晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的转录组学分析_袁畅.pdf

3期691晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的转录组学分析袁畅1，李蔚2，何苹萍2，陆专灵2，黄彬胜2，王大鹏2*，李文红1*（1广西大学动物科学技术学院，广西南宁530004；2广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室，广西南宁530021）摘要：【目的】运用转录组测序技术探究不同晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的基因表达变化，筛选出与其卵巢发育相关的候选基因及信号通路，为研究晒田胁迫方式促进克氏原螯虾卵巢发育的作用机制提供理论依据。【方法】以雌性克氏原螯虾为研究对象，分别在晒田环境胁迫0 d（CK）、3 d（T1）、7 d（T2）和10 d（T3）时采样，构建卵巢cDNA文库进行转录组测序，对差异表达基因（DEGs）进行GO功能注释及KEGG信号通路富集分析。【结果】共获得86377个Unigenes，在Nr、KOG/COG、Swiss-Prot和KEGG库中成功注释到22712个Unigenes；获得1115个胁迫组（T1、T2和T3）与CK的DEGs。KEGG信号通路富集分析结果表明，DEGs富集的PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路和雌激素信号通路与卵巢发育相关。实时荧光定量PCR验证结果表明，3个DEGs的表达模式与转录组分析结果基本一致，证明转录组数据准确可靠。筛选得到B2M、TUBA1B、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND4、DSX、Pck2、PIM3和serine prote-ase nudel-like等10个与卵巢发育相关的DEGs，并对其表达量进行分析，结果表明各基因在晒田胁迫期间均可调控卵巢发育。【结论】B2M、TUBA1B、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND4、DSX、Pck2、PIM3和serine protease nudel-like等10个DEGs及PI3K-Akt信号通路、GnRH信号通路、雌激素信号通路等3个富集通路在晒田胁迫期间参与卵巢发育调控。关键词：克氏原螯虾；卵巢；发育调控；晒田环境胁迫；转录组中图分类号：S966.12文献标志码：A文章编号：2095-1191（2023）03-0691-13收稿日期：2022-06-02基金项目：广西创新驱动发展专项（桂科AA20302019-3）通迅作者：王大鹏（1981-），https:/orcid.org/0000-0002-3714-8936，博士，副研究员，主要从事水产养殖技术研究工作，E-mail：；李文红（1966-），https:/orcid.org/0000-0003-1235-8408，博士，教授，主要从事水产养殖技术研究工作，E-mail：第一作者：袁畅（1996-），https:/orcid.org/0000-0003-4554-0687，研究方向为克氏原螯虾工厂化繁育，E-mail：南方农业学报Journal of Southern Agriculture2023，54（3）：691-703ISSN 2095-1191；CODEN NNXAABhttp:/DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.03.005Transcriptomic analysis of ovary of Procambarus clarkii undersun-drying environmental stressYUAN Chang1，LI Wei2，HE Ping-ping2，LU Zhuan-ling2，HUANG Bin-sheng2，WANG Da-peng2*，LI Wen-hong1*（1College ofAnimal Science and Technology，Guangxi University，Nanning，Guangxi 530004，China；2GuangxiAcademyof Fishery Sciences/Guangxi Key Laboratory ofAquatic Genetics，Breeding and Healthy Breeding，Nanning，Guangxi530021，China）Abstract：【Objective】The purpose of the study was to explore the gene expression changesin ovaries of Procam-barus clarkii under different sun-drying stresses by transcriptomic sequencing technology，and to screen outthe candidategenes and signaling pathways related to ovarian development，so as toprovide a theoretical basis for studying the mecha-nism of sun-drying stress in promoting the ovarian development of P.clarkii.