卒中后认知障碍患者血清mi...p水平与认知障碍相关性分析_吴纪霞.pdf

基金项目蚌埠医学院自然科学类项目(BYKY2019295ZD);蚌埠市科技局创新指导类项目(20190333)作者单位安徽省蚌埠市第一人民医院 神经内科，233000 作者简介吴纪霞(1974 )，女，副主任医师，博士。DOI:10 14126/j cnki 1008 7044 2023 02 001论著卒中后认知障碍患者血清 mi 210 3p 水平与认知障碍相关性分析吴纪霞，郭清江，陈栋肖，司峥，崔丹 摘要 目的:探讨轻中度缺血性卒中后认知障碍(PSCI)患者血清 mi-210-3p 的表达水平及与认知障碍的相关性。方法:选取 2019 年 1 月2021 年 11 月某院收治的轻中度缺血性卒中后认知障碍患者 30 例为研究组，并选取同期该院健康体检者 30例作为对照组。采用蒙特利尔认知量表(MoCA)对受试者进行认知评估，采用荧光定量 PC 检测患者血清中 mi-210-3p 表达水平，针对 mi-210-3p 表达水平与 MoCA 评分进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(OC)评估 mi-210-3p 表达水平对 PSCI 的诊断价值。结果:研究组患者血清中 mi-210-3p 表达水平为(0.045 0.035)，低于健康对照组的(0.380 0.475)，差异有统计学意义(P 0.001);研究组患者血清中 mi-210-3p 表达水平与 MoCA 评分呈正相关性(r=0.486，P 0.05);OC 曲线分析表明，mi-210-3p 在轻中度缺血性 PSCI 中具有良好的诊断性能，灵敏度 0.815，特异度 0.875，曲线下面积(AUC)为 0.937(95%CI 0.831 0.986)，截断值 0.095(P 0.01)。结论:mi-210-3p 在轻中度缺血性 PSCI 血清中的表达是下降的，与 MoCA 评分呈正相关性，可作为 PSCI 的潜在分子生物标志物，而且可能为该病的预防和治疗提供新的见解。关键词 缺血性卒中;mi-210-3p;相关性分析 中图分类号 743.32 文献标识码 A 文章编号 1008-7044(2023)02-0111-04Correlation analysis of mi 210 3b level in post stroke cognitive impairment and cognitive impairmentWU Jixia，GUOQingjiang，CHEN Dongxiao，SI Zheng，CUI Dan(Department of Neurology，The First Peoples Hospital of Bengbu，Anhui 233000，Chi-na)【Abstract】Objective:To investigate the expression level of serum microNA(mi)-210-3b in patients with mild to moderate is-chemic post-stroke cognitive impairment(PSCI)and its correlation with cognitive impairment Methods:A total of 30 patients withmild to moderate ischemic post-stroke cognitive impairment who were admitted to a hospital from January 2019 to November 2021 wereselected for the study，and 30 healthy people by physical examination in the hospital during the same period were selected as the controlgroup Cognitive function was evaluated by Montreal Cognitive Assessment(MoCA)The expression level of mi-210-3b were meas-ured by eal-time PC The correlation between mi-210-3p expression levels and MoCA score was analyzed esults:The expressionlevel of mi-210-3p in serum of the study group was(0 045 0 035)，which was significantly lower than that in the healthy controlgroup(0 380 0 475)，the difference being statistically significant(P 0 001)The expression level of mi-210-3p of the studygroup was positively correlated with MoCA(r=0 