余甘子鲜果不同部位中7种有效成分的含量比较.pdf

中草药():.王嘉雯王洁樊强强等.基于网络药理学和 响应面法优化养心颗粒提取工艺.中国现代应用药学():.余甘子鲜果不同部位中 种有效成分的含量比较龙小妹李蓉郭爽古建兴刘海鹏范源(.云南中医药大学中药学院昆明.云南中医药大学第二附属医院内分泌科昆明.云南中医药大学第一附属医院内分泌科昆明)摘 要 目的 建立同时测定余甘子鲜果不同部位(果肉、果皮、果核、果汁、果渣)中没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸和槲皮素含量的方法考察余甘子鲜果不同部位主要活性成分的分布情况为新鲜余甘子的研究及开发利用提供参考 方法 采用 (.)色谱柱流动相为甲醇().磷酸溶液()流速为 检测波长 柱温 进样量 并以 格式导出余甘子鲜果不同部位的色谱图使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算相似度 结果 种活性成分在不同余甘子鲜果部位含量有明显差异其中槲皮素为果皮特有表没食子儿茶素未在果核中检测出果核中整体化合物含量均低于其他部位但鞣花酸含量显著较高果渣中咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯与诃黎勒酸含量可达其他部位的 倍而没食子酸、表没食子儿茶素、鞣花酸的含量与果汁相差较小果汁中表没食子儿茶素含量明显高于其他部位与果肉比较其他化合物含量差异较小余甘子鲜果果肉、果皮、果核、果汁、果渣的相似度分别为.、.、.、.、.结论 该方法简便、快速、可靠可同时测定余甘子鲜果不同部位中 种成分的含量余甘子鲜果不同部位有效成分含量存在明显差异关键词 余甘子鲜果有效成分含量测定高效液相色谱法中图分类号.文献标识码 文章编号()./.开放科学(资源服务)标识码()(.)().(.)().().“”.医药导报 年 月第 卷第 期 余甘子()是大戟科叶下珠属热带、亚热带落叶小乔木的果实是原卫生部批准的药食同源药材俗名繁多如庵摩勒、滇橄榄、油甘子等 余甘子果实可鲜食酸甜酥脆初食时味酸涩食用后回味甘甜爽口故名余甘子 其富含维生素(仅次于刺梨是苹果的 倍柑橘的 倍)、抗氧化剂、单宁及酚酸类物质等已在中国、印度、马来西亚等国家及南美等地区广泛栽培 目前我国已开发了一系列与余甘子相关的中药和保健食品如余甘子含片、余甘果汁、果脯等深受广大消费者的喜爱 除其营养价值外余甘子药理作用也极其广泛如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、“降三高”、保肝、免疫调节等作用 研究表明从余甘子分离出来的橄榄苦苷能够明显改善脾切除手术后老年大鼠认知功能障碍中医学认为中药鲜品可保存药材的大部分活性成分故极具开发与利用价值余甘子是世界卫生组织指定为推广种植的 种保健植物之一有助于身体的保健以及疾病的预防 有学者对余甘子的毒理学实验进行了研究用余甘子水提物灌胃小鼠观察 周结果半数致死量为(.)可知食用安全毒性极小 新鲜余甘子的研究较少国内外仅见于果实、果汁方面但大多局限于其化学成分没食子酸 本课题组在新鲜余甘子果实褐变的方面也做了相关研究发现没食子酸可作 为 褐 变 底 物 且 低 温 保 存 可 减 缓 褐 变 的 产生 市场上售卖的余甘子作为水果和入药部分多为果肉但因为余甘子鲜果保鲜技术难度大上市时间又比较集中部分余甘子作为新鲜水果直接销售外还有大量用于加工产品短时间内产生大量果核与果渣废弃物不仅影响到产业链条的延伸同时也造成资源的浪费及环境的污染 研究发现榨汁后的果渣中仍含有淀粉(.)、总膳食纤维(.)