辣木籽水提物对5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用.pdf

引文格式：赵润萍,黄开兰,宋爽,等.辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用J.云南农业大学学报(自然科学),2024,39(2):4352.DOI:10.12101/j.issn.1004-390X(n).202311002辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用*赵润萍1，黄开兰1，宋爽1,2*，白忠彬3*(1.云南农业大学食品科学技术学院，云南昆明650201；2.国家辣木加工技术研发专业中心，云南昆明650201；3.云南农业大学动物医学院，云南昆明650201)摘要:【目的】探究辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)诱导引起的小鼠空肠黏膜炎的改善作用。【方法】将 50 只 SPF 级雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组(腹腔注射 5-FU130mg/kg)及辣木籽水提物低、中、高剂量组(分别灌胃辣木籽水提物 50、100 和 200mg/kg)。第 114 天，每日正常组和模型组灌胃蒸馏水，辣木籽组灌胃不同剂量的辣木籽水提物；第 1516 天，每日正常组腹腔注射生理盐水，其余组均腹腔注射 5-FU；第 1718 天观察；第 19 天处死小鼠。每日记录小鼠摄食量、饮水量及体质量；采用 HE 染色并观察小鼠空肠组织形态学变化；采用免疫组化法检测空肠增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)的表达情况；采用 Tunel 法检测空肠细胞的凋亡情况；采用酶联免疫法(ELISA)测定空肠组织 IL-6、IL-1 和 TNF-炎症因子的含量变化。【结果】与模型组相比，辣木籽水提物高剂量组(200mg/kg)可显著缓解小鼠体质量下降，极显著提高空肠绒毛高度、降低隐窝深度、增加绒毛高度与隐窝深度的比值，提高空肠PCNA 表达量，降低细胞凋亡程度，抑制 IL-6、IL-1 和 TNF-的表达。【结论】辣木籽水提物可改善5-FU 诱导引起的小鼠空肠黏膜炎，且呈剂量依赖性。关键词:辣木籽水提物；5-氟尿嘧啶；空肠黏膜炎；调节作用中图分类号:S794.908文献标志码:A文章编号:1004390X(2024)02004310Regulatory Effect of Moringa oleifera Seeds Water Extract onJejunal Mucositis Induced by 5-Fluorouracil in MiceZHAORunping1，HUANGKailan1，SONGShuang1,2，BAIZhongbin3(1.CollegeofFoodScienceandTechnology,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China;2.NationalResearchandDevelopmentCenterofMoringa oleiferaProcessingTechnology,Kunming650201,China;3.CollegeofVeterinaryMedicine,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China)Abstract:PurposeToexploretheimprovementofMoringa oleiferiaseedswaterextractonjejunalmucositisinducedby5-fluorouracil(5-FU)inmice.MethodsAtotalof50SPFgrademaleKunmingmicewererandomlydividedintonormalgroup,modelgroup(intraperitoneallyinjec-收稿日期：2023-11-01修回日期：2024-03-07网络首发日期：2024-04-11*基金项目：国家自然科学基金项目(31960508)。作者简介：赵润萍(1998)，女，云南大理人，在读硕士研究生，主要从事功能性食品功效研究。E-mail：*通信作者 Correspondingauthors：宋爽(1982)，男，吉林通化人，博士，副教授，主要从事过敏原和肠道免疫研究。E-mail：；白忠彬(1969)，男，吉林公主岭人，博士，教授，主要从事云南道地中药及功能性食品研究。