几种植物挥发油的抗菌作用研究.pdf

中兽医医药杂志 JTCVM2006年第1期10 调查研究几 种 植 物 挥 发 油 的 抗 菌 作 用 研 究王建国,张国伟,徐贵财,韩 静(天津市畜牧兽医研究所,天津 300112)摘 要:通过香薷、藿香、大蒜、苍术、艾叶等植物挥发油对仔猪黄白痢大肠杆菌、奶牛乳房炎链球菌、奶牛乳房炎酵母类真菌、孔雀肺炎球菌、金黄色葡萄球菌标准株抗菌作用的研究,初步证实了香薷挥发油、大蒜挥发油对上述临床病原菌具有较强的抑制作用。关键词:香薷;广藿香;大蒜;苍术;艾叶;挥发油;抗菌 中图分类号:S853174 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2006)01-0010-03 挥发油(Volatile oils)又称精油(Essential oils),广泛存在于多种植物中,其主要化学成分为脂肪族、芳香族和萜类三大类化合物以及它们的含氧衍生物,如醇、醛、酮、酸、酚、醚、酯、内酯等,此外还有含氮和含硫的化合物。挥发油的药理作用有发汗、抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、镇痛、局麻、健胃、平喘、止咳、祛痰及驱虫等1,2。为探索天然抗菌活性成分,研究开发兽医临床天然药物制剂,笔者针对临床分离的仔猪黄白痢大肠杆菌、奶牛乳房炎链球菌、奶牛乳房炎酵母类真菌、孔雀肺炎球菌、金黄色葡萄球菌标准株进行了几种植物挥发油的抗菌作用研究,现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 药材来源及挥发油提取香薷、广藿香购自天津市药材市场,苍术、艾叶购自河北安国药材市场,大蒜购自天津市农贸市场。挥发油的提取采用水蒸气蒸馏法,用石油醚萃取而得。1.2 供试药液采用挥发油原液、乳液进行抗菌实验。乳液的制备系用挥发油与Tween-80加蒸馏水制成。1.3 实验菌株金黄色葡萄球菌标准株,仔猪黄痢大肠杆菌临床分离株9 d、B5、C3,奶牛乳房炎酵母类真菌临床分离株,孔雀肺炎球菌临床分离株。以上菌种由本所兽医室提供。1.4 抗菌实验1.4.1 平板打孔法 将普通琼脂培养基溶化后,每平皿加18 ml,冷凝后用直径3 mm不锈钢管均匀打孔,每皿均匀涂布菌液350l,孔中定量加入药液20l。37培养18 h以上,测定抑菌圈直径。1.4.2 平板培养法(M IC测定)按照2倍稀释法进行。取13只灭菌烧杯,第1只烧杯中加入普通琼脂汤36 ml,其余12只烧杯中加入普通琼脂汤20 ml。将5%大蒜油乳4 ml与第1只烧杯中普通琼脂汤混合均匀,取20 ml混合液加入第2只烧杯中,混合后再取20 ml加入第3杯,以此类推,第12只烧杯取出20 ml混合液弃掉,第13杯为空白对照。第112杯药物浓度(l/ml)依次为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、收稿日期:2005-09-22作者简介:王建国(1962-),男,副研究员,主要从事新兽药开发与研究。0.1563、0.0781、0.0310、0.0195、0.0098、0.0049、0.0024。将琼脂-药液倾入灭菌平皿中,冷凝后定点接种菌液2l,37 培养18 h以上,观察有无细菌生长。2 实验结果2.1 几种挥发油原液的抗菌作用实验结果表明,香薷挥发油、大蒜挥发油对大肠杆菌临床株C3具有较好的抑制作用,而藿香挥发油、艾叶挥发油及苍术挥发油则无抑制作用。香薷挥发油、藿香挥发油对孔雀肺炎球菌具有很强的抑制活性,大蒜挥发油也有一定的抑制作用,而艾叶挥发油、苍术挥发油则无抑制作用。见表1。表1 几种挥发油原液的抑菌圈直径/mm挥发油种类猪黄痢大肠杆菌C3孔雀肺炎球菌香薷挥发油1020藿香挥发油015艾叶挥发油00大蒜挥发油89苍术挥发油002.2 不同浓度挥发油对病原菌的抑制作用香薷挥发油原液对金葡菌标准株和临床分离的仔猪黄痢大肠杆菌9 d、B5,奶牛乳房炎酵母类真菌均具有很强的抑制作用,特别是对大肠杆菌B5,在19 mm的抑菌圈外,还有一明显的菌膜稀薄区域,直径为48 mm。