DB43T 2224-2021 规模猪场非洲猪瘟监测样品采集及检 测技术规程.pdf

43湖南省地方标准ICSCCS 65.020B 16发 布湖南省市场监督管理局2021-11发布-092022-01实施-09DB43/T 22242021 规模猪场非洲猪瘟监测样品采集及检测技术规程Technical specification for monitoring sample collection and detectionof African swine fever in large scale pig farms 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 要求 1 5 样品采集 2 6 样品包装与运输 3 7 检测 3 8 阳性结果处置 3 9 废弃物处理 4 10 档案记录 4 附录 A（资料性）非洲猪瘟环境样品采样位置与数量表 5 附录 B（资料性）非洲猪瘟监测样品采样记录表 6 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省畜牧兽医研究所、湖南鑫广安农牧股份有限公司、怀化市畜牧水产事务中心、安仁县旺峰养殖专业合作社。本文件主要起草人：杨俊、王慧、刘伯承、杜丽飞、宋武、周望平、杨爱梅、洪蕾、江新明、刘俊琦、蒋战波、冯小花、陈一峰、彭苗苗、聂后福、袁旭鹏。规模猪场非洲猪瘟监测样品采集及检测技术规程 1 范围 本文件规定了规模猪场非洲猪瘟监测样品采集及检测技术的术语和定义、要求、样品采集、样品包装与运输、检测、阳性结果处置、废弃物处理和档案记录等要求。本文件适用于湖南省规模猪场非洲猪瘟监测样品的采集和检测。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GBT 18648 非洲猪瘟诊断技术 GB 19489 实验室生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 DB43/T 1670 非洲猪瘟病毒检测免核酸提取荧光 PCR 法 高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范（农业部公告 第 503 号）3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 监测样品（monitoring sample）取自生猪或环境，拟通过检测反映个体、群体或环境有关状况的材料或物料。4 要求 4.1 采样原则 4.1.1 发生急性死亡的生猪疑为炭疽时不得解剖，应按 NY/T 541 的规定采血涂片镜检，排除炭疽后方可采样。4.1.2 采集死亡动物的病料以及动物活体采样时，应符合动物伦理的相关规定，动物扑杀应符合动物福利。4.1.3 做好环境消毒，动物组织及采样废弃物的无害化处理，避免污染环境，防止疫病扩散传播。4.2 无菌操作 采样过程应注意无菌操作，采样所需刀、剪、镊子、离心管、封口袋、PBS 或生理盐水等采样用品应事先严格灭菌，每种样品应单独采集、盛放。4.3 安全防护 4.3.1 采样人员应做好个人防护，严格遵守生物安全操作的相关规定。人员要求应符合 NY/T 541 中的相关要求。4.3.2 无生物安全防护及消毒措施保障情况下，不得对疑似非洲猪瘟病死猪进行剖检。4.4 检测实验室资质 开展非洲猪瘟检测的实验室应符合非洲猪瘟检测实验室技术要求，并取得省级兽医行政主管部门审定的非洲猪瘟检测实验资质。5 样品采集 5.1 采样前准备 5.1.1 制定采样方案 猪场应根据采样目的、风险点、疫情等情况制定采样方案，确定样品采集的种类、数量、部位与采样方法等。5.1.2 采样人员准备 采样人员经洗手消毒，穿戴好一次性手套、防护服、口罩、鞋套后，带上采样所需物品到达洗消点。5.1.3 采样物品准备 棉签、装有 PBS 的离心管、真空采血管、记号笔、剪刀、镊子、75%酒精棉、密封袋、样品箱、冰袋等,可根据实际操作的需要增加采样物品。5.2 样品种类 5.2.1 常规监测 主要采集全血或鼻液（唾液）拭子样品，环境采集拭子样品。5.2.2 紧急监测 对发生非洲猪瘟疫情猪场进行感染评估、精准剔除时，应根据猪场感染实际，确定采样单元和采样数量，对猪群主要采样鼻液（唾液）拭子样品及全血样品，对环境采集拭子样品。