E-mail：网络首发地址：https:/ and TNF-in jejunum tissue were determined by enzyme-linked immunoassay(EL-ISA).ResultsComparedwithmodelgroup,highdoseofM.oleiferiaseedswaterextractgroup(200mg/kg)couldalleviatetheweightlossofmicesignificantly;extremelysignificantlyincreasethevillouslengthofjejunum,decreasethecryptdepth,andincreasetheratioofvillouslengthtocryptdepth;increasetheexpressionofPCNAinjejunum;reducethedegreeofapoptosis;inhibitetheex-pressionofIL-6,IL-1andTNF-.ConclusionM.oleifonicaseedswaterextractcanameliorate5-FU-inducedjejunalmucositis,andwithadose-dependentmanner.Keywords:Moringa oleiferaseedswaterextract;5-fluorouracil;jejunalmucositis;regulatoryeffect恶性肿瘤的发病率呈逐年增长的趋势1，化疗是其最常见的有效治疗方式2。在杀死肿瘤细胞的同时，化疗也会杀死正常细胞3，对机体产生极大的危害4。目前，常见的化疗药物主要以5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)、甲氨蝶呤(me-thotrexate，MTX)等为主5，这类药物会快速杀死分化的肠黏膜细胞，导致肠黏膜损伤，对小肠黏膜产生一定的危害6。据报道，超过一半的癌症患者在化疗过程中都会患有肠道黏膜炎7，其典型特征是：小肠绒毛缩短、隐窝结构的完整性被破坏、炎症细胞浸润等；其主要临床特征是：体质量减轻、厌食、恶心、呕吐、腹泻、便血等8-9。5-FU 被广泛应用于结肠、胃、食管等消化系统肿瘤的治疗10，主要干扰 DNA 的合成。临床表明：约 60%的患者在接受 5-FU 治疗时会出现不同程度的肠道黏膜炎11。因此，避免 5-FU的副作用，寻找一种天然且具有药食同源性的食品用于治疗或预防肠道黏膜炎非常必要。辣木(Moringa oleiferaLam.)又称鼓槌树、奇迹树，为辣木科(Moringaceae)辣木属(MoringaAdans.)多年生热带落叶乔木，原产于印度和非洲地区，现有超过 30 个国家栽培，云南是中国最早引种辣木的省份12。辣木具有多种保健、预防及治疗疾病的功效，具有明显的药食同源性13。辣木籽是辣木的种子，是辣木的衍生产品，被称为“植物钻石”14，在马来西亚和津巴布韦被作为蔬菜食用，并被推荐用于营养补充15。辣木籽具有丰富的营养价值，含有大量的油脂、蛋白质、多糖、挥发油、维生素等成分16，还含有其他多种天然活性成分，如生物碱、皂苷、单宁、甾体、酚酸、硫代葡萄糖苷、异硫氰酸盐、硫代氨基甲酯、黄酮类化合物、萜类化合物等17。辣木籽还具有较高的药用价值和抗氧化活性18，对肿瘤有明显的抑制作用19。据文献报道：辣木籽提取物能够有效降低结肠溃疡的严重程度、面积和指数以及黏膜炎的严重程度和范围、隐窝损伤、浸润程度、结肠炎指数等20，推测辣木籽水提物可能对肠道黏膜炎具有一定的保护作用。本研究通过建立 5-FU 诱导的小鼠肠道黏膜炎，探究辣木籽水提物预防肠道黏膜炎的作用，以期为挖掘辣木籽的新保健功效奠定基础，也为辣木籽的应用提供新思路。1 材料与方法1.1试验材料1.1.1供试动物SPF 级昆明小鼠50 只，雄性，68 周龄，体质量 2225g，购自河南斯克贝斯生物科技股份有限44云南农业大学学报第39卷公司，动物质量合格证号：410000000000005760，许可证号：SCXK(豫)2020-0005。饲养环境：2325，相对湿度60%65%，光照 12h，自由饮食、饮水。所有程序均严格按照中国实验动物使用和护理法规以及云南农业大学实验动物研究所制定的指南，并经云南农业大学实验保护和使用委员会批准实施。1.1.2供试药物辣木籽(云南天佑科技开发有限公司)；5-FU(CAS#51-21-8，上海源叶生物科技有限公司)；生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)。