正交实验设计优化复方珍珠含片制备工艺.docx

资源描述

正交实验设计优化复方珍珠含片制备工艺【摘要】　　目的研究复方珍珠含片的制备工艺。方法采用正交实验法，以浸膏收率、梓醇含量及甘草酸含量为指标，考察加水量、煎煮时间和煎煮次数３因素及含醇量及醇沉浓度对浸膏收率和有限成分的影响。结果优化的提取工艺为加入２４倍水量，重复两次，每次煎煮３ｈ。结论优化筛选处方工艺具备良好的收率，适合于工业化生产。【关键词】　珍珠口含片提取工艺正交实验　　Abstract：ObjectiveＴｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄ Pｅａｒｌ Bｕｃｃａｌ Tａｂｌｅｔｓ.MethodsＴｈｅｓｔｕｄｙｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｈｒｏｕｇｈｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ，ｕｓｉｎｇｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｖｅｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｃａｔａｌｐｏｌａｎｄｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃａｃｉｄａｓｔｈｅｇｕｉｄｅ．３ｉｎｆｌｕｅｎtｉａｌｆａｃｔｏｒｓ，ａｍｏｕｎｔｏｆｗａｔｅｒｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｔｉｍｅｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ.ResultsＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ were as follows：２４ｔｉｍｅｓｗａｔｅｒ， decocting ｔｈｒｅｅｔｉｍｅｓａｎｄｔｈｒｅｅｈｏｕｒｓｅａｃｈｔｉｍｅ.ConclusionＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｃａｎｐｒｏｖｉｄｅａｇｏｏｄｙｉｅｌｄａｎｄｆｉｔｓｔｏｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．　　Key words：Pearl Ｂｕｃｃａｌｔａｂｌｅｔｓ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ；Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ　　复方珍珠含片是在古代名方“珍珠丸”基础上加减化裁而成，原方由珍珠、西瓜霜、冰片、硼砂、生地黄、甘草等组成，具有清利咽喉，消肿止痛，解毒生肌之功，用于咽喉肿痛，声哑失音，口舌生疮，牙龈肿痛或出血。其中生地黄［１］为玄参科多年生草本植物地黄Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ．的干燥块根，性味甘、苦，寒，归心、肝、肾经。具有清热凉血、养阴生津之功效。甘草药性平和，长于清火解毒，润肺止咳，多用以痰热咳嗽、咽喉肿痛等，其主要有效成分为甘草酸［２］。在复方珍珠含片的制备工艺中，甘草需同生地黄一起经煎煮，得浸膏，粉碎后加入其余成分，故本研究以浸膏收率、梓醇含量及甘草酸含量作为考察指标［３］，对复方珍珠含片的提取工艺进行优化。　　１　仪器与试剂　　１．１仪器ＲＥ－５２Ｃ型旋转蒸发器；ＹＨＧ－４０ ×４５远红外快速恒温干燥箱；ＰＢ２０３－Ｎ型电子天平；ＤＺＦ－６０５０型真空干燥箱。　　１．２试剂与药材乙腈、甘草、地黄。　　２方法与结果　　２．１色谱条件［２，３］　　２．１．１甘草酸含量测定流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；流动相：乙腈∶０．１％醋酸水溶液；柱温２５℃；检测波长２５４ｎｍ。　　２．１．２梓醇含量测定流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；流动相０．６％乙腈水溶液；柱温４０℃；检测波长２１０ｎｍ。　　２．２提取工艺优化　　２．２．１醇浓度影响称取甘草１６ｇ，地黄２０ｇ，加入１５倍量分别为醇浓度０%，２０%，３０%，４０%，５０%，６０％的醇溶液于１０００ｍｌ圆底烧瓶中，加热煮沸，并保持低沸２ｈ，停止加热，放冷后，抽滤。将滤液加入旋转蒸发仪，蒸发浓缩，并移至２５０ｍｌ容量瓶，定容，则每毫升含１．８ｇ原药材，精取药液２５ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５°Ｃ干燥３ｈ，移置干燥器中，冷却３０ｍｉｎ，迅速精密称定重量。以浸出物量、梓醇含量、甘草酸含量为考察指标，综合评分：总分为１００分，浸出物占３０分，梓醇含量占３５分，甘草酸含量占３５分。结果见表１。　　表1 醇浓度影响实验结果　　结果表明，随着醇浓度的增大，浸膏收率下降，甘草酸含量升高，梓醇含量没有明显变化趋势。醇浓度影响不明显，需进一步实验证实。　　２．２．