1%香薷挥发油乳剂则对两株大肠杆菌无抑制作用,对金葡菌标准株具有中等抑制作用,对酵母类真菌具有较强的抑制作用。5.0%、215%和1.0%的大蒜油乳剂用平板法对两株大肠杆菌均未表现出抑制作用,而5.0%和2.5%大蒜油乳剂对金葡菌和酵母类真菌表现了很强的抑制作用,特别是5.0%的乳剂对酵母类真菌抑制作用极强,抑菌圈直径达到36 mm。1%的大蒜油乳剂对金葡菌标准株无抑制作用,对酵母类真菌的抑菌作用较强。见表2。表2 不同浓度挥发油对病原菌的抑菌圈直径/mm挥发油种类大肠杆菌9 d大肠杆菌B5金葡菌酵母菌香薷挥发油原液161914201.0%香薷挥发油乳009135.0%大蒜挥发油乳/015362.5%大蒜挥发油乳0015171.0%大蒜挥发油乳/0010中兽医医药杂志 JTCVM2006年第1期11调查研究2.3 大蒜挥发油对病原菌的最小抑菌浓度(M I C)实验结果表明,大蒜挥发油对奶牛乳房炎链球菌、仔猪黄痢大肠杆菌B5、奶牛乳房炎酵母类真菌、金葡菌标准株的最小抑菌浓度分别为0.3125l/ml、0.005l/m l、01625l/m l和0.3125l/m l。见表3。3 讨论表3 大蒜挥发油对病原菌的最小抑菌浓度(M IC)稀释倍数原液24816326412825651210242048空白对照浓度/lml-15.002.501.250.630.310.160.080.040.020.010.0050.00250 链球菌-+大肠杆菌B5-+酵母菌-+金葡菌-+3.1 香薷(M osla chinensisMaxi m.)为唇形科草本植物,其性微温,味辛香,无毒,能理气、解表、化湿3。成彩莲等4的实验证实,石香薷挥发油对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、变形杆菌等均有抑制作用,其M IC为78312g/ml。龚慕辛5对青香薷和江香薷挥发油的药理作用进行了比较,表明两种香薷挥发油在浓度为0101mol/ml时,对金黄色葡萄球菌、甲型链球菌、大肠杆菌、卡他双球菌、肺炎双球菌均能完全抑制。香薷挥发油的主要有效成分为麝香草酚(Thymol)和香荆芥酚(Carvacrol)6。藿香是唇形科草本植物,包括广藿香(Pogostem on cablin(Blanco)Benth1)和藿香Agastache rugosa(Fisch.etMey.)O.Kuntze两种,其味辛甘苦,具有抗真菌、祛湿、止吐、化痰止咳、健脾和胃、消食解暑等功效。藿香中的二萜类成分具有弱的抗真菌活性7,藿香的乙醚、醇、水的浸出液在体外对同心性毛癖菌等15种真菌具有弱的抗菌作用8。杨得坡报道9,中国广藿香(P.cablin)油对皮肤癣菌有很好的特异选择性抑制作用,M IC在50400l/l之间。大蒜为百合科植物大蒜A llium sativumL.(A llium pekin2genseProkh.)的鳞茎。其性辛味温,具有暖脾胃、止痢、止咳、杀菌、驱虫的功效10,对化脓性球菌、葡萄球菌、脑膜炎球菌、肺炎双球菌、链球菌、念球菌、绿脓杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、大肠杆菌、幽门螺旋杆菌、霍乱弧菌、须发癣菌等有明显的抑制或 杀灭作用1113,被誉为“天然广谱抗生素”。郭涛14研究证明大蒜素、大蒜油对所有真菌都有抑杀作用。苍术为菊科植物苍术A tractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术A tractylodes lanceaDC.var.chinensis Kitam.的根茎。其性温,味辛、苦,有健脾燥湿,祛风湿的作用15。徐小平等16试验表明,1.4%苍术消毒剂(乙醇浸液)对金黄色葡萄球菌作用7 min,杀灭率99.9%,10.0%的该液对枯草杆菌黑色变种芽胞作用7 min的杀灭率为100%。尹秀芝等17用苍术萃取物(非水溶性)乳剂进行了抗真菌研究,结果对断发癣菌、石膏样小孢子菌、粉小孢子菌、石膏样毛癣菌、铁锈色小孢子菌、红色毛癣菌、羊毛状小孢子菌、紫色癣菌、黄癣菌、絮状表皮癣菌均具有较好的抑制作用。艾叶为菊科植物艾蒿A rtem isia argyiLevl.etVant.