2091例非小细胞肺癌ALK D5F3表达及其与临床病理特征的关系.pdf

366Journal of Practical Oncology Vol.38No.4 DOI:10.13267/ki.syzlzz.2023.0582 091 例非小细胞肺癌 ALK D5F3 表达及其与临床病理特征的关系丁会珍1,2，金贻铎3，王宏伟3 1.河北一洲肿瘤医院病理科，河北 涿州 072759；2.锦州医科大学中国人民解放军总医院第四医学中心研究生培养基地，北京 100048；3.中国人民解放军总医院第四医学中心病理科，北京 100048摘要：目的 探讨全自动罗氏平台（Ventana）免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）方法检测非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）中间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）表达的意义及与患者临床病理特征的关系。方法 对中国人民解放军总医院第四医学中心病理科 2015 年 6 月 1 日至 2021 年 7 月 8 日收集的 2 091 例 NSCLC 组织标本（包括活检、穿刺、根治切除标本和胸腔积液沉渣等）进行 ALK D5F3（Ventana）IHC 检测。分析 ALK 阳性表达与临床病理特征的关系。结果 2 091 例 NSCLC 标本中，ALK 阳性率为 5.45%（114/2 091），肺腺癌、肺鳞癌和其他类型 NSCLC 的ALK 阳性率分别为 6.03%（107/1 774）、1.43%（3/210）和 8.39%（36/429）。ALK 阳性患者中男女比为 1 2.8。ALK 阳性患者中浸润癌占比为 5.36%（112/2 091），高于原位癌的 0.01%（2/2 091）和微浸润癌的 0.005%（1/2 091）。原位腺癌可见 ALK 阳性；原位鳞癌未见阳性；1 例癌肉瘤出现阳性。ALK 阳性腺癌转移到其他部位时，最容易出现脑转移。结论 ALK D5F3（Ventana）IHC 检测对 NSCLC 患者 ALK 阳性筛查有重要意义，规范检测提高其结果的准确性，可为临床治疗提供重要参考依据。关键词：非小细胞肺癌；间变性淋巴瘤激酶；免疫组织化学Expression of ALK D5F3 in 2 091 cases of non-small-cell lung cancer and its relationship with clinico-pathological features Ding Huizhen1,2,Jin Yiduo3,Wang Hongwei31.Department of Pathology,Hebei Yizhou Cancer Hospital,Zhuozhou 072759,China;2.Postgraduate Training Base,the Fourth Medical Center of the Chinese PLA General Hospital,Jinzhou Medical University,Beijing 100048,China;3.Department of Pathology,the Fourth Medical Center of the Chinese PLA General Hospital,Beijing 100048,ChinaAbstract:Objective To investigate the significance of automatic Ventana immunohistochemistry(IHC)assay in detecting the expression of anaplastic lymphoma kinase(ALK)in non-small-cell lung cancer(NSCLC)and its relationship with clinicopathological characteristics of patients.Methods Totally 2 091 NSCLC tissue specimens(including biopsy,puncture,and radical resection specimens,and pleural effu-sion sediment)were collected from the department of pathology,the Fourth Medical Center of the Chinese PLA General Hospital,from June 1st,2015 to July 8th,2021,and detected by ALK D5F3(Ventana)IHC assay.The relationship between ALK positive expression and clinico-pathological features was analyzed.Results Among 2 091 NSCLC specimens,the positive rate of ALK was 5.45%(114/2 091).The positive rates of ALK in lung adenocarcinoma,lung squamous cell carcinoma and other types of NSCLC were 6.03%(107/1 774),1.43%(3/210)and 8.39%(36/429),respectively.The male to female