药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件.pptx

药品质量控制中药品质量控制中当代分析方法与技术当代分析方法与技术Modern analytical methods&techniquesin quality control of drugs第十六章第十六章药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第1页 当代分析方法与技术，为药学发展提供了适时而有效伎俩当代分析方法与技术，为药学发展提供了适时而有效伎俩与动力。与动力。色谱及其联用技术：色谱及其联用技术：药学研究分子水平。药学研究分子水平。手性分析：手性分析：毛细管电泳及手性色谱技术药品研究毛细管电泳及手性色谱技术药品研究与质量控制提供了保障。与质量控制提供了保障。当代光谱技术：当代光谱技术：药品结构判定，药品结构判定，微量杂质检定。微量杂质检定。第一节 概况药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第2页Capillary electrophoresis,CEModern chromatogr&its application药品当代色谱法及其应用药品当代色谱法及其应用药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第3页UPLCUltraPerformance LC(UPLC)technology starts with unique 1.7 m small-particle chemistries.Chromatographers no longer need to choose between speed and resolutionwith UPLC you get both.药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第4页Mass spectroscopy MSNuclear magnetic resonance spectrometry NMRX-ray diffraction methodNear infrared spectrometry NIRS当代光谱法及其应用当代光谱法及其应用Modern spectroscopy&its application in pharmaceutical analysis药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第5页GC-FTIRGC-MSUPLC-MSHPLC-NMRHyphenated Techniques in Chromatography 当代联用技术及其应用当代联用技术及其应用HPLC-MSCE-MS药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第6页+样品与溶剂脱离及电离 EI ESI APCILC/MS接口离子源质量分析器检测离子HPLC数据系统质谱质谱离子识别 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform +离子检测+-+-+第二节第二节 液质联用技术与应用液质联用技术与应用药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第7页2.1 离子化方式离子化方式药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第8页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第9页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第10页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第11页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第12页2.2 离子分离与测定模式离子分离与测定模式药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第13页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第14页Full-Scan Mass SpectrometryAdvantageProvides MW Information药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第15页Full-Scan MS of BuspironeBuspirone(丁螺环酮)C21H31N5O2MW=385150200250300350400450500m/z255075100Relative Abundance386408(M+H)+(M+Na)+药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第16页Single Ion Monitoring(SIM)AdvantagesTargeted Analyte MonitoringHigh Duty CycleSimpleDisadvantagesCan suffer from interferencesNot as sensitive or selective as SRM(see below)Fixed m/zPass AllPass All药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第17页Product Ion Scanning:A Tandem MS MethodAdvantageProvides Structural InformationDisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningProduct Ion SpectrumQ3Q2Q1药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第18页Product Ion Spectrum of Buspirone100150200250300350400m/z255075100Relative Abundance122386222150265180(M+H)+药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第19页Precursor Ion ScanningAdvantageID compounds producing specific fragment ion(e.g.,PO3 for phosphopeptides)DisadvantageLow duty cycleFixed m/zPass AllScanningPrecursor Ion SpectrumQ3Q2Q1药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第20页Precursor Ion Scan Mode for Buspirone MetabolitesPrecursor Ion Scan:Q3 set to m/z 122100200300400500m/zRelative Abundance402386910111213141516Time(min)255075100Relative Abundance11.6213.8413.1614.4012.1310.4515.45药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第21页Neutral Loss