486，P 0 05)The OC curve analysis showed that mi-210-3p presented excel-lent diagnostic performance，with sensitivity being 0 815 and specificity 0 875 The area under the curve(AUC)was 0 937(95%CI:0 831 0 986)，and the cutoff value was 0 095(P 0 01)Conclusion:The expression level of mi-210-3b in serum of mild tomoderate PSCI patients is decreased，and is positively correlated with MoCA score，which may be a promising biomarker for PSCI，andmay provide new insights for the prevention and treatment of PSCI【Key words】Ischemic stroke;Mi-210-3p;Correlation analysis卒中后认知障碍(PSCI)特指卒中后发生的认知功能下降，是血管性认知障碍(VCI)一个重要亚型，严重影响患者的生活质量和生存时间，并被认为是唯一一种可以预防的痴呆，早期干预可能逆转1-2。PSCI 危险因素众多，在诊断中没有特异性，目前主要依靠临床表现、影像、神经心理评估三个方面来诊断，仍缺乏确切的分子机制和可靠的生物标志物，microNAs(miNA)作为一类以转录后调控蛋白表达而闻名的非编码 NA，研究3-6 表明，miNAs是血管性认知障碍和阿茨海默病(AD)的诊断及预后的分子标志物，也有研究7 表明 miNAs与脑卒中及卒中后认知功能障碍相关，并且有望成为 PSCI 的一种新的疾病生物标志物，近年来研究8-9 表明，mi-210 可作为血管性认知障碍的诊断标志物，在卒中等神经系统疾病治疗方面也具有潜在的作用10。本研究旨在研究轻中度缺血性 PSCI患者和正常健康体检者的血清中mi-210-3p表达水平，探讨 mi-210-3p 表达水平与 PSCI 的关系及诊断的价值作用，以期为 PSCI 的发病机制、临床诊断和治疗提供理论依据。111淮海医药2023 年 3 月 第 41 卷 第 2 期J Huaihai Med，March 2023，Vol.41，No.21资料与方法1 1一般资料选取 2019 年 1 月2021 年 11 月我院收治的轻中度大动脉粥样硬化性缺血性卒中后认知障碍患者 30 例为研究组，其中男 21 例，女 9例;年龄(74.19 6.109)岁;选取同期我院健康体检者 30 例作为对照组，其中男 20 例，女 10 例;年龄(72.77 6.191)岁。该研究已通过本院医学伦理委员会批准(批准号:HBTSF20170218)，患者及家属均签署相关知情同意书。2 组受试者年龄、性别、文化程度等一般资料比较差异无统计学意义(P 0.05)，具有可比性。见表 1。表 12 组受试者一般资料比较项目研究组(n=30)对照组(n=30)2/t 值P 值年龄/(?x s，岁)7419 6 10972 77 6 19109090367性别/例05170472男21(7000)20(66 67)女9(3000)10(33 33)糖尿病/例13(4333)6(20 00)31590076高血压/例14(4667)10(33 33)07110399受教育年限/年16530199623(7667)19(63 33)67(2333)11(36 67)注:()内数字为构成比/%。1 2入选标准纳入标准:(1)符合 2021 年，卒中后认知障碍专家共识1;(2)MoCA 评分小于 26 分，Hachinski 缺血量表(Hachinski Ischemic Scale，HIS)评分 7 分;(3)患者头颅 CT 或 MI 显示有局灶性缺血灶。排除标准:(1)其他原因引起的痴呆(脑积水、AD、帕金森病等);(2)意识障碍的患者;(3)有严重的心、肝、肾等脏器疾病的患者;(4)有严重感染者;(5)有精神病及精神障碍的患者。1 3方法(1)临床资料评估。对受试者年龄、性别、受教育年限及病史进行采集，采用蒙特利尔认知量表对认知功能进行评估。MoCA 认知评估量表包括了注意与集中、执行功能、记忆、语言、视结构技能、抽象思维、计算和定向力等 8 个认知领域的 11个检查项目，满分 30 分。认知障碍分级:正常26分;轻度认知功能障碍在 18 26 分之间;中度在 1017 分之间;重度 10 分。如果受教育年限12年加 1 分。Hachinski 缺血量表(hachinski ischemicscale，HIS)评分，满分 18 分，得分在 4 分以下者，属老年性痴呆;7 分以上者，则属血管性痴呆。(2)血清 mi-210-3p 水平检测方法:清晨常规采空腹外周静脉血 2 mL 于肝素抗凝管中，将血标本进行离心，离心的速度为3 000 r/min，离心后的血清分装在 PC管，保存在 80 待测。采用天根生化科技有限公司提供的 T-PC 试剂盒检测血清 mi-210-3p 水平。