Circ_DOCK1调节miR-122-5p_PPIB轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.pdf

论著C i r c_D O C K 1调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响*金美 巴桑 次仁(日喀则市人民医院,西藏 日喀则 8 5 7 0 0 0)【摘要】目的 探讨环状核糖核苷酸_胞质分裂作用因子1(C i r c_D O C K 1)通过调节微小核糖核苷酸-1 2 2-5 p(m i R-1 2 2-5 p)/肽酰脯氨基顺反异构酶B(P P I B)轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量P C R检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织中的c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达水平。取人结直肠细胞SW 4 8 0,脂质体转染法转染c i r c_D O C K 1干扰质粒(s h-c i r c_D O C K 1)、m i R-1 2 2-5 p抑制物(a n t i-m i R-1 2 2-5 p)和模拟物(m i R-1 2 2-5 p m i m i c s),以C C K-8法、划痕试验和T r a n s w e l l实验检测结直肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡情况。以生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析c i r c_D O C K 1与m i R-1 2 2-5 p的靶向关系。结果 结直肠癌组织的c i r c_D O C K 1、P P I B mR NA表达水平高于癌旁组织,m i R-1 2 2-5 p表达水平低于癌旁组织。与挽救组和N C-c i r c_D O C K 1组比较,s h-c i r c_D O C K 1组的c i r c_D O C K 1和P P I B mR NA表达量下降,m i R-1 2 2-5 p表达量升高,且细胞转染4 8 h和7 2 h的A值及细胞迁移率和穿膜细胞数均降低(P0.0 5)。生物信息学软件预测c i r c_D O C K 1含有与m i R-1 2 2-5 p互补的核苷酸序列。转染m i R-1 2 2-5 p m i m i c s后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染a n t i-m i R-1 2 2-5 p后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加(P0.0 5)。结论 c i r c_D O C K 1在结肠癌组织中的表达上调,且能通过调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴影响结直肠癌的增殖、迁移和侵袭,可考虑经c i r c_D O C K 1作为结直肠癌的分子靶向治疗研究方向。【关键词】环状核糖核苷酸_D O C K 1;微小核糖核苷酸-1 2 2-5 p;结直肠癌;增殖;迁移;侵袭【中图分类号】R 7 3 5.3 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.0 9.0 1 0 基金项目:西藏自治区自然科学基金组团式医学援藏项目X Z 2 0 2 0 Z R-Z Y 3 4(Z)引用本文:金美,巴桑,次仁.C i r c_D O C K 1调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响J.西部医学,2 0 2 3,3 5(9):1 2 9 8-1 3 0 3.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.0 9.0 1 0E f f e c t s o f c i r c_D O C K 1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s b y r e g u l a t i n g t h e m i R-1 2 2-5 p/P P I B a x i sJ i n m e i,B a s a n g,C i r e n(S h i g a t s e P e o p l e s H o s p i t a l,S h i g a t s e 8 5 7 0 0 0,T i b e t,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t s o f C i r c_D O C K 1 o n t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s b y r e g u l a t i n g m i c r o r i b o n u c l e o t i d e-1 2 2-5 p(m i R-1 2 2-5 p)/p e p t i d y l p r o a m i n o c i s-t r a n s i s o m e r a s e B(P P I B)a x i s.M e t h o d s T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c i r