阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较.pdf

文章编号：1674 7054(2023)04 0441 10阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较郭琳坤1，祖海月1，孙江2，覃尧1，韩谦1，王金花1（1.海南大学 动物科技学院，海口 570208;2.海之大宠物医院，海口 570105）摘要：为了比较阿仑膦酸钠和富血小板血浆（Platelet rich plasma,PRP）对犬累-卡-佩斯病(LCPD)治疗效果，选取 12 只 6 月龄体质量相近的犬，应用液氮建模法建立 LCPD 模型，运用 X 线片及 Ficat and Arletclassification(Ficat)分期体系对建模结果进行分期和评估。根据股骨头坏死临床诊断标准，选取股骨头坏死期阶段的 9 只犬随机分成 A、B、C 3 组，A 组以每周 3 mgkg1剂量口服给药阿伦磷酸钠治疗 12 周；B 组每两周以 1 mL 葡萄糖酸钙活化的富血小板血浆进行关节腔注射治疗，共注射 3 次；C 组作为空白对照组，不采取治疗措施。3 个月后，通过 X 线扫描及解剖患肢股骨头评估治疗效果，如 X 影像未出现、期病变特征及解剖结果出现股骨头表面光滑无塌陷则认为治疗有效，否则为无效，并运用 SPSS Statistics 17.0 软件包进行数据统计分析评估治疗效果。结果显示，A 组 2 只犬治疗有效，1 只无效。B 组 3 只均有效，C 组 3 只无效。A 组与 C 组差异显著（P=0.05），A 组与 B 组差异不显著（P=0.267），B 组与 C 组差异极其显著（P=0.01），表明，阿仑膦酸钠和 PRP 均能有效治疗犬 LCPD 病，但阿仑膦酸钠与 PRP 治疗效果无显著性差异。关键词：犬；犬股骨头缺血性坏死；阿仑膦酸钠；富血小板血浆中图分类号：S 854.5+2 文献标志码：A引用格式：郭琳坤，祖海月，孙江，等.阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较 J.热带生物学报，2023,14（4）：441450.DOI：10.15886/ki.rdswxb.2023.04.012 股骨头缺血性坏死或无菌性坏死，又称累-卡-佩斯病(Legg-Calv-Perthes Disease，LCPD)，此病常 见 于 约 克 夏 犬(Yorkshire terrier)、腊 肠 犬(Dachshund)、吉 娃 娃 犬(Chihuahua)、贵 宾 犬(Poodle)等小型犬种，其中 610 月龄犬只高发 1；此病发病的主要原因是血供破坏，但主要发病机制目前还不清楚，主要的病理过程是以股骨头部分或完全性缺血和成骨细胞凋亡坏死，骨小梁萎缩，进而导致股骨头塌陷、形变。在人类临床上，LCPD 是常见又难以治愈的骨科疾病，尚没有公认的根本治愈的方法2，其治疗一般会根据不同发展阶段采用相适应的治疗方法，其早中期的治疗一般采用双膦酸盐类药物保守治疗或实施髓蕊减压术、钽棒植入支撑、富血小板血浆（platelet richplasma,PRP）等保髋治疗，后期则采用全髋置换术(Total hip replacement，THR）。但临床上，对于犬 LCPD保髋治疗的方法研究甚少，去髋疗法股骨头和股骨颈切除术(femoral head and neck excision，FHNE)及 THR 仍然是该病普遍采用的治疗方法。双磷酸盐对骨代谢的作用首次报道于 1968年3，目前已经出了第三代药，比如依替磷酸盐、阿伦磷酸盐，第三代药无论是活性还是抗骨吸收能力还是治疗范围都比前两代更强，甚至比第一代活性强几万倍4。由于双膦酸盐类药物能够抑制破骨细胞活性加速其凋亡，预防骨质吸收，同时又能防止成骨细胞凋亡，增加新骨形成在人类临床上被广泛应用于骨质疏松、恶性肿瘤骨转移、早期 LCPD 的治疗；富血小板血浆 收稿日期：2022 05 19修回日期：2022 06 11第一作者：郭琳坤（1986），男，海南大学动物科技学院 2019 级硕士研究生.E-mail：通信作者：王金花(1979)，女，博士，副教授.研究方向：热带动物疾病诊疗.E-mail： 第 14 卷 第 4 期热 带 生 物 学 报Vol.14 No.42023 年 7 月JOURNALOFTROPICALBIOLOGYJul.2023（platelet rich plasma,PRP）由于其富含具有促进成骨细胞增殖和分化、抑制破骨细胞对骨吸收等功能的同源性生长因子（growth factors,GFs），被广泛应用于治疗股骨头缺血性坏死(avascularnecrosis of femoral head,ANFH)5 8，但在兽医临床上双膦酸盐类药物及 PRP 对犬 LCPD 的研究甚少。