1.1.3主要试剂无水乙醇(分析纯)、二甲苯(分析纯)、正丁醇(分析纯)、盐酸(分析纯)和中性树胶购自国药集团化学试剂有限公司；组织固定液、脱蜡透明液和 Tunel 试剂盒购自武汉赛维尔生物科技有限公司；伊红染液和苏木精染液购自北京索莱宝有限公司；小鼠白细胞介素 6(IL-6)、白细胞介素 1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-)ELISA 试剂盒购自江苏酶免实业有限公司。1.1.4主要仪器真空冷冻干燥机(上海比朗仪器制造有限公司)；光学生物显微镜(上海光学仪器厂)；电热恒温培养箱(武汉一恒苏净科学仪器有限公司)；酶标仪(美国 MoleculartDevices)；台式高速冷冻离心机(上海卢湘仪离心机仪器有限公司)；电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)。1.2试验方法1.2.1辣木籽水提物的制备将去壳的辣木籽用粉碎机磨碎成粉末并称取200g，加入蒸馏水 2000mL，煎煮 1h，用尼龙布过滤，滤渣再重复上述操作 3 次，合并 3 次滤液，抽滤，55 旋转蒸发浓缩至无水滴滴下。静置冷却后，将浓缩液置于80 冷冻 12h，再置于真空冷冻干燥机中冷冻干燥至粉末，冻干后的粉末于 4 保存备用。测定辣木籽水提物提取率为 21.7%，与已有研究21基本一致。1.2.2动物分组与模型建立小鼠适应性饲养 7d 后，将其随机分为正常组，模型组，辣木籽水提物低、中、高剂量组，每组 10 只。每天 8：00，正常组和模型组灌胃蒸馏水，辣木籽水提物低、中、高剂量组分别灌胃50、100 和 200mg/kg 辣木籽水提物，持续 14d；第 1516 天，正常组腹腔注射生理盐水，其余组均腹腔注射 130mg/kg5-FU，观察 2d 后处死。1.2.3小鼠健康状况观察与腹泻评分每天观察小鼠毛发光泽度、清洁度和颜色，活动情况，精神状态，小鼠死亡情况等一般状态，并记录小鼠体质量(体质量减轻是肠道黏膜炎的重要临床指标)、摄食量和饮水量。此外，腹泻也是肠道黏膜炎的重要临床指标，故处死前 12h 根据小鼠粪便性状对小鼠进行腹泻评分(表 1)。表 1 腹泻评分表Tab.1Diarrheascore评分score小鼠粪便情况stoolconditionofmice0正常(干燥、颗粒状)normal(dry,granular)1微湿(质软、成型)slightlywet(soft,formed)2中等湿度(不成型)mediumhumidity(unformed)3松散便loosestool4水样便waterystool1.2.4动物组织收集试验小鼠于第 18 天晚上禁食不禁水 12h，第19 天早上眼球取血；采用 CO2将小鼠窒息后颈椎脱臼死亡，75%酒精消毒后立即剖开腹腔快速取出心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和胸腺进行称量并记录，按照公式计算小鼠脏器指数：脏器指数=脏器质量/小鼠体质量100%。收集空肠，一部分用 PBS 冲洗干净，液氮速冻后于80 保存备用；另一部分清洗干净后，置于 4%多聚甲醛溶液中备用。1.2.5空肠组织病理学观察将固定好的空肠组织取出，用水冲洗后依次放入 45%、55%、65%、75%、85%、95%乙醇溶液中进行脱水；脱水结束后，将其放入二甲苯石蜡液中进行石蜡包埋，对包埋的蜡块进行切片，厚度约 5m。取空场切片用二甲苯脱蜡，再用不同梯度乙醇水化，最后进行苏木精和伊红染色。采用显微镜观察空肠组织病理学变化并拍照，测量空肠绒毛高度、隐窝深度以及二者的比值以评价其形态学变化，绒毛缩短、隐窝深度增加、绒毛高度与隐窝深度的比值减小预示肠黏膜可能存在病理损伤22。第2期赵润萍，等：辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用451.2.6免疫组化法检测空肠增殖细胞核抗原的表达取空肠切片，用二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水，用柠檬酸钠缓冲溶液进行抗原修复，加入过氧化氢孵育，PBS 洗涤 3 次，BSA 进行封闭，滴加一抗增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)过夜；第 2 天回收抗体，PBS 洗涤 3 次，滴加 HRP 标记的 PCNA 蛋白二抗，37孵育 1h，PBS 洗涤 3 次，按 11000(VV)加入DAB 显色液进行显色；待显色完成后，用水终止显色反应并多次冲洗，然后置于苏木精染液中染色，梯度酒精脱水后用中性树胶封片。采用显微镜观察并拍照，DAB 显示棕黄色为 PCNA 增殖。1.2.7Tunel 法检测细胞凋亡将空肠切片置于 65 烘箱中烤片 1.5h，按照 Tunel 检测试剂盒说明书进行操作，置于显微镜下观察并在 400 倍下采集图像，DAB 显示棕黄色为细胞凋亡。