结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验结核菌的临床比较.pdf

SYSTEMS MEDICINE 系统医学系统医学 2023 年 8 月第 8 卷第 15 期 临床医学系统研究 结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验结核菌的临床比较葛冰磊，陈永红，徐成春，赵成娟宣城市人民医院检验科，安徽宣城 242000摘要 目的 探讨对比结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验结核菌的临床价值。方法 选取2020年1月2022年12月期间宣城市人民医院收治的248例疑似结核患者，均进行结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验，以罗氏固体培养基培养结果作为金标准，对其阳性检出率及诊断效能等进行比较。结果 结核分枝杆菌分子生物检测的阳性检出率（35.89%）高于常规痰涂片（33.06%）；结核分枝杆菌分子生物检测的灵敏度94.19%、特异度95.06%高于常规痰涂片82.56%和93.21%，但差异无统计学意义（2=0.949、0.077，P0.05）。结论 结核分枝杆菌分子生物检测结核菌其检出率高，且进一步提高其诊断效能，一致性良好，可为疑似结核的患者提供明确诊断，对后续疾病治疗及控制提供重要参考。关键词 结核分枝杆菌分子生物检测；常规痰涂片；结核菌；临床比较中图分类号 R446 文献标识码 A 文章编号 2096-1782（2023）08(a)-0091-05Clinical Comparison of Molecular Bioassay for Mycobacterium Tuberculosis with Routine Sputum Smear Testing for Tubercle BacilliGE Binglei,CHEN Yonghong,XU Chengchun,ZHAO ChengjuanDepartment of Laboratory,Xuancheng Peoples Hospital,Xuancheng,Anhui Province,242000 ChinaAbstract Objective To investigate the clinical value of comparing molecular biological testing for Mycobacterium tuberculosis with routine sputum smear testing for mycobacterium tuberculosis.Methods A total of 248 suspected tuberculosis patients admitted to Xuancheng Peoples Hospital between January 2020 and December 2022 were selected,and all of them were subjected to mycobacterium tuberculosis molecular biology test and routine sputum smear test,and the results of roche solid medium culture were used as the gold standard to compare the positive detection rate and diagnostic efficacy.Results The positive detection rate of mycobacterium tuberculosis molecular bioassay(35.89%)was higher than conventional sputum smear(33.06%).The sensitivity and specificity of mycobacterium tuberculosis molecular bioassay were 94.19%and 95.06%,which were significantly higher than conventional sputum smear 82.56%and 93.21%,but the difference was not statistically significant(2=0.949,0.077,P0.05).Conclusion Mycobacterium tuberculosis molecular bioassay for tuberculosis has a high detection rate and further improves its diagnostic efficacy with good consistency,which can provide a clear diagnosis for patients with suspected tuberculosis,and provide an important reference for the subsequent treatment and control of the disease.Key words Mycobacterium tuberculosis molecular bioassay;Routine sputum smear;Mycobacterium tuberculosis;Clinical comparison当前，结核病仍然是全球范围内的重要公共卫生问题。结核分枝杆菌是导致结核病的主要病原体，其传播和感染对于早期诊断和有效治疗至关重要。传统的痰涂片检验是结核病的常规诊断方法之一，但其存在一些局限性，如低灵敏度和特异性以及需大量时间来培养和鉴定细菌1-2。近年来，随着分子生物学技术的发展，结核分枝杆菌的分子生物检测方法逐渐成为结核病诊断和监测的重要DOI：10.19368/ki.2096-1782.2023.15.091作者简介 葛冰磊（1969-），女，本科，主任技师，研究方向为分子生物学。