c_D O C K 1,m i R-1 2 2-5 p a n d P P I B i n c a n c e r t i s s u e s a n d a d j a c e n t t i s-s u e s o f c o l o r e c t a l c a n c e r p a t i e n t s w e r e d e t e c t e d b y r e a l-t i m e f l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e P C R.H u m a n c o l o r e c t a l c e l l s S W 4 8 0 w e r e t r a n s f e c t e d w i t h c i r c_D O C K 1 i n t e r f e r i n g p l a s m i d(s h-c i r c_D O C K 1),m i R-1 2 2-5 p i n h i b i t o r(a n t i-m i R-1 2 2-5 p)a n d m i R-1 2 2-5 p m i m i c s(m i R-1 2 2-5 p m i m i c s).T h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d a p o p t o s i s o f c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l s w e r e d e t e c t e d b y C C K-8 m e t h o d,s c r a t c h t e s t a n d T r a n s w e l l t e s t.T h e t a r g e t i n g r e l a t i o n s h i p b e t w e e n c i r c_D O C K 1 a n d m i R-1 2 2-5 p w a s a n a l y z e d b y b i o i n f o r m a t i c s a n d l u c i f e r a s e r e p o r t e r g e n e e x p e r i m e n t s.R e s u l t s T h e e x p r e s s i o n l e v e l s o f c i r c_D O C K 1 a n d P P I B mR NA i n c o l o r e c t a l c a n c e r t i s s u e s w e r e h i g h e r t h a n t h o s e i n a d j a c e n t t i s s u e s,a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f m i R-1 2 2-5 p w a s l o w e r t h a n t h a t i n a d j a c e n t t i s s u e s.C o m p a r e d w i t h t h e r e s c u e g r o u p a n d N C-c i r c_D O C K 1 g r o u p,t h e e x p r e s s i o n o f c i r c_D O C K 1 a n d P P I B mR NA i n s h-c i r c_D O C K 1 g r o u p d e c r e a s e d,e x p r e s s i o n o f m i R-1 2 2-5 p 8921西部医学 2 0 2 3年9月 第3 5卷第9期 M e d J W e s t C h i n a,S e p t e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.9i n c r e a s e d,a n d t h e A v a l u e,c e l l m i g r a t i o n r a t e a n d n u m b e r o f t r a n s m e m b r a n e c e l l s a t 4 8 h a n d 7 2 h a f t e r t r a n s f e c t i o n d e-c r e a s e d(P0.0 5).B i o i n f o r m a t i c s s o f t w a r e p r e d i c t e d t h a t c i r c_D O C K 1 c o n t a i n e d a n u c l e o t i d e s e q u e n c e c o m p l e m e n t a r y t o m i R-1 2 2-5 p.T h e d u a l l u c i f e r a s e r e p o r t e r g e n e e x p e r i m e n t s h o w e d t h a t t h e r e l a t i v e a c t i v i t y o f t h e w i l d-t y p e l u c i f e r a s e r e p o r t e r p l a s m i d o f c i r c_D O C K 1 d e c r e a s e d a f t e r t r a n s f e c t i o n o f m i R-1 