DB43_T 2474-2022湘东黑山羊冷冻精液生产技术规程.pdf

ICS 65.020.30 CCS B43 43 湖南省地方标准 DB 43/T 24742022 湘东黑山羊冷冻精液生产技术规程 Code of practice for making frozen semen of Xiangdong black goat 2022-12-09 发布 2023-03-09 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 基本要求.1 5 采精.1 6 精液处理.2 7 精液冷冻.3 8 冻精活力检查.3 9 包装、标签、贮存和运输.3 10 记录.4 附录 A（资料性）湘东黑山羊冷冻精液生产仪器设备.5 附录 B（资料性）羊采精操作技术.6 附录 C（资料性）细管冷冻精液标识方法.7 附录 D（资料性）羊精液生产记录表.8 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省光大牧业科技有限公司、湖南省畜牧兽医研究所、浏阳市农业发展事务中心、长沙学院、长沙市动植物疫病预防控制中心、湘阴县畜牧水产服务中心。本文件主要起草人：段洪峰、刘海林、张佰忠、朱立军、张翠永、李昊帮、罗璋、李安定、刘东翔、朱建军、樊志坚、冯小花、刘伯承、向静、奉佳、薛爽、陈新娟、赵晓。湘东黑山羊冷冻精液生产技术规程 1 范围 本文件规定了湘东黑山羊冷冻精液生产的基本要求，采精，精液处理，精液冷冻，冻精活力检查，包装、标签、贮存和运输，记录。本文件适用于湘东黑山羊冷冻精液生产。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 20557 山羊冷冻精液 GB/T 30396 牛冷冻精液包装、标识、贮存和运输 NY/T 810 湘东黑山羊 NY/T 1234 牛冷冻精液生产技术规程 NY/T 3186 羊冷冻精液生产技术规程 DB43/T 2410 湘东黑山羊种羊选育技术规范 3 术语和定义 NY/T 3186界定的术语和定义适用于本文件。4 基本要求 种公羊 品种特征特性应符合NY/T 810的规定，体质健康，无传染病和规定疫病，3代以上系谱完善，等级综合评定为特级或者一级，等级综合评定方法按DB43/T 2410 规定执行。仪器设备 见附录A。器具 器具清洗、消毒、贮存按NY/T 3186规定执行。稀释液 使用商品化的山羊专用稀释液。5 采精 环境 采精场所应环境安静，清洁卫生，地面平坦防滑，有护栏等安全设施。采精前准备 5.2.1 器具 集精管、假阴道、漏斗、水浴锅、干燥箱。5.2.2 采精器润滑剂 将凡士林与液体石蜡1:1混合，用水浴煮沸消毒10 min后置于62 65 水浴锅内待用。5.2.3 台羊 台羊应选择健壮、性情温顺、无疫病且性成熟的母羊，体表、外阴、臀部应清洁卫生，并保定于牢固的采精架内。5.2.4 公羊 种公羊体表应修剪过长的阴毛，体表清洁卫生。包皮需冲洗的，冲洗干净30 min后才准许采精。5.2.5 采精器 将采精器安装好后，注入温水约130 mL，外壳与内胎容积的三分之二。采精时内胎温度应达到38 43，有一定压力，外口呈三角形。集精杯温度维持在33 35。采精器的消毒和润滑剂的使用应符合NY/T 3186的要求。采精操作 见附录B。6 精液处理 准备 接触精液的器皿均应放在34 恒温箱中，稀释液放在34 恒温水浴箱中备用。稀释精液的稀释瓶应做明显标记。外观检查 检查精液的色泽，气味及是否有脓性分泌物或血液等异物。正常情况下，精液为乳白色或微黄，略有腥味。采精量测定 直接读取集精管上刻度（精确到0.1 mL），记录采精量。精子密度测定 使用精子密度测定仪进行测定，应符合GB 20557的规定。精子活力测定 取精液和稀释液5 L10 L于载玻片上，加盖盖玻片后在37 恒温装置的相差显微镜上评定活力，用百分率表示。应符合GB 20557的规定。精液评价及处理 外观正常、密度大于等于6108个/mL、活力大于等于65%、畸形率小于等于15%的精液用于冻精生产。稀释、平衡、灌装 应符合NY/T 1234的规定。标识 细管冷冻精液标识方法见附录C。