苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析.pdf

引文格式：李梅方,唐国文,刘正杰,等.苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析J.云南农业大学学报(自然科学),2024,39(1):6473.DOI:10.12101/j.issn.1004-390X(n).202202034苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析*李梅方1，唐国文1，刘正杰2，王一1，李成云1，董玉梅2*(1.云南农业大学，云南省生物资源保护与利用国家重点实验室，云南昆明650201；2.云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201)摘要:【目的】鉴定和分析苦荞白粉病病原菌，并确定其在白粉菌系谱中的位置。【方法】通过孢子形态观察、致病性测定及核糖体基因内转录间隔区(internaltranscribedspacer，ITS)和核糖体大亚基(ribosomallargesubunit，LSU)序列系统发育树分析对苦荞白粉病病原菌进行鉴定，并进行多序列比对和聚类分析。【结果】苦荞白粉病病原菌鉴定为蓼白粉菌(Erysiphe polygoni)；经 ITS 多序列比对和聚类分析发现该白粉菌(607bp，MW494930.1)与甜荞上的白粉菌(E.polygoni，KP076437.1)相似性为 100.00%，与大黄、酸模、蓼、竹节蓼、珊瑚藤等蓼科植物上的 16 个菌株 ITS 扩增片段相似性均高于 98.83%；基于 LSU 序列扩增获得 1 条长度为910bp 的片段(OK490143)，与酸模上的白粉菌(E.polygoni，MT361769.1)序列相似性为 99.89%。【结论】本研究将侵染苦荞的白粉菌鉴定为子囊菌门(Ascomycota)白粉菌目(Erysiphales)白粉菌属(Erysiphe)蓼白粉菌(E.polygoni)。研究结果可为苦荞白粉病的防治提供依据。关键词:苦荞白粉菌；病原鉴定；系谱分析中图分类号:S435.17文献标志码:A文章编号:1004390X(2024)01006410Identification of Pathogen Causing Powdery Mildew ofTartary Buckwheat and Analysis of Its PedigreeLIMeifang1，TANGGuowen1，LIUZhengjie2，WANGYi1，LIChengyun1，DONGYumei2(1.StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofBio-ResourcesinYunnan,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China;2.CollegeofAgronomyandBiotechnology,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China)Abstract:PurposeToidentifyandanalyzethepathogenoftartarybuckwheatpowderymildewand determine its position in the powdery mildew pedigree.Methods The tartary buckwheatpowderymildewpathogenwasidentifiedbasedonsporemorphologyobservation,pathogenicitytestandphylogenetictreeanalysisofinternaltranscribedspacer(ITS)andribosomallargesubunit(LSU)sequence,and multiple sequence alignment and cluster analysis of sequences were carried out.ResultsThepathogenofpowderymildewoftartarybuckwheatwasidentifiedasErysiphepoly-goni.ThroughITSmultiplesequencealignmentandclusteranalysis,itwasfoundthatthepowderymildew(607bpfragment,MW494930.1)was100.00%similartoE.polygoni(KP076437.1)oncom-monbuckwheat.ThesimilarityofthatITSamplificationsequenceswith16strainscollectedfromrhu-收稿日期：2022-02-22修回日期：2024-02-25网络首发日期：2024-03-20*基金项目：国家重点研发项目(2023YFD1400800)。作者简介：李梅方(1995)，女，云南腾冲人，在读硕士研究生，主要从事荞麦资源收集及病害研究。