miR-155通过调控PKG1影响滋养细胞生物学功能并参与子痫前期的机制探讨.pdf

Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.9miR-155通过调控PKG1影响滋养细胞生物学功能并参与子痫前期的机制探讨岳巾晶1，曾莹1，郭晓珮1，董越1，姬若楠1，彭瑞2，罗晓华1摘要：目的探究miR-155和环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶1（PKG1）在子痫前期患者胎盘组织中的表达及miR-155在核因子（NF）-B的介导下通过抑制PKG1对滋养细胞HTR-8/SVneo功能的影响。方法收集剖宫产分娩的正常产妇（NPE组）以及子痫前期产妇（PE组）的胎盘各20个,体外培养滋养细胞HTR-8/SVneo，分为NC组、mimics组、inhibitor组、siRNA NC组、PKG1 siRNA组、siRNA+inhibitor组；用NF-B抑制剂PDTC处理细胞，分为Control组、PDTC组、PDTC+NC组、PDTC+mimics组。采用qPCR检测胎盘和滋养细胞HTR-8/SVneo中miR-155和PKG1 mRNA的表达；Western blot检测PKG1蛋白的表达；分别采用CCK-8法、Transwell法、流式细胞术检测细胞的增殖、迁移、凋亡能力。结果PE组胎盘组织中miR-155的表达升高，而PKG1的表达降低（P0.05）。体外实验表明，与NC组相比，miR-155 mimics组中PKG1的表达降低，滋养细胞迁移、增殖能力减弱，凋亡能力增强，miR-155 inhibitor组中PKG1表达则升高，滋养细胞迁移、增殖能力增强，凋亡能力减弱（P0.05）；与Control组相比，PDTC组miR-155的表达降低，滋养细胞迁移、增殖能力增强，凋亡能力减弱（P0.05）。结论miR-155在子痫前期中表达上调，并且可在NF-B的介导下通过下调PKG1影响滋养细胞的增殖、迁移和凋亡。关键词：先兆子痫；细胞运动；细胞增殖；细胞凋亡；NF-B；miR-155；PKG1；滋养细胞中图分类号：R714.244文献标志码：ADOI：10.11958/20221869基金项目：河南省科技攻关项目（202102310473）作者单位：1郑州大学第三附属医院妇产科（邮编450000），2科研办公室作者简介：岳巾晶（1997），女，硕士在读，主要从事子痫前期的诊断和治疗方面研究。E-mail：通信作者E-mail：L细胞与分子生物学cells as a selective topoisomerase inhibitorJ.NaunynSchmiedebergs Arch Pharmacol，2022，395（1）：65-76.doi：10.1007/s00210-021-02172-5.12 周小剑，李玉华，唐湘，等.乌头碱抑制食管癌EC-1细胞增殖与侵袭并诱导其凋亡作用研究 J.中国医药生物技术，2019，14（4）：335-340.ZHOU X J，LI Y H，TANG X，et al.Aconitineinhibits the proliferation and invasion while induces the apoptosis ofesophagealcancerEC-1cells J.ChineseMedicinalBiotechnology，2019，14（4）：335-340.doi：10.3969/j.issn.1673-713X.2019.04.008.13 WANG X，LIN Y，ZHENG Y.Antitumor effects of aconitine inA2780 cells via estrogen receptor -mediated apoptosis，DNAdamage and migration J.Mol Med Rep，2020，22（3）：2318-2328.doi：10.3892/mmr.2020.11322.14 JI B L，XIA L P，ZHOU F X，et al.Aconitine induces cell apoptosisin human pancreatic cancer via NF-B signaling pathway J.EurRev Med Pharmacol Sci，2016，20（23）：4955-4964.15 柯东平，朱金祥，毛俊倩，等.miR-181d-5p对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制 J.贵州医科大学学报，2019，44（7）：814-820.KE D P，ZHU J X，MAO J Q，et al.Effect and mechanism ofmicroRNA-181d-5p on apoptosis of human colon cancer cells J.Journal of Guizhou Medical University，2019，44（7）：814-820.doi：10.19367/ki.1000-2707.2019.07.014.16 DONG X，LIU Y，DENG X，et al.C1GALT1，Negatively regulatedby miR-181d-5p，promotes tumor progression via upregulatingRAC1 in lung adenocarcinomaJ.Front Cell Dev Biol，2021，9：707970.doi：10.3389/fcell.2021.707970.17 KHALIL S，FABBRI E，SANTANGELO A，et al.miRNA arrayscreening reveals cooperative MGMT-regulation between miR-181d-5p and miR-409-3p in glioblastoma J.Oncotarget，2016，7（19）：28195-28206.doi：10.18632/oncotarget.8618.18 李祥双，于海霞，叶燕珍，等.miR-181d-5p对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及机制 J.