ScanningAdvantageScreen for compounds producing specific neutral loss(e.g.,loss of 176 for glucuronide conjugates)DisadvantageLow duty cycleScanningPass AllScanningNeutral Loss SpectrumLinkedQ3Q2Q1药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第22页Neutral Loss Scan of Buspirone MetabolitesNeutral Loss Scan:Q1/Q3 difference set to 121 Da100200300400500m/zRelative Abundance402386910111213141516Time(min)255075100Relative Abundance13.9211.6913.2115.5010.58药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第23页Selected Reaction Monitoring(SRM)AdvantagesTargeted Analyte MonitoringHigh Duty Cycle“Simultaneous”Monitoring of Multiple TransitionsDisadvantageNo“advanced”structural informationFixed m/zPass AllFixed m/zQ1Q2Q3药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第24页MS/MS Selectivity in Complex Matrices息斯敏阿斯咪唑(astemizole)药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第25页Chlroamphenicol(氯霉素，氯霉素，CAP)残留测定残留测定黄杨生物碱成份判定黄杨生物碱成份判定苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究2.3药品分析中经典应用药品分析中经典应用药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第26页C11H12Cl2N2O5FMW=323.13【类别】酰胺醇类抗生素【适应症】本品是治疗伤寒、副伤寒首选药品，外用可治疗沙眼。因脑脊液浓度高，故惯用于治疗细菌性脑膜炎和脑脓肿。另外，尚可外用治疗痤疮、酒糟鼻、脂溢性皮炎等。被农业养殖滥用！肉食品中严格检验。2.3.1 Chlroamphenicol(氯霉素，氯霉素，CAP)残留测定残留测定药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第27页HPLC analysis was performed on the Finnigan Surveyor HPLC module with MS Pump and AutosamplerColumn:Thermo Hypersil Gold C18(1002.1 mm,5)Mobile Phase:A:Water;B:AcetonitrileColumn Temperature:40 oCGradient Program:0.25 mL/minInjection:20 uL with loopTime(min)%A%B080202.520803.020803.180205.08020药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第28页Operation Conditions for CAPIon source:ESIIon polarity:NegativeSpray voltage:4000 VSheath gas pressure:45Auxiliary gas pressure:15Ion transfer capillary temperature:300 oCSource CID:8 VScan Type:SRM,3 transitions of M-H-(m/z:321)(321152,321 194 and 321 257)Q1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2 Da in H-SRMQ3 peak width0.7 DaCollision Pressure:Ar at 1.3 mTorr药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第29页Q1 peak width and H-SRM experiment Enabling the H-SRM experiment Highly Selective Selected Reaction Monitoring(H-SRM)Reduces“isobaric”chemical noise Increases confidence of analysis&improved LOQQ1 peak width0.7 Da in SRM or 0.2 Da in H-SRMQ3 peak width0.7 Da药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第30页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第31页CAP SRM Result:CAP Standard Q1 peak width=0.7 DaTIC321-152321-194321-257CAPPeak Area Counts=2.4E4药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第32页CAP SRM Result:Kidney Blank TIC321-152321-194321-257药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第33页CAP SRM Result:Kidney Spiked(0.5ng/g)TIC321-152321-194321-257CAPNot accurate for confirmationCAP detected药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第34页CAP H-SRM Result:CAP Standard Q1 peak width=0.2 DaTIC321-152321-194321-257Peak Area Counts=7.3E3药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第35页CAP H-SRM Result:Kidney BlankTIC321-152321-194321-257No CAP detected药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第36页CAP H-SRM Result:Kidney Spiked(0.5ng/g)TIC321-152321-194321-257CAP药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第37页2.3.2 黄杨宁生物碱黄杨宁生物碱HPLC-MS联用判定联用判定黄杨科植物小叶黄杨Buxus microphlla Sieb.et.Zucc.var.sinica Rehd.et Wils中含有含有较强心血管疾病治疗活性孕甾烷生物碱，主要含环维黄杨星D、环黄杨碱D和环常绿黄杨碱C等生物碱成份。