【Method】The female P.clarkii were sam-pled at 0 d（CK），3 d（T1），7 d（T2）and 10 d（T3）of sun-drying environmental stress，and ovary cDNA libraries wereconstructed for transcriptome sequencing，and the differentially expressed genes（DEGs）were subjected to GO functionalannotation and KEGG signaling pathway enrichment analysis.【Result】A total of 86377 Unigenes were obtained.Ofthese，22712 Unigenes were successfully annotated in Nr，KOG/COG，Swiss-Prot and KEGG databases.A total of 1115DEGs were obtained between the stress group（T1，T2，T3）and the CK.The results of KEGG signaling pathway enrich-ment analysis showed that DEGs enriched on the pathways associated with ovarian development，including PI3K-Aktsignaling pathway，GnRH signaling pathway and estrogen signaling pathway.The real-time fluorescence quantitative54卷南 方 农 业 学 报 6920引言【研究意义】克氏原螯虾（Procambarus clarkii）又称小龙虾，在20世纪初被引入我国，是我国养殖面积最广和产量最大的淡水虾，也是淡水水产出口创汇的主导产品。克氏原螯虾广泛分布于湖北、江苏等省份，由于冬春季市场价格过高，其人工养殖产业逐渐向气候温暖适宜的华南地区发展。克氏原螯虾的主要养殖模式为稻田养殖，效益最佳的冬闲田养殖阶段在每年10月至次年4月；获得苗种的主要途径为人工繁殖，出苗量最大的长江中下游地区供苗高峰期在每年46月，与冬闲田养殖存在时间差。为保障秋冬季养殖的苗种供应，提高苗种产量，优化繁育促熟技术迫在眉睫。克氏原螯虾繁殖期时间跨度大，雌雄交配现象在每年春冬季外的大部分时间均可发现，当雌虾卵巢未成熟时也会发生交配，交配后，雄虾精子排入雌虾纳精囊内保存，直到卵巢成熟、排卵，产生抱卵现象（王庆，2012；徐增洪等，2014）。生产实践表明，晒田能提高克氏原螯虾卵巢成熟的同步性，促使其提前抱卵，提高抱卵同步率，且具备杀灭敌害生物的效果，在生产上已广泛使用。因此，了解晒田促熟卵巢的分子机制，对发展新的繁殖相关技术具有重要意义。【前人研究进展】转录组测序技术已广泛应用于水产动物的病原体感染（Lee et al.，2021；Liu et al.，2021；Yang et al.，2022）、免疫调节（Jiao et al.，2019；Jiang et al.，2021；Dinget al.，2022）、神经调节（Veenstra，2015；He et al.，2019；Costa et al.，2021）和性腺发育（Wang et al.，2020；Zheng et al.，2021；Zhong et al.，2021）等方面的分子机制研究。近年来，转录组技术作为研究虾类性腺发育的重要手段，对探寻提升虾类繁殖性能具有重要意义。相关报道表明，在克氏原螯虾中，DNA复制、细胞周期、错配修复、嘧啶代谢、减数分裂酵母和核苷酸切除修复等KEGG通路及Vg、cyclinB、CDK2和Dmc1等差异基因共同参与调节性腺发育（Jiang et al.，2014；Shen et al.，2014）；对雌性斑节对虾（Penaeus monodon）投喂多毛类动物并切除单侧眼柄后，参与调控脂肪酸调节、能量生成和激素介导卵母细胞成熟等通路的重要基因，如MAPKK、PGM-RC1及cytochrome等高表达，协同诱导卵巢成熟（Sit-tikankaew et al.，2020）；日本沼虾（Macrobrachiumnipponense）卵巢在繁殖期间可快速且周期性成熟，其溶酶体通路中富集的相关基因cathepins、legu-mains和cystatin，可保护卵黄原蛋白水解，且myosinheavy chain 67参与了卵母细胞的排出（Zhang et al.