、蛋白质收稿日期 修回日期 基金项目云南省高校中西医结合防治甲状腺病重点实验室建设计划()云南省科技厅科技计划项目应用基础研究计划()云南省万人计划“名医”专项云南省中医重点专科项目作者简介 龙小妹()女苗族贵州铜仁人在读硕士从事中药药理应用与研究工作:通信作者 范源()男云南昆明人教授博士从事中药药理应用与研究工作:(.)以及多酚、维生素、矿物质等较为丰富的营养成分果核仍有丰富的多酚类化合物且两者均具有较高的抗氧化活性 目前处理果核与果渣的方法是通过无害化处理后掩埋这种情况往往会产生资源的浪费 因此笔者采用高效液相色谱()法同时对余甘子果肉、果皮、果核、果汁、果渣成分差异进行分析并比较 种成分的含量为进一步研究和开发利用其药用价值奠定基础 仪器与试药.仪器 摇摆式高速多功能粉碎机(武义海纳电器有限公司)系列高效液相色谱仪(紫外检测器美国安捷伦公司)电子天平(上海菁海仪器有限公司感量:.)分析天平赛多利斯科学仪器(北京)有限公司感量:.电热恒温水浴锅(上海量壹科学仪器有限公司)型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)东森牌超声波清洗机(深圳市品凰科技有效公司)()循环水式多用真空泵(上海秋佐科学仪器有限公司)常温离心机(湖南恒诺仪器设备有限公司).药品与试剂野生余甘子鲜果采摘地为云南省楚雄彝族自治州牟定县戌街乡碗厂村委会老厂村 对照品:没食子酸(四川省维克奇生物科技有限公司批号:含量)、表没食子儿茶素(四川省维克奇生物科技有限公司批号:含量)、咖啡酸(上海源叶生物科技有限公司批号:含量)、没食子儿茶素没食子酸酯(四川省维克奇生物科技有限公司批号:含量)、诃黎勒酸(四川省维克奇生物科技有限公司批号:含量)、鞣花 酸(成 都 普 瑞 法 科 技 开 发 有 限 公 司 批 号:含量)、槲皮素(上海源叶生物科技有限公司批号:含量)甲醇为色谱纯其余试剂为分析纯水为娃哈哈纯净水 方法与结果.色谱条件 色谱柱:(.)流动相:甲醇().磷酸溶液()梯度洗脱(表)流速:检测波长:柱温:进样量:.实验原材料的预处理 果肉处理:将采摘的野生余甘子鲜果清水洗净、晾干 将清洗干净的余甘子用 不锈钢刀削去果皮剔除其中的余甘子核分切成块用打浆机打浆放入冰箱冷藏表 流动相梯度洗脱程序./甲醇.磷酸果皮处理:将采摘的野生余甘子鲜果清水洗净、晾干 将清洗干净的余甘子用不锈钢刀削下果皮将果皮放入电热恒温鼓风干燥箱中温度设置为 待恒重后用粉碎机粉碎干燥保存果核处理:将采摘的野生余甘子鲜果清水洗净、晾干人工对果实、果核进行分离果核洗净后放置于 恒温干燥箱中烘干粉碎干燥保存果汁处理:将采摘的野生余甘子鲜果清水洗净、晾干、去核粉碎 然后用滤布对果浆进行过滤将得到的余甘子汁在 下离心 (.)过滤取上清液即为余甘子果汁样品 并存入 冰箱中备用果渣处理:将采摘的野生余甘子鲜果清水洗净、晾干、去核粉碎 然后用滤布挤干果汁果渣在 下烘干并粉碎干燥保存.供试品溶液制备 称取余甘子不同部位样品(果肉、果皮、果核、果汁、果渣)各 加甲醇 超声处理 过滤滤液转移至旋转蒸发仪中于 减压回收溶液水至干加甲醇溶解转移至 量瓶定容低温保存备用.对照品溶液制备分别精密称取对照品没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸、槲皮素置 量瓶中用甲醇溶解定容后取适量甲醇分别稀释配制成浓度分别为.、.、.、.、.、.及.的对照品溶液低温避光保存备用.方法学考察.线性关系考察取“.节”的对照品溶液经孔径.微孔滤膜滤过依次精密吸取不同体积的进样量()按“.节”色谱条件进样 以对照品进样量()为横坐标峰面积为纵坐标进行线性回归 结果见表 表 种成分的线性关系.