2018—2022年广西融安猪场主要病毒性腹泻流行病学调查.pdf

2023 年第 12 期 总第 100 期疾病防控7120182022 年广西融安猪场主要病毒性腹泻流行病学调查石国凡（融安县潭头乡农业农村综合服务中心，广西融安 545404）摘 要：为了解广西融安造成猪场发生腹泻的主要病毒性病原，为猪场病毒性腹泻综合防控提供参考依据，本研究采用RT-PCR 方法，对 20182022 年融安 28 个猪场 305 份腹泻病料进行猪主要病毒性腹泻病原核酸检测，以分析不同病原在猪群中的流行情况。结果显示，在 305 份腹泻病料中，猪流行性腹泻病毒核酸阳性率最高，为 27.87%（85/305），猪轮状病毒次之，为 15.08%（46/305），猪传染性胃肠炎和猪丁型冠状病毒分别为 4.92%（15/305）、3.28%（10/305）。存在二重、三重病原混合感染的情况。在 20182022 年中，主要腹泻病毒性病原核酸检出率呈总体上升趋势，2021 年最高，2022 年略有下降，但仍处于较高水平，需进一步加强病原监测和科学防控。关键词：猪病毒性腹泻；猪流行性腹泻病毒；混合感染 作者简介：石国凡（1977），男，汉族，广西柳州人，中专，助理农艺师，主要从事畜牧兽医工作。近年来，猪腹泻病频发，已成为危害养猪业健康发展的重要病原，临床上以腹泻、呕吐、脱水为主，各年龄段猪均易感，其中仔猪病死率较高，感染带来的危害更严重1，2。目前研究发现，造成仔猪腹泻的病原主要包括病毒、细菌、寄生虫、饲养环境以及生产管理措施等，其中病毒性病原是目前猪腹泻病的重要病原，主要包括猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）、猪 轮 状病毒（porcinerotavirus，PoRV）、猪传染性胃肠炎（transmissiblegastroenteritisvirusof swine，TGEV）和猪丁型冠状病毒（porcinedeltacoronavirus，PDCoV）等，上述病原在我国多省市均有报道，但各地发病率略有不同，各病原混合感染发病比例有一定差异。为了解广西融安猪场病毒性腹泻的感染情况，分析流行病学态势，对近 5 年（20182022 年）28 个猪场的305 份出现腹泻症状的临床样品进行猪腹泻主要病毒性病原核酸检测，为掌握融安猪群主要腹泻病原流行病学数据和猪群疫病综合防控提供临床数据支持。1 材料和方法1.1 临床样品 2018 年 1 月至 2022 年 12 月在融安 28 个不同规模猪场采集临床出现腹泻、呕吐等临床症状的样品，包括猪内脏、肠道、肛拭子及粪便等合计 305 份。1.2 主要试剂 Taq Mix、DL2000 DNA Marker、LB 培养基、RNA抽提试剂盒等试剂分别购自 Takara 公司、生工生物工程（上海）股份有限公司、Axygen生物科技有限公司。1.3 检测方法 取腹泻样品，与无菌 PBS 按照 1:4 混合、研磨制成匀浆，冻融 3 次后，离心取上清，按照 Takara 柱式总RNA小量提取试剂盒说明书提取RNA作为检测模板。分别采用国家标准检测方法及相关文献公布的检测方法，通过 RT-PCR 检测上述病原，检测所用引物见表1。1.4 数据处理与分析 对采集的腹泻样品分别进行 4 种病毒性病原核酸检测，同一份样品只检测到 1 种病原核酸阳性的归为单一感染，同时检测到 2 种病原核酸阳性为二重感染，同时检测到3种病原核酸阳性的为三重感染，以此类推。表 1 扩增目的片段的引物病毒名称引物序列（5 3）片段大小（bp）参考标准/文献PEDVTTCGGTTCTATTCCCGTTGATG663GB/T 36871-20183CCCATGAAGCACTTTCTCACTATCTGEVTTACAAACTCGCTATCGCATGG528GB/T 36871-20183TCTTGTCACATCACCTTTACCTGCPoRVCCCCGGTATTGAATATACCACAGT333GB/T 36871-20183TTTCTGTTGGCCACCCTTTAGPDCoVCCAAACGCAACCCCAACAATCC329逄凤娇等4CTTCTCAGTGTCTGCAGAGCCG722 结果与分析2.1 20182022 年融安猪场主要腹泻病毒性病原检测结果 对采集的 305 份猪腹泻样品进行 PEDV、PoRV、TGEV 和 PDCoV 病原核酸检测，共检出腹泻相关病原核酸阳性样品 102 份，存在单一病原感染和多种病原混合感染的情况。