，2021）；通过增加甘油三酯和甾醇等营养物质的含量及提高雌激素、雌二醇、甲基法尼苷等相关激素的分泌，从而促进雌性南美白对虾（Litopenaeus vanna-mei）卵巢发育（Liang et al.，2022）。根据有关研究报道，温度（张聚涛，2011；王庆等，2012）、隐蔽物（宋光同等，2015）、光照（孙珂，2019）等环境因素可促进克氏原螯虾卵巢成熟，通过温棚反季繁育（文玲梅等，2018；刘国峰等，2021；宋光同等，2022）及工厂化离体繁育（许洪杰等，2020）等方式可促进亲虾繁育，但还未有生产技术可实现克氏原螯虾卵巢稳定成熟。环境胁迫会影响能量的最佳分配，包括生长、繁殖和储存等（Sokolova，2013）。卵黄是胚胎发育主要的能量储备，卵黄生成的平衡改变可能会导致严重的生殖障碍（Arambourou et al.，2020）；纳米聚苯乙烯（PS NPs）与除草剂阿特拉津胁迫克氏原螯虾卵巢发育，导致其卵黄原蛋白（Vtg）表达下调、卵母细胞较小（Silveyra et al.，2018；Capanni et al.，2021）；萘会引起卵巢封闭，促使卵黄发生前期和卵黄发生期的卵母细胞退化（Sarojini et al.，1995）。但也有学者曾尝试利用胁迫因素加强克氏原螯虾卵巢发育，以了解其发育的分子机制，曾有研究发现使用法尼酸甲酯（MF）胁迫可刺激卵母细胞成熟，促进卵巢成熟（Laufer et al.，1998）。【本研究切入点】目前，生产中已广泛使用晒田方式对雌虾卵巢进行促熟，进而提高克氏原螯虾的繁殖能力。但晒田促熟卵巢的分子机制尚不明确，仍需深入探讨。【拟解决的关键问题】PCR verification results showed that the expression patterns of the three DEGs was basically consistent with the results oftranscriptome analysis，proving that the transcriptome data were accurate and reliable.The ten DEGs related to ovariandevelopment were screened out，includingB2M，TUBA1B，MT-CYB，MT-ND1，MT-ND2，MT-ND4，DSX，Pck2，PIM3，and serine protease nudel-like.The expressions of these DEGs were analyzed，and the results showed that these genesregulated ovarian development during the period of sun-drying environmental stress.【Conclusion】In this study，ten DEGsincludingB2M，TUBA1B，MT-CYB，MT-ND1，MT-ND2，MT-ND4，DSX，Pck2，PIM3and serine protease nudel-like，and three enriched pathway sincluding PI3K-Akt signaling pathway，GnRH signaling pathway，and estrogen signalingpathway are involved in the regulation of ovarian development during the period of sun-drying environmental stress.Key words：Procambarus clarkii；ovary；developmental regulation；sun-drying environmental stress；transcriptomeFoundation items：Guangxi Innovation Driven Development Project（GuikeAA20302019-3）3期693时间Time晒田前（0 d）Before sun-drying晒田后（10 d）After sun-drying解剖数量Number ofdissections4040期数量Number ofphase 30期数量Number ofphase 90期数量Number ofphase 253期数量Number ofphase 337成熟率（%）Maturityrate7.592.5从晒田环境胁迫着手，基于转录组技术对克氏原螯虾晒田胁迫期间卵巢发育的分子机制进行分析，筛选出与卵巢发育相关的候选基因及信号通路，为研究晒田胁迫方式促进克氏原螯虾卵巢发育的作用机制提供理论依据。1材料与方法1.1样本处理与预试验供试克氏原螯虾来自广西来宾市商业养殖场，该场采用稻虾共作养殖模式。选取有环沟的露天池塘，在环沟靠田面一侧顶部，用铁棒和塑料网将田面围住，防止克氏原螯虾逃离田面至环沟掘洞。