2 2-5 p m i m i c s,a n d t h e w i l d-t y p e l u c i f e r a s e o f c i r c_D O C K 1 a f t e r t r a n s-f e c t i o n o f a n t i-m i R-1 2 2-5 p T h e r e l a t i v e t r a n s c r i p t i o n a l a c t i v i t y o f t h e r e p o r t e r p l a s m i d i n c r e a s e d(P0.0 5).C o n c l u s i o n T h e e x p r e s s i o n o f c i r c_D O C K 1 i s u p-r e g u l a t e d i n c o l o n c a n c e r t i s s u e,a n d i t c a n a f f e c t t h e p r o l i f e r a t i o n,m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f c o l o r e c t a l c a n c e r b y r e g u l a t i n g t h e m i R-1 2 2-5 p/P P I B a x i s.C i r c_D O C K 1 c a n b e c o n s i d e r e d a s t h e r e s e a r c h d i-r e c t i o n o f m o l e c u l a r t a r g e t e d t h e r a p y f o r c o l o r e c t a l c a n c e r.【K e y w o r d s】C y c l i c r i b o n u c l e o t i d e_d e d i c a t o r o f c y t o k i n e s i s 1;M i c r o r i b o n u c l e o t i d e-1 2 2-5 p;C o l o r e c t a l c a n c e r;P r o-l i f e r a t i o n;M i g r a t i o n;I n v a s i o n 结直肠癌是全球第三大常见恶性肿瘤,是导致癌因性死亡的第二大原因1,对人类健康造成了极大的影响,我国近年来的结直肠癌发病率和死亡率均持续升高,造成了严重的癌症负担2-3。因恶性肿瘤发生早期无特异性的症状,且受健康检查意识薄弱、漏诊及结肠镜检查覆盖不全等综合因素影响,多数结直肠癌患者就诊时已失去最佳手术时机,预后不佳。因此探索结直肠癌的发病机制,寻找新的治疗靶点对于结直肠癌的防治有重要意义。多项研究证实,非编码R NA参与癌症表型,关于非编码R NA的干预研究为结直肠癌的治疗提供了新的前景4-6。环状核糖核苷酸(c i r c R NA)作为非 编码R NA,能够调 节 微 小R NA(m i R NA)和信使R NA(mR NA),并充当m i R NA s的分子海绵和转录调节因子,与R NA结合蛋白质结合翻译蛋白,影响细胞的生命活动7。研究发现c i r c_胞质分裂作用因子1(D e d i c a t o r o f c y t o k i n e s i s 1,c i r c_D O C K 1)在结直肠癌中表达异常,且能影响人脑血管平滑肌细胞的增殖和凋亡8-9。m i R-1 2 2-5 p作为小型非编 码R NA已 经 被 证 实 参 与 多 种 癌 症 的 发 生 发展1 0-1 1。肽酰脯氨基顺反异构酶B(P e p t i d y l-p r o l y l c i s-t r a n s i s o m e r a s e,P P I B)有肽酰脯氨基顺反异构催化活性,在m i R NA调控下能发挥转录因子的作用,促进细胞的生长和增殖1 2。故本研究探讨c i r c_D O C K 1通过调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以期为结直肠癌的靶向治疗提供新的研究方向。1 材料与方法1.1 临床样本 选取2 0 2 0年5月2 0 2 1年5月收治的经病理诊断证实且术前未接受化疗的3 0例结直肠癌患者癌组织与癌旁组织标本(距离癌组织5 c m),患者年龄3 68 0岁,男性1 8例,女性1 2例,平均(6 4.6 91 0.5 8)岁;分化程度:高分化4例,中分化1 5例,低分化1 1例;T NM分期:I/I I期1 2例,I I I/I V期1 8例。研究项目经医院伦理委员会批准,且患者均签署知情同意书。1.2 实验材料 人结直肠癌细胞SW 4 8 0株(中国科学院上海细胞库),1 0%胎牛血清、1%双抗(链霉素+青霉素)(南京科佰生物科技有限公司)DMEM培养基,于3 7、5%C O2密 闭 式 孵 箱 内 培 养。T r i z o l R NA抽提试剂、荧光素酶检测试剂盒、L i p o f e c t a m i-n e TM 3 0 0 0阳离子脂质体(美国I n v i t r o g e n公司),c i r c_D O C K 1干扰质粒(s h-c i r c_D O C K 1),m i R-1 7-5 p反义寡核苷酸重组质粒(a n t i-m i R-1 7-5 p)和m i R-1 7-5 p模拟物(m i R-1 7-5 p m i m i c s)(苏州吉玛基因股份有限公司);3 5 5 0 UV酶标仪、7 5 0 0实时荧光定量P C R仪、电泳仪、C h e n i D o c X R S化学发光成像分析系统(B i o-r a d公司),徕卡生物倒置显微镜(德国L e i c a公司)。