E-mail：*通信作者 Correspondingauthor：董玉梅(1975)，女，云南石林人，博士，副教授，主要从事荞麦资源收集及评价利用。E-mail：网络首发地址：https:/ 10000种双子叶和单子叶植物，涉及约 900 种具有重要经济价值的农作物3-5。白粉菌严格地专性寄生于活体植物，在寄主植物上完成生长和繁殖，目前仍不能通过人工培养，其寄主范围的变化直接导致生态位分离，从而可能触发诱发白粉菌的新物种形成6。苦荞(Fagopyrum tataricum)为蓼科(Polygon-aceae)荞麦属(Fagopyrum)一年生或多年生双子叶植物7，截至目前已有 22 个种8-9。苦荞为荞麦栽培种之一，在中国主产于西北、东北、华北和西南一带高寒山区10。据中国农村统计年鉴统计，2017 年全国苦荞年产量达到 5.39105t，种植面积和产量均居世界第 1 位，是重要的粮食作物11。自 2018 年以来，在云南农业大学荞麦实验种植区和云南荞麦种植区一直观察到白粉病，严重时基本绝收。本研究通过形态鉴定以及核糖体基因内转录间隔区(internaltranscribedspacer，ITS)和核糖体大亚基(ribosomallargesubunit，LSU)序列分析，明确苦荞白粉病的病原类型及分类地位，为防治苦荞白粉病提供依据，也为大田作物布局时避开白粉菌跨寄主的近距离接触提供参考。1 材料与方法1.1材料收集与保存从云南农业大学试验地采集苦荞白粉病病叶，将病叶装入自封袋置于冰盒中带回实验室，用于形态观察及和分子生物学试验。1.2试验方法1.2.1田间症状调查观察记录植株发病部位、病斑颜色和大小、危害程度等12-13。1.2.2病原菌形态观察及致病性检测参考 BRAUN 等3、KIRK 等14以及中国真菌志15对白粉菌无性型进行形态学分类。在数码显微镜 Smartzoom5(广州行真科技设备)下观察病叶的白粉菌分生孢子形态特征，测量大小并拍照；用扫描电子显微镜 FlexSEM1000(日立高新技术设备)观察分生孢子形态、着生方式及表面形态特征。按照科赫法则测定白粉菌的致病性并进行确认16。将苦荞感染叶片打成直径 6mm 的叶盘，置于 5 周龄健康苦荞叶片正面和背面，叶盘上含有大量孢子，各接种 5 株植物；将接种植株置于2025、相对湿度 80%、光照周期 12h12h的温室培养，将 5 株未接种的对照植株种植于相同环境条件的另一个生长室中，用聚乙烯袋罩住处理和对照植株 48h，观察发病症状和病原菌形态。1.2.3病原菌 ITS、LSU 片段的 PCR 扩增和测序将病菌样本带回实验室，用 Chelex-100 法提取白粉菌 DNA17，利用真菌通用引物 ITS 和 LSU进行 PCR 扩增(ITS1：5-TCCGTAGGTGAACCT-GCGG-3；ITS4：5-TCCTCCGCTTATTGATAT-GC-318；LROR：5-ACCCGCTGAACTTAAGC-3；LR5：5-TCCTGAGGGAAACTTCG-3)19。PCR 反应体系为 25.0L，包括 2PhantaMaxBuf-fer12.5L，10mmol/LdNTPMix0.5L，10mol/L上、下游引物各 1.0L，PhantaMaxSuper-Fidel-ityDNAPolymerase0.5L，ddH2O 补足体系。PCR 扩增程序为：953min；9515s，5615s，7230s，循环 32 次；725min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测，并回收备用。参照pTOPO-BluntSimple 平末端载体试剂盒说明书与TreliefTM5 感受态细胞连接转化，菌液用 PCR确定阳性克隆后送至擎科生物有限公司测序。1.2.4数据分析在 GenBank 上对测序序列进行 BLAST 序列第1期李梅方，等：苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析65比对；为比较不同寄主白粉菌的系统发育关系，从 GenBank 中下载相似性高于 97%的 ITS 片段，采用 MEGA7.0 软件对序列进行最大似然法系统发育分析，进行 1000 次重复的 BS 分析，构建进化树20。2 结果与分析2.1苦荞白粉病田间症状苦荞白粉病发病早期，主要在病叶背面出现不规则的白色粉尘状菌落，叶面出现褪绿小点；随着病情发展，菌落变得丰富，覆盖整个叶片背面，并且在叶正面也形成白色菌斑，继而叶片正面失绿黄化，严重时可危害花和果实。感病叶片轻者褪绿、黄化、卷曲、皱缩，严重时叶片畸形、质地变硬、失去光泽、干枯(图 1)。2.2苦荞白粉菌的形态特征及致病性苦荞白粉菌分生孢子呈圆筒形或椭圆形，无色，透明，两端圆，单胞，表面有皱纹；长 28.050.9m，宽11.319.9m，平均大小为 39.1m15.3m(n=100)(图 2)。根据形态特征初步将病原菌鉴定为子囊菌门(Ascomycota)白粉菌目(Ery-siphales)白粉菌属(Erysiphe)真菌16。苦荞健康叶片接种病原 7d 后，在接种植株上观察到与田间感病植株一致的症状，而对照植株则无发病症状(图 3)。接种发病叶片病原菌再经显微观察表明：其菌落形态及分生孢子形态特征与采集的苦荞白粉病病原一致，表明接种的病原菌为苦荞白粉病的致病菌。