选取50 kg雌虾，逐个称重后放入池塘，水深控制在3040 cm，让其适应新池塘环境，3 d后将水排干，充分自然曝晒进行晒田环境胁迫，同时停止喂料，促使雌虾在田面掘洞进入繁殖状态。2021年9月2030日期间进行晒田试验，分别于晒田0 d（CK）、3 d（T1）、7 d（T2）和10 d（T3）捕获雌虾，每个时期捕获9只雌虾，随机分成3组样本（每3只雌虾1组），共收集12组样本。收集后的样本立即浸泡在RNA保存缓冲液中，当天转移到-80 冰箱保存备用。晒田可诱导克氏原螯虾掘洞、交配、产卵，是其繁育促熟的关键（奚业文等，2021）。为验证这一观点，本研究采用上述晒田方法，先进行10 d晒田预试验，利用Zhong等（2021）对克氏原螯虾卵巢发育分期的鉴定方法，将晒田前后随机捕获的40只雌虾解剖，其卵巢生长至期确定为卵巢成熟，结果见表1。最终晒田后的雌虾卵巢成熟率为92.5%，表明生产上晒田可促熟克氏原螯虾卵巢。1.2RNA提取、cDNA文库构建和Illumina测序通过TRIzol试剂盒提取每个卵巢样本的总RNA，用琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性和基因组DNA污染情况，根据试剂盒构建克氏原螯虾卵巢cDNA文库（包括mRNA分离及打断、cDNA双链合成和纯化、cDNA末端修复、加poly（A）尾并连接到Illu-mina测序适配器、筛选200 bp左右cDNA片段、PCR扩增并纯化其产物），使用 Illumina NovaSeq 6000测序仪对cDNA文库进行测序。1.3测序数据组装和功能注释原始Reads通过fastp（Chen et al.，2018）进行质控。过滤掉含有序列适配器、超过10%未知核苷酸（N）和超过50%低质量（Q值20）碱基的数据，得到的高质量数据使用Trinity（Grabherr et al.，2011）拼接成转录本。使用BUSCO（Simoet et al.，2015）对组装转录本进行完整性评估，取每个聚类中最长的转录本作为Unigene参考序列进行后续分析。用BLAST在Nr、Swiss-Prot、KEGG和KOG/COG数据库进行基因功能注释分析；根据NR数据库注释信息，使用Blast2GO（Conesa，2005）进行GO功能注释。1.4差异表达与基因富集分析将各样本测序得到的Reads在Unigene数据库进行比对，根据比对结果，使用RSEM进行基因表达量水平统计（Li and Dewey，2011）。采用FPKM法表示基因表达量统计和表达量丰度（Pertea et al.，2015，2016）。计算得到的基因表达量可直接用于比较不同样品间的基因表达差异（DEGs）。采用DESeq2（Love et al.，2014）进行样品组间的差异表达分析，获得晒田期间不同阶段的差异表达基因。分析过程：对read count进行标准化（normalization），根据模型计算假设检验概率（P），对得到的P进行多重假设检验校正，得到错误发现率（FDR），筛选条件为取FDR1的基因为显著DEGs。对DEGs进行GO功能注释及KEGG通路富集分析，获得DEGs相对应的各种注释信息。1.5实时荧光定量PCR验证为检测转录组测序的准确可靠性，随机选择3 个 DEGsPck2（phosphoenolpyruvate carboxy-kinase）、PIM3（serine/threonine-protein kinase pim-1-like）、serine protease nudel-like 进行验证。利用Primer 6.0设计引物，以GAPDH为内参基因，实时荧光定量PCR引物序列见表2，按照2-Ct方法计算基因相对表达量。2结果与分析2.1转录组数据组装结果对照样品CK（0 d：CK-1、CK-2、CK-3）和胁迫样品表 1晒田环境胁迫前后克氏原螯虾的卵巢各发育时期数量及成熟率Table 1Changes in the number and maturation rate of P.clarkii ovaries in different developmental stages before and after sun-dryingenvironmental stress袁畅等：晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的转录组学分析54卷南 方 农 业 学 报 694T1（3 d：T1-1、T1-2、T1-3）、T2（7 d：T2-1、T2-2、T2-3）、T3（10 d：T3-1、T3-2、T3-3）分别进行转录组测序。获得12个样本的原始数据3733406653041744条，原始GC含量为43.50%44.20%；得到高质量数据3719929652819840 条，质 控 GC 含 量 为 43.41%44.10%，且Q30占比达93.61%以上（表3）。对高质量数据进行组装，共获得86377个Unigenes，长度在20131884 bp，平均长度为1051 bp，小于1000 bp的Unigenes占73.72%（图1）。