山东医药，2022，62（22）：42-46.LI XS，YU H X，YE Y Z，et al.Influence and mechanism of miR-181d-5p on radiosensitivity of cervical cancer cellsJ.ShandongMedical Journal，2022，62（22）：42-46.doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2022.22.010.19 NI J，CHEN L，LING L，et al.MicroRNA-196a promotes cellproliferation and inhibits apoptosis in human ovarian cancer bydirectly targeting DDX3 and regulating the PTEN/PI3K/AKTsignaling pathwayJ.Mol Med Rep，2020，22（2）：1277-1284.doi：10.3892/mmr.2020.11236.20 VAN DER POL C C，MOELANS C B，MANSON Q F，et al.Cytoplasmic DDX3 as prognosticator in male breast cancerJ.Virchows Arch，2021，479（4）：647-655.doi：10.1007/s00428-021-03107-4.21 HUA Q，LIU Y，LI M，et al.Tobacco-related exposure upregulatesCirc_0035266 to exacerbate inflammatory responses in humanbronchial epithelial cellsJ.Toxicol Sci，2021，179（1）：70-83.doi：10.1093/toxsci/kfaa163.（2022-11-14收稿2023-03-14修回）（本文编辑陈丽洁）928天津医药 2023 年 9 月第 51 卷第 9 期子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期特有的疾病，其特征是妊娠20周后出现蛋白尿和高血压。PE的发病率为2%8%1，是导致孕产妇及新生儿死亡的主要原因之一，占全球孕产妇死亡的 10%15%2。目前普遍认为胎盘滋养层细胞侵袭异常、血管内皮功能受损与PE的发病密切有关3，但具体发病机制仍不清楚，缺少有效的治疗措施。微小RNA（microRNA，miR）是一类小分子非编码RNA，长度约22个核苷酸4。研究表明，miRNA的表达失调可能与PE的发生有关5。本团队前期研究发现，miR-155在子痫前期患者胎盘组织中高表达，并且可抑制滋养细胞的增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡和炎性反应6。已有研究表明，miR-155可通过与一氧化氮（NO）/环磷酸鸟苷（cGMP）通路的主要下游分子环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶1（cGMP-dependentprotein kinase 1，PKG1）的 3-非翻译区（UTR）互补结合，从而负向调节血管平滑肌细胞（VSMC）中PKG1的表达，进而导致VSMC 表型转换和功能障碍7。然而，该通路在PE和滋养细胞中的作用尚未被证实，笔者推测miR-155可能通过调节PKG1参与PE的进展。本研究旨在探究miR-155/PKG1轴对PE的影响以及对滋养细胞生物学功能的调节机制。1材料与方法1.1材料选择2020年6月2021年12月于郑州大学第三附属医院剖宫产分娩的PE产妇20例作为PE组，选择同期剖宫产分娩的正常产妇20例作为NPE组。PE的诊断标准参考妊娠期高血压疾病诊治指南（2020）8。2组产妇均排除双胎及多胎妊娠、慢性肝肾疾病、妊娠期糖尿病、传染性或代谢性疾病等。本研究经本院伦理委员会批准（伦理号：2022-238-01），所有研究对象均签署知情同意书。1.2主要试剂与仪器人绒毛膜滋养层细胞HTR8/SVneo购自上海中国科学院细胞库；Trizol试剂购自日本TAKARA公司；Lipofectaimine 2000、Transwell 小室购自美国 ThermoFisher Scientific 公司；miR-155 mimic、inhibitor、NC、PKG1siRNA以及PKG1 siRNA NC购自上海吉玛制药技术有限公司；PDTC购自英国Abcam公司；荧光定量PCR（qPCR）试剂盒购自德国DBI公司；PKG1抗体购自美国Boster公司；BCA蛋白定量试剂盒购自南京凯基生物发展有限公司；CCK-8试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；Annexin V-FITC/PI试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；PCR扩增仪（Mx3000P）购自杭州晶格科学仪器有限公司。