2.3基于 ITS 和 LSU 片段的苦荞白粉病菌系统进化分析2.3.1苦荞白粉病菌的分子鉴定苦荞白粉病病原菌 ITS 片段为 607bp(MW-494930.1)，LSU 片段为 910bp(OK490143)，将序列在 GenBank 中进行比对，ITS 结果显示该序列与甜荞上的白粉菌(E.polygoni，KP076437.1)核酸序列的相似度为 100.00%；LSU 结果显示该序列与酸模上的白粉菌(E.polygoni，MT36176-9.1)核酸序列的相似度 99.89%。从 GenBank 获得76 条序列相似性高于 97%的 ITS 片段，以 E.gl-ycines 序列(LC028953.1)为外群，经多序列比对后获得 550bp 的矩阵，构建的系统发育树(图 4)显示：病原菌的 ITS 序列与 E.polygoni 聚为一支。从 GenBank 检索相似性高于 97%的 LSU 序列，共获得 57 条注册为白粉菌的序列，以 E.glyci-nes 序列(AB015927.1)为外群，经过对位排列后获得 792bp 的矩阵，构建的系统发育树(图 5)显示：病原菌的 LSU 序列与 E.polygoni 聚为一支。a)b)注：a)苦荞白粉病症状；b)苦荞白粉病叶片。Note:a)symptomsofpowderymildewoftartarybuckwheat;b)powderymildewleavesoftartarybuckwheat.图 1 苦荞白粉病症状Fig.1Powderymildewsymptomsintartarybuckwheata)200 m100 m10.0 mb)c)图 2 显微镜(a)和电镜(b 和 c)下的苦荞白粉菌分生孢子Fig.2Conidiaofpowderymildewcollectedfromtartarybuckwheatundermicroscope(a)andelectronmicroscope(bandc)66云南农业大学学报第39卷结合病原菌致病性测定、形态特征以及 ITS 和LSU 序列比对，将苦荞白粉病病原菌鉴定为蓼白粉菌(E.polygoni)。2.3.2苦荞白粉病菌在白粉菌系谱中的位置76 条序列包含 5 种已命名的白粉病病原菌，寄主来源涵盖 7 科 26 属植物(表 1)，E.polygo-ni、E.heraclei、E.buhrii 和 E.betae 占主要部分。E.polygoni 寄主均为蓼科植物；E.heraclei 序列占比最多，寄主植物包括伞形科、五加科和蓼科的 16 属植物，其中伞形科植物占 83%；E.buhrii寄主为石竹科；E.betae 寄主为藜科和苋科植物，且与 E.heraclei 在系谱发育树上交替分布。相似性高于 99%的序列中包含 E.polygoni 和 E.her-aclei2 个种；当相似性大于 98%时，新增加 E.buhrii 和 E.betae2 个种；当相似性大于 97%时，又新增加 E.pisi1 个种。基于 ITS 基因片段构建的系统发育树(图 4)显示：在第 4 个节点处将序列分为 2 个大分支，本研究病原菌与来自蓼科的E.polygoni(KP076437.1)相似性为 100.00%，与13 个 E.polygoni 和 1 个 E.heraclei 的相似性都大于 99%。该分支的寄主均为蓼科，且强烈聚为1 个分支。该分支又分为 2 个小分支，1 个小分支寄主为荞麦属、大黄属和酸模属，其中酸模属居多；另 1 个小分支寄主为蓼属、竹节蓼属和珊瑚藤属，其中竹节蓼属和珊瑚藤属各有 1 种，其余为蓼属植物。57 条 LSU 序列包含 21 种白粉病病原菌，寄主来源涵盖 22 科 29 属植物(表 2)。其中也检索到E.polygoni 和E.heraclei2 个种的LSU 序列，E.polygoni 的寄主为蓼科植物，E.heraclei 的寄主为a)b)注:a)苦荞接种病菌症状；b)对照。Note:a)symptomoninoculatedleavesoftartarybuckwheat;b)control.图 3 苦荞白粉菌的致病性Fig.3PathogenicityoftartarybuckwheatpowderymildewE.heraclei KY661135.1E.pisi KY660750.1E.heraclei KT211366.1E.heraclei JX499184.1E.betae DQ164435.1E.betae KF268348.1E.heraclei KF680162.1E.heraclei AB104510.1E.heraclei KR048065.1E.betae DQ164433.1E.betae DQ164434.1E.betae DQ164439.1E.betae DQ164437.1E.betae DQ164440.1E.betae DQ164438.1E.heraclei KF111807.1E.heraclei KY660875.1E.heraclei KY660874.1E.heraclei KY660873.1E.heraclei KY660871.1E.heraclei KY660870.1E.heraclei KY660826.1E.heraclei