2.2转录组序列注释结果对照组和胁迫组样本序列组装总共获得86377个Unigenes，将其与Nr、KOG/COG、Swiss-Prot和KEGG4个数据库进行比对（参数为evalue0.00001），其中22712个Unigenes在库中得到注释，未被注释部分有63665个，占总Unigenes数量的73.71%（表4）。测序数据中有11906个Unigenes与同为节肢动物门十足目的南美白对虾基因同源性匹配最好，且与其他生物匹配差异明显，表明序列注释准确度较高（图2）。2.3晒田胁迫下卵巢DEGs的表达分析结果胁迫组（T1、T2、T3）与CK对比的3个比较组，共鉴定出1115个显著DEGs。在3个比较组中，T3 vsCK组上调和下调的显著DEGs均最多，表达上调和下调显著DEGs最少的是T2 vs CK组（表5）。2.4DEGs的GO功能注释分析结果胁迫组（T1、T2、T3）与CK对比后，结果显示，3个比较组的DEGs在GO各二级功能分类的富集情况大致相似，表明克氏原螯虾卵巢组织在不同晒田环境胁迫时间（3、7和10 d）下，适应环境胁迫的主要生理过程大致相似。生物学过程主要涉及细胞过程（Cellular process）、代谢过程（Metabolic process）和单一生物过程（Sing-organism process）等，细胞组分主要涉及细胞（Cell）、细胞区域（Cellpart）和膜类（Membrane）等，分子功能主要涉及黏合（Binding）、催化活性（Catalyticactivity）和转运蛋白活性（Trans-porter activity）等（图3）。2.5DEGs的KEGG信号通路富集分析结果Q值0.05的通路定义为显著富集，找出晒田胁迫时期克氏原螯虾卵巢DEGs显著富集的通路，以确定其参与的最主要代谢通路和转导通路。在3个比较组中，T1 vs CK比较组共124个DEGs注释到195条KEGG通路中，前10通路包括溶酶体、抗原加工和呈样品名SampleCK-1CK-2CK-3T1-1T1-2T1-3T2-1T2-2T2-3T3-1T3-2T3-3原始数据（条）Raw reads443781144499433239698776458564765304174447680870449833324300873037334066434371664295855038695144原始GC含量（%）Raw GC content43.6144.1743.9243.8443.7343.6844.2043.5943.7943.5743.5743.50质控数据（条）Clean reads442137364482374839546716456694245281984047484048448050144284632237199296432768064280143238560918质控GC含量（%）Clean GC content43.5144.0843.8343.7343.6243.5844.1043.5043.7143.4843.4743.41Q30（%）94.2994.2794.2294.3494.2394.2194.4793.9694.3494.0293.6194.24基因名称 GenePck2PIM3serine protease nudel-like正向引物 Forward primer5-AACGAGGTGCGGGAACAAC-35-AAGGACGAAAACCTGCTCATA-35-ATGGAGTGCGAGGGGACGA-3反向引物 Reverse primer5-TGAATCCAGTCAGCAAAACCA-35-TCTGACACTCTTCGGAAATGG-35-TCTTCTTGAGCGGGACACAC-3表 2实时荧光定量PCR扩增引物序列信息Table2Real-time fluorescence quantitative PCR amplified primer sequence information表 3晒田环境胁迫克氏原螯虾卵巢的转录组数据统计结果Table 3Statistics of the ovary transcriptome of P.clarkii under sun-drying environmental stress图 1组装Unigenes长度分布情况Fig.1Assembled Unigenes length distribution map050010001500200025003000长度（bp）Length频次 Frequence80006000400020000121086420比例（%）Percentage比例 Percentage频次 Frequence3期695注释数据库Annotation databaseAnnotated in NrAnnotated in KEGGAnnotated in KOG/COGAnnotated in Swiss-ProtAnnotated in all databaseAnnotated in at least one databaseWithout annotation in databaseTotal genes基因数目 Number of