MiR-155 affects the biological functions of trophoblastic cells through regulatingcGMP-dependent kinase 1 and is involved in the mechanism of preeclampsiaYUE Jinjing1,ZENG Ying1,GUO Xiaopei1,DONG Yue1,JI Ruonan1,PENG Rui2,LUO Xiaohua11 Department of Gynaecology and Obstetrics,2 Department of Scientific Research Office,the Third Affiliated Hospital ofZhengzhou University,Zhengzhou 450000,ChinaCorresponding AuthorE-mail:LAbstract:ObjectiveTo investigate the expression levels of miR-155 and cGMP-dependent protein kinase 1(PKG1)in placental tissue of patients with preeclampsia,and the effect of miR-155 on the function of trophoblasts HTR-8/SVneo by inhibiting PKG1 under the mediation of nucleus factor kappa B(NF-B).MethodsTwenty placentas werecollected from normal pregnant women and pre-eclampsia pregnant women who delivered by cesarean section.In vitrotrophoblasts HTR-8/SVneo were cultured and divided into the NC group,the mimics group,the inhibitor group,thesiRNA NC group,the PKG1 siRNA group and the siRNA+inhibitor group.Cells were treated with NF-B inhibitorPDTC and divided into the control group,the PDTC group,the PDTC+NC group and the PDTC+mimics group.Real-time quantitative polymerase chain reaction(qPCR)was performed to detect the expression of miR-155 and PKG1mRNA in placentas and HTR-8/SVneo cells.Western blot assay was performed to measure the level of PKG1 protein.The cell proliferation,migration and apoptosis were assessed by CCK-8 assay,Transwell assay and flow cytometry.ResultsThe expression of miR-155 was significantly upregulated in placental tissue of the PE group,while theexpression of PKG1 decreased significantly(P0.05).The vitro experiments showed that compared with the NC group,the expression of PKG1 was significantly reduced in the miR-155 mimics group(P0.05).The migration andproliferation ability of trophoblast was significantly weakened,the apoptotic ability was significantly enhanced(P0.05).The expression of PKG1 was significantly increased in the miR-155 inhibitor group,the migration andproliferation ability of trophoblast was significantly enhanced,and the apoptotic ability was significantly weakened.Compared with the control group,the expression of miR-155 was significantly reduced in the PDTC group,the migrationand proliferation ability of trophoblast was significantly enhanced,and the apoptotic ability was significantly weakened(P0.05).ConclusionResults indicate that the expression of miR-155 is upregulated in preeclampsia,and can affectproliferation,migration and apoptosis of trophoblast cells by down-regulating PKG1 mediated by NF-B.Key words:pre-eclampsia;cell movement;cell proliferation;apoptosis;NF-kappa B;miR-155;PKG1;trophoblast929Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.91.3研究方法1.3.1标本的收集与处理所有标本均在剖宫产胎盘娩出后5 min内收集，避开钙化灶及出血区域，于胎盘母面不同位置剪取胎盘组织，置于无菌的EP管中，并迅速置于-80 冰箱中保存备用。