KY660791.1E.heraclei KY660749.1E.heraclei KY660792.1E.heraclei KY660877.1E.heraclei KY660830.1E.heraclei MK571420.1E.betae MN368297.1E.betae DQ164432.1E.betae DQ164436.1E.betae KX574674.1E.betae KY399969.1E.heraclei KY073878.1E.heraclei KY660858.1E.heraclei KY660859.1E.heraclei KY660872.1E.heraclei KY660878.1E.heraclei KP055630.1E.heraclei KR012457.1E.heraclei KF931139.1E.heraclei AB000942.1E.heraclei GU252368.1E.heraclei MT703849.1E.heraclei KC480605.1E.heraclei KP729443.1E.heraclei KR269918.1E.heraclei AB104514.1E.heraclei AB104513.1E.heraclei EU010381.1E.heraclei KU511276.1E.heraclei AB104464.1E.heraclei KU201964.2E.heraclei JQ517297.1E.heraclei AB104512.1E.polygoni KR048074.1E.polygoni AB104522.1E.polygoni KY660918.1E.polygoni AF011307.1E.heraclei KX757832.1E.polygoni KX098506.1E.polygoni MK685172.1E.polygoni KY661154.1E.polygoni KY660828.1E.polygoni MW169023.1E.polygoni KY660827.1E.polygoni MG647828.1MW494930.1E.polygoni KP076437.1E.polygoni LC009892.1E.polygoni KT984287.1E.polygoni AF011308.1E.buhrii KY660881.1E.buhrii KY660922.1E.buhrii KY660767.1E.buhrii AB128924.1E.buhrii KJ530705.1E.glycines LC028953.1302629571636363636363636363636363624241515151515151525515151626262626262626262626262525262626262623333333346464747598461646441656464646491646364648484蓼科 Polygonaceae伞形科 Umbelliferae石竹科 Caryophyllaceae藜科 Chenopodiaceae五加科 Araliaceae注：以大豆白粉菌 Erysiphe glycines(LC028953.1)ITS 序列作为外群。分支上的数字表示来自 1000 个复制的引导值，不同白粉菌种名用不同树枝颜色表示，不同颜色阴影代表白粉菌寄主在科水平上不同，寄主出现 3 次以下不做任何标记，苦荞白粉菌序列用红星标注；下同。Note:TheITSsequenceofErysiphe glycines(LC028953.1)servedasout-group.Numbersabovethebranchesdenotebootstrapvaluesfrom1000replications,differentpowderymildewgenusnamesarerepresentedbydifferentbranchcolors,theshadesofdifferentcolorsrepresentthediffer-encesofthepowderymildewhostsatthefamilylevel,thehostofpatho-genicbacteriathatappearslessthanthreetimeswillnotbemarked,tar-tarybuckwheatpowderymildewITSsequencesaremarkedwithredstar;thesameasbelow.图 4 基于 77 条白粉菌序列 ITS 区域的系统发育树Fig.4PhylogenetictreebasedontheITSregionsof77powderymildewsequences第1期李梅方，等：苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析67伞形科植物。苦荞白粉菌序列与 E.polygoni、E.heraclei 在同 1 分支，具有较好的支持率，与 ITS序列进化树相似。相似性高于 99%的序列包括 E.polygoni 和 E.heraclei2 个种；当相似性大于 98%时，增加 E.trifoliorum、E.cruciferarum、E.ac-antholimonis、E.quercicola、E.convolvulivar.