药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第38页黄杨生物碱HPLC-ELSD色谱图 色谱条件色谱条件色谱柱：Lichrospher SiO2(250mm4.6mm,5 m)流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈-氨水 (32:50:13:3)流速：1mLmin-1柱温：30ELSD参数：漂移管温度70 雾化气体（N2）流速：1.5 Lmin-1药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第39页环维黄杨星D和相关生物碱含量测定结果次数环维黄杨星D含量%峰1生物碱含量%峰2生物碱含量%峰4生物碱含量%峰5生物碱含量%相关生物碱总含量%186.853.578.090.790.9213.37287.083.848.540.800.9814.15385.833.468.820.810.9514.03485.703.548.760.870.9314.10585.053.528.640.740.8513.75684.843.749.030.790.9714.53Mean85.893.618.650.800.9313.99RSD%1.073.653.384.624.632.8药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第40页环维黄杨星环维黄杨星D及其相关生物碱判别及其相关生物碱判别 质谱条件 电喷雾离子化正离子检测 喷口电压5000V 雾化气压35psi 辅助气压力5psi 毛细管温度350 碰撞气氩气压力1.5mTorr 色谱条件 色谱柱：Lichrospher SiO2(250mm4.6mm,5 m)流动相：四氢呋喃-甲醇-乙腈-氨水 (32:50:13:3)流速：1mLmin-1 柱温：30药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第41页黄杨宁LC-MS/MS全扫描色谱图 黄杨宁LC-MS/MS全扫描色谱放大图 123456789药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第42页峰1母离子质荷比峰1二级质谱图M+H+=370药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第43页可能为峰1黄杨宁相关生物碱Cyclobuxomicreine KCyclobuxosuffrine KBuxenone MCyclobuxoviridine B药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第44页峰2母离子质荷比峰2二级质谱图M+H+=431药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第45页可能为峰2黄杨宁相关生物碱Cyclomicrophylline BBuxazidine BCyclobuxoxazine CCyclomicrophylline C药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第46页峰3母离子质荷比峰3二级质谱图M+H+=415药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第47页可能为峰3黄杨宁相关生物碱Cycloprotobuxine ACyclokreanine BCyclovirobuxeine B16-deoxybuxidienine C药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第48页峰4母离子质荷比峰4二级质谱图环常绿黄杨碱CM+H+=417药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第49页峰5母离子质荷比峰5二级质谱图M+H+=401383.34药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第50页可能为峰5黄杨宁相关生物碱Cycloprotobuxine CBuxaminol EBuxocyclamine ACyclobuxine B药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第51页峰6母离子质荷比峰6二级质谱图环黄杨碱DM+H+=387药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第52页峰7母离子质荷比峰7二级质谱图环维黄杨星DM+H+=403药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第53页峰8母离子质荷比M+H+=375药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第54页 357.15峰8二级质谱图峰9二级质谱图 371.17药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第55页m/z=375m/z=357m/z=344m/z=326m/z=309 357.15药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第56页峰9母离子质荷比M+H+=389药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第57页峰9二级质谱图 371.17药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第58页m/z=389m/z=371m/z=358m/z=340m/z=309 371.17药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第59页峰位号tR(min)M+H+(m/z)特征碎片离子(m/z)可能生物碱名称13.92370339，325，283，135，70，58Cyclobuxomicreine K,Cyclobuxosuffrine K,Buxenone M,Cyclobuxoviridine B24.03431413，382，323，86，70，58Buxazidine B,Cyclomicrophylline B,Cyclobuxoxazine C,Cyclomicrophylline C35.35415384，84，58Cycloprotobuxine A,Cyclokreanine B,Cyclovirobuxeine B,16-deoxybuxidienine C45.92417399，386，368，84，58Cylcyclovirobuxine C56.11401370，352，326，171，58Cycloprotobuxine C,Buxaminol E,Buxocyclamine A,Cyclobuxine B67.03387369，356，338，171，58Cyclobuxine D77.63403385，372，354，70，58Cyclovirobuxine D88.28375357，344，326，309，58未有相关文件报道99.77389371，358，340，173，70，58可能为Cyclobuxine D双键加氢还原产物HPLC-ELSD法黄杨宁相关生物碱归属表药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第60页苯甲酸利扎曲普坦苯甲酸利扎曲普坦 (Rizatriptan Benzoate)MW:391.47 分子式分子式：C15H19O5C7H6O25-HT受体拮抗剂受体拮抗剂2.3.3 苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究苯甲酸利扎曲普坦人体药代动力学研究药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第61页药理作用v刺激大脑血管壁后接点5-HT1B受体收缩血管，降低颅内血管通透性；v刺激三叉神经前突触5-HT1D受体，调整神经递质释放，抑制硬膜神经原性炎症反应和血浆外渗；v阻止血管肽释放，使血管口径正常化，经过收缩颅内血管并抑制神经炎症；v刺激脑干5-HT1B或5-HT1D受体，抑制三叉神经核兴奋；v降低颈动脉血流；v透过血脑屏障，增加脑血流量。