子痫前期患者外周血PLGF和sFlt-1的表达情况分析.pdf

医药前沿 2024年3月 第14卷第7期 综合医学 137子痫前期患者外周血 PLGF 和 sFlt-1 的表达情况分析柳 溪（湖北省妇幼保健院妇产科 湖北 武汉 430413）【摘要】目的：分析子痫前期患者胎盘组织及外周血胎盘生长因子（PLGF）和可溶性 fms 样酪氨酸激酶 1（sFlt-1）的表达情况及临床意义。方法：选取 2019 年 8 月2021 年 8 月湖北省妇幼保健院收治的 80 例子痫前期孕妇为研究对象，根据患病程度分为轻度子痫前期组和重度子痫前期组，每组 40 例；选取同期 40 名健康孕妇为健康孕妇组。使用半定量RT-PCR方法测量胎盘组织中PLGF和sFlt-1 mRNA水平；采用蛋白质印迹法检测胎盘组织中PLGF和sFlt-1的蛋白水平；采用酶联免疫吸附试验检测血清中 PLGF 和 sFlt-1 的水平，比较健康孕妇组、轻度子痫前期组与重度子痫前期组三组间的收缩压（SP）、舒张压（DP）、平均动脉压（MAP）、PlGF mRNA 和蛋白表达水平。结果：轻度子痫前期组、重度子痫前期组的 SP、DP、MAP 均高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），重度子痫前期组 SP、DP、MAP 高于轻度子痫前期组，差异有统计学意义（P 0.05）。健康孕妇组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组 PlGF mRNA 和蛋白表达水平、血清 PLGF 水平呈逐渐降低趋势，sFlt-1 mRNA 和蛋白表达水平、血清 sFlt-1 水平呈逐渐升高趋势，组间两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。结论：PLGF、sFlt-1 与子痫前期发病及病情严重程度相关，用于临床辅助诊断子痫前期及疑似子痫前期孕妇的治疗管理具有正向、积极的意义。【关键词】子痫前期；胎盘组织；外周血；PLGF；sFlt-1【中图分类号】R714.24【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2024）07-0137-03子痫前期是产科常见病，临床特点是胎盘和母体内皮功能障碍，可造成胎儿生长受限、胎盘早剥、早产和死产等后果1。子痫前期的诊断标准非常简单，若错过治疗黄金时间，可能会导致严重的产妇和新生儿并发症发生1-2。各种生物标志物对预测疑似或已确诊子痫前期患者的母体和胎儿并发症及妊娠期延长有很大的增量价值。相关研究表明，胎盘生长因子（placental growth factor,PLGF）是子痫前期风险评估的最佳生物标记物3-4。PLGF 是由滋养细胞分泌的糖基化二聚糖蛋白，由合体滋养层细胞产生，可促使胎盘血管的生成，是胎盘形成的重要细胞因子5。在子宫胎盘缺血缺氧的情况下，可溶性 fms 样酪氨酸激酶 1（soluble fms like tyrosine kinase 1,sFlt-1）表面会释放过量的抗血管生成因子 sFlt-1 进入母体血液循环，引发血管收缩和血管内皮损伤。sFlt-1 增加和 PLGF 减少引起的胎盘血管生成失衡会使滋养细胞对子宫内膜的侵袭性降低，从而诱导中央缺血和缺氧6。PLGF 和 sFlt-1 在筛查、预测、诊断、监测胎盘相关疾病的发生发展中有重要作用。本研究分析子痫前期患者胎盘组织及外周血 PLGF 和 sFlt-1 的表达情况，以期为预防子痫前期提供一种预测方法。现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料选取 2019 年 8 月2021 年 8 月湖北省妇幼保健院收治的 80 例子痫前期孕妇为研究对象，根据患病程度分为轻度子痫前期组和重度子痫前期组，每组 40 例。选取同期 40 名健康孕妇为健康孕妇组。轻度子痫前期组年龄 21 40 岁，平均年龄（31.153.75）岁；孕周 32 38 周，平均（34.831.38）周；体质量指数 18.28 26.01 kg/m2，平均（22.172.13）kg/m2。重度子痫前期组年龄 25 40 岁，平均年龄（32.233.81）岁；孕周 32 37 周，平均（34.881.36）周；体质量指数 18.22 27.08 kg/m2，平均（22.492.28）kg/m2。健康孕妇组年龄 25 43 周，平均（32.484.74）岁；孕周 33 38 周，平均（34.801.60）周；体质量指数19.44 28.06 kg/m2，平均（22.961.84）kg/m2。三组一般资料比较，差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。本研究符合赫尔辛基宣言要求。纳入标准：（1）所有孕妇均符合关于子痫前期的诊断标准7；（2）所选孕妇均为初产妇，单胎；（3）定时产检；（4）均无高血压、贫血、心脏病史；（5）临床资料完整，孕产妇知情同意书并签署同意书。