２乙醇提取次数对有效成分影响称取甘草１６ｇ，地黄２０ｇ，置１０００ｍｌ圆底烧瓶中，加入６０％乙醇５５０ｍｌ，加热煮沸，并保持低沸２ｈ，停止加热，放冷后，抽滤。将滤液加入旋转蒸发仪，蒸发浓缩，并移至２５０ｍｌ容量瓶，定容，则每毫升含１．８ｇ原药材，精取药液２５ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５°Ｃ干燥３ｈ，移置干燥器中，冷却０．５ｈ，迅速精密称定重量。　　综合评分：总分为１００分，浸出物占３０分，梓醇含量占３５分，甘草酸含量占３５分。结果见表２。　　表2 60%乙醇提取次数对甘草酸和梓醇含量的影响　　结果表明，６０％乙醇提取时，随提取次数增加，３个指标也发生递增。但分值指标偏低。　　２．３水煎煮法提取工艺条件的优化　　２．３．１正交实验［4～６］为优化水煎煮法提取工艺的条件，选用正交实验法，考察加水量、煎煮次数、煎煮时间３个因素，以８５％醇出物量及甘草酸含量作为考察指标，选用Ｌ９表安排实验。因素水平见表３。　　表3 因素水平　　取甘草１６ｇ，地黄２０ｇ，加入Ａ倍量水，加热煮沸，并保持低沸Ｃ小时，停止加热，放冷后，抽滤，煎煮Ｂ次。合并滤液，将滤液置于电炉上，蒸发浓缩，并移至２５０ｍｌ容量瓶，定容，精取药液２５ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５℃干燥３ｈ，移置干燥器中，冷却３０ｍｉｎ，迅速精密称定重量。将浸出物用１００ｍｌ８５％乙醇溶解转移到锥形瓶中，超声０．５ｈ，过滤后将滤液分多次加入蒸发皿中，于水浴锅上蒸干后，于１０５℃干燥３ｈ，移置干燥器中，冷却３０ｍｉｎ，迅速精称重量。　　综合评分：总分为１００分，８５％醇出物占３０分，梓醇含量占３５分，甘草酸含量占３５分。结果见表４～５。　　表4 正交实验结果　　表5 水煎煮提取工艺正交实验结果　　３个因素的极差比较结果是：ＲＢ＞ＲＡ＞ＲＣ，最佳工艺条件是：Ａ因素取３水平，Ｂ因素取３水平，Ｃ因素取３水平，即采用２４倍量水，煎煮３次，３ｈ／次。　　表6 方差分析　　由方差分析表６结果看出，Ａ，Ｂ，Ｃ因素的水平变化对实验结果都有显着影响。可以看出，最高得分处方为Ａ３Ｂ３Ｃ３，即采用２４倍量水，煎煮３次，３ｈ／次。从含量结果分析，煎煮两次甘草酸提取率已经可以达到甘草总量的９６．３％，梓醇含量的９２．１％。从企业大生产考虑，采用二次提取更为　合理，因此取Ａ３Ｂ２Ｃ３与正交实验所得得最优处方Ａ３Ｂ３Ｃ３进行重复，以确定最佳处方。　　２．重复实验根据正交实验结果，按照处方组合Ａ３Ｂ２Ｃ３和Ａ３Ｂ３Ｃ３进行重复３次，取２５ｍｌ定容后的提取液，测定浸出物中甘草和梓醇含量，再用８５％乙醇１００ｍｌ，超声０．５ｈ，过滤后，挥干乙醇，得醇出物量。结果见表7。　　表7 重复实验结果　　通过重复实验的比较，确证了Ａ３Ｂ３Ｃ３条件是最佳提取条件。而处方组合Ａ３Ｂ３Ｃ３与最佳提取条件Ａ３Ｂ３Ｃ３相比较无显着差异，且从企业大生产考虑，采用二次提取更为经济合理，因此取Ａ３Ｂ３Ｃ３作为最优处方。　　２．3．3 醇沉淀对有效成分的影响直接提取、提取后醇沉两种提取方法进行比较。根据正交试验结果，按照处方组合Ａ３Ｂ２Ｃ３进行重复３次，取２５ｍｌ定容后的提取液，测定浸出物中甘草和梓醇含量，再用８５％乙醇１００ｍｌ，超声３０ｍｉｎ，过滤后，挥干乙醇，得醇出物量。另取２５ｍｌ的提取液加入浓醇，调至浓度为６０％，体积控制在１００ｍｌ以内，分别转入锥形瓶中，静置过夜，取上清液，定容至５０ｍｌ，测定梓醇、甘草酸含量。结果见表8。　　表8 两种提取方法比较结果　　采用醇沉法，对甘草酸含量无明显影响，但是梓醇含量明显下降。　　3 讨论　　　　本实验以复方珍珠含片中有效成分甘草酸、梓醇的含量为指标，分别考察不同浓度乙醇回流和煎煮的提取工艺可行性。结果，乙醇回流１～３次获得的提取液中有效成分含量均偏低，不能将有效成分成功转移。因此，宜选择传统煎煮法作为提取工艺。实验重点对加水量、煎煮次数、煎煮时间３个因素分别进行了单因素考察。结果，一定范围内加水量与甘草酸、梓醇含量成正比关系，且加水量大于２４倍时提取较完全；煎煮次数在二次以上即可将有效成分转移出来，煎煮时间达３ｈ以上提取完全。由于中药复方制剂成分复杂，遵循“去粗取精”，即除去糟粕，留其精华，在保证有效成分不被丢失的前提下，最大可能的保留有效成分。同时，结合实际生产节约资源原则优化出适合工业化生产的生产工艺。【参考　文献】　　［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５：５９，２７４，８２　　［2］汪程远，张浩，孟莉，等．ＨＰＬＣ测定地黄及其制剂中梓醇的含量［Ｊ］．华西药学杂志，２００３，１８：１３４．　　［3］王兰霞，杨玲霞，张伯崇．ＲＰ－ＨＰＬＣ测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量［Ｊ］．中国药学杂志，１９９７，３２：４３４．　　［4］刘　扬，龚金红，储宁，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定复方珍珠咽喉宁含片中梓醇和甘草酸含量［Ｊ］．抗感染药学，２００６，３：１０９．　　［5］黄维安，蒙毅，黄品莲．正交法试验比较甘草浸膏的提取工艺［Ｊ］．中国中药杂志，１９９４，１９，２８３．　　［6］钱漪，许树梧．实用药学计算［Ｍ］．长沙：湖南科学技术出版社，１９８５：３４７．

展开阅读全文