不同提取方法对西洋参中人参皂苷含量的影响.pdf

西洋参（P a n a xq u i n q u e f o l i u s L.）系五加科人参属植物，原产于加拿大和美国，现已在我国东北、北京、陕西等省市引种成功。其中东北是最大的栽培基地，长白山地区就约占全国的 7 5%。西洋参味苦，性凉，入心、肺、肾经，功能以补益为主，可滋阴降火、益气生津 1。药理实验结果表明，该生药的活性成分为西洋参总皂苷。迄今为止，中外学者已从西洋参中分离鉴定出的皂苷类成分的苷元有 3种：达玛烷型(D a m m a r a n e)、齐墩果烷型(O l e a n a n e)、奥克梯隆醇型(O c o t i l l o l)，而分离出的人参皂苷近 4 0 种。利用高效液相色谱法测定其中人参皂苷 R g1、R e、R f、R b1、R c、R b2、R d 及总皂苷的含量 2，以便选择提取工艺更简单、提取成本更低、更利于大规模工业化生产的提取方法。1材料与仪器1.1材料为 2 0 0 4 年 9 月下旬采自吉林省抚松县 4 年生西洋参的干燥根。1.2仪器岛津 H P L C色谱仪，含 P G U-1 2 A V P在线脱气机、L C-1 0 A T V P二元梯度泵、S P D-M1 0 A V P二级管阵列检测器、S I L-1 0 A D V P自动进样器、C l a s s-v p不同提取方法对西洋参中人参皂苷含量的影响焉石,王英平,许世泉,刘继永,王艳艳（中国农业科学院特产研究所，吉林 吉林 1 3 2 1 0 9）摘要:目的为了选择更好的西洋参提取方法。方法用 H P L C法，对不同提取方法得到的样品进行人参皂苷含量的测定。结果在 4 0 用 1 0 倍水提取 1 小时的条件下，提取物的人参皂苷含量最高。结论本研究对规范西洋参的提取工艺具有一定意义。关键词:西洋参；人参皂苷；H P L C中图分类号:S 5 6 7.5;R 2 8 4.1文献标识码:AA b s t r a c t：a i m T oo p t i m i z e t h e b e s t e x t r a c t i n gp r o c e d u r e f o r A m e r i c a nG i n s e n g.me t h o d sB yt h e m e a n s o f H P L Ct od e t e r m i n e t h ec o n t e n t o f G i n s e n o s i d e o f s a m p l e o b t a i n e dw i t hd i f f e r e n t e x t r a c t e dm e t h o d s.r e s u l t sA t t h e e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r e 4 0 w i t h1h o u ra n d w i t h 1 0 t i m e s o f w a t e r,t h e c o n t e n t o f G i n s e n o s i d e o f s a m p l e w a s t h e h i g h e s t.c o n c l u s i o nT h e r e s e a r c h i s m e a n i n g f u l t o s t a n d a r d-i z a t i o n o f e x t r a c t i n g t e c h n o l o g y f o r A m e r i c a n G i n s e n g.K y e w o r d s：A m e r i c a n G i n s e n g；G i n s e n o s i d e；H P L CE f f e c t o f D i f f e r e n t E x t r a c t e d Me t h o d s o n G i n s e n o s i d eC o n t e n t o f A me r i c a n G i n s e n gY A NS h i,WA N GY i n g-p i n g,X US h i-q u a n,L I UJ i-y o n g,WA N GY a n-y a n(I n s t i t u t e o f S p e c i a l Wi l d E c o n o m i c A n i m a l a n d P l a n t S c i e n c e,C A A S.J i l i n 1 3 2 1 0 9,C h i n a)收稿日期:2 0 0 6-1 0-0 9基金项目:国家科技部“人参等中药提取物生产技术研究”项目（2 0 0 6 B A I 0 6 A 1 4）；吉林省科技厅中药现代化建设重大项目（2 0 0 3 0 9 0 6）作者简介:焉石（1 9 8 1-），男，吉林省松原市人，研究实习员，学士，从事天然药物化学方面研究。