genes2216720672126351384011677227126366586377比例（%）Percentage25.6623.9314.6316.0213.5226.2973.71100.00比较组Comparison groupT1 vs CKT2 vs CKT3 vs CK上调Up-regulation11575178下调Down-regulation372175514合计Total487250692表 4晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢基因注释统计结果Table 4Annotation statistics of ovary gene of P.clarkii under sun-drying environmental stress图 2组装Unigenes比对物种数量统计结果Fig.2Statistics of number of assembled Unigenes compared tothe species表 5晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢显著DEGs统计结果Table 5StatisticsofsignificantlyDEGsinP.clarkiiovary undersun-drying environmental stressPenaeus vannameiProcambarus carkiiHomo sapiensHyalella aztecaTrinorchestia longiramusParagonimus westermaniAraneus ventricosusArmadillidium nasatumHydra vuigarisArmadillidium vulgare150001000050000Unigenes 数量Number of Unigenes11906675 638542 433339 261220 206 165递、氨基糖和核苷酸糖代谢等通路。T2 vs CK比较组共55个DEGs注释到193条KEGG通路中，前10通路包括淀粉和蔗糖代谢、心肌收缩、近端小管碳酸氢盐再生等通路。T3 vs CK比较组共有143个DEGs注释到255个途径中，前10通路包括流体剪切应力和动脉粥样硬化、抗原加工和呈递、IL-17信号途径等通路（表6）。其中与卵巢发育相关的信号转导通路有GnRH信号通路、PI3K-Akt信号通路、雌激素信号通路。前10通路中，3个比较组共同具备的通路为淀粉与蔗糖代谢，此通路中共同存在的基因有-淀粉酶和内切葡聚糖酶。T1 vs CK与T3 vs CK比较组在该通路中共同存在麦芽糖酶-葡糖淀粉酶和海藻糖6-磷酸合酶/磷酸酶，T2 vs CK比较组特有的基因是葡萄糖-6-磷酸酶和葡萄糖-6-磷酸异构酶（表7）。此外，前10通路中，3个比较组间也存在较多不同的通路，如溶酶体、心肌收缩、流体剪切应力和动脉粥样硬化等通路（表6）。2.6DEGs的实时荧光定量PCR验证结果为验证转录组数据的准确性，本研究随机挑选3个DEGs（Pck2、PIM3、serine protease nudel-like）进行实时荧光定量PCR检测。结果显示，serine prote-ase nudel-like在T1、T2和T3时期表达上调，Pck2和PIM3在T1、T2和T3时期均表达下调，3个DEGs的表达趋势与转录组测序结果基本一致，表明转录组测序数据准确可信（表8和图4）。在转录组数据中继续筛选到7个与卵巢发育相关的DEGs（B2M、TUBA1B、MT-CYB、MT-ND1、MT-ND2、MT-ND4和DSX）准备进行后续研究（表8）。3讨论有研究表明，一些胁迫因子会对性腺产生影响，如常见的重金属铜，通过干扰人类、猪、小鼠等哺乳动物雄性和雌性的生殖系统来影响其繁殖功能（Roychoudhury et al.，2016）；铜可使精巢中活性氧和丙二醛水平升高，导致雄性克氏原螯虾精巢组织氧化损伤（Zhao et al.，2019）；铜纳米粒子（CuNPs）的形状和支撑也会对猪卵巢细胞的基础功能造成直接的刺激性影响（Sirotkin et al.，2020）。研究发现克氏原螯虾体内铁蛋白基因（PcFer）可能具有免疫防御作用，保护克氏原螯虾免受重金属因子胁迫（Liuet al.，2017），为重金属刺激卵巢发育提供研究思路。此外，An等（2018）使用微囊藻毒素-LR（非重金属因子）对克氏原螯虾进行胁迫试验后发现，虾青素可在一定程度上阻止微囊藻毒素-LR在肝胰腺和卵巢中产生生物蓄积，说明环境因素可影响物种的卵巢发育。