药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第62页试验内容v建立苯甲酸利扎曲普坦在血浆、尿样浓度LC-MS/MS测定方法v苯甲酸利扎曲普坦分散片和胶囊进行生物等效性试验v苯甲酸利扎曲普坦片体内药代动力学研究 单剂量(5,10,15 mg)屡次给药(10 mg)稳态(10 mg)药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第63页LC-MS/MS测定方法建立测定方法建立v测定方法选择测定方法选择v质谱条件优化质谱条件优化v色谱条件选择色谱条件选择 色谱柱选择色谱柱选择 缓冲盐选择缓冲盐选择v血浆处理方法血浆处理方法 液液萃取法液液萃取法 蛋白沉淀法蛋白沉淀法v内标选择内标选择LC-MS/MSm/z 270m/z 158Phenomenx PFP1%冰醋酸冰醋酸,0.2%醋酸铵醋酸铵蛋白沉淀法蛋白沉淀法盐酸曲马多盐酸曲马多药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第64页色谱条件色谱条件流动相A：醋酸盐缓冲液(1%冰醋酸，2%醋酸铵;pH 3.5)流动相B：甲醇(0.1%甲酸)梯度条件过程：0 min(B50%)1.0 min(B95%)4.5 min(B95%)4.6 min(B50%)6.5 min(B50%)药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第65页空白溶剂色谱图 预处理空白血浆色谱图 药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第66页质谱条件质谱条件离子检测方式：ESI+SRM检测对象：利扎曲普坦 m/z 269.9158.1 曲马多 m/z 263.958.0喷口电压：5000 V雾化气压：35 psi辅助气压力：5 psi毛细管温度：350碰撞气氩气压力：1.3mTorr碰撞能量：20 eV药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第67页质谱条件优化质谱条件优化利扎曲普坦LC-MS质谱扫描图（m/z=270）药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第68页利扎曲普坦LC-MS/MS质谱扫描图（m/z=158）药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第69页利扎曲普坦质谱裂解图 m/z 270m/z 158（碰撞能量：20ev）药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第70页色谱条件选择色谱条件选择色谱柱色谱柱Intersil-ODS C18Lichrospher-C18 Zorbak-ODS C18 Lichrospher-CN Phenomenx Curosil-PFP 缓冲盐条件(0.1%HCOOH,v/v;0.2%醋酸铵,w/v;pH3.0）采取PFP（五氟苯基）（五氟苯基）柱柱，样品保留适当，峰型良好，有机相和水相百分比也较为适当。药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第71页醋酸铵(w/v)0.05%0.1%0.2%甲醇:水=(50:50)0.2%(w/v)醋酸铵样品峰响应高，拖尾得到一定程度改进。0.1%HCOOH0.1%HAC0.2%HAC 0.5%HAC 1.0%HAC1%HAC水相pH值为3.5，样品保留时间适当，峰形良好。药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第72页血浆处理方法血浆处理方法苯甲酸利扎曲普坦血浆提取条件试验 药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第73页内标选择内标选择佐米曲普坦佐米曲普坦(Zolmitriptan)MW：287 分子式：分子式：C16H21N3O2药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第74页盐酸曲马多盐酸曲马多(Tramadol hydrochloric)MW：299.8 分子式：分子式：C16H25NO2药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第75页曲马多LC-MS质谱扫描图（m/z=264）药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第76页曲马多LC-MS/MS质谱扫描图（m/z=58）药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第77页曲马多质谱裂解图 m/z 264 m/z 58药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第78页单次给药单次给药 受试者单次口服苯甲酸利扎曲普坦片后，苯甲酸利扎曲普坦Cmax和AUC与服药剂量成正比关系。CmaxDoseAUCDose药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第79页数据分析数据分析受试者单剂量口服低中高剂量后平均血药浓度-时间曲线 药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第80页受试者单剂量口服低中高剂量后平均累积排泄量-时间曲线药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第81页受试者屡次服药第36天时平均谷时血药浓度-时间曲线 药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第82页受试者屡次口服达稳态后平均药时曲线药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第83页2.4 其它质谱技术与特点其它质谱技术与特点药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第84页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第85页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第86页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第87页药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第88页成功起源成功起源于于创新意识 不停不停探索探索勇于实践药品质量控制中的现代分析方法与技术培训课件第89页