ratio of ALK-positive patients was 1 2.8.Compared among ALK-positive patients,the proportion of invasive carcinoma(5.36%,112/2 091)was higher than that of carcinoma in situ(0.01%,2/2 091)and microinvasive carcinoma(0.005%,1/2 091).Adenocarcinoma in situ samples were positive for ALK,while squamous cell carcinoma in situ specimens were not pos-itive.Carcinosarcoma was positive in one case.Brain metastases were most likely to occur when ALK-positive adenocarcinoma metastasized to other sites.Conclusions ALK D5F3(Ventana)IHC assay is of great significance for ALK-positive screening for NSCLC patients.Stan-dardized test can improve the accuracy of results and provide an important reference for clinical treatment.Key words:non-small-cell lung cancer;anaplastic lymphoma kinase;immunohistochemistry临床研究367实用肿瘤杂志 2023 年 第 38 卷 第 4 期 近年来，肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第 1 位，女性发病率和死亡率均占第 2 位1。中晚期肺癌治疗已由传统的手术治疗、放疗和化疗转向精准的个体化靶向治疗，驱动基因决定分子靶向药物的选择及合理应用。间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）融合基因是继表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突变之后新发现的肺癌驱动基因，其中 5%的非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）存在 ALK 基因融合，以棘皮动物微管相关蛋白 4（echinoderm microtubule-associated protein-like 4，EML4）-ALK 突变最为常见，阳性患者可从酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor，TKI）克唑替尼中获益2-3。本研究采用 Ventana 平台检测 2 091 例 NSCLC 的 ALK D5F3 表达，总结 ALK 阳性病例的临床病理特征及判读要点，进一步促进 ALK 规范化病理检测，使其在精准治疗中发挥重要的作用。1资料与方法1.1一般资料回顾性分析中国人民解放军总医院第四医学中心病理科 2015 年 6 月 1 日至 2021 年 7 月 8 日收集的 2 091 例 NSCLC 标本的 ALK 表达情况。标本包括活检、穿刺、根治切除标本和胸腔积液沉渣等。每例标本均由有经验的 2 名病理科医师经过 HE 染色及相关免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）方法检查确诊为 NSCLC，鉴于肿瘤的异质性，以肿瘤细胞占比成分最多者进行分组。本研究已通过中国人民解放军总医院第四医学中心伦理审查委员会审核批准。1.2实验材料即用型 4%中性甲醛、乙醇及二甲苯均购自北京益利精细化学品有限公司。全自动脱水机（Leica ASP300S）、切片机（Leica RM2235）、展片仪（Leica HI1210）、烤片机（Leica HI1220）、染色机（Leica ST5020）、封片机（Leica CV5030）和熔点 60的优质石蜡均购自德国 Leica 公司。苏木精和伊红购自美国 DAKO 公司。全自动包埋机购自日本 Tissue TEC。包埋盒购自河北省文安县协力塑料制品厂。载玻片购自江苏世泰实验器材有限公司。显微盖玻片购自海门市神鹰实验器材厂。封片胶购自珠海贝索生物技术有限公司。ALK（D5F3）兔单克隆抗体、OptiView DABIHC 检测试剂盒即增强试剂盒和全自动 IHC 仪（BenchMark ULTRA）均购自美国罗氏公司。1.3标本处理标本均经 4%中性甲醛固定，常规取材、上机、包埋和制片等，连续切片 2 张，分别进行 HE 染色用于肿瘤细胞定位和罗氏全自动 IHC 染色（IHC染色加上阴性和阳性对照组织）。1.4结果判读采用二元法进行判读，即阳性和阴性。ALK阳性结果的判读标准为：肿瘤细胞胞质内出现颗粒状强阳性染色（无论阳性细胞的数量多少）即判读为阳性，否则为阴性。非肿瘤细胞应排除假阳性，如：NSCLC 中正常黏膜细胞内、坏死区域内、肺泡巨噬细胞的胞质、神经来源细胞、腺上皮细胞、黏蛋白、树突状细胞以及浸润的淋巴细胞也可以见到一些背景着色（图 1）。1.5统计学分析采用 SPSS 17.0 版统计学软件进行数据分析。计数资料采用频数（百分比）表示，组间比较采用 2检验。以 P0.05 为差异具有统计学意义。