的干燥叶,其性温,味苦辛,有小毒,功能温经散寒、止血安胎18。艾叶油410-3浓度时对肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌等均有抑制作用,挥发油成分4-松油烯醇210-3对金黄色葡萄球菌等有抑制作用19。艾叶挥发油可随点燃的艾烟扩散到空气中。叶春枚等20观察了艾烟熏的抑菌作用,发现艾烟熏2 min后可抑制金黄色葡萄球菌和乙型溶血型链球菌,熏30 min可抑制大肠杆菌,熏50 min可抑制绿脓杆菌。从大量的报道来看,上述几种植物的挥发油对多种病原菌均有不同程度的抑制或杀灭作用,这些植物作为中药在临床上应用较多,其药效多与其所含挥发油有关。3.2 本文中实验采用的菌株是从临床病例中分离得到的,此前曾经对多味清热解毒和具有抗菌作用的中药进行实验筛选,几株仔猪黄白痢大肠杆菌均具有较高的耐受性,药物抗菌作用不明显。而对挥发油的筛选实验表明,香薷挥发油、大蒜挥发油对上述病原菌均显示了很强的抗菌作用,表明这两种挥发油对开发兽用天然抗菌新制剂具有很大潜力。3.3 实验中香薷挥发油原液对大肠杆菌9 d、B5具有较强的抗菌作用,而1%的乳剂却未表现出抗菌作用,其原因之一可能与挥发油浓度有关,另一原因可能受乳化剂的影响,降低了其抗菌作用21。3.4 用平板打孔法,5%大蒜油乳剂对大肠杆菌B5未见抑菌作用,而用2倍稀释法测定的M IC可达到0.005l/ml,两种方法的差异性很大。其原因与实验方法和接菌量不同有关22,后者接菌量要小得多。参考文献:1周邦靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法M.北京:科学技术文献出版社重庆分社,1987,14.2唐得时.中药化学M.北京:人民卫生出版社,1986,192.3江苏新医学院编.中药大辞典M.上海:上海人民出版社,1975,609610.4成彩莲,彭承秀,刘爱荣.石香薷挥发油抗菌作用及治疗急性细菌性痢疾的疗效观察 J.同济医科大学学报,2000,29(6):569571.5龚慕辛.青香薷与江香薷挥发油药理作用比较J.北京中医,2000,(4):4649.6郑尚珍,杨彩霞,高黎明,等.石香薷挥发油成分的研究J.西北师范大学学报(自然科学版),1998,34(3):中兽医医药杂志 JTCVM2006年第1期12 调查研究3133.7 Lee HK.Diterpenes from roots of Agastache rugosa andtheir cytoroxic activitiesJ.Saengyak Hakhaechi,1994,25(4):319327.8孙 迅.中药对某些致病性皮肤癣菌抗菌作用的研究J.中华皮肤科杂志,1958,(3):210213.9杨得坡.藿香和广藿香挥发油对皮肤癣菌和条件致病真菌的抑制作用J.中国药学杂志,2000,35(1):911.10黄泰康等主编.现代本草纲目M.北京:中国医药科技出版社,2000,170.11 Chen Guangwei.Effects of garlic compounds disllyl sulfurand diallyl disulfur on aryl mine N-acetyltransferase activ2ity in Klebsiella PneumoniaeJ.J Appl Toxicol,1999,19(2):758.12 Ankri Serge.Antimicrobial properties of allicin from garlicJ.Microbes Infect,1999,1(2):125.13 Cellini,Luigina.Inhibition of Helicobacterpylori by garlicextractJ.FEMS I mmunolMelMicrobial,1996,13(4):273.14郭 涛.大扶康、大蒜素、大蒜油注射液对深部真菌的抑杀作用J.沈阳药科大学学报,2000,17(3):214.15 黄泰康等主编.现代本草纲目M.北京:中国医药科技出版社,2000,1253.16徐小平,李卓成,肖建德,等.