1.3.2细胞分组转染将体外培养的HTR-8/SVneo细胞分为6组：NC组（转染miR-155 NC）、mimics组（转染miR-155mimic）、inhibitor组（转染miR-155 inhibitor）、siRNA NC组（转染 PKG1 siRNA NC）、PKG1 siRNA 组（转染 PKG1 siRNA）、siRNA+inhibitor组（转染PKG1 siRNA和miR-155 inhibitor）。取对数期生长至密度为90%的细胞接种至6孔板（3105/孔），并更换为无血清无双抗的培养基，按照Lipofectaimine 2000试剂盒说明书对各组细胞分别进行转染，于37、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养4 h后更换为含10%胎牛血清的培养基继续培养48 h。1.3.3核因子（NF）-B抑制剂PDTC处理PDTC是国际公认的NF-B抑制剂，可以在多种细胞中抑制NF-B的激活。将细胞分为4组：Control 组（常规培养）、PDTC 组（PDTC 处理）、PDTC+NC 组（PDTC 与 miR-155 NC 共处理）、PDTC+mimics组（PDTC与miR-155 mimics共处理）。PDTC组使用含 PDTC 30 mol/L 的 培 养 基 培 养 48 h，PDTC+NC 组 与PDTC+mimics 组中，miR-155 NC 或 miR-155 mimics 转染后更换为含PDTC 30 mol/L的培养基再培养48 h。1.3.4总RNA提取及qPCR检测将所保存的胎盘组织从冰箱中取出，采用 Trizol 法进行胎盘组织和各组 HTR-8/SVneo细胞中总RNA的提取，质检后继续-80 保存。按照逆转录试剂盒说明书将 RNA 合成 cDNA，随后用 AgilentStratagene荧光定量PCR仪进行荧光定量，PCR反应条件：95 2 min；94 20 s，58 20 s，72 20 s，40 个循环。miR-155以U6为内参，PKG1以GAPDH为内参。引物序列见表1。采用2-Ct法计算miR-155和PKG1的相对表达量。1.3.5Western blot检测各组PKG1的表达采用RIPA裂解液提取胎盘组织和各组HTR-8/SVneo细胞中的总蛋白，按照BCA试剂盒检测蛋白浓度，用10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白样品，并转移到PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭2 h后，加入一抗（1 1 000）孵育过夜，然后加入二抗（1 2 000）室温下孵育2 h，之后进行ECL显影，各条带的灰度值采用Image Pro Plus Ver.6.0进行分析，目的蛋白相对表达量=目的条带灰度值/GAPDH灰度值。1.3.6Transwell检测细胞迁移能力在Transwell小室的上室接种细胞（3104/孔），下室加入含10%胎牛血清的完全培养基，培养24 h后采用4%多聚甲醛固定，结晶紫染色，随机抽取3张图片，显微镜下观察迁移细胞数。1.3.7CCK-8检测细胞增殖活性将细胞接种于96孔培养板（3103/孔）中培养12 h，分别于0 h、24 h、48 h、72 h时取出培养板，加入100 L CCK-8工作液，再培养2 h，然后检测450 nm处的吸光度（A）值。1.3.8流式细胞术检测细胞凋亡按照Annexin V-FITC/PI试剂盒说明书进行操作。首先收集培养48 h的细胞，制备细胞悬液，然后加入凋亡检测工作液，避光孵育 15 min。用FlowJo软件测定细胞凋亡率。1.4统计学方法采用SPSS 26.0及Graphpad Prism 9.0软件进行数据分析。正态分布的计量资料以xs表示，2组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验。不符合正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，2组间比较采用Mann-Whitney U检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1受试者一般资料比较与NPE组相比，PE组年龄、体质量指数（BMI）和孕周的差异无统计学意义（P0.05），收缩压（SBP）及舒张压（DBP）升高，而胎儿出生体质量降低（P0.05），见表2。2.22 组胎盘组织中 miR-155 及 PKG1 的表达比较与NPE组相比，PE组miR-155的表达水平升高（P0.01），而 PKG1 的 mRNA 及蛋白0.15（0.07，0.32）vs.0.88（0.77，1.03），n=4，Z=16.000 水平均降低（P0.05），见表3、图1。2.3miR-155对滋养细胞HTR-8/SVneo中PKG1表达的影响与NC组相比，miR-155 mimics组miR-155水平升高，miR-155 inhibitor组降低（P0.05），miR-155 inhibitor组PKG1 mRNA和蛋白水平升高，而miR-155 mimics组降低（P0.05）。见表4、图2。