91系统医学 2023 年 8 月第 8 卷第 15 期 临床医学系统研究 系统医学 SYSTEMS MEDICINE工具。这些分子生物学方法基于对结核分枝杆菌DNA 的扩增和检测，能够提供更快速、准确和敏感的诊断结果。与传统的痰涂片检验相比，分子生物检测方法可以在更短的时间内完成诊断，并且对于低菌量样本的检测具有较高的灵敏度3-4。为进一步探讨比较结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验结核菌的价值，本文回顾分析2020年1月2022 年 12 月期间宣城市人民医院收治的 248 例疑似结核患者的临床资料，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料回顾性分析本院收治的248例疑似结核患者的临床资料，所有患者均进行结核分枝杆菌分子生物检测与常规痰涂片检验，其中，男 199 例，女 49 例，年龄1687岁，平均（61.0516.20）岁。1.2 纳入与排除标准纳入标准：疑似结核的患者；伴有疑似结核病症状；未服用相关药物；可正常交流，无意识障碍。排除标准：严重肺部疾病者；重要脏器功能障碍者；精神疾病者；中途退出者。1.3 方法所有患者均进行结核分枝杆菌分子生物检测和常规痰涂片检验，以罗氏固体培养基培养结果作为金标准，1.3.1 常规痰涂片 在患者入院的当天，使用广口痰杯收集患者的痰液标本3 mL，然后严格根据操作规定进行检测。先使用接种环挑取适当的痰液标本，然后制作成一个厚膜涂片，规格在 1520 mm，待其自然干燥后，使用火焰对其进行固定。选择染色材料，以石碳酸复红染液进行染色，并使用3%盐酸溶液对其进行脱色处理。使用吕氏美蓝液对其再次进行染色，时间约为 30 s，涂片复染时间 2 min。确定样本无误可用后使用抗酸染色镜检结果，并对其进行分级观察，判定其结果阴阳性。1.3.2结核分枝杆菌分子生物检测 以聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）结核分枝杆菌DNA 检测，取适当痰液标本，将其加入适当等体积的液化液，充分震荡混合后，于 37环境下将其液化半小时。清洗阶段。先抽取1 mL的液化后样本，置入洁净的离心管内，对其进行离心处理，时间5 min，转速12 000 r/min，离心半径10 cm，清除上层清液，加入 1 mL的生理盐水，再次涡旋震荡并进行再次离心处理，转速，半径及时间同上，然后再次清除上层清液。提取阶段。此阶段中将60 l的和旋提取液加入离心管内，充分涡旋震荡混合，将其转入核酸提取的试管中，使用核酸快速提取设备，充分进行震荡 5 min，采用恒温为 95的水，对其核酸提取管进行 5 min 水浴，取出后并第三次进行离心处理 60 s，获得核酸，抽取 2 l 样本对其扩增实验，并详细记录结果。放置在荧光定量PCR仪上运行程度，PCR扩增参数：反应罐在93下保温2 min，先93 45s55 1 min循环10次，再次按93 30 s55 45 s循环30次，而荧光检测需在第二次循环55 45 s 时完成。最后根据说明书对其结果进行判断。1.3.3 结核分枝杆菌培养 取患者的痰液样本，1 mL，并使用氢氧化钠（40 g/L）对其进行处理；将其接种到酸性罗氏培养基中，于 37下孵育，每间隔一周时间对其进行观察 1次，查看菌株生长的情况，共持续观察 4 周，期间如果出现结核分枝杆菌生长即可判定为阳性，相反即判定为阴性。1.4 观察指标以罗氏固体培养基培养结果作为金标准，对比分析两种检查方式的阳性检出率，计算其诊断效能，包括灵敏度，特异性及准确率，其中，灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）100%，特异性=真 阴 性 例 数/（真 阴 性 例 数+假 阳 性 例 数）100%；准确率=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数100%。1.5 统计方法采用 SPSS 28.0 统计学软件分析数据。符合正态分布的计量资料用(x s)表示，采用t检验；计数资料用例数（n）和率（%）表示，采用 2检验。P0.05），而两种检测方法的准确率比较，差异有统计学意义（P0.05），这与刘原园等19的研究中，分子生物检测组阳性检出率高于常规痰涂片，灵敏度93.78%、特异度96.35%高于常规痰涂片的结果一致，由此可知，PCR 在检测结核病方面具有更高的准确性和敏感性，能够更可靠地检测到结核分枝杆菌的存在。PCR 的特异度略低于痰涂片，意味着在某些情况下可能会出现PCR的假阳性结果。这可能是由于 PCR 方法对结核分枝杆菌的高敏感性，使其在一些非活动性或低菌量感染的情况下也能够检测到20。综上所述，结核分枝杆菌分子生物检测结核菌其检出率高，且进一步提高其诊断效能，一致性良好，可为疑似结核的患者提供明确诊断，对后续疾病治疗及控制提供重要参考。参考文献1 陈江燕,王霖,马志强,等.结核分枝杆菌 DNA 及 RNA检测在结核病中的诊断价值J.云南医药,2023,44(2):26-29.2 袁世超,谢桂华,侯维娟,等.结核分枝杆菌特异性-干扰素化学发光免疫检测体系的建立J.国际检验医学杂志,2023,44(8):973-977,982.3 邹远妩,李静,王彪,等.结核分枝杆菌 RNA 恒温扩增实时荧光检测技术检测肺泡灌洗液诊断肺结核的价值J.中国防痨杂志,2023,45(4):434-436.4 曲芸墨,丁鑫园,闫玫漪,等.CRISPR 基因组编辑技术在结核分枝杆菌中的研究进展及应用J.中国防痨杂志,2023,45(2):208-214.5 肺结核诊断WS288-2017J.中国感染控制杂志,2018,17(7):642-652.6 Aagaard C,Knudsen N,Sohn I,et al.Immunization with Mycobacterium tuberculosis-Specific 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