、E.berberidis 和 E.magnifica7 个种；当相似性大于97%时，增加 E.alphitoides、E.convolvuli、E.le-spedezae、E.limonii、Pseudoidium neolycopersici、E.corylacearum、E.caricae-papayae、E.aquileg-iae、E.takamatsui、E.platani、E.aquilegiaevar.和 E.cornicola12 个种。E.quercicola 序列占比达47%，寄主包括芸香科、大戟科、漆树科和蓼科。3 讨论白粉菌是最常见和最重要的专性寄生性植物病原真菌21，有超过 400 种白粉菌能够侵染近10000 种植物，其中包括许多具有重要经济价值的农作物和观赏植物22-24。本研究通过致病性测定、形态学及分子鉴定，证实供试苦荞白粉病病原为 E.polygoni，该种于 1986 年在中国台湾被发现，根据形态学和寄主植物将其鉴定到种25。白粉菌具有专性活体营养性质，其中既有寄主专化性很高的种，也有寄主范围较广的种。由于迄今尚不能人工培养，仅有部分白粉菌进行过分子系统发育的相关分析26。根据分子鉴定结果，ITS 进化树的 E.polygoni 分支中有 E.heraclei(KX-757832.1)，与 E.polygoni 的寄主同为蓼科植物，E.buhrii 的寄主为石竹科植物，而伞形科和蓼科均属于石竹亚纲。在 GenBank 中检索到 E.polygo-ni 的相关序列 45 条，寄主分别是蓼科、藜科和豆科植物，涵盖 10 属，其中，蓼科酸模属和蓼属最多，豆科豇豆属和藜科甜菜属次之。有研究报道：东南亚、印度和澳大利亚地区 E.polygoni侵染绿豆 Vigna radiata(Linn.)Wilczek 引起绿豆白粉病27，美国西部地区 E.polygoni 侵染甜菜(Beta vulgarisL.)引起白粉病28，可见，E.poly-goni 不仅只侵染蓼科植物，但其优势寄主为蓼科植物。LSU 序列进化树中，苦荞白粉菌序列与E.polygoni(MT361769.1)、E.heraclei(MK966309.1)序列的亲缘关系最近，但 E.heraclei 寄主为伞形科植物，可见，白粉菌寄主专性范围可跨越 2 个科以上的植物。随着分子生物学的发展，对白粉菌的研究更加深入，越来越多的研究表明白粉菌的寄主跨越事件，如 BEENKEN29报道臭椿(Ail-anthus altissima)上的 E.platani 和 E.alphitoides，宿主跳跃、跨越了不同科甚至不同目的植物，分别从悬铃木科(Proteales)和壳斗科(Fagales)扩展E.quercicola KM260675.1E.quercicola KM260667.1E.quercicola KX180828.1E.quercicola KM260668.1E.quercicola KM260669.1E.quercicola KM260670.1E.quercicola KM260671.1E.quercicola KM260672.1E.quercicola KX180826.1E.quercicola KX180827.1E.quercicola KX180829.1E.quercicola KX180819.1E.quercicola KX180820.1E.quercicola KX180821.1E.quercicola KX180822.1E.quercicola KX180823.1E.quercicola KX180824.1E.quercicola KX180825.1E.quercicola KX180830.1E.quercicola MH305358.1E.quercicola KM260674.1E.quercicola KM260676.1E.quercicola KM260677.1E.quercicola KM260678.1E.quercicola KM260679.1E.quercicola KM260673.1E.quercicola MK240388.1E.alphitoides MK357411.1E.alphitoides MK357412.1E.alphitoides MK357414.1E.alphitoides MK357415.1E.alphitoides MF187451.1E.magnifica KJ567066.1E.magnifica MW729345.1E.platani MN093346.1E.corylacearum MW345726.1E.cornicola AB022389.1P.neolycopersici KR069049.1P.neolycopersici MH699868.1E.takamatsui MK478869.1E.aquilegiae KP202686.1E.caricae-papayae LC371319.1E.aquilegiae var.MT309771.1E.aquilegiae var.AB022405.1P.neolycopersici LC371322.1P.neolycopersici