2.4miR-155 对滋养细胞 HTR-8/SVneo 迁移、增殖、凋亡的影响与NC组相比，miR-155 inhibitor组细胞迁移、增殖能力增强，细胞凋亡率减少（P基因名称U6miR-155GAPDHPKG1引物序列（53）上游：CTCGCTTCGGCAGCACA下游：AACGCTTCACGAATTTGCGT上游：ACACTCCAGCTGGGTTAATGCTAATCGTGATA下游：TTAATGCTAATCGTGATAGGGG上游：TGTTCGTCATGGGTGTGAAC下游：ATGGCATGGACTGTGGTCAT上游：AACTCCACAAATGCCAGTCG下游：GCAACTGTCCTTGCCATACT产物大小/bp9660154272Tab.1Oligonucleotide primer sequences for qPCR表1qPCR引物序列组别PE组NPE组t年龄/岁29.73.531.03.11.187BMI/（kg/m）29.12.328.31.91.193SBP/mmHg155.311.2107.36.216.756Tab.2Comparison of clinical characteristics between thetwo groups of patients表22组产妇一般资料比较（n=20，xs）P0.05，P0.01。组别PE组NPE组tDPB/mmHg98.09.467.86.311.957分娩孕周/周36.62.137.01.80.730胎儿出生体质量/kg2.60.73.00.53.235930天津医药 2023 年 9 月第 51 卷第 9 期0.05），而miR-155 mimics组细胞迁移、增殖能力减弱，细胞凋亡率增加（P0.05），见表5，图3、4。2.5抑制PKG1的表达后对miR-155、PKG1表达的影响与NC组相比，inhibitor组miR-155水平降低，PKG1 mRNA和蛋白的水平升高（P0.05）；与PKG1PKG1GAPDHPE组NPE组Fig.1Expression of PKG1 protein in placenta of two groups detectedby Western blot assay图1Western blot检测2组胎盘组织中PKG1蛋白的表达量P0.01；a与NC组比较，P0.05。组别NC组miR-155 mimics组miR-155 inhibitor组FmiR-1551.000.0712.411.02a0.290.02a400.478PKG1 mRNA1.000.230.410.03a2.760.31a135.734PKG1蛋白0.490.100.130.01a1.190.07a185.053Tab.4Comparison of miR-155 and PKG1 mRNAexpression levels after treatment with miR-155 mimics andmiR-155 inhibitor between the three groups表4miR-155 mimics和miR-155 inhibitor处理后各组miR-155、PKG1 mRNA和蛋白水平比较（n=3，xs）10-1100101102103101103105107104105106NC组Annexin VPI10-1100101102103101103105107104105106miR-155 mimics组Annexin VPI10-1100101102103101103105107104105106miR-155 inhibitor组Annexin VPIFig.4Detection of apoptosis in each group detected by flow cytometry图4流式细胞术检测各组细胞凋亡情况NC组miR-155 mimics组miR-155 inhibitor组Fig.3Cell migration of each group after treatment with miR-155 mimics and miR-155 inhibitor(200)图3miR-155 mimics和miR-155 inhibitor处理后各组细胞迁移情况（200）A：NC组；B：miR-155 mimics组；C：miR-155 inhibitor组。CBAGAPDHPKG1Fig.2Expression of PKG1 protein in each group of trophoblast HTR-8/SVneo detected by Western blot assay图2Western blot检测各组滋养细胞HTR-8/SVneo中PKG1蛋白的表达组别PE组NPE组tmiR-1554.412.062.070.614.782PKG11.520.904.042.035.076Tab.3Comparison of expression levels of miR-155 andPKG1 mRNA in placental tissue between the two groups表32组胎盘组织中miR-155及PKG1 mRNA表达水平比较（n=20，xs）P0.01。组别NC组miR-155 mimics组miR-155 inhibitor组F增殖能力（A450）24 h0.260.020.250.01a0.290.01a6.04848 h0.430.210.320.03a0.500.03a37.32772 h0.640.190.460.02a0.870.04a160.188Tab.5Comparison of cell proliferation,migration andapoptosis after treatment with miR-155 mimics and miR-155 inhibitor between the three groups表5miR-155 mimics和miR-155 inhibitor处理后各组细胞增殖、迁移及凋亡水平的比较（n=3，xs）P0.05，P0.01；a与NC组比较，P0.05。组别NC组miR-155 mimics组miR-155 inhibitor组F迁移细胞数/（个/视野）124.6711.3764.3310.02a205.338.02a153.205凋亡率/%11.581.1417.561.44a5.800.54a85.114931Tianjin Med J,September 2023,Vol.51 No.9siRNA 组相比，siRNA+inhibitor 组 miR-155 水平降低，PKG1在mRNA和蛋白水平均升高（P0.05），见表6、图5。