1.3 实时荧光定量P C R检测c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达水平 结肠癌组织和癌旁组织加入液氮中研磨,以T r i z o l试剂盒提取总R NA,逆转录试剂盒将R NA逆转为c D NA,分别扩增c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B和内参U 6及-a c t i n基因,引物序列设计由上海生工生物工程有限公司合成,制备P C R反应体系,2S y b g r e e n预混合物1 0 L,c D NA模板8.8 L,上下游引物各0.6 L,总体积2 0 L,严格按照试剂盒说明书操作,在P C R结束后直接获取目的基因相对表达水平(本研究细胞实验均重复3次)。1.4 人结直肠癌细胞SW 4 8 0的培养与转染 取对数生长期人结直肠癌细胞SW 4 8 0,11 04/孔密度接种于9 6孔板中,至细胞融合率达到7 0%,按照L i p o-f e c t a m i n e TM 3 0 0 0脂质体转染试剂盒说明书操作,分别转染s h-c i r c_D O C K 1(s h-c i r c_D O C K 1组)、干扰对照载体(N C-c i r c_D O C K 1组)和s h-c i r c_D O C K 1+a n-t i-m i R-1 7-5 p(挽救组)。1.5 C C K-8检测细胞增殖能力 转染后培养0 h、2 4 h、4 8 h和7 2 h时分别在培养孔中加入1 0 L的C C K-8工作液,3 7 孵育2 h,酶标仪检4 5 0 n m处的吸光度(A)值,绘制生长曲线。9921西部医学 2 0 2 3年9月 第3 5卷第9期 M e d J W e s t C h i n a,S e p t e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.91.6 划痕实验检测细胞迁移能力 转染后的细胞以11 04/孔密度接种于6孔板中,2 4 h待细胞贴壁生长后以1 0 L移液枪头在培养板中划直线,更换为含1 0%血清的新鲜培养液,3 7、5%C O2环境中继续培养,4 8 h后倒置显微镜下观察细胞迁移情况。1.7 T r a n s w e l l实验检测细胞侵袭能力 转染后的细胞11 05个接种于T r a n s w e l l小室上室,加入2 0 0 L无血清培养液,下室加入5 0 0 L的DMEM培养基,孵育箱培养4 8 h,去除上室细胞,4%多聚甲醛固定,0.1%结晶紫染色1 5 m i n,晾干后拍照计算穿模细胞数。1.8 双荧光素酶报告基因实验 细胞接种于2 4孔板,贴壁后待转染,将含有m i R-1 2 2-5 p潜在结合位点的c i r c_D O C K 1 3 非翻译区(3 -u n t r a n s l a t e d r e g i o n,3 UT R)和U P F 1 3 -UT R荧光素酶报告质粒(P m i r-G L O)和结合位点突变的荧光素酶质粒与a n t i-m i R-1 7-5 p、m i R-1 7-5 p m i m i c s共转染至人结直肠癌细胞SW 4 8 0,孵育4 8 h,按照荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。1.9 统计学分析 采用S P S S 2 0.0软件进行统计学分析,计量资料以xs表示,多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用L S D-t检验;两样本比较采用t检验。P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 临床标本c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达水平比较 与癌旁组织比较,癌组织的c i r c_D O C K 1、P P I B mR NA表达量升高,m i R-1 2 2-5 P表达量下降,差异有统计学意义(P0.0 5),见图1、2。图1 癌组织与癌旁组织c i r c_D O C K 1、P P I B m R N A表达量比较F i g u r e 1 C o m p a r i s o n o f C i r c_D O C K 1 a n d P P I B m R N A e x p r e s s i o n b e-t w e e n c a n c e r t i s s u e a n d a d j a c e n t t i s s u e注:与癌组织比较,P0.0 5。图2 癌组织与癌旁组织c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B m R N A表达电泳图F i g u r e 2 C o m p a r i s o n o f C i r c_D O C K 1,m i R-1 2 2-5 p,P P I B m R N A e x p r e s s i o n b e t w e e n c a n c e r f i s s u e a n d a d j a c e n t t i s s u e2.2 人结直肠癌细胞SW 4 8 0 c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表 达 水 平 比 较 与 挽 救 组 和N C-c i r c_D O C K 1组比较,s h-c i r c_D O C K 1组的c i r c_D O C K 1和P P I B mR NA表达量下降,m i R-1 2 2-5 p表达量升高,差异有统计学意义(P0.0 5),见图3、4。