miNA 提取采用天根 miNA 提取分离试剂盒(货号 DP501)进行 NA 提取;逆转录使用 TakaraKIT 试剂盒(货号 6110A)获得 cDNA;再取 2 g cD-NA 加入 20 L eal-time PC 体系，扩增条件为:95预变性 2 min;95 15 s，62 32 s，测定荧光强度，重复 40 个循环;使用 U6 为实验内参。mi-210-3p Forward Primer:5-GCAAGCACCTGTGCGTGTGT3，everse Primer:5-TGGTGTCGTGGAGTCGGC-3，U6 Forward Primer:5-CGCGCTAGCAGCACGTA-AAT-3，everse Primer:5-GTGCAGGGTCCGAG-GT-3。采用 2 Ct法对 mi-210-3p 表达水平进行定量分析。1 4观察指标(1)分析 2 组受试者血清 mi-210-3p 表达水平的差异;(2)观察 2 组受试者 MoCA评分;(3)分析研究组血清 mi-210-3p 表达水平与MoCA 分数的相关性;(4)绘制 OC 曲线分析血清mi-210-3p 表达水平对 PSCI 的诊断价值。1 5统计学方法应用 SPSS 23.0 统计学软件分析数据，计量资料以?x s 表示，采用 t 检验，计数资料以 n，%表示，采用 2检验，相关性分析采用Pearson法，诊断效能通过绘制 OC 曲线来评价，以P 0.05 表示差异有统计学意义。2结果2 12 组受试者 MoCA 评分比较研究组 MoCA评分低于对照组，差异有统计学意义(P 0.05)。见表 2。表 22 组受试者 MoCA 评分比较(?x s)组别例数MoCA/分t 值P 值研究组301548 3694140430 001对照组302654 11792 22 组受试者血清 mi-210-3p 表达水平比较研究组血清中 mi-210-3p 表达水平低于对照组，差异有统计学意义(P 0.05)。见表 3。表 32 组受试者血清 mi-210-3p 表达水平比较(?x s)组别例数mi-210-3pt 值P 值研究组300045 003549400001对照组300380 0475211淮海医药2023 年 3 月 第 41 卷 第 2 期J Huaihai Med，March 2023，Vol.41，No.223研究组血清 mi-210-3p 表达水平与 MoCA 评分的相关性分析研究组患者血清中 mi-210-3p表达水平与 MoCA 评分呈正相关性(r=0.486，P 0.05)，MoCA 评分越低，血清中 mi-210-3p 水平越低。见图 1。图1研究组血清 mi-210-3p 表达水平与 MoCA 评分的散点图2 4血清 mi-210-3p 表达水平对卒中后认知障碍诊断价值OC 曲线分析表明，mi-210-3p 在轻中度缺血性 PSCI 中具有良好的诊断性能，灵敏度0.815，特异度 0.875，AUC 为 0.937(95%CI 0.8310.986)，截断值 0.095(P 0.01)。见图 2。图 2血清 mi-210-3p 诊断卒中后认知障碍的 OC 曲线3讨论PSCI 强调的是卒中事件触发认知功能障碍，早期即可发生，并可被早期识别、管理和干预。迄今为止，PSCI 仍缺乏有效的治疗策略和客观的诊断工具。MicroNAs(miNAs)是一类小分子的非编码NA，转录后的 miNAs 可调节基因表达，对于植物和动物等真核生物的正常发育和生理至关重要1。血液 miNAs 是最有前途的疾病诊断工具之一11，作为中枢神经疾病的诊断工具有以下独特优势12:(1)miNAs 是反映大脑变化的很好的生物标志物，因为分子量较小，可以穿过血脑屏障;(2)miNAs在血液中高度稳定，因为受到外泌体、其他微粒子、不同蛋白质和脂质的保护;(3)外周血易于采集，无创性;(4)miNAs 的表达具有时间特异性，可以反映疾病发展的时间变化。因此，血液中 miNAs 可能是诊断 VCI 新的和潜在的生物标志物8-9，13，周丽娟等14 就 miNA 与痴呆的相关性研究中综述得出miNA 可作为血管性痴呆(VaD)早期诊断的可靠分子标志物。miNAs 在血管性认知障碍和 AD 中发挥重要作用，miNAs 参与疾病的发展以及作为治疗靶点、诊断生物标志物或预后指标的作用。miNAs 在 VCI 中神经元死亡、炎症、氧化应激、突触可塑性以及维持血脑屏障通透性的机制中发挥着关键作用。这些研究普遍还处于早期阶段，需要进一步验证，特别是 PSCI 作为 VCI 的亚型与外周血mi-210-3p 的研究数据有限。因此，有必要进一步研究，为临床早期诊断和治疗提供研究思路。本研究通过检测目标基因 mi-210-3p 表达水平，了解与 PSCI 的相关性及作为诊断该病的潜在价值，发现 PSCI 患者血清 mi-210-3p 表达水平是下降的，说明 mi-210-3p 参与了 PSCI 的发生发展过程，具体机制还不清楚。其他研究13-14 表明 mi-NAs 通过调节突触可塑性来影响认知功能，突触的可塑性在神经系统的发育、成熟以及学习记忆等生理功能过程中起着十分重要的作用，被普遍认为是学习和记忆的生物学基础。突触结构的缺失，如树突分支和树突棘以及突触传递效率低下是突触可塑性下降的重要原因。