文章编号:1 0 0 1-4 7 2 1（2 0 0 7）0 1-0 0 5 1-0 3特 产 研 究s p e c i a l w i l de c o n o m i c a n i m a l a n dp l a n t r e s e a r c h5 15 1色谱工作站；德国 H e i d o l p h 大型旋转蒸发仪；法国Me t t l e r A L 2 0 4 电子天平；I n o l u b p H计；美国 Mi l l i-p o r e 1 8 5 型超纯水器；瑞士 B U C H I 1 9 0 型喷雾干燥机；小型中药提取罐。1.3试剂与样品乙腈为色谱纯（天津协和医学科技公司）；超纯水；磷酸二氢钾及磷酸氢二钾均为分析纯。人参单体皂苷 R b1、R b2、R c、R d、R e、R f、R g1对照品均购自中国药品生物制品检定所。2方法及结果2.1材料的制备取西洋参 0.5 k g，粉碎至 8 0 目，加入一定体积的水在提取罐中用一定的温度、提取一定时间，提取 3次，过滤，合并滤液减压回收至浸膏，浸膏喷雾干燥成粉，称重。实验提取条件温度、时间、液料比见表 1。2.2色谱条件色谱柱：T h e r m o C1 8柱，5 m，4.6 m m 2 0 0 m m；柱温：室温；流动相：A：乙腈，B：磷酸缓冲溶液（p H5.8 1），线性梯度洗脱，0 5 0 m i n：2 0 3 3%A，5 0 5 1m i n：3 3 1 0 0%A，5 1 6 6 m i n：1 0 0%A，6 6 6 7 m i n：1 0 0 2 0%A，6 7 8 0 m i n：2 0%A；流速：1 m L/m i n；检测波长 2 0 3 n m；进样量：4 0 L。2.3对照品溶液的制备精密称取人参皂苷 R b1、R b2、R c、R d、R e、R f、R g1适量，加甲醇配置成每 1 m L含人参皂苷 R b1、R b2、R c、R d、R e、R f、R g10.1 m g 的混合溶液备用。2.4供试品溶液的制备取用方法 1 9 提取的西洋参提取物 1 9 号样品各 0.5 g，精密称定，加甲醇-水（7 3）2 0 m L震荡2 h，3 0 0 0 r/m i n 离心 5 m i n 吸取上清液，重复 1 次，合并上清液用微孔滤膜（0.4 5 m）滤过定容至 5 0 m L。2.5方法学考察2.5.1线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液 0.1 m L、0.2 m L、0.5 m L、1.0 m L、2.0 m L、5.0 m L，用甲醇定容于 1 0 m L容量瓶中，分别进样 3次，各4 0 L，测定其总峰面积值。以对照品进样量为横坐标，总峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程 y=2 1.5 3 5 X+3.6 7 4，r=0.9 9 9 9。结果表明，对照品浓度与总峰面积平均值呈良好的线性关系，线性范围为 0.0 4 2 g。2.5.2精密度实验精密吸取对照品溶液 4 0 L，重复进样 7 次，以混合对照品的总峰面积计算，其R S D=1.3%。结果表明该方法有良好的精密度。2.5.3重复性实验精密称取西洋参提取物样品约0.5 g，共 6份，按 2.4操作，各进样 4 0 L测定，R S D=0.8%。结果表明该方法重现性良好。2.5.4稳定性实验精密称取西洋参提取物样品约 0.5 g，共 6 份，按 2.4 操作，于 1 h、2 h、4 h、8 h、1 2 h、2 4 h 各进样 4 0 L，以混合对照品的总峰面积计算，其 R S D=2.0 2%，表明供试品溶液在 2 4 h 内稳定。2.5.5回收率测定采取加样回收法，精密称取西洋参提取物样品约 0.5 g，共 6 份，加入一定量的对照品，按 2.4操作并测定其含量，平均回收率为9 0.2%，R S D=1.4 5%。2.6样品含量测定取供试品溶液 1 9，进样 4 0 L入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，并计算各单体皂苷及总皂苷含量。2.7实验结果不同方法提取物的得率，见表 2。对照品的色谱图，见图1。对照品的出峰顺序及保留时间，见表 3。测得的总皂苷及单体皂苷在提取物中的含量，见表 4。