1.2.8ELISA 检测小肠炎症因子水平取空肠组织 50mg，加入一定量的 PBS 缓冲液，使用匀浆器匀浆后，4、3000r/min 离心20min，按照 IL-6、IL-1 和 TNF-试剂盒说明书进行操作，并测定其含量。1.3数据统计与分析采用 GraphPadPrism8.0.2 软件进行数据分析和作图，组间比较采用 one-wayANOVA 分析。2 结果与分析2.1小鼠健康及活动状况2.1.1健康状况正常组小鼠精神状态良好，活动敏捷，饮食正常，毛色呈白色，有光泽，无腹泻情况。腹腔注射 5-FU 后，模型组小鼠精神状态不佳，反应迟钝，懒动，扎堆，毛色偏淡黄色，光泽感降低。给予辣木籽水提物后，精神状态和毛色均有不同程度的改善，其中辣木籽水提物高剂量组效果较为明显。2.1.2摄食量和饮水量第 15天开始腹腔注射 5-FU，正常组小鼠的摄食量和饮水量趋于稳定，模型组的摄食量和饮水量明显下降；与模型组相比，辣木籽提取物高、中、低剂量组能不同程度缓解小鼠摄食量和饮水量的下降(图 1)。说明辣木籽水提物对 5-FU 诱导的小鼠肠道黏膜炎摄食量和饮水量有明显的恢复作用，能够促进小鼠正常进食和饮水。2.1.3体质量由图 2 可知：给予小鼠辣木籽水提物期间(014d)，各组小鼠体质量较为稳定，且无明显差异；与正常组相比，模型组小鼠的体质量在注射建模药物 5-FU 后极显著下降(P0.001)；与模型组相比，200mg/kg 辣木籽水提物(辣木籽水提物高剂量组)能够显著缓解小鼠体质量下降(P0.05)。说明辣木籽水提物对 5-FU 诱导的肠道黏膜炎小鼠体质量下降具有抑制作用，其中高剂量的抑制作用最为明显。NMM+LM+MM+H01 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617182468时间/dtime1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213141516171918平均摄食量/gaverage food intake0246810平均饮水量/gaverage water intake注：N.正常组，M.模型组，M+L.辣木籽水提物低剂量组，M+M.辣木籽水提物中剂量组，M+H.辣木籽水提物高剂量组；“*”“*”和“*”分别表示在 0.05、0.01 和 0.001 水平上差异显著；下同。Note:N.normalgroup,M.modelgroup,M+L.lowdoseofM.oleiferaseedswaterextractgroup,M+M.mediumdoseofM.oleiferaseedswaterextractgroup,M+H.highdoseofM.oleiferaseedswaterextractgroup;“*”“*”and“*”indicatessignificantdifferencesat0.05,0.01and0.001levels,respect-ively;thesameasbelow.图 1 辣木籽水提物对肠道黏膜炎小鼠摄食量和饮水量的影响Fig.1EffectsofMoringa oleiferaseedswaterextractonthefoodandwaterintakeofmicewithintestinalmucositis46云南农业大学学报第39卷2.1.4腹泻情况由图 3 可知：与正常组相比，模型组小鼠腹泻评分极显著升高(P0.001)，粪便较湿润；与模型组相比，辣木籽提取物中、高剂量组小鼠腹泻评分均有不同程度改善，中剂量组的腹泻评分显著低于模型组(P0.05)，高剂量组的腹泻评分极显著低于模型组(P0.01)。说明辣木籽水提物可预防 5-FU 诱导的小鼠肠道黏膜炎腹泻，其中，中、高剂量组改善较为显著。2.2小鼠各脏器指数由图 4 可知：注射 5-FU 后，各试验组小鼠心脏、肝脏、肺和肾脏指数无显著差异；与正常组相比，模型组脾脏指数和胸腺指数极显著减小(P0.01 和 P0.001)；与模型组相比，辣木籽水提物可缓解脾脏和胸腺指数减小，其中高剂量辣木籽水提物的缓解作用达到显著或极显著水平。说明辣木籽水提物可以使肠黏膜炎小鼠胸腺和脾脏指数恢复至正常水平，能够降低化疗药物对免疫器官的损伤，在一定程度上增强其免疫力。2.3小鼠空肠的组织病理学正常组空肠绒毛组织结构完整，排列紧密整齐，形态规则，无萎缩、变形、缺失等；相较而言，模型组空肠绒毛萎缩、变短，隐窝深度增加，出现炎症细胞浸润现象；辣木籽水提物高、中、低剂量组均能改善空肠形态，且随着辣木籽提取物剂量的增加，改善效果更加明显(图 5)。由图 6 可知：与正常组相比，模型组小鼠的空肠绒毛高度极显著减小、隐窝深度极显著增大、绒毛高度与隐窝深度的比值极显著减小(P0.001)；与模型组相比，高、中、低剂量的辣木籽提取物均可增加绒毛高度，且呈剂量依赖性。