7 精液冷冻 上架 灌装、封口、标识后的细管上架码放时，应注意细管摆放的方向，棉塞封口端靠近操作者，超声波封口端远离操作者。放入程控冷冻仪时亦应如此放置。用区分棒做好不同羊号细管间的识别。冷冻 采用程控冷冻仪冷冻精液，程控冷冻仪与低温平衡柜应尽量靠近，设置好冷冻程序，4 下降至-10用时180s，-10 降至-100 用时150s，-100 降至-140 用时120s，应按照程控冷冻仪的操作程序进行冷冻。收集 冷冻完成后，打开程控冷冻仪盖子，把细管的棉塞封口端在下，快速将冻精收集到贮精管内，每管收集25支，按种公羊号投入盛满液氮的不同提筒中，并迅速浸泡在液氮中。8 冻精活力检查 参照NY/T 1234的方法。每只羊每批次取1支冻精迅速浸入37 38 水中并晃动20s，取出擦干水珠，剪去细管的超声波封口端，用专用推针把精液挤入一小试管内。取解冻精液进行活力检查，操作方法见6.5。检查合格的冻精作为初检合格品保存。9 包装、标签、贮存和运输 包装和标签 9.1.1 在液氮内将细管分类装入冻精储存管，包装后的细管其棉塞端朝下。包装袋规格应符合 GB/T 30396 的规定。9.1.2 包装袋标签应标记生产单位、品种、种羊号、数量。贮存和运输 应符合GB/T 30396的规定。10 记录 记录内容和格式见附录D。A A 附录A （资料性）湘东黑山羊冷冻精液生产仪器设备 表A.1 湘东黑山羊冷冻精液生产仪器设备 序号 名称 规格和数量 用途 1 移液枪 50 L，2把 精液取样 2 磁力搅拌器 2台 搅拌稀释液 3 水浴锅 2台 稀释液恒温保存 4 冰箱 冷藏0 4，冷冻-20，1台 试剂的保存 5 干燥箱 80 120，1台 使用器械的干燥及消毒 6 液氮罐 容量30 L，口径150 mm 容量10 L，口径50 mm 冷冻精液的保存及转移 7 自动喷码机 1台 喷印细管冻精的编码信息 8 自动程序冷冻仪 1台 冷冻分装好的细管精液 9 大型平衡柜 20 L30 L，1台 稀释好的精液低温平衡 10 光学相差显微镜 1台 检测精液的活力及密度等 11 自动灌装机 1台 罐装细管精液 12 自控蒸馏水仪 1台 在冷冻精液制备中提供稳定可靠的蒸馏水 13 智能精液分析系统 1台 精子密度的检测分析 B B 附录B （资料性）羊采精操作技术 B.1 准备 公羊靠近台羊时，应采取控制措施，不让公羊立即爬跨，使其充分排泄副性腺后进行2次3次空爬，等待3 min5 min后采精，空爬时不让阴茎触及台羊。性欲不强的公羊采取观摩、引诱、被爬跨和更换台羊、地点等措施引导采精。B.2 采精方法 采精员手持采精器站在公羊侧后方，当公羊阴茎伸出爬跨时，迅速向前托着公羊包皮，采精器口斜向下方，双手配合将阴茎引入采精器口内，公羊往前一冲完成射精。采精器紧随公羊阴茎移动，当阴茎缩回后立即将采精器口斜向上方，打开活塞，取下集精管，迅速送至精液处理室。安装好的采精器只能使用一次，不应重复使用。B.3 采精量 公羊一般3 d4 d采精1次，视年龄、身体状况增减次数，每次可连续采精2回（间隔时间30 min 以上），采精充分（集精管内泡沫丰富，精液量大且稠密）的公羊不宜连续采精。C C 附录C （资料性）细管冷冻精液标识方法 C.1 标记组成 细管冷冻精液标记由四部分组成，排列顺序从棉塞封口端到超声波封口端依次为“产地代号”或“公牛站代号”+“种公羊品种代号”+“冻精生产日期”+“种公羊号”。C.2 标记代码 C.2.1 生产单位代码或用汉语拼音大写首字母表示。C.2.2 种公羊品种代码为该品种汉字的汉语拼音大写字母。C.2.3 生产日期按年、月、日次序排列，年、月、日各两位数字，年的两位数采用年度的后两位数，月、日不够两位的，分别加“0”补充为两位数。C.2.4 各部分之间空6个字节以上。示例：注：431表示产地湖南，XDHSY表示品种为湘东黑山羊，2021/11/21表示2021年11月21日生产，03100表示种公羊号。D D 附录D （资料性）羊精液生产记录表 表D.1给出了羊精液生产记录的内容和格式。表D.1 羊精液生产记录表 日期 羊号 第一次采精量mL 第二次采精量mL 总采精量mL 采精员 精液 颜色 精子 活力 精子密度(亿个/mL)检验员 稀释液量 稀释后活力 平衡温度 冷冻后活力 冷冻数量(支)冷冻操作员 备 注