2结果2.1一般特征2 091 例 NSCLC 患者中，发病年龄 1994 岁，中位年龄 65 岁；50 岁 1 776 例，50 岁 315 例。IHC 检测 ALK 阳性的病例中 3 个月的白片用于 ALK 检测，ALK 阳性的细胞强度减弱，因此 IHC 检测的肿瘤组织标本需注意以下几点：（1）4%甲醛充分固定，保证肿瘤组织的形态良好；（2）石蜡白片时间 3 个月，不建议 ALK 检测；（3）蜡块 5 年不建议行 IHC 检测；（4）手工检测存在假阳性，推荐使用全自动 IHC 机器，使用配套的 Optiview 扩增试剂盒，便于结果判读；（5）用于 ALK IHC 检测的阴性和阳性对照推荐使用液态阳性对照，并且切片四周都加上对照，防止假阳性及假阴性的出现11-12。ALK 基因融合与多种肿瘤的发生和发展密切相关，并可发生于 NSCLC3。非小细胞肺癌分子注A：正常黏液上皮阳性；B：变性坏死区非特异性着色；C：坏死区非特异性着色；D：巨噬细胞非特异性着色；E：黏蛋白非特异性着色；F：树突细胞非特异性着色图 1NSCLC 中 ALK D5F3（Ventana）蛋白常见的非特异性着色（Ventana200）Fig.1Common non-specific staining of ALK D5F3(Ventana)in NSCLC(Ventana200)ABECFD369实用肿瘤杂志 2023 年 第 38 卷 第 4 期 表 12 091 例 NSCLC 患者 ALK D5F3（Ventana）表达情况与临床特征的关系（例，%）Table 1Relationship between ALK D5F3(Ventana)expression and clinical features in 2 091 NSCLC patients(case,%)临床特征总例数（n=2 091）ALK 阳性（n=114）ALK 阴性（n=1 977）2值P 值年龄18.1620.0150 岁1 776（84.94）81（71.05）1 695（85.73）50 岁315（15.06）33（28.95）282（14.27）性别34.0550.01女性986（47.15）84（73.68）902（45.62）男性1 105（52.85）30（26.32）1 075（54.38）肺腺癌1 774（84.84）107（93.86）1 667（84.31）103.0830.01实性型腺癌443（21.19）30（26.31）413（20.89）腺泡状为主型腺癌689（32.95）44（38.60）645（32.63）黏液型腺癌110（5.26）21（18.41）89（4.50）附壁为主型腺癌227（10.86）3（2.63）224（11.33）乳头状为主型腺癌145（6.93）1（0.88）144（7.28）微乳头型腺癌24（1.15）1（0.88）23（1.16）印戒细胞样腺癌5（0.24）4（3.51）1（0.05）微浸润腺癌8（0.38）1（0.88）7（0.35）原位腺癌123（5.88）2（1.76）121（6.12）肺鳞癌210（10.04）3（2.63）207（10.47）0.0660.798原位鳞癌5（0.24）0（0.00）5（0.25）浸润鳞癌205（9.80）3（2.63）202（10.22）其他类型107（5.11）4（3.50）103（5.21）13.5000.004大细胞癌90（4.30）2（1.76）88（4.45）类癌4（0.19）0（0.00）4（0.20）癌肉瘤2（0.09）1（0.88）1（0.05）腺鳞癌11（0.53）1（0.88）10（0.51）肺腺癌转移其他部位322（15.40）32（28.07）290（14.67）10.0950.073淋巴结转移141（6.74）17（14.91）124（6.27）胸膜转移66（3.16）3（2.63）63（3.18）骨转移96（4.59）8（7.02）88（4.46）脑转移13（0.62）4（3.51）9（0.46）肝转移5（0.24）0（0.00）5（0.25）乳腺转移1（0.05）0（0.00）1（0.05）注NSCLC：非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer）；ALK：间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase）注A：肺实性黏液腺癌；B：肺印戒样细胞癌；C：肺原位腺癌；D：肺腺癌脑转移；E：肺鳞癌；F：肺癌肉瘤 图 2不同亚型 NSCLC 组织中 ALK D5F3 蛋白的表达情况（Ventana200）Fig.2Expression of ALK D5F3 protein in different subtypes of NSCLC(Ventana200)ABECFD370Journal of Practical Oncology Vol.38No.4 病理检测临床实践指南(2021 版)及 2020 年 V1版 NCCN 非小细胞肺癌临床实践指南也明确指出，FDA 批准的 IHC 检测可用于 ALK 独立检测，不需要 FISH 进一步验证13-14。本研究发现，NSCLC中 ALK 阳性率为 5.2%（114/2 091），ALK 阳性的病例中腺癌占比 65.8%，更倾向于女性（73.7%）；ALK 阳性的黏液型腺癌、实性型腺癌和印戒细胞样腺癌更常见，腺泡型和贴壁型腺癌少见，ALK 阳性病例中鳞癌占比低，与既往研究报道相符15-18。本研究显示，肺腺癌容易转移到淋巴结、胸膜、骨和脑，且肺腺癌转移到脑中阳性率高。本研究在原位癌和癌肉瘤也检出阳性 2 例和 1 例。