说明辣木籽水提物可修复 5-FU 诱导的空肠黏膜损伤，减轻肠道炎症反应。2.4小鼠空肠的 PCNA 蛋白表达量由图 7 可知：与正常组相比，模型组空肠隐窝处棕黄色减少，即 PCNA 蛋白表达量降低，说明模型组小鼠的隐窝细胞受损，增殖能力降低；与模型组相比，辣木籽水提物低、中、高剂量组0246014 d处理treatments体质量变化/gbody weight change43210121518 d*NMM+LM+MM+HNMM+LM+MM+H图 2 辣木籽水提物对肠道黏膜炎小鼠体质量变化的影响Fig.2EffectsofM.oleiferaseedswaterextractonthechangeofbodyweightofmicewithintestinalmucositis00.51.01.52.0腹泻评分diarrhea score*处理treatmentsNMM+LM+MM+H图 3 辣木籽水提物对肠道黏膜炎小鼠腹泻的影响Fig.3EffectsofM.oleiferaseedswaterextractonthediarrheainmicewithintestinalmucositis第2期赵润萍，等：辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用47空肠隐窝处棕黄色逐渐增多，即辣木籽水提物呈剂量依赖性增加 PCNA 蛋白表达量。说明辣木籽水提物可不同程度改善隐窝细胞受损，提高小鼠小肠隐窝细胞的增殖能力，对肠道黏膜炎有一定的保护作用。2.5小鼠空肠细胞的凋亡由图 8 可知：正常组小鼠几乎没被染色，说明凋亡现象较少；与正常组相比，模型组的 Tunel阳性细胞数量增加(棕黄色部分增多)；与模型组相比，辣木籽水提物低、中、高剂量组的 Tunel00.20.40.60.8心脏指数/%cardiac index012345肝脏指数/%liver index00.10.20.30.4脾脏指数/%spleen index*00.20.40.60.81.0肺指数/%lung index00.51.01.52.0肾脏指数/%renal index00.10.20.30.4胸腺指数/%thymus index*处理treatmentsNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+H图 4 辣木籽水提物对肠道黏膜炎小鼠脏器指数的影响Fig.4EffectsofM.oleiferaseedswaterextractontheorganindexofmicewithintestinalmucositisNMM+LM+MM+H200 m200 m200 m200 m200 m图 5 空肠组织病理学观察(HE 染色，100)Fig.5Histopathologicalobservationofjejunum(HEstaining)48云南农业大学学报第39卷阳性细胞数量减少(棕黄色部分减少)。说明辣木籽水提物可降低空肠细胞的凋亡程度，对 5-FU引起的空肠损伤具有一定的保护作用。2.6小鼠小肠炎症因子的分泌量由图 9 可知：与正常组相比，模型组空肠组织的 IL-6、IL-1 和 TNF-含量极显著增加(P0.01)；与模型组相比，辣木籽水提物高剂量组能显著或极显著降低 IL-6、IL-1 和 TNF-含量(P0.05 或 P0.01)。说明辣木籽水提物能够降低肠道黏膜炎小鼠空肠组织中炎症因子的水平。3 讨论辣木籽具有典型的营养特性，如含有丰富的维生素和油脂23以及优质蛋白质24，因此，其具有对抗营养不良的药食同源属性和促进机体健康、提高身体免疫力的潜质25。本研究以辣木籽为原料，得到其水提物进行试验，发现其对小鼠空肠黏膜炎具有一定的缓解和保护作用，但辣木籽水提物中含有氨基酸、脂肪酸、萜类、黄酮类、多糖等生物活性成分26，具体是哪种单一成分或哪些成分协同对小鼠肠道黏膜炎起保护作用，还需要后续试验验证。化疗药物治疗往往伴随着患者体质量下降这一副作用，严重影响患者的生存质量27。本研究发现辣木籽水提物可显著改善小鼠体质量下降，其原因可能与辣木籽中含有丰富的营养物质有0100200300400绒毛高度/mvillus length*050100150隐窝深度/mcrypt depth*012345villus length/crypt depth*处理treatmentsNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+H绒毛高度/隐窝深度图 6 辣木籽水提物对空肠黏膜炎的损伤修复Fig.6DamagerepairofM.oleiferaseedswaterextractonthejejunalmucositisNMM+LM+MM+H50 m50 m50 m50 m50 m图 7 小鼠空肠 PCNA 免疫组化染色(IHC 染色，400)Fig.7ImmunohistochemicalstainingofPCNAinjejunumofmice(IHCstaining)第2期赵润萍，等：辣木籽水提物对 5-氟尿嘧啶诱导小鼠空肠黏膜炎的调节作用49关，这意味着辣木籽水提物在预防肠道炎症方面具有潜在优势。