5.2.3 诊断监测 对疑似非洲猪瘟进行诊断时，应选择症状典型或有患病征兆的猪，采集鼻液（唾液）拭子、血液和组织等样品。5.2.4 引种监测 对于引进的猪，严格执行隔离与检测，所有猪只均需采集鼻液（唾液）拭子和血样。5.2.5 复养场评估监测 对于发生过非洲猪瘟的复养场进行评估监测时，以采集环境拭子样品为主。5.2.6 非洲猪瘟环境样品采样位置与数量参见附录 A。5.3 采样方法 5.3.1 鼻液（唾液）拭子及血液、组织样品 鼻液（唾液）拭子及血液、组织样品的采样方法按按 NY/T 541 的规定执行。5.3.2 环境拭子样品 将充分湿润的无菌棉拭子在物体表面涂抹 3 次5 次后，放入装有 1 ml2 ml 灭菌 PBS 的离心管中。5.3.3 环境液体样品 采用无菌吸管吸取被检液体 3 ml5 ml，放入灭菌离心管中。5.3.4 环境固体样品 采集 2.0 g5.0 g 大小样品装入灭菌离心管中。5.3.5 蜱等生物媒介样品 采用手动或工具诱捕，收集后样品直接放入样品瓶或管中。5.3.6 所有样品在采集时应做好标识和记录。6 样品包装与运输 6.1 紧急和诊断监测样品应按高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范（农业部公告第 503 号）的规定执行，其它监测样品按 NY/T 541 的规定执行。6.2 蜱等生物媒介样品低温保存运输。6.3 所有样品均应密闭包装，并做好防渗、防水、防扩散等。7 检测 7.1 样品预处理和灭活 样品的预处理和灭活按 DB43T 1670 的规定进行。7.2 检测 7.2.1 检测程序按 GBT 18648 规定的方法执行。7.2.2 采用实时荧光定量 PCR 方法检测时，可适当混合检测，但混合样品不宜超过 5 合 1。8 阳性结果处置 病原检测结果为阳性时，应按农业农村部发布的非洲猪瘟疫情应急实施方案要求处置。9 废弃物处理 9.1 采样中应做好死猪尸体、场地、物品、操作人员防护用品等消毒或无害化处理。9.2 检测过程及实验室废弃物处置应遵守 GB 19489、NY/T 1948 等生物安全管理相关要求。10 档案记录 10.1 非洲猪瘟监测样品采样记录表参见附录 B。10.2 记录档案保存至少 2 年以上。附 录 A（资料性）非洲猪瘟环境样品采样位置与数量表 采样区域 采样位置 采样数量(份)采样区域 采样位置 采样数量(份)办公区 门卫室 5-20 生产区 人员进出口区域 5-20 更衣室 5-20 物资进出口区域 5-20 淋浴室 5-20 仓库区域 5-20 物料间 5-20 生产区公共地面 5-20 车辆进出口区域 5-20 中转猪车辆 5-10 人员进出口区域 5-20 生产区车辆 5-10 物资进出口区域 5-20 更衣室 5-20 接待室区域 5-20 淋浴间 5-20 饲料进出口区域 5-20 隔离舍 5-20 食堂仓库和操作区域 5-20 种公猪站/舍 5-20 隔离区公共地面 5-20 配种妊娠舍 5-20 隔离区车辆 5-20 分娩舍 5-20 隔离区宿舍 5-10 保育舍 5-20 门及附属物 5-10 育肥舍 5-20 屋顶 5-10 门及附属物 5-10 裸露的土壤 5-10 窗及附属物 5-10 各种沟渠 5-10 屋顶 5-10 水源及管线 5-20 裸露的土壤 5-10 生活区 人员进出口区域 5-20 舍内设备设施正反面 5-10 物资进出口区域 5-20 料塔 5-10 仓库区域 5-20 舍外料管线 5-10 生活区公共地面 10-15 选猪间 5-10 生活区车辆 5-20 出猪台 5-20 员工宿舍 5-10 水源及管线 5-10 门及附属物 5-10 粪沟及其他沟渠 5-20 窗及附属物 5-10 其他区域 洗消中心 5-20 屋顶 5-10 场外专用通道地面 10-15 水源及管线 5-10 场外公共通道地面 5-20 粪沟及其他沟渠 5-20 无害化处理区域 5-20 裸露的土壤 5-10 水源及管线 5-20 附 录 B（资料性）非洲猪瘟监测样品采样记录表 猪场名称：联系人：猪场地址：电 话：采 样 记 录 序号 样品编号 采样位置 样品名称 备注