本试验研究阿仑膦酸钠及 PRP 治疗 LCPD模型犬的效果，为临床治疗缺血性股骨头坏死提供新途径。1材料与方法 1.1材料 12 只髋关节健康 6 月龄中华田园犬(Canis lupus familiaris)（100.5）kg 购自海口邻宠之家宠物诊疗中心；福善美阿伦膦酸钠片（70mg），购买自杭州默沙东制药有限公司；PRP 采集容器，购自浏阳市三力医用科技发展有限公司。1.2犬 LCPD 模型的建立 参照建立幼犬股骨头坏死模型的试验研究9的犬股骨头缺血性坏死液氮建模法，随机对 12 只中华田园犬一侧股骨头建立 LCPD 模型，对侧健肢作对照。60 d 后运用DR 仪对 12 只犬的股骨头进行 X 线扫描评估，再取 X 影像结果不明显的犬只实施股骨头外科摘除术，肉眼观察股骨头外形特点，进一步进行评估。同时运用 Ficat and Arlet classification(Ficat)分期体系4对建模结果进行分期分析。1.3活化 PRP 制备 犬只用异氟烷行呼吸麻醉，用含有柠檬酸钠的 PRP 采血管在犬前肢桡外侧皮静脉采集5 mL 血样，放入离心管中，以3 000 rmin1，离心 6 min，取血浆与红细胞之间的高浓度血小板1 mL，并加入 0.98 mg 葡萄糖酸钙进行活化。1.4临床治疗试验 把建模成功且影像学特征明显的 9 只犬随机分为 A、B、C 3 组，A 组为阿伦磷酸钠口服治疗组，以每周 3 mgkg1的剂量进行口服阿仑膦酸钠治疗，为期 12 周；B 组为葡萄糖酸钙活化的 PRP 注射组，通过外科手术打开试验患肢关节囊，暴露髋关节，再用注射器将事先准备好已经活化的血小板血浆注入关节囊内，最后闭合伤口。每只犬每 2 周注射 1 次，一共注射 3 次。C 组为对照组，不做任何治疗。90 d 后对 A、B、C3 组试验动物进行左右髋关节 DR 仪腹背位 X 线扫描检查，并运用 Ficat 分期体系及解剖患肢髋关节评估治疗效果。1.5Ficat 分期 Ficat 分期是根据股骨头缺血性坏死不同时期 X 线扫描的影像变化，把股骨头缺血性坏死分为 0、过渡、期，6 个不同时期4。本研究把建模及治疗试验数据通过Ficat 分期体系对结果进行分析评估。1.6数据分析 运用数据统计差异分析 SPSSStatistics 17.0 软件包进行数据分析。2结果与分析 2.1LCPD 建模结果 2.1.1 X X 线扫描影像结果线扫描影像结果 建模前、后 X 线扫描对比（图 1、图 2）。在 12 只犬中，9 只犬 DR 影像 1 号犬8 号犬12 号犬建模后建模前 图 1 建模后 DR 影像结果建模后，1、8、12 号犬无明显异常。442热 带 生 物 学 报2023 年不同程度地出现骨密度不均匀、囊性变、股骨头形态轻微改变等异常变化，其中 1、8、12 号犬股骨头 DR 影像无明显变化。2.1.2 股骨头外观特点股骨头外观特点 外科解剖无 DR 影像学变化的犬股骨头，外观形态结果见图 3。图 3 可见，1 号犬股骨头关节面出现瘀斑，8、12 号犬关节面出现不同程度的软骨磨损和塌陷。2.1.3 建模建模后后 FicaFicat t 分期分期 建模 12 只犬中，8 只 2 号犬3 号犬4 号犬5 号犬6 号犬7 号犬9 号犬10 号犬11 号犬建模后建模前 图 2 建模后 DR 影像结果短箭头指示骨密度不均匀；长箭头指示囊性病变；粗箭头指示股骨头形态变化。第 4 期郭琳坤等:阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较443犬在 Ficat 分期体系中属于 I 期，1 只犬属于 II 期，3 只犬为 0 期，结果成功建立 12 只犬 0II 期LCPD 模型（表 1）。表1建模后 Ficat 分期评估表分期评估试验犬编号分期症状0 期无疼痛、X线无异常1、8、12I期骨密度不均匀2、3、4、5、7、9、11 期骨硬化、囊性病变6过渡期软骨下骨折(新月征)及股骨头局灶性变扁期新月征、股骨头塌陷期股骨头扁平、畸形、骨赘生成、关节间隙变窄 2.2评估股骨头坏死模型治疗后的结果 2.2.1 影像学评估影像学评估 A 组治疗前、后股骨头 X 线片检查结果（图 4）可见，5 号犬 X 线片显示较治疗前股骨头骨密度不均匀得到改善，但关节间隙变窄；6 号犬患肢髋关节 X 线片与治疗前 X 线片对比囊性病变缩小，髋臼窝与股骨头界限清晰；9 号犬只患肢髋关节 X 线片与治疗前 X 线片对比形态更为光滑，骨密度更均匀，髋臼窝与股骨头界限更为清晰。