实验二PMSG生物效价测定省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

试验二试验二 PMSG生物学效价测定生物学效价测定一试验目标一试验目标 掌握用生物测定法测定PMSG生物学效价。二试验原理二试验原理 PMSG含有FSH、LH成份，所以含有FSH、LH相同生物学作用，即能促使性成熟前小鼠子宫增大、促进卵泡发育、排卵和黄体形成；对雄性动物含有促进精细管发育和性细胞分化。第1页三、测试材料三、测试材料（一一）试试验验动动物物：取健康无伤残2428日龄(即将到达性成熟日龄)、体重1215g，同源雌幼小鼠。各测试组内试验鼠出生日龄相差不得超出5天，体重相差不得超出3g。第2页(二二)测试样品测试样品：孕马血清PMSG生物制剂。(三三)器器械械及及药药品品：1ml注射器、4号针头、0.1ml微量注射器、1ml和2ml吸管，酒精棉球、生理盐水、剪子、大号镊子、带齿小镊子、鼠解剖台(或用小木板及图钉)、玻璃片(2030cm)，鼠罐、小玻瓶。第3页四、测试方法四、测试方法（一）测试组确实定：每取0.1ml孕马血清（0.5 IU/l），按表加入不一样量生理盐水，稀释成不一样浓度，作为各测试组。（二）对照组：注射生理盐水。测定方法：测定方法：生物测定法、细胞培养生物测定法、免疫测定法、受体测定法第4页第5页第6页五、检定方法五、检定方法(一一)注射注射1注注射射次次数数 按各测试组要求，按照稀释成不一样浓度一定剂量。每个测试组需注射3只雌幼小鼠，孕马血清只作一次注射。对照组亦为3只雌幼小鼠，在每次给各测试组小鼠注射同时，注射一样剂量生理盐水。2注注射射部部位位 按照各组要求药品剂量,准确地注射于小鼠皮下,注意不得将药液注射于胸腔或腹腔内，亦不可溢漏于体表。第7页3剂量剂量 每只小鼠注射剂量为0.2ml。4注注射射方方法法 用手指捏住小鼠头及尾部固定之，以酒精棉球消毒其背部,提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药品。伴随药品推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药品确已注入皮下部位。注射针头宜选取小号细针头,以预防注射后药液从针孔处逸出。第8页(二二)剖检剖检1.剖剖检检时时间间 测试小鼠应在注射药品后72-78h内进行。2.剖检步骤剖检步骤(1)处处死死小小鼠鼠 采取颈椎脱臼法处死小鼠。将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼振动。也可采取将小鼠头部经撞击致死。然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。(2)剖剖腹腹 将处死并固定好小鼠，沿腹中线剪开腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方看到两侧呈乳白色卵巢及与输尿管相平行两子官角。第9页(3)组组织织剥剥离离 将卵巢及子宫周围组织剥离，于膀胱后阴道段剪断，向上提起即可将子宫及卵巢摘出。(4)剔除从属组织剔除从属组织 按各测试组次序，将摘出子宫平置于玻璃板上，剔除子宫周围从属组织。为了预防子宫干涸，可滴上数滴生理盐水浸润。第10页(三三)效效价价确确定定 将各测试组雌幼小鼠子宫与对照组子宫相对比观察。在每组3只雌幼小鼠中，若有2只鼠子宫增大一倍者，则确定该组为阳性反应组。依据各测试组中以呈阳性反应最低浓度组效价值，换算出每毫升孕马血清中含有小鼠单位。取最低有效剂量组，将其分母5，即为1ml血清样品中含PMSG小鼠单位数。第11页表表1 1 孕马血清稀释倍数折算鼠单位表孕马血清稀释倍数折算鼠单位表组别每0.1ml血清中加入生理盐水量(ml)稀释后血清浓度每鼠注射量（ml）注射鼠数（只）实际鼠体内血清量（ml）每ml血清中含有小鼠单位1 10.91/100.231/505021.21/130.231/656531.51/160.231/808041.81/190.231/959552.11/220.231/11011062.41/250.231/12512572.71/280.231/14014083.01/310.231/15515593.31/340.231/170170103.61/370.231/185185第12页组别每0.1ml血清中加入生理盐水量(ml)稀释后血清浓度每鼠注射量（ml）注射鼠数（只）实际鼠体内血清量（ml）阳性小鼠数量（只）1 10.91/100.231/5021.51/160.231/8032.11/220.231/11042.71/280.231/14053.31/340.231/1706对照组30动物科学动物科学1001班班0.2第13页组别每0.1ml血清中加入生理盐水量(ml)稀释后血清浓度每鼠注射量（ml）注射鼠数（只）实际鼠体内血清量（ml）阳性小鼠数量（只）1 11.21/130.231/6521.81/190.231/9532.41/250.231/12543.01/310.231/15553.61/370.231/1856对照组3动物科学动物科学1002班班0.20第14页六、试验汇报六、试验汇报计算出被测样品中含有PMSG小鼠单位数。第15页