2.6抑制NF-B的表达对滋养细胞HTR-8/SVneo中 miR-155 和 PKG1 水平的影响与 Control 组相比，PDTC组miR-155水平降低，PKG1 mRNA和蛋白表达水平升高（P0.05）；与 PDTC+NC 组相比，PDTC+mimics 组 miR-155 的水平升高（P0.05），PKG1 mRNA 和蛋白水平均降低（P0.05），见表7、图6。2.7抑制NF-B表达对滋养细胞HTR-8/SVneo生物学功能的影响与Control组相比，PDTC组滋养细胞的迁移、增殖能力增强，凋亡率下降（P0.05）；与PDTC+NC组相比，PDTC+mimics组滋养细胞的迁移、增殖能力减弱，凋亡率增加（P0.01）。见表8，图7、8。3讨论PE是一种严重威胁母婴健康的妊娠特异性疾病，伴有炎症反应和内皮细胞功能障碍9，如不及时治疗会导致脑卒中、肾功能衰竭、肺水肿、肝破裂、子痫等严重并发症10。目前PE的病因和发病机制尚不清楚，治疗旨在减缓病理进展以延长孕周，然而可用于治疗该疾病的临床策略有限，只有胎盘娩出才可彻底解除母体的症状，因而寻找有效的治疗靶点是当前围产医学领域中的研究热点。3.1miR-155在PE中的表达及作用miRNAs在基因的表达调控中发挥着重要的作用，其通过与靶基因mRNA的3-UTR反向互补，参与细胞分化、增殖、组别NC组inhibitor组siRNA NC组PKG1 siRNA组siRNA+inhibitor组FmiR-1550.990.010.320.04a1.070.091.040.080.650.07b10.933PKG1 mRNA1.020.043.060.19a1.000.030.250.040.640.08b12.000PKG1蛋白0.210.040.830.03a0.250.050.100.000.340.00b67.230Tab.6Comparison of miR-155,PKG1 mRNA andprotein levels after inhibiting the expression of PKG1between the five groups表6抑制PKG1的表达后各组miR-155、PKG1 mRNA和蛋白水平比较（n=3，xs）P0.05，P0.01；a与 NC 组比较，b与 PKG1 siRNA 组比较，P0.05。ABCDEPKG1GAPDHFig.5Expression of PKG1 protein in each group of trophoblast HTR-8/SVneo detected by Western blot assay图5Western blot检测各组滋养细胞HTR-8/SVneo中PKG1蛋白的表达A：NC 组；B：inhibitor 组；C：siRNA NC 组；D：PKG1 siRNA 组；E：siRNA+inhibitor组。组别Control组PDTC组PDTC+NC组PDTC+mimics组FmiR-155 mRNA1.000.030.560.05a0.570.0110.110.28b3 233.927PKG1 mRNA1.010.133.240.23a3.130.250.500.01b182.535PKG1蛋白0.350.021.000.04a1.010.050.110.03b311.788Tab.7Comparison of miR-155 mimics and miR-155mRNA expression levels after inhibiting the expression ofNF-B between the four groups表7抑制NF-B表达后各组细胞中miR-155、PKG1mRNA和蛋白表达水平比较（n=3，xs）P0.01；a与Control组比较，b与PDTC+NC组比较，P0.05。组别Control组PDTC组PDTC+NC组PDTC+mimics组F增殖能力（A450）24 h0.260.010.290.02a0.300.030.240.02b6.26748 h0.420.040.590.04a0.530.030.330.01b38.30972 h0.630.020.930.04a0.900.060.450.03b104.970Tab.8Comparison of cell proliferation,migration andapoptosis after inhibiting the expression of NF-Bbetween the four groups表8抑制NF-B表达后各组细胞增殖、迁移及凋亡率比较（n=3，xs）P0.05，P0.01；a与Control 组比较，b与PDTC+NC 组比较，P0.05。组别Control组PDTC组PDTC+NC组PDTC+mimics组F迁移细胞数/（个/视野）116.005.29169.678.62a156.674.1764.006.25b171.173凋亡率/%10.130.966.251.06a6.591.0915.560.06b69.012PKG1GAPDHABCDA：Control组；B：PDTC组；C：PDTC+NC组；D：PDTC+mimics组。Fig.6Expression of PKG1 protein in each group of trophoblast HTR-8/SVneo detected by Western blot assay图6Western blot检测各组滋养细胞HTR-8/SVneo中PKG1蛋白的表达932天津医药 2023 年 9 月第 51 卷第 9 期凋亡、代谢等多种生物学过程11。有学者研究miRNAs的基因表达谱发现，一些miRNAs，如miR-335、miR-424、miR-18a、miR-155 可以通过作用于多种靶点导致滋养层细胞功能障碍12-13。miR-155是保守性较好的多功能miRNA之一，由位于21号染色体上的miR155宿主基因（MIR155HG）编码，可以在包括PE在内的多种疾病中表达。本课题组前期研究发现，miR-155在PE患者中高表达