排除标准：（1）合并自身免疫性疾病和严重肝、肾病者；（2）合并急慢性感染性疾病者；（3）孕前 3 个月出现妊娠期相关疾病。1.2 方法（1）资料收集：收集所有孕妇的年龄、孕周、体质量指数、收缩压（systolic blood pressure,SP）、舒张压（diastolic blood pressure,DP）、计算平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）。（2）实验方法：所有孕妇在分娩前采集 3 mL 静脉血，然后离心血清并将其置于 70 的环境中使用。胎盘分娩后，快速选择胎盘母体表面脐带附近的约 2 4 块组织，每块约 1 cm3，将其储存在80 的冰箱中，以备后续使用。使用半定量反转录聚合酶链式反应（Semi-QRT-PCR）方法测量胎盘组织中基金项目：湖北省卫生健康委员会立项项目（WJ2019H290）。138 医药前沿 2024年3月 第14卷第7期 综合医学PLGF 和 sFlt-1 mRNA 的表达水平。（3）采用蛋白质印迹法检测胎盘组织中 PLGF 和 sFlt-1 的蛋白表达水平：取孕妇胎盘组织，加入蛋白裂解液进行裂解，采用二喹啉甲酸法检测蛋白质浓度，制备聚丙烯酰胺凝胶后混合沸水浴 5 min，电泳后将蛋白转印到聚偏氟乙烯膜上，室温下用封闭液封闭 1 h，与不同抗体按比例孵育，4 摇床过夜，TBST 清洗 3 次，10 min/次，暗室中电化学发光超敏发光液孵育，室温反应 1 2 min，检测各样本中PLGF 和 sFlt-1 蛋白表达水平。（4）采用酶联免疫吸附试验检测血清中 PLGF 和 sFlt-1 的表达水平：将待测稀释样品 0.1 mL 加入反应孔中，在 37 环境中孵育 1 h。添加酶联抗体：在每个反应孔中加入 0.1 mL 新鲜稀释的酶联抗体（滴定后稀释），再在37 环境下培养0.51.0 h并洗涤。加入显色基质溶液：在每个反应孔中加入0.1 mL临时制备的三甲苯基质溶液，在 37 环境中培养 10 30 min。终止反应：在每个反应孔中加入 0.05 mL 2 M 硫酸，用空白对照孔在450 nm处调零，测量每个孔的OD值。1.3 统计学方法采用 SPSS 23.0 软件进行统计学数据分析，符合正太分布计量资料以均数 标准差（x s）表示，多组间数据采用方差分析，两两比较进一步行 LSD-t 检验。计数资料以频数、百分比 n（%）表示，采用2检验。P 0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 三组孕妇血压水平比较轻度子痫前期组、重度子痫前期组 SP、DP、MAP高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05）；重度子痫前期组 SP、DP、MAP 高于轻度子痫前期组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 1。表 1 三组孕妇血压水平比较（x s,mmHg）组别例数SPDPMAP健康孕妇组40114.956.0172.207.1486.455.04轻度子痫前期组40153.133.6095.953.54115.012.36重度子痫前期组40171.386.74100.486.79124.114.93F1 052.85252.58838.25P 0.001 0.001 0.001注：与健康孕妇组比较，P0.05；与轻度子痫前期组比较，P0.05。2.2 三组孕妇 PLGF 和 sFlt-1 mRNA 表达比较轻度子痫前期组、重度子痫前期组 PLGF mRNA 表达水平低于健康孕妇组，sFlt-1 mRNA水平高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），重度子痫前期组 PLGF mRNA 表达水平低于轻度孕妇组，sFlt-1 mRNA 水平高于轻度孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 2。表 2 三组孕妇 PLGF 和 sFlt-1 mRNA 表达比较（x s）组别例数PLGF mRNAsFlt-1 mRNA健康孕妇组4023.200.8817.860.64轻度子痫前期组4017.250.1538.091.19重度子痫前期组407.240.0257.148.78F9 791.15586.73P 0.001 0.001注：与健康孕妇组比较，P0.05；与轻度子痫前期组比较，P0.05。2.3 三组孕妇 PLGF 和 sFlt-1 蛋白表达水平轻度子痫前期组、重度子痫前期组 PLGF 蛋白水平低于健康孕妇组，sFlt-1 蛋白水平高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05）；重度子痫前期组 PLGF 蛋白水平低于轻度孕妇组，sFlt-1蛋白水平高于轻度孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 3。