在各种病原核酸检测结果中，PEDV 检出率最高，为 27.87%，共检出 85 份，PoRV 次之，为 15.08%，检出 46 份，TGEV 和 PDCoV 分别为 4.92%、3.28%，即分别检出 15 份、10 份，表明在融安猪场中存在多种病毒性腹泻病原的流行以及混合感染，其中 PEDV和 PoRV 是主要病原。2.2 病原混合感染情况 进一步对腹泻病原感染情况进行分析。20182022 年病原混合感染检测结果如表 2 所示，共检出阳性样品 102 份，其中单一感染 58 份，PEDV 核酸阳性样品 45 份，占 77.58%，其次是 PoRV，核酸阳性样品 13 份，占 22.41%，TGEV 和 PDCoV 无单一感染。二重感染样品共 34 份，其中 PEDV 和 PoRV、PEDV 和TGEV、PEDV和 PDCoV混合感染样品分别为23份、3份、5 份，PoRV 和 PDCoV、TGEV 和 PDCoV 的混合感染样品各 1 份。三重感染阳性样品为 10 份，其中 PEDV、PoRV 和 TGEV 混 合 感 染 样 品 7 份，PEDV、TGEV 和PDCoV 混合感染样品 2 份，TGEV、PoRV 和 PDCoV 混合感染样品 1 份。上述结果提示，不管是单一感染还是多重混合感染，PEDV 和 PoRV 均为主要病原，TGEV 和PDCoV 均为混合感染。2.3 各病原历年阳性样品检出率 20182022 年检测结果显示，4 种腹泻病原阳性率整体呈上升趋势，其中 2021 年最高，分别为41.51%、22.64%、9.43%和 7.55%；2019 年较低，参考文献1 殷震,刘景华.动物病毒学 M.第二版.北京:科学出版社,1997.2 蔡宝祥.家畜传染病学 M.第四版.北京:中国农业出版社,2000.3 GB/T 36871-2018.猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法S.北京:中国标准出版社,2018.4 逄凤娇,张柏猛,何孔旺,等.猪 冠状病毒 M 基因 RT-PCR 检测方法的建立及应用 J.畜牧与兽医,2016,48(9):50-53.分别为 17.24%、10.34%、1.72%和 1.72%。其中 PEDV 和 PoRV 阳性率一直居高不下，在 2019年最低，之后于 2021 年升至 41.51%和 22.64%，呈再次暴发态势，2022 年阳性率略有下降，但仍处于较高水平；TGEV 和 PDCoV 流行态势与 PEDV 和 PoRV类似，在 2021 年达到最高，阳性率分别为 9.43%和7.55%，2022 年略有下降，但仍高于多数年份。3 小结 广西是我国的养猪大省，近年来，生猪养殖业不断发展，但因腹泻造成的猪群减产、死亡频繁发生，造成巨大的经济损失，病原中以 PEDV、PoRV、TGEV和 PDCoV 为主。为了解导致融安猪群腹泻的病毒性病原及感染情况，20182022 年从融安 28 个猪场采集 305 份腹泻样品，开展 PEDV、PoRV、TGEV 和 PDCoV的核酸检测。结果发现，PEDV 和 PoRV 是导致融安猪群腹泻的主要病原，单一感染和多重感染率均较高，TGEV 和 PDCoV 则以混合感染为主；在持续 5 年的检测中，2021 年各病原检出率最高，2022 年稍降低，但仍维持在较高水平，说明目前腹泻仍是影响猪群健康的重要因素，需高度关注并采取有效措施进行防控。表 2 20182022 年融安临床腹泻样品混合感染情况病原阳性数合计阳性率（%）单一感染PEDV455877.58PoRV1322.41TGEV00PDCoV00二重感染PEDV+PoRV233467.65PEDV+TGEV38.82PEDV+PDCoV514.71PoRV+TGEV12.94PoRV+PDCoV12.94TGEV+PDCoV12.94三重感染PEDV+PoRV+TGEV71070PEDV+TGEV+PDCoV220TGEV+PoRV+PDCoV110