B 组治疗前、后股骨头 X 线片检查结果（图 5）可见，2 号犬患肢 X 线片较治疗前，髋臼窝与股骨头界限更为清晰，关节间隙无差异；3 号犬患肢较治疗前囊性病变减轻，髋臼窝与股骨头界限清晰；4 号犬骨密度不均匀，治疗后无明显改善，关节界限不清，无其他异常。C 组治疗前、后股骨头 X 线片检查结果（图 6）可见，7 号犬患肢 X 线片较治疗前股骨头密度变得不均匀，下骨塌陷形成 1 号犬8、12 号犬 图 3 股骨头解剖图1 号犬：建模处股骨头出现瘀斑（箭头指示）；8、12 号犬：建模处股骨头软骨磨损（箭头指示）。5 号犬6 号犬9 号犬治疗前治疗后 图 4 A 组治疗前、后股骨头 X 线片治疗后，5、6、9 号犬骨密度明显增加；长短箭头分别表示治疗前后病灶处。444热 带 生 物 学 报2023 年新月征；10 号犬股骨头骨密度不均匀与治疗前无差异；11 号犬股骨颈出现囊性病变，股骨头形状发生改变。9 只犬治疗后 X 线片对比结果见图 7。2.2.2 解剖外观评估解剖外观评估 如图 8 和表 2 所示，经治疗后 A 组（阿伦磷酸钠组）5 号犬溃疡状软骨塌陷，其他犬只股骨头均光滑无塌陷。B 组（PRP 组）3 只犬股骨头表面光滑无异常。C 组对照组 10 号犬出现沟渠状软骨塌陷，7、11 号犬出现环形软骨塌陷。2.2.3 治疗治疗后后 FicaFicat t 分期评估分期评估 治疗后 A 组中，5、9 号犬从 I 期变为 0 期，6 号仍是 I 期；B 组 2 号犬从 I 期变为 0 期，3、4 号仍是 I 期；C 组 7 号犬从 I 期变为过渡期，10 号犬从 I 期变为 III 期，11 号犬从 I 期变为期（表 3）。2.2.4 数据分析数据分析 3 组试验动物治疗后 X 线片影像结果 Ficat 分期分析依据为比治疗前好或无差异及股骨头解剖未出现股骨头塌陷或者形变则认为治疗有效，否则为无效。数据分析结果（表 4）表明，A 组 2 只动物治疗有效，B 组 3 只动物治疗有效，C 组 3 只动物病情逐渐加重，软骨严重塌陷，治疗无效。统计差异分析结果表明(表 4)，A 组与 B 组差 2 号犬3 号犬4 号犬治疗前治疗后 图 5 B 组治疗前、后右侧股骨头 X 线片长短箭头分别表示治疗前后病灶处。治疗前治疗后 图 6 C 组治疗前、后股骨头 X 线片长短箭头分别表示治疗前后病灶处。第 4 期郭琳坤等:阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较445 5 号犬2 号犬7 号犬6 号犬3 号犬10 号犬9 号犬4 号犬11 号犬A 组B 组C 组 图 7 9 只犬治疗后 X 线片对比结果白色箭头为病灶处。5 号犬2 号犬7 号犬6 号犬3 号犬10 号犬9 号犬4 号犬11 号犬A 组B 组C 组 图 8 犬治疗后右侧股骨头解剖图白色箭头为病灶处。446热 带 生 物 学 报2023 年 表2治疗试验股骨头解剖症状评估表试验组试验犬编号解剖症状股骨头表面光滑无塌陷或瘀斑股骨头软骨面磨损股骨头塌陷股骨头扁平、畸形、骨赘生成A组5号6号9号B组2号3号4号C组7号10号11号 表3治疗效果Ficat 分期评估表试验组试验犬编号时期0期I期II期过渡期III期IV期A组5号6号 9号B组2号3号 4号 C组7号10号 11号注：“”表示治疗前症状，“”表示治疗后症状。0期：股骨头症状为无疼痛、X线无异常；I期：骨密度不均匀；II期：骨硬化、囊性病变；过渡期：软骨下骨折(新月征)及股骨头局灶性变扁；期：新月征、股骨头塌陷；IV期：扁平、畸形、骨赘生成、关节间隙变窄。表4A、B、C 组治疗有效性组间差异性的分析组 间均值差标准误显著性95%置信区间下限上限A组B组0.3330.2720.2670.331.00C组0.667*0.2270.051.330.00B组A组0.333*0.2270.2671.000.33C组1.000*0.2270.011.670.33C组A组0.667*0.2270.050.001.33B组1.000*0.2270.010.331.67注：差异为显著P0.5，差异为极显著P0.01。第 4 期郭琳坤等:阿仑膦酸钠和富血小板血浆治疗犬累-卡-佩斯病的效果比较447异不显著，B 组与 C 组差异极显著，A 与 C 组差异显著。3讨论 3.1液氮冷冻性股骨头坏死模型的建立 兽医临床上创伤性股骨头缺血性坏死的发病机理已经明确，而非创伤性股骨头坏死的机制尚未完全明确，目前仍未建立一种理想的动物模型。液氮冷冻股骨头坏死动物模型具有造模时间较快、动物存活率高的优点而成为比较常见采用的股骨头坏死造模方法。