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正交实验设计优化复方珍珠含片制备工艺
【摘要】　　目的研究复方珍珠含片的制备工艺。方法采用正交实验法，以浸膏收率、梓醇含量及甘草酸含量为指标，考察加水量、煎煮时间和煎煮次数３ 因素及含醇量及醇沉浓度对浸膏收率和有限成分的影响。结果优化的提取工艺为加入２４ 倍水量，重复两次，每次煎煮３ ｈ。结论优化筛选处方工艺具备良好的收率，适合于 工业 化生产。
【关键词】　珍珠 口含片 提取工艺 正交实验
　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｃｏｍｐｏｕｎｄ Pｅａｒｌ Bｕｃｃａｌ Tａｂｌｅｔｓ.MethodsＴｈｅ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ ， ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｃａｔａｌｐｏｌ ａｎｄ ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ｔｈｅ ｇｕｉｄｅ．３ ｉｎｆｌｕｅｎtｉａｌ ｆａｃｔｏｒｓ， ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ， ｔｉｍｅ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ.ResultsＴｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ were as follows：２４ ｔｉｍｅｓ ｗａｔｅｒ， decocting ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ ａｎｄ ｔｈｒｅｅ ｈｏｕｒｓ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ.ConclusionＴｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｇｏｏｄ ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｆｉｔｓ ｔｏ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ．
　　Key words：Pearl Ｂｕｃｃａｌ ｔａｂｌｅｔｓ； Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ； Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ
　　复方珍珠含片是在古代名方“珍珠丸”基础上加减化裁而成，原方由珍珠、西瓜霜、冰片、硼砂、生地黄、甘草等组成，具有清利咽喉，消肿止痛，解毒生肌之功，用于咽喉肿痛，声哑失音，口舌生疮，牙龈肿痛或出血。其中生地黄［１］ 为玄参科多年生草本植物地黄Rehmannia glutinosa Ｌｉｂｏｓｃｈ．的干燥块根，性味甘、苦，寒，归心、肝、肾经。具有清热凉血、养阴生津之功效。甘草药性平和，长于清火解毒，润肺止咳，多用以痰热咳嗽、咽喉肿痛等，其主要有效成分为甘草酸［２］ 。在复方珍珠含片的制备工艺中，甘草需同生地黄一起经煎煮，得浸膏，粉碎后加入其余成分，故本研究以浸膏收率、梓醇含量及甘草酸含量作为考察指标［３］ ，对复方珍珠含片的提取工艺进行优化。
　　１ 　仪器与试剂
　　１．１ 仪器ＲＥ －５２Ｃ 型旋转蒸发器；ＹＨＧ －４０ ×４５ 远红外快速恒温干燥箱；ＰＢ２０３ －Ｎ 型 电子 天平；ＤＺＦ－６０５０ 型真空干燥箱。
　　１．２ 试剂与药材乙腈、甘草、地黄。
　　２ 方法与结果
　　２．１ 色谱条件［２，３］
　　２．１．１ 甘草酸含量测定流速１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；流动相：乙腈∶０．１％醋酸水溶液；柱温２５℃；检测波长２５４ ｎｍ。
　　２．１．２ 梓醇含量测定流速１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；流动相０．６％乙腈水溶液；柱温４０℃；检测波长２１０ ｎｍ。
　　２．２ 提取工艺优化
　　２．２．１ 醇浓度影响称取甘草１６ ｇ，地黄２０ ｇ，加入１５ 倍量分别为醇浓度０%，２０%，３０%，４０%，５０%，６０％的醇溶液于１ ０００ ｍｌ 圆底烧瓶中，加热煮沸，并保持低沸２ ｈ，停止加热，放冷后，抽滤。将滤液加入旋转蒸发仪，蒸发浓缩，并移至２５０ ｍｌ 容量瓶，定容，则每毫升含１．８ ｇ 原药材，精取药液２５ ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５°Ｃ 干燥３ ｈ，移置干燥器中，冷却３０ ｍｉｎ，迅速精密称定重量。以浸出物量、梓醇含量、甘草酸含量为考察指标，综合评分：总分为１００ 分，浸出物占３０ 分，梓醇含量占３５ 分，甘草酸含量占３５分。结果见表１。
　　表1 醇浓度影响实验结果
　　结果表明，随着醇浓度的增大，浸膏收率下降，甘草酸含量升高，梓醇含量没有明显变化趋势。醇浓度影响不明显，需进一步实验证实。
　　２．２．２ 乙醇提取次数对有效成分影响称取甘草１６ ｇ，地黄２０ ｇ，置１ ０００ ｍｌ 圆底烧瓶中，加入６０％乙醇５５０ ｍｌ，加热煮沸，并保持低沸２ ｈ，停止加热，放冷后，抽滤。将滤液加入旋转蒸发仪，蒸发浓缩，并移至２５０ ｍｌ 容量瓶，定容，则每毫升含１．８ ｇ 原药材，精取药液２５ ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５°Ｃ 干燥３ ｈ，移置干燥器中，冷却０．５ ｈ，迅速精密称定重量。