苍术消毒剂杀菌性能的实验观察 J.中华医院感染学杂志,2003,13(9):843844.17 尹秀芝,蒲 卓,王冰梅,等.中药苍术抗真菌作用的研究及临床观察J.北京大学学报(自然科学版),2000,1(6):492494.18 黄泰康等主编.现代本草纲目M.北京:中国医药科技出版社,2000,674.19 防治慢性气管炎艾叶油研究协作组.艾叶油及其有效成分的药理研究J.医药工业,1977,(11):5.20 叶春枚,呈 荧,高建芳.艾熏治愈54例手指骨髓炎临床观察与实验研究J.上海针灸,1988,(2):7.21 罗明生,高天惠主编.药剂辅料大全M.成都:四川科学技术出版社,1993,772.22 周邦靖.常用中药的抗菌作用及其测定方法M.重庆:科学技术文献出版社重庆分社,1987,21,23.Study on the antibiosis effects of some TCM volatile oilsWANG Jian-guo,ZHANG Guo-wei,XU Gui-cai,HAN Jing(Tianjin Institute ofAnimal&Veterinary Sciences,Tianjin 300112,China)Abstract:Effects of some volatile oils,which were extracted fromM osla chinensisMaxim.,Agastache rugosa(Fisch.etMey.)O.kuntze,A llium sativumL.,A tractylodes lancea(Thunb.)DC.andA rtem isia argyiLevl.etVant.on the pathogenic a2gents,such asE.coliin piglets,yeast fungus andStreptococcusin bovine mastitis,Staphylococcusin peacock pneumonia and stand2ard strains ofStaphylococcus aureus,were investigated.Itwas initially proved that volatile oils extracted fromM osla chinensisMax2im.andAllium sativumL.could potently inhibit the growth of these microorganisms.Key words:volatile oils;antibiosis;traditional Chinese medicine正 交 设 计 法 优 选 大 蒜 乳 剂 的 制 备 工 艺丁晓刚,田淑琴,龙 江(西南民族大学,四川成都 610041)摘 要:目的:优选大蒜乳剂的制备工艺,制备大蒜新剂型。方法:根据影响乳剂稳定性因素,选用正交设计法L934优选大蒜乳剂的制备工艺。结果:工艺优选结果表明,乳化剂司盘-80的用量对乳剂形成及其稳定性影响显著(P0.05),乳剂制备的最佳工艺条件为D1B2C3A2,即司盘-80为1.0%,油、水相的比例为21,吐温-80为0.5%,乳化温度为60。结论:用该工艺制备的大蒜乳剂符合 中国药典 2005年版乳剂要求。关键词:大蒜;乳剂;正交设计;等电点超滤法 中图分类号:S853173 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2006)01-0012-03 大蒜其味辛温;归脾、胃、肺经。功能行气通滞,温脾胃,收稿日期:2005-09-28作者简介:丁晓刚(1978-),男,硕士研究生,主要从事新药药理与临床药理学研究。消肿,解毒,杀虫。常用于泄泻、痢疾、肺痨、顿咳以及皮癣、虫蛇咬伤、钩虫、蛲虫等病证。现代医学研究证明,大蒜具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、提高机体免疫功能、降血糖、解毒等功能。其抗菌谱较广,对青、链、氯、金霉素耐药菌敏感。大蒜对细菌性痢疾疗效确切。临床多用于深部霉菌感