本研究对晒田胁迫0、3、7和10 d的克氏原螯虾卵巢组织进行转录组测序，共组装获得86377个袁畅等：晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢的转录组学分析54卷南 方 农 业 学 报 696图 3DEGs的GO功能注释分析结果Fig.3Results of GO functional annotation analysis of DEGs表 6根据Q值排列的晒田胁迫时期克氏原螯虾卵巢DEGs富集的前10条KEGG信号通路Table 6The top 10 KEGG pathways of DEGs in P.cruzi ovary under sun-drying stress ranked according environmental to Q value比较组Comparison groupT1 vs CKT2 vs CKT3 vs CK通路名称Pathway溶酶体 Lysosome抗原加工和呈递Antigen processing and presentation氨基糖和核苷酸糖代谢Amino sugar and nucleotide sugar metabolism细胞凋亡Apoptosis胰腺分泌物 Pancreatic secretion自噬动物Autophagy-animal胰岛素抵抗 Insulin resistance类风湿关节炎 Rheumatoid arthritis脂肪细胞因子信号通路Adipocytokine signaling pathway淀粉和蔗糖代谢 Starch and sucrose metabolism淀粉和蔗糖代谢 Starch and sucrose metabolism心肌收缩 Cardiac muscle contraction近端小管碳酸氢盐再生 Proximal tubule bicarbonate reclamationAGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications胰岛素抵抗 Insulin resistance碳水化合物的消化和吸收 Carbohydrate digestion and absorption脂肪细胞因子信号通路Adipocytokine signaling pathway心肌细胞中的肾上腺素能信号传导Adrenergic signaling in cardiomyocytes胰岛素信号通路 Insulin signaling pathway蛋白质消化吸收 Protein digestion and absorption流体剪切应力和动脉粥样硬化 Fluid shear stress and atherosclerosis抗原加工和呈递Antigen processing and presentationIL-17信号通路 IL-17 signaling pathway癌症中的蛋白聚糖 Proteoglycans in cancer淀粉和蔗糖代谢 Starch and sucrose metabolismC型凝集素受体信号通路 C-type lectin receptor signaling pathwayGnRH信号通路 GnRH signaling pathwayPI3K-Akt 信号通路 PI3K-Akt signaling pathway雌激素信号通路 Estrogen signaling pathway细胞凋亡Apoptosis通路IDPathway IDko04142ko04612ko00520ko04210ko04972ko04140ko04931ko05323ko04920ko00500ko00500ko04260ko04964ko04933ko04931ko04973ko04920ko04261ko04910ko04974ko05418ko04612ko04657ko05205ko00500ko04625ko04912ko04151ko04915ko04210DEGs总数Total DEGs261413151212997867455446651410714888151011Q值Q value000.0000020.000030.0000930.000840.000920.000920.0013920.0013920.0000320.0001980.0002860.0003260.0007860.0009150.0010840.001170.0012050.0012580.0000110.0000380.0000950.000110.0001940.0002610.0003950.000470.0004760.0011411000080006000400020000DEGs数量Number of DEGs生物学过程Biological process细胞组成Cellular component分子功能Molecular function3期697表 7淀粉与蔗糖代谢通路中的部分基因在不同比较组中的分布情况Table 7The distribution of some genes in starch and sucrose metabolic pathways in different comparison groups通路名称 Pathway淀粉和蔗糖代谢Starch and sucrosemetabolism基因 Gene葡萄糖-6-磷酸酶基因 G6PC葡萄糖-6-磷酸异构酶基因 GPI、pgi-淀粉酶基因AMY、amyA、malS内切葡聚糖酶基因 E3.2.1.4海藻糖6-磷酸合酶/磷酸酶基因 TPS麦芽糖酶-葡糖淀粉酶基因 MGAMT1 vs CKT2 vs CKT