Jin 等10对 12 只成年比格犬建模，术后 8 周其股骨头出现了塌陷形成了蘑菇云。Velez 等11联合使用血管结扎及液氮冷冻技术建立了羊模型，最后显示试验动物出现股骨头坏死特征性双线征和股骨头塌陷。建模试验结果显示：建模 8 周后，12 只犬中有 9 只犬 DR 影像不同程度地出现骨密度不均匀、囊性变、股骨头形态轻微改变等异常变化。其余 3 只犬解剖股骨头后发现出现不同程度的瘀斑、软骨磨损和塌陷等现象，说明 12 只犬均成功建模，但建模后部分模型股骨头 X 线片出现骨密度不均匀，可能是由于关节腔内存在纤维组织修复而导致的。建模后 6 号犬DR 影像出现关节半脱位现象可能是建模时为了能充分暴露股骨头而对圆韧带进行部分分离而导致的，但这并不影响建模结果，因为圆韧带主要起到固定股骨防止脱位的作用，在整个试验周期动物采取固定区域饲养，限制活动，没有出现关节脱位导致股骨头损伤的情况。另外在许多建模方法中，有剪断圆韧带充分暴露股骨头，也有对圆韧带进行保留的，都能取得不错的效果12 16。此外，应用液氮冷冻法诱导犬股骨头坏死更加接近犬非创伤性股骨头缺血性坏死的特点，且方法简单、稳定可靠、重复性好，能够为研究非创伤性股骨头坏死的发病机制和治疗方法等方面提供帮助，可作为有效的建模方法进行推广。3.2阿仑膦酸钠和 PRP 治疗 LCPD 模型的作用 相关文献报道4双磷酸盐能够抑制破骨细胞活性加速其凋亡，预防骨质吸收，同时又能防止成骨细胞凋亡，增加新骨形成，在人类临床上被广泛应用于早期 ANFH 的治疗。PRP 及其类似物富血小板纤维蛋白（platelet rich fibrinogen，PRF），由于它们富含具有促进成骨细胞增殖和分化、抑制破骨细胞对骨吸收等功能的同源性生长因子，不但应用于治疗股骨头缺血性坏死症，还应用于牙槽骨的促生长及抗牙槽骨吸收17 18。Agarwala 等19对 294 名早期 ANFH 患者采用阿伦磷酸钠治疗，每位患者每日口服 10 mgd1预防剂量的阿伦磷酸钠，同时补充 5001 000 mg 钙剂和 1020 g 的维生素 D，连续服用 3 a，平均随访 4 a，研究结果发现口服二磷酸盐类药物(阿伦磷酸钠)能有效抑制股骨头坏死病程的发展，改善患肢功能，降低股骨头塌陷的几率，减少人工关节置换的需求。刘松等20对 18 例 ONFH 患者行 PRP 联合髋关节外科脱位头颈开窗植骨术治疗，术后平均随访时间（12.403.12）个月，末次随访时 Harris 评分较术前显著改善，优良率达 90.91%，影像学评价改善率为 95.45%，这些数据都与本试验结果阿伦磷酸钠及 PRP 能够有效治疗 LCPD 结果相一致。本研究是基于 X 线扫描以及 Ficat 分期体系、股骨头解剖形态去评估阿仑膦酸钠以及 PRP 对犬 ANFH 模型治疗的效果，阿伦膦酸钠组虽然1 只犬治疗后解剖出现股骨头表面凹陷，但光滑无骨赘生成，这与 C 组 3 只犬出现大面积塌陷且表面粗糙的病变特征存在明显差异，这可能是由于个体差异造成的愈合时间延长，也可能是由于药物的作用减缓了塌陷的进程，这有待深入研究。PRP 组中 3 只犬在治疗后影像、解剖结果都明显改善，而阿伦磷酸钠组只有 2 只犬在治疗后得到明显改善，从数量上 PRP 组优于阿伦磷酸钠组，但整体治疗数据结果二者差异不显著。C 组的 10 号犬与 A 组的 5 号犬股骨头解剖病变都出现绿豆及米粒大小的小面积塌陷，但 DR 影像并未发现它们股骨头塌陷的病变特征，而 C 组的 7、11 号犬出现大面积塌陷在 X 线片中却得到有效诊断，说明DR 影像对小面积股骨头塌陷敏感度低，那么，是否可以通过建立犬 ANFH 模型测量 DR 影像对犬股骨头塌陷敏感的临界值，从而为 DR 评估犬LCPD 股骨头塌陷程度开发新的方法，这还有待深入研究。4结论阿仑膦酸钠及 PRP 能够有效治疗犬 LCPD，但无法区分阿仑膦酸钠与 PRP 的优劣性。448热 带 生 物 学 报2023 年参考文献：1 PARRA E,VERGARA A,SILVA R F.Autologousplatelet concentrates as treatment for avascular necrosisof femoral head in a dog J.Topics in Companion An-imal Medicine,2017,32（1）:31 35.2 郭晓忠,岳聚安.一个世界性难题:股骨头坏死早期治疗的挑战与机遇J.