2.3 人结直肠癌细胞SW 4 8 0增殖情况比较 3组转染后0 h、2 4 h的A值比较,差异无统计学意义(P0.0 5),s h-c i r c_D O C K 1组的4 8 h和7 2 h的A值低于挽救组和N C-c i r c_D O C K 1组(P0.0 5)。见图5。图3 C i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B表达水平比较F i g u r e 3 C o m p a r i s o n o f C i r c_ D O C K 1,m i R-1 2 2-5 p a n d P P I B e x p r e s-s i o n l e v e l s注:与s h-c i r c_D O C K 1组比较,P0.0 5。0031西部医学 2 0 2 3年9月 第3 5卷第9期 M e d J W e s t C h i n a,S e p t e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.9 图4 人结直肠癌细胞c i r c_D O C K 1、m i R-1 2 2-5 p、P P I B m R N A表达电泳图F i g u r e 4 E l e c t r o p h o r e s i s o f h u m a n c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l c i r c_ D O C K 1,m i R-1 2 2-5 p,P P I B m R N A e x p r e s s i o n图5 人结直肠癌细胞S W 4 8 0增殖情况比较F i g u r e 5 C o m p a r i s o n o f p r o l i f e r a t i o n o f h u m a n c o l o r e c t a l c a n c e r c e l l S W 4 8 02.4 人结直肠癌细胞SW 4 8 0迁移和侵袭情况比较s h-c i r c_D O C K 1组的细胞迁移率和穿膜细胞数均低于挽救组和N C-c i r c_D O C K 1组(P0.0 5),见表1、图6、7。表1 人结直肠癌细胞S W 4 8 0迁移和侵袭情况比较(xs)T a b l e 1 C o m p a r i s o n o f m i g r a t i o n a n d i n v a s i o n o f h u m a n c o l o r e c t a l c a n c-e r c e l l S W 4 8 0组别细胞迁移率(1 0-2)穿膜细胞数(个/视野)s h-c i r c_D O C K 1组1 0.3 34.3 66 2.3 56.3 5挽救组3 2.1 25.0 61 0 6.5 85.2 0N C-c i r c_D O C K 1组3 5.6 35.4 71 5 0.3 61 0.3 3F1 8.2 1 53 6.8 4 3P0.0 0 20.0 0 1注:与s h-c i r c_D O C K 1组比较,P0.0 5。图6 细胞迁移情况F i g u r 6 C e l l m i g r a t i o n图7 细胞侵袭情况F i g u r e 7 C e l l i n v a s i o n1031西部医学 2 0 2 3年9月 第3 5卷第9期 M e d J W e s t C h i n a,S e p t e m b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.92.5 c i r c_D O C K 1与m i R-1 2 2-5 p的靶向关系验证 利用生物信息学软件T a r g e t S c a n、m i R w a l k初步预测c i r c_D O C K 1与m i R-1 2 2-5 p 3 UT R的结合位点,显示c i r c_D O C K 1序列中含有与m i R-1 2 2-5 p互补的核苷酸序列,见图8。双荧光素酶报告基因实验显示,转染m i R-1 2 2-5 p m i m i c s后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染a n t i-m i R-1 2 2-5 p后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加,差异有统计学意义(P0.0 5)。见表2。图8 c i r c_D O C K 1与m i R-1 2 2-5 p的结合位点F i g u r e 8 C i r c_ b i n d i n g s i t e o f D O C K 1 a n d m i R-1 2 2-5 p表2 c i r c_D O C K 1荧光素酶活性(xs)T a b l e 2 C i r c_ D O C K 1 l u c i f e r a s e a c t i v i t y转染类型野生型荧光素酶报告质粒相对活性值突变型荧光素酶报告质粒相对活性值阴性对照1.0 20.21.1 10.2 2m i R-1 2 2-5 p m i m i c s0.6 00.1 01.0 80.2 2a n t i-m i R-1 2 2-5 p1.6 80.3 01.1 50.2 0F1 9.0 5 40.0 8 1P0.0 0 30.9 2 3注:与阴性对照比较,P0.0 5。