例如，Huang 等15 研究揭示了VaD 大鼠海马中的 circNA 表达异常，得出 a 突触可塑性和认知功能障碍相关的结论。Hu 等15 发现mi-132 在神经元兴奋、传递和突触可塑性中发挥重要作用。有研究17 报道过表达mi-210-3p可破坏血脑屏障，损伤多巴胺能神经元。而另有研究18 报道 mi-210-3p 可诱导神经发生，如感觉轴突再生和感觉毛细胞形成。因此，mi-210-3p 表达下降，神经再生障碍，可能会影响认知功能。此外，mi-210 正稳定地作为一种主要的缺氧反应因子，调节健康和疾病的几个关键方面19。也有研究8 表明，过表达 mi-210-5p 可减少原代海马神经元的突触数量，并且降低了突触体相关蛋白 Snap25 mNA 3非翻译区(3 utr)萤光素酶的活性从而影响认知。311淮海医药2023 年 3 月 第 41 卷 第 2 期J Huaihai Med，March 2023，Vol.41，No.2詹莹等9 综述认为在痴呆或严重认知功能障碍患者血清中 miNA-210 的表达明显高于健康人，miNA-210可能将作为 VaD 的诊断指标。本研究结果显示血清 mi-210-3p 表达水平是下降的，与以上研究血清中 miNA-210 的表达明显高于健康人不一致，考虑与研究的基因片段不同有关，因为有研究19 表明，mi-210 的一些靶蛋白在不同的细胞类型中具有不同的功能。另有研究20 表明，在全脑缺血再灌注之后的 30 min 有 23 种 miNA 上调、32 种miNA 下调，缺血再灌注 24 h 后有 40 种 miNA 上调、31 种 miNA 下调，这些都表明不同的 miNA表达水平是不同的。本研 究 发 现 miNA-210-3p 的 表 达 水 平 与MoCA评分呈正相关性，提示 mi-210-3p 可能参与PSCI 发生和发展的疾病过程。OC 曲线分析提示血清 mi-210-3p 可以作为 PSCI 的潜在生物标志物，鉴于 mi-210 在病理条件下对细胞功能及其失调发挥多种作用，靶向纠正异常表达的 mi-210 的策略可能为缺血性疾病和认知障碍等一系列疾病开辟新的治疗途径。综上所述，PSCI 患者血清中 mi210-3p 表达水平是明显下降的，并且与认知功能损害相关，对PSCI的诊断有潜在价值。然而，本研究也有一定的缺陷，仅初步探究了 mi-210-3p 在 PSCI 患者血清中的表达关系，样本量偏小，具体生物医学机制仍不清楚。mi-210-3p 与 PSCI 的关系复杂，例如急性脑梗死病因包括大动脉粥样硬化型、小动脉闭塞型、心源性栓塞型和不明原因型等，不同病因或机制引起的缺血性 PSCI 对血清 mi-210-3p 有无影响，另外 NIHSS及 ms 评分等与血清 mi-210-3p 有无关系，都是需要下一步扩大样本容量继续进行深入研究的内容，以便更好的为 PSCI 患者临床诊断治疗提供一定的参考依据。参考文献 1汪凯，董强，郁金泰，等 卒中后认知障碍管理专家共识 2021J 中国卒中杂志，2021，16(4):376-389 2CASOLLA B，CAPAOS F，CODONNIE C，et al Biologicaland imaging predictors of cognitive impairment after stroke:a sys-tematic reviewJ J Neurol，2019，266(11):2593-2604 3LIANG H B，LAI Z H，TU X Q，et al MicroNA-140-5p exacer-bates vascular cognitive impairment by inhibiting neurogenesis inthe adult mouse hippocampus after global cerebral ischemiaJ Brain es Bull，2022，183:73-83 4ZHOU C，SUN P，XU Y，et al Genetic Deficiency of MicroNA-15a/16-1 Confers esistance to Neuropathological Damage andCognitive Dysfunction in Experimental Vascular Cognitive Impair-ment and DementiaJ Adv Sci(Weinh)，2022，9(17):e2104986 5ZHAI W，ZHAO M，ZHANG G，et al MicroNA-Based Diagnosisand Therapeutics for Vascular Cognitive Impairment and Dementi-aJ Front Neurol，2022，13:895316 6TOYAMA K，SPIN J M，MOGI M，et al Therapeutic perspectiveon vascular cognitive impairmentJ Pharmacol es，2019，146:104266 7BAO Y，LI S 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