(3):37-39.3李彦飞,张小军.17%烯草酮乙羧氟草醚乳油配方与田间药效研究J.现代农药,2021,20(3):26-29.4白延海,李瑞军,洪广峰,等.乙羧氟草醚的合成J.现代农药,2006,5(6):22-24.5宋伟杰,杨中学,李培强,等.乙羧草铵膦微乳剂的研制及对非耕地杂草防效J.现代农药,2017,16(3):10-13.6强伟,王英,薛建强,等.液相色谱法测定 E-和 Z-烯草酮含量J.世界农药,2022,44(9):52-55.7王继军.乙羧氟草醚的分析方法J.化学工程师,2006(4):60-61.8王嫱,龚党生,连伟祥.乙羧氟草醚原药的高效液相色谱分析J.农药,2002,41(6):23-24.9王恩礼.高效液相色谱法测定 20%氟磺胺草醚微乳剂J.科技风,2010(7):215.（上接第 10 页）农药中间体创造性的判断，需要考察“与中间体接近”和“与产物接近”2 类相关现有技术，基于这 2 类现有技术判断中间体是否显而易见性。如果通过这 2 类现有技术都能够得到中间体非显而易见的结论，认可中间体的创造性，如果通过其中任何一类现有技术得出中间体显而易见的结论，还需进一步考察其是否具有预料不到的技术效果。农药中间体是否具有预料不到技术效果，需要基于其制备后续产物的用途，具体而言，该用途体现在该中间体对后续产物结构和/或性能、以及由中间体制备后续产物的方法做出的贡献，如果由中间体能够制备得到具有创造性的产物、并且所述产物的创造性依赖于中间体所作出的贡献，或者由中间体直接或间接制备产物的方法具备创造性、并且所述方法的创造性依赖于中间体所作出的贡献，就应认可中间体的创造性。参考文献1中华人民共和国知识产权局制定.专利审查指南M.北京:知识产权出版社,2009:284-286.2李雪莹.浅谈中间体化合物的创造性J.审查业务通讯,2009(7):5-10.3拜耳知识产权有限责任公司.噻二唑基氧苯基脒类及其作为杀真菌剂的应用:CN102076674AP.2011-05-25.4阿方蒂农科有限公司.N-苯基脒衍生物:CN1342137AP.2002-03-27.5拜耳知识产权有限责任公司.2-(3-烷硫基苯甲酰基)环己二酮及其作为除草剂的用途:CN102548960AP.2012-07-04.6VON D W,BAUMANN E,HOFMANN M,et al.Benzoylcyclohexenonederivatives:US20040235793A1P.2004-11-25.7赫彻斯特股份公司.2-苯酰基环己二酮盐选择性除草剂、其制法及在除草中的应用:CN1077449AP.1993-10-20.