3 讨论随着基因检测、筛查等技术的进步,寻找恶性肿瘤的基因治疗靶点成为研究热点。c i r c R NA作为新型的内源性非编码R NA,是由前mR NA和非编码R NA的非规范反向剪接产生的单链R NA的共价环,较线性的R NA更为稳定,在真核细胞中广泛存在,参与控制细胞周期、肿瘤发生和化学抗性1 3-1 4。有研究证实,c i r c R NA调节的主要机制之一是作为竞争性内源性R NA或R B P分子海绵调控靶基因的表达,影响恶性肿瘤的进展1 5。D O C K 1属于胞质分裂贡献因子家族成员,具有鸟嘌呤核苷酸交换因子活性,而D O C K 1异常是多种免疫缺陷疾病的重要原因。D O C K 1在甲状腺癌、肝癌、骨肉瘤等多种恶性肿瘤中具有促癌基因属性,参与肿瘤的生长、侵袭、转移等生物学过程。研究发现来自c i r c R NA的D O C K 1能过抑制甲状腺细胞中的m i R-1 2 4的表达,阻断a n u s激酶/信号转导及转录激活因子/腺苷5 -单磷酸活化蛋白激酶信号通路的信号转导,并参与通过下调m i R-1 2 4导致甲状腺癌的发生;还可通过m i R-6 5 4-5 p/S MA D同源物2轴抑制肝癌的进展,并能调节m i R-3 3 9-3 p/胰岛素样生长因子1受体轴促进成骨肉瘤的肿瘤发生和顺铂耐药1 6-1 8。一项动物实验发现,m i R-1 2 2-5 p能通过细胞分裂周期和细胞凋亡调控因子1增强肠上皮细胞放射敏感性,加重小鼠放射性直肠损伤1 9。Y i n等2 0一项细胞实验中,m i R-1 2 2-5 p亦能受c i r c_0 0 0 7 1 4 2的调节,启动下游C D C 2 5 A促进结直肠癌的进展。以上研究说明一种c i r c R NA可调控多种靶基因,而一个靶基因受多种c i r c R NA的调控。P P I B具有肽酰脯氨基顺反异构催化活性,当其顺反异构的催化活性被阻断,则作为细胞外基质主要成分的胶原蛋白成熟被延迟,而细胞外基质是癌细胞发生转移需要突破的第一道屏障2 1。在本研究中发现c i r c_D O C K 1、P P I B mR NA在结直肠癌组织中高表达,m i R-1 2 2-5 p低表达;在SW 4 8 0细胞中抑制c i r c_D O C K 1的表达,而m i R-1 2 2-5 p表达升高,P P I B mR NA表达下降,且SW 4 8 0细胞的增殖、转移和侵袭能力下降,说明c i r c_D O C K 1和P P I B在结直肠癌中高表达,而m i R-1 2 2-5 p低表达,敲低c i r c_D O C K 1能影响m i R-1 2 2-5 p和P P I B表达,并抑制结直肠癌的增殖、侵袭和转移。本研究为了评估c i r c_D O C K 1在SW 4 8 0细胞能够由m i R-1 2 2-5 p介导,将敲低c i r c_D O C K 1的细胞共转染a n t i-m i R-1 7-5 p,结果逆转了敲低c i r c_D O C K 1的作用效应。此外通过双荧光素酶报告基因结果显示,转染m i R-1 2 2-5 p m i m i c s后,c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染a n t i-m i R-1 2 2-5 p后c i r c_D O C K 1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加,说明过表达m i R-1 2 2-5 p能结合c i r c_D O C K 1抑制报告基因荧光素酶活性,证明了两者的靶向关系,即c i r c_D O C K 1在结直肠癌中充当m i R-1 2 2-5 p的分子海绵,竞争性结合m i R-1 2 2-5 p,调节P P I B,影响结直肠癌的进展。4 结论综上所述,c i r c_D O C K 1在结直肠癌组织中的表达异常升高,并可通过调节m i R-1 2 2-5 p/P P I B轴影响结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。【参考文献】1K E UM N,G I OVANNU C C I E.G l o b a l b u r d e n o f c o l o r e c t a l c a n c e r:e m e r g i n g t r e n d s,r i s k f a c t o r s a n d p r e v e n t i o n s t r a t e g i e sJ.N a t R e v G a s t r o e n t e r o l H e p a t o l,2 0 1 9,1 6(1 2):7 1 3-7 3 2.2L I N,L U B,L UO C,e t a l.I n c i d e n c e,m o r t a l i t y,s u r v i v a l,r i s k f a c t o r a n d s c r e e n i n g o f c o l o r e c t a l c a n c e r:A c o m p a r i s o n a-m o n g C h i n a,E u r o p e,a n d n o r t h e r n 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