　　综合评分：总分为１００ 分，浸出物占３０ 分，梓醇含量占３５分，甘草酸含量占３５ 分。结果见表２。
　　表2 60%乙醇提取次数对甘草酸和梓醇含量的影响
　　结果表明，６０％乙醇提取时，随提取次数增加，３ 个指标也发生递增。但分值指标偏低。
　　２．３ 水煎煮法提取工艺条件的优化
　　２．３．１ 正交实验［4～６］ 为优化水煎煮法提取工艺的条件，选用正交实验法，考察加水量、煎煮次数、煎煮时间３ 个因素，以８５％ 醇出物量及甘草酸含量作为考察指标，选用Ｌ９ 表安排实验。因素水平见表３。
　　表3 因素水平
　　取甘草１６ ｇ，地黄２０ ｇ，加入Ａ 倍量水，加热煮沸，并保持低沸Ｃ 小时，停止加热，放冷后，抽滤，煎煮Ｂ 次。合并滤液，将滤液置于电炉上，蒸发浓缩，并移至２５０ ｍｌ 容量瓶，定容，精取药液２５ ｍｌ，置小蒸发皿中，水浴蒸干，于１０５℃干燥３ ｈ，移置干燥器中，冷却３０ ｍｉｎ，迅速精密称定重量。将浸出物用１００ ｍｌ ８５％乙醇溶解转移到锥形瓶中，超声０．５ ｈ，过滤后将滤液分多次加入蒸发皿中，于水浴锅上蒸干后，于１０５℃干燥３ｈ，移置干燥器中，冷却３０ ｍｉｎ，迅速精称重量。
　　综合评分：总分为１００ 分，８５％醇出物占３０ 分，梓醇含量占３５ 分，甘草酸含量占３５ 分。结果见表４ ～５。
　　表4 正交实验结果
　　表5 水煎煮提取工艺正交实验结果
　　３ 个因素的极差比较结果是：ＲＢ ＞ＲＡ ＞ＲＣ ，最佳工艺条件是：Ａ因素取３ 水平，Ｂ 因素取３ 水平，Ｃ 因素取３ 水平，即采用２４ 倍量水，煎煮３ 次，３ ｈ／次。
　　表6 方差分析
　　由方差分析表６ 结果看出，Ａ，Ｂ，Ｃ 因素的水平变化对实验结果都有显着影响。可以看出，最高得分处方为Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ ，即采用２４ 倍量水，煎煮３ 次，３ ｈ／次。从含量结果分析，煎煮两次甘草酸提取率已经可以达到甘草总量的９６．３％，梓醇含量的９２．１％。从 企业 大生产考虑，采用二次提取更为　合理，因此取Ａ３ Ｂ２ Ｃ３与正交实验所得得最优处方Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ 进行重复，以确定最佳处方。
　　２． 重复实验根据正交实验结果，按照处方组合Ａ３ Ｂ２ Ｃ３ 和Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ 进行重复３ 次，取２５ ｍｌ 定容后的提取液，测定浸出物中甘草和梓醇含量，再用８５％乙醇１００ ｍｌ，超声０．５ ｈ，过滤后，挥干乙醇，得醇出物量。结果见表7。
　　表7 重复实验结果
　　通过重复实验的比较，确证了Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ 条件是最佳提取条件。而处方组合Ａ３ Ｂ３ Ｃ３与最佳提取条件Ａ３ Ｂ３ Ｃ３相比较无显着差异，且从企业大生产考虑，采用二次提取更为经济合理，因此取Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ 作为最优处方。
　　２．3．3 醇沉淀对有效成分的影响直接提取、提取后醇沉两种提取方法进行比较。根据正交试验结果，按照处方组合Ａ３ Ｂ２ Ｃ３ 进行重复３ 次，取２５ ｍｌ 定容后的提取液，测定浸出物中甘草和梓醇含量，再用８５％乙醇１００ ｍｌ，超声３０ ｍｉｎ，过滤后，挥干乙醇，得醇出物量。另取２５ ｍｌ 的提取液加入浓醇，调至浓度为６０％，体积控制在１００ ｍｌ 以内，分别转入锥形瓶中，静置过夜，取上清液，定容至５０ ｍｌ，测定梓醇、甘草酸含量。结果见表8。
　　表8 两种提取方法比较结果
　　采用醇沉法，对甘草酸含量无明显影响，但是梓醇含量明显下降。
　　3 讨论

　　本实验以复方珍珠含片中有效成分甘草酸、梓醇的含量为指标，分别考察不同浓度乙醇回流和煎煮的提取工艺可行性。结果，乙醇回流１ ～３ 次获得的提取液中有效成分含量均偏低，不能将有效成分成功转移。因此，宜选择传统煎煮法作为提取工艺。实验重点对加水量、煎煮次数、煎煮时间３ 个因素分别进行了单因素考察。结果，一定范围内加水量与甘草酸、梓醇含量成正比关系，且加水量大于２４ 倍时提取较完全；煎煮次数在二次以上即可将有效成分转移出来，煎煮时间达３ ｈ 以上提取完全。由于中药复方制剂成分复杂，遵循“去粗取精”，即除去糟粕，留其精华，在保证有效成分不被丢失的前提下，最大可能的保留有效成分。同时，结合实际生产节约资源原则优化出适合 工业 化生产的生产工艺。
【 参考　文献 】
　　［1］ 国家药典委员会． 中国 药典，Ⅰ部［Ｓ］．北京：化学工业出版社，２００５：５９，２７４，８２
　　［2］ 汪程远，张 浩，孟 莉，等．ＨＰＬＣ 测定地黄及其制剂中梓醇的含量［Ｊ］．华西药学杂志，２００３，１８：１３４．
　　［3］ 王兰霞，杨玲霞，张伯崇．ＲＰ －ＨＰＬＣ 测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量［Ｊ］．中国药学杂志，１９９７，３２：４３４．
　　［4］ 刘　扬，龚金红，储 宁，等．ＲＰ －ＨＰＬＣ 法测定复方珍珠咽喉宁含片中梓醇和甘草酸含量［Ｊ］．抗感染药学，２００６，３：１０９．
　　［5］ 黄维安，蒙 毅，黄品莲．正交法试验比较甘草浸膏的提取工艺［Ｊ］．中国中药杂志，１９９４，１９，２８３．
　　［6］ 钱 漪，许树梧．实用药学 计算 ［ Ｍ］．长沙：湖南 科学 技术出版社，１９８５：３４７．