表2不同方法提取物的得率(%)方法123456789得率 3 8.8 4 5.4 3 3.4 3 6.8 3 6.6 2 0.6 2 0.4 2 0.4 3 2.8表3对照品的出峰顺序及保留时间（m i n）出峰顺序保留时间2 9.5 5 73 0.5 6 05 1.1 7 95 2.9 4 95 3.5 6 85 4.3 0 45 5.8 5 1R g1R eR fR b1R cR b2R d表1提取条件温度、时间、液料比方法 提取温度（）提取时间（h）料液比14 011:824 011:1 034 011:1 245 021:1 055 021:1 265 021:876 031:1 286 031:896 031:1 0特产研究2 0 0 7 年第 1 期5 25 2尊敬的广告、发行客户及读者朋友：你们好！因南昌环球广告传媒有限公司（经理：钟有辉）严重违约，我杂志社已解除与其签订的广告、发行代理协议。自 2 0 0 6 年第 1 2 期起 现代园艺 广告、发行等有关业务一律由杂志社直接接管。欢迎新老客户来电来函联系广告、发行业务。现代园艺杂志是 中国核心期刊数据库 和 中国期刊 全文收录期刊。荟萃了当代果树、种子、种苗、花卉、园林苗木、肥料、农药等当前先进科技信息，预测市场发展，生产、管理、营销并重；突出新科技、新成果、新产品、新情况、新观点、新经验，交流致富信息，传播成功范例，引导广大农民发家致富。本刊为月刊，大 1 6开，全年 1 2期共 4 8元,国内统一刊号C N 3 6-1 2 8 7/S；邮发代号：4 4-1 1 4。全国各地邮政局（所）及本刊发行部均可随时破季、破月订阅。注:1.凭 2 0 0 7 年订阅收据（复印件有效）可免费刊登 1 2 0 字以内供求信息一次或领取赠品一份。2.凡订阅者邮购本刊代理的产品，可享受九折优惠。3.凡订阅者可免费参加由本刊专家团组织的学术（技术）经验交流会。4.欢迎索取样刊。本刊欲在全国各地设立工作站（办事处），有意者请来函来电联系。地址:江西省南昌市北京西路 3 0 号 现代园艺 杂志社 黄小龙（收）邮编:3 3 0 0 4 6电话:[phone]（传真）6 2 1 4 6 6 50 1 3 8 7 0 9 1 7 8 5 8E-m a i l：x d y y-y j g 1 6 3.c o mQ Q:5 9 3 5 2 6 8 1 7欢迎订阅 2 0 0 7年现代园艺杂志表4测得的总皂苷及单体皂苷在提取物中的含量(mg)方法R g1R eR fR b1R cR b2R d总皂苷14.2 5 4 51 8.8 7 8 11.7 4 6 68 5.9 5 5 42 5.5 4 9 45.0 7 2 43.3 3 8 11 4 6.9 3 5 026.9 4 5 02 6.8 0 0 11.2 7 2 19 1.4 8 8 22 6.0 9 7 71.2 9 1 73.9 8 3 31 6 0.7 2 0 034.0 8 0 31 4.3 6 7 80.8 9 2 37 5.1 7 3 62 3.9 6 8 32.5 9 3 93.6 9 8 91 2 7.5 9 5 044.3 2 0 31 7.1 5 6 70.1 9 9 37 7.7 4 3 22 6.4 6 0 06.3 4 8 44.1 3 3 41 3 6.8 2 7 550.8 4 4 73.1 8 1 20.0 9 6 34 7.8 5 3 72 4.1 5 0 41 4.4 1 4 13.6 2 0 89 5.3 1 0 061.5 4 4 21 4.3 6 1 50.1 5 1 27 6.0 8 5 72 3.6 1 4 41.7 4 9 53.7 7 2 61 2 2.4 5 5 072.1 0 8 92 1.0 0 2 50.2 5 4 98 8.8 5 8 92 5.2 0 3 04.5 3 2 24.9 0 8 41 4 8.3 4 7 581.3 4 7 51 5.7 2 7 50.0 9 5 05 2.6 1 7 52 4.8 3 2 54.6 4 5 03.5 7 51 0 1.1 4 9 091.9 1 0 62 1.3 6 1 10.1 7 4 89 2.0 6 2 92 6.5 3 3 54.7 2 5 34.7 4 0 31 5 1.6 6 0 03结果与讨论本实验对用 9 种不同方法提取的西洋参的总皂苷及 7 种单体皂苷进行了含量测定。结果表明，在方法 2 的条件下总皂苷的提取效率最高，同时单体皂苷 R g1、R e、R b1、R c 的含量也是最高的，而单体皂苷R f、R b2、R d 的含量也保持在一个较高的水平上。另外，从降低提取成本的角度来说，方法 2 也是较为经济的提取方法，可用于大规模的工业生产。参 考 文 献 1 孟凡征，李柏.西洋参 M.北京：科学技术出版社，2 0 0 3.2 陈 薇，胡广林，王翊如，王小如.高效液相色谱法分离测定人参中的 6 种人参皂苷 J .色谱，2 0 0 0，1 8（5）：4 3 9-4 4 1.图1对照品的色谱图第 1 期焉石，等：不同提取方法对西洋参中人参皂苷含量的影响5 3