腹腔注射 5-FU 后，小鼠精神状态不佳，毛色暗淡、光滑度降低，试验期间未出现死亡，且组织学表现为小鼠绒毛明显萎缩、隐窝深度增加，表明试验动物模型建模成功且造模剂量适当。但评价空肠发生病理变化的指标并非只有肠道绒毛高度和隐窝深度，在今后的研究中需要进一步探讨试验动物处理和药物剂量。炎症因子的分泌早期可聚集吞噬细胞，对机体具有一定的保护作用，但炎症因子的长期释放会对机体造成损伤。本研究采用 5-FU 诱导小鼠引发肠道黏膜炎，炎症因子的释放对机体具有一定危害，但研究表明辣木籽水提物可抑制炎症因子的分泌，这意味着辣木籽可能具有一定的免疫调节作用28。肠道黏膜炎病变过程中发生了炎症细胞浸润，细胞炎症因子分泌量增加29。炎症因子(IL-6、IL-1 和 TNF-)不仅是促炎因子，也是衡量肠道黏膜损伤的重要依据30。本研究表明：模型组空肠组织的IL-6、IL-1 和 TNF-含量极显著升高，说明 5-FU 提高了 IL-6、IL-1和 TNF-水平，引发炎症。辣木籽中不仅含有抗氧化剂(如抗坏血酸、类胡萝卜素、类黄酮和酚类化合物)31，还含有多种抗炎化合物(如异硫代酸、分类衍生物等)32，这些成分都具有一定的抗炎和抗氧化作用33，故辣木籽水提物能显著抑制炎症因子分泌水平，说明辣木籽水提物可通过抑NMM+LM+MM+H50 m50 m50 m50 m50 m图 8 小鼠空肠 Tunel 免疫组化染色(IHC 染色，400)Fig.8ImmunohistochemicalstainingofTunelinjejunumofmice(IHCstaining)020406080100IL-6*020406080100IL-1*0100200300400TNF-*NMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+HNMM+L M+M M+H处理treatments/(pgmL1)图 9 辣木籽水提物对肠道黏膜炎小鼠 IL-6、IL-1 和 TNF-水平的影响Fig.9EffectsofM.oleiferaseedswaterextractonthelevelsofIL-6,IL-1andTNF-inmicewithintestinalmucositis50云南农业大学学报第39卷制 IL-6、IL-1 和 TNF-炎症因子释放水平从而减轻炎症。研究表明：5-FU 引起的肠道黏膜炎与 DNA损伤、RNA 损伤、细胞增殖与凋亡密切相关34-35。PCNA 是反映细胞增殖状态的指标，对细胞增殖具有十分重要的意义。本研究表明：辣木籽水提物可提高 PCNA 蛋白表达量，促进小鼠空肠细胞增殖分化，对小鼠黏膜炎有一定的预防作用。5-FU 在诱导肿瘤细胞凋亡的同时也诱导正常细胞凋亡，Tunel 法检测结果表明：辣木籽水提物可在一定程度上抑制小肠细胞凋亡，从而缓解小鼠肠道黏膜炎。本研究探索了辣木籽水提物对5-FU 诱导的小鼠空肠黏膜炎的调节作用，不仅为缓解肠道副作用的化疗药物研究提供了前期基础和治疗思路，也为辣木籽水提物成为预防肠黏膜炎的候选药物提供了科学依据。随着辣木籽水提物对小鼠空肠黏膜炎调节作用研究的深入，下一步可继续开展辣木籽水提物对 TLR2、MyD88 和NF-B 通路的调节方式以及通路核心蛋白的研究。4 结论辣木籽水提物可缓解由 5-FU 引起的小鼠体质量减轻和腹泻，改善胸腺指数和脾脏指数进而恢复肠道黏膜的免疫功能，减轻肠道黏膜损伤，促进空肠 PCNA 增殖，降低 Tunel 凋亡表达，抑制炎症因子水平，有一定的抗炎能力。可见，辣木籽水提物可有效减轻 5-FU 诱导引起的肠道不良反应，进而预防和治疗肠道黏膜炎。参考文献ZHANGPF,LIUJ,XIONGBH,etal.Microbiotafromalginateoligosaccharide-dosedmicesuccessfullymitig-ated small intestinal mucositisJ.Microbiome,2020,8(1):112.DOI:10.1186/s40168-020-00886-x.1YAOWT,CAIQQ,WANGJQ,etal.Treatmentofosteosarcoma around the knee in skeletally immaturepatientsJ.Oncology 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