表 3 三组孕妇 PLGF 和 sFlt-1 蛋白表达比较（x s）组别例数PLGF 蛋白sFlt-1 蛋白健康孕妇组4039.081.0221.731.38轻度子痫前期组4019.341.0932.891.10重度子痫前期组408.170.2264.488.30F12 911.10819.40P 0.001 0.001注：与健康孕妇组比较，P0.05；与轻度子痫前期组比较，P0.05。2.4 三组孕妇血清 PLGF 和 sFlt-1 水平轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清 PLGF 水平低于健康孕妇组，血清 sFlt-1 水平高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05）；重度子痫前期组血清PLGF 水平低于轻度孕妇组，血清 sFlt-1 水平高于轻度孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），见表 4。表 4 三组孕妇血清 PLGF 和 sFlt-1 水平比较（x s,pg/mL）组别例数PLGFsFlt-1健康孕妇组40409.0720.762 310.3811.90轻度子痫前期组40310.589.403 015.527.12重度子痫前期组40235.8712.163 518.479.68F1 357.31154 518.18P 0.001 0.001注：与健康孕妇组比较，P0.05；与轻度子痫前期组比较，P0.05。3 讨论子痫前期是由于胎盘促血管生成因子和抗血管生成因子之间的不平衡造成的，这些因子损害了产妇的血管内皮，从而导致了各种不同的临床表现8-9。由于该疾病具有高发性和严重性，相关血管生成因子 PlGF 和 sFlt-1在血清中的含量已被作为子痫前期的诊断标志物，或被医药前沿 2024年3月 第14卷第7期 综合医学 139用以诊断疾病的严重程度。PLGF 是促血管生成因子，经研究发现，滋养细胞侵袭不足，子宫螺旋动脉血管重铸障碍，导致胎盘血流灌注不足，是子痫前期发病的关键。PLGF在促进子宫动脉重铸，促进新生血管形成分支，非分支血管的形成，建立有效的胎儿胎盘网络过程中起着至关重要的作用。sFlt-1 是血管内皮生长因子 PLGF 的受体之一，在孕妇循环系统中，sFlt-1 结合 PLGF 后可降低其促血管生成功能，从而损伤血管生成11-12。目前，PlGF 和 sFlt-1 已在子痫前期辅助诊断中有一定程度的应用，其临床意义和价值逐渐被认可。本研究结果显示，轻度子痫前期组、重度子痫前期组的 SP、DP、MAP 均高于健康孕妇组，差异有统计学意义（P 0.05），重度子痫前期组 SP、DP、MAP 高于轻度子痫前期组，差异有统计学意义（P 0.05）。健康孕妇组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组 PlGF mRNA 和蛋白表达水平、血清 PLGF 水平呈逐渐降低趋势，sFlt-1 mRNA 和蛋白表达水平、血清 sFlt-1 水平呈逐渐升高趋势，组间两两比较，差异有统计学意义（P 0.05）。提示 PlGF 和 sFlt-1 与子痫前期的发生存在密切关系，且与孕妇病情严重程度明显相关。分析相关原因可能为，正常妊娠中，PLGF 主要与滋养层细胞受体 sFlt-1 结合，L-Arg 在一氧化氮合成酶（eNOS）的作用下，生成 NO，促进血管舒张。子痫前期孕妇中，当sFlt-1 升高时，会抑制 PLGF 与受体 Flt-1 结合，同时过量表达的精氨酸酶，降低 L-Arg 的浓度，使一氧化氮合成酶倾向生成超氧化物阴离子，进一步形成过氧化亚硝酸盐，缩短 NO 的半衰期，减少胎盘血流灌注13。而子痫前期患者中，PLGF 表达减少，造成胎盘血管数目减少，母儿间气体、营养等物质交换障碍，影响后期发展。综上所述，PLGF、sFlt-1 与子痫前期发病及病情严重程度相关，用于临床辅助诊断子痫前期及疑似子痫前期孕妇的治疗管理具有正向、积极的意义，可帮助临床医生更合理地对高危因素及疑似子痫前期孕妇进行危险分层和临床评估，加强子痫前期管理，减少或延缓子痫前期的发生、发展，确保母胎安全。【参考文献】1 黄敏珊，陈敦金，陈兢思子痫前期致子代高血压发病机制的研究进展 J现代妇产科进展，2021,30(3):224-226.2 李园园，田晓予，杨雪，等子痫前期预测指标及症状前治疗的研究进展 J中国计划生育学杂志，2020,28(5):782-786.3 VERLOHREN S,BRENNECKE S P,GALINDO A,et al.Clinical interpretation and implementation of the sFlt-1/PlGF ratio in the prediction,diagnosis and management of preeclampsia J.Pregnancy Hypertens,2022,27:42-50.4 JEON H R,JEONG D H,LEE J Y,et al.sFlt-1/PlGF 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