LC371323.1P.neolycopersici LC371320.1E.lespedezae MF066656.1E.convolvuli var.MT380913.1E.convolvuli MN093349.1E.cruciferarum KU672346.1E.trifoliorum MT380914.1E.berberidis MN093348.1E.heraclei MK966309.1E.polygoni MT361769.1OK490143E.acantholimonis KU554536.1E.limonii KU554533.1E.glycines AB015927.17979323862379060606060606060616161616161616161616192929292929293274866393950131819210098656565656564649953926464蓼科 Polygonaceae大戟科 Euphorbiaceae漆树科 Anacardiaceae芸香科 Rutaceae木兰科 Magnoliaceae注：Erysiphe glycines(AB015927.1)LSU 序列作为外群。Note:TheITSsequenceofErysiphe glycines(AB015927.1)servedasout-group.图 5 基于 59 条白粉菌 LSU 区域的系统发育树Fig.5PhylogenetictreebasedontheLSUregionsof59powderymildewsequences68云南农业大学学报第39卷表 1 GenBank 中检索到的相似性高于 97%的白粉菌 ITS 序列及其寄主信息Tab.1HostinformationandITSsequencesimilarity(97%)retrievedfromGenBank种名与基因登录号speciesandGenBankaccessionNo.片段长度/bpfragmentlength相似性/%similarity寄主host国家country属genus科familyE.polygoniKP076437.1621100.00荞麦属Fagopyrum蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniKT984287.158699.83大黄属Rheum蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniMG647828.157399.82酸模属Rumex蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniLC009892.155899.82酸模属Rumex蓼科Polygonaceae日本JapanE.polygoniAF011308.167199.51酸模属Rumex蓼科Polygonaceae不详unknownE.polygoniKY660918.173299.34蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae英国UKE.polygoniKY660827.168499.34蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae英国UKE.polygoniMW169023.164699.34蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniKY660828.166399.34蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae英国UKE.polygoniKY661154.173699.34蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae英国UKE.polygoniKX098506.172299.18竹节蓼属Homalocladium蓼科Polygonaceae朝鲜KoreaE.heracleiKX757832.168499.18蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniMK685172.166299.01珊瑚藤属Antigonon蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniAF011307.163999.01蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae不详unknownE.polygoniKR048074.161698.83蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae中国ChinaE.polygoniAB104522.166298.83蓼属Persicaria蓼科Polygonaceae伊朗IranE.buhriiAB128924.159098.47刺叶属Acanthopyllum石竹科Caryophyllaceae伊朗IranE.buhriiKY660922.173598.35蝇子草属Silene石竹科Caryophyllaceae英国UKE.buhriiKY660881.173498.35蝇子草属Silene石竹科Caryophyllaceae英国UKE.buhriiKY660767.168598.35蝇子草属Silene石竹科Caryophyllaceae英国UKE.heracleiKU201964.267298.19茴香属Foeniculum伞形科Umbelliferae中国ChinaE.heracleiKY661135.173898.19峨参属Anthriscus伞形科Umbelliferae英国UKE.heracleiKY660878.173698.19峨参属Anthriscus伞形科Umbelliferae英国UKE.heracleiKY660872.173598.19峨参属Anthriscus伞形科Umbelliferae英国UKE.heracleiKY660859.170498.19独活属Heracleum伞形科Umbelliferae英国UKE.heracleiKY660858.168198.19独活属Heracleum伞形科Umbelliferae英国UKE.heracleiKY073878.168698.19酸模属Rumex蓼科Polygonaceae中国ChinaE.heracleiKP055630.164698.19常春藤属Hedera五加科Araliaceae中国ChinaE.betaeDQ164436.164098.19甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae美国USAE.betaeDQ164432.164098.19甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae英国UKE.betaeKY399969.164598.19甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae希腊GreeceE.betaeKX574674.179198.19甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae朝鲜KoreaE.heracleiAB104510.162098.16毒参属Conium伞形科Umbelliferae伊朗IranE.heracleiKF680162.160698.15欧芹属Petroselinum伞形科Umbelliferae朝鲜KoreaE.heracleiAB104514.159098.14窃衣属Torilis伞形科Umbelliferae伊朗IranE.betaeKF268348.165098.12甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae中国ChinaE.betaeMN368297.178298.03腺毛藜属Dysphania苋科Amaranthaceae巴基斯坦PakistanE.betaeDQ164440.164098.03甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae美国USAE.betaeDQ164439.164098.03甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae美国USAE.betaeDQ164434.164098.03甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae美国USAE.betaeDQ164433.164098.03甜菜属Beta藜科Chenopodiaceae英国UKE.heracleiMK571420.165198.03独活属Heracleum伞形科Umbelliferae中国China第1期李梅方，等：苦荞白粉病病原鉴定及其系谱分析69到苦木科(Sapindales)，由此可见，寄主植物在纲、目、科、属的分类阶元对白粉菌的系统进化和生理进化、物种形成起着十分重要的作用。根据寄主范围、交叉接种和多个分子标记的联合系谱分析才能为白粉菌种群划分、寄主范围确定及病害有效防控提供准确的理论依据。4 结论本研究通过病原菌致病性测定、形态特征以及 ITS 和 LSU 序列比对，确定引起苦荞白粉病的病原菌为蓼白粉菌(E.polygoni)，该病原菌有多个科寄主植物，是典型的复合种，急需从寄主范表1(续)种名与基因登录号speciesandGenBankaccessionNo.片段长度/bpfragmentlength相似性/%similarity寄主host国家country属genus科familyE.heracleiKR012457.162398.03胡萝卜属Daucus伞形科Umbelliferae中国ChinaE.heracleiKC480605.168798.03胡萝卜属Daucus伞形科Umbelliferae中国ChinaE.heracleiMT703849.168098.03刺芹属Eryngium伞形科Umbelliferae中国ChinaE.heracleiKY660877.173898.03独活属Hera