研究结果显示，ALK D5F3（Ventana）IHC 检测结果及病理组织学类型与既往研究报道的 ALK 多种检测方法得到的结果相符19，可以应用于各种来源的标本，如经皮穿刺、手术切除和细胞沉渣等各类标本，可以作为一个可靠有效的筛查手段，广泛用于临床的筛查，使患者以最低消费获得最大受益。综上所述，NSCLC 治疗模式已由传统的治疗手术和放化疗模式转为精准的个体化靶向治疗，靶向基因治疗也有其自身的适应证，标准化和规范化的检测结果是靶向治疗的前提。ALK 是 NSCLC 靶向治疗推荐的第 2 个检测位点。本研究通过 2 091例 NSCLC 病理分型分析，ALK 阳性表达趋向于年轻患者，并且女性多于男性；黏液型腺癌、实性型腺癌和印戒细胞样腺癌阳性比例最高。ALK IHC筛查可以作为 NSCLC 简单标准的筛查方法，给患者提供新的个体化治疗机会，提高患者生活质量。参考文献：1 Oliver AL.Lung cancer:Epidemiology and screeningJ.Surg Clin North Am,2022,102(3):335-344.2 Mithoowani H,Febbraro M.Non-small-cell lung cancer in 2022:A review for general practitioners in oncologyJ.Curr Oncol,2022,29(3):1828-1839.3 Svaton M.Targeted therapy of non-small cell lung can-cerJ.Klin Onkol,2021,34(1_suppl):48-52.4 Zhao R,Guo L,Zhang B,et al.Identification and thera-peutic evaluation of ALK rearrangements in non-small-cell lung cancerJ.J Pathol Clin Res,2022,8(6):538-549.5 陈培欣,周彩存.非小细胞肺癌药物治疗进展与展望J.实用肿瘤杂志,2022,37(1):33-39.6 Kang S,Woo J,Kim S.A systematic review of companion diagnostic tests by immunohistochemistry for the screening of alectinib-Treated patients in ALK-positive non-small cell lung cancerJ.Diagnostics(Basel),2022,12(5):1297.7 沈勤,王璇,余波,等.手工免疫组化检测非小细胞肺癌 ALK 蛋白表达的对比分析J.临床与实验病理学杂志,2015,31(3):268-272.8 Ibrahim M,Parry S,Wilkinson D,et al.ALK immunohis-tochemistry in NSCLC:discordant staining can impact pa-tient treatment regimenJ.J Thorac Oncol,2016,11(12):2241-2247.9 孟辉,高献争,张岚,等.增强免疫组化和原位杂交方法检测非小细胞肺癌的 ALK 重排的临床可行性J.中国肺癌杂志,2015,18(2):75-79.10 颜黎栩,崔倩,罗东兰,等.非小细胞肺癌中 Ventana ALK 免疫组化异质性分析J.临床与实验病理学杂志,2019,35(12):1391-1394.11 丁会珍,刘丹丹,金贻铎.免疫组织化学检测阳性对照的应用现状与进展J.诊断病理学杂志,2020,27(7):499-501,504.12 吴景,何杰.组织悬液 HER2 阳性标本在免疫组化室内质控中作为阳性对照的作用和价值 J.中山大学学报：医学版,2019,40(5):683-688.13 中华医学会病理学分会，国家病理质控中心，中华医学会肿瘤学分会肺癌学组,等.非小细胞肺癌分子病理检测临床实践指南(2021 版)J.中华病理学杂志,2021,50(4):323-332.14 张家豪,张亚杰,李鹤成.2020 年 V1 版NCCN 非小细胞肺癌临床实践指南更新解读J.中国胸心血管外科临床杂志,2020,27(6):614-618.15 刘月红,蒋军红.非小细胞肺癌患者 EGFR、ALK 基因突变及临床病理特征与预后的相关性研究 J.临床肺科杂志,2020,25(5):760-763,774.16 贺佳子,黄清洁,李莉,等.396 例非小细胞肺癌 EGFR,KRAS,ALK 和 BRAF 基因突变状态及其临床病理特征J.临床与病理杂志,2020,40(9):2252-2258.17 赵颖馨,沈虹,袁瑛.晚期非小细胞肺癌的免疫治疗再挑战 J.实用肿瘤杂志,2021,36(3):202-208.18 Lu S,Lu C,Xiao Y,et al.Comparison of EML4-ALK fu-sion gene positive rate in different detection methods and samples of non-small cell lung cancerJ.J Cancer,2020,11(6):1525-1531.19 Rachagiri S,Gupta P,Gupta N,et al.Detection of ALK gene rearrangements in non-small cell lung cancer by im-munocytochemistry and fluorescence in situ hybridization on cytologic samplesJ.Turk Patoloji Derg,2022,38(1):16-24.（收稿日期：2021-12-05）