中华损伤与修复杂志(电子版),2020,15（2）:81 83.3 KOSUGI E M,MOUSSALEM G F,SIMES J C,et al.Topical therapy with high-volume budesonide nasal irrig-ations in difficult-to-treat chronic rhinosinusitis J.Brazilian Journal of 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570208;2.Haizhida Pet Hospital,Haikou,Hainan 570105,China）Abstract：An attempt was made to study the therapeutic effect of alendronate sodium and platelet-rich plasma(PRP)on canine Legg-Calv-Perthes disease (LCPD)to provide a new way for the clinical treatment ofavascular necrosis of canine femoral head.Twelve 6-month-old dogs with similar body weight were selected toestablish the LCPD model by liquid nitrogen freezing,and the modeling results were evaluated and staged byX-ray film and Ficat-Arlet classification system.According to the clinical diagnostic criteria,nine dogs with thestages of avascular necrosis of the femoral head were randomly divided into three groups,A,B and C.Group A was treated with alendronate sodium orally;Group B received intra-articular injection of calciumgluconate activated platelet rich plasma;Group C served as a control group without any treatment.Threemonths after treatment,X-ray films were taken and the femoral head of the affected limb was dissected toevaluate the therapeutic effect.If the X-ray film shows no phase and pathological features and anatomicalresults,and the surface of the femoral head is smooth without collapse,it is considered that the treatment iseffective,otherwise it is ineffective.The results showed that the two dogs in Group A had effective treatmentwhile one did not have effective treatment.All the three dogs in Group B were treated effectively,and the threedogs in Group C were not effectively treated.This indicated that both alendronate sodium and PRP caneffectively treat canine LCPD,but there was no significant difference in treatment effect between alendronatesodium and PRP(P=0.267).Keywords：canine；avascular necrosis of canine femoral head；sodium alendronate；platelet-rich plasma(责任编辑：叶静)450热 带 生 物 学 报2023 年