成分名称回归方程线性范围/没食子酸.表没食子儿茶素.咖啡酸.没食子儿茶素没食子酸酯.诃黎勒酸.鞣花酸.槲皮素.精密度、稳定性、重复性实验精密度测试是将同一批样品溶液(果皮)按照“.节”色谱条件重复进样 次稳定性实验是将同一批样品溶液(果皮)按“.节”方法制备供试品溶液共计 份重复实验是取同一供试品溶液(果皮)分别在制备后、按照“.节”色谱条件进样测定测定记录没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸及槲皮素的峰面积分别计算相对标准偏差()结果见表 表 精密度、稳定性、重复性实验的 值.方法学相对峰面积相对保留时间 峰面积精密度.稳定性.重复性.种成分加样回收率实验 取已知含量的样品(果皮)共 份精密称定加入约等量的对照品溶液按“.节”方法制备供试品溶液并按“.节”色谱条件进样测定峰面积计算平均回收率及 值 结果表明没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸、槲皮素的平均回收率分别为.、.、.、.、.、.、.分别为.、.、.、.、.、.、.表明方法的准确度良好.数据处理实验均重复 次数值以均数标准差()表示采用统计学软件.版进行相关性、显著性分析 绘图 采用中药色谱指纹图谱医药导报 年 月第 卷第 期相似度评价系统.版软件建立新鲜余甘子果肉、果皮、果核、果汁、果渣的指纹图谱和相似度评价.不同部位(果肉、果皮、果核、果汁、果渣)色谱图 混合对照品和样品色谱图见图 可见余甘子鲜果不同部位化学成分具有较大差异尤其是余甘子果核色谱峰与其他 类有明显不同 通过标准品指认出余甘子鲜果的果肉、果皮、果核、果汁、果渣均含有没食子酸、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸而槲皮素是余甘子果皮特有在果核中未能检测出表没食子儿茶素 说明野生余甘子鲜果不同部位有部分相似化学成分同时也含有特定的成分在本实验的甲醇.磷酸溶液 洗脱梯度条件下没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸及槲皮素对照品与样品色谱峰出峰完全且峰形规范分离度良好基线较平稳无其他杂峰干扰满足了定性和定量检测的要求 .果肉.果皮.果核.果汁.果渣.混合对照品.没食子酸.表没食子儿茶素.咖啡酸.没食子儿茶素没食子酸酯.诃黎勒酸.鞣花酸.槲皮素图 余甘子鲜果不同部位 色谱图.不同部位(果肉、果皮、果核、果汁、果渣)指纹图谱建立利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版)软件建立野生余甘子鲜果的果肉、果皮、果核、果汁、果渣指纹图谱并进行相似性检验结果见表 果肉、果皮、果汁、果渣的相似度较高超过.而果核与果肉、果皮、果汁、果渣相似度较低 均咖啡酸诃黎勒酸没食子儿茶素没食子酸酯没食子酸鞣花酸果皮中检测出 种已知化合物分别为没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸和槲皮素其含量大小依次为表没食子儿茶素咖啡酸诃黎勒酸没食子儿茶素没食子酸酯鞣花酸没食子酸槲皮素 由结果可知槲皮素是野生余甘子鲜果果皮特有的化合物 果皮与果肉比较两者中没食子酸的含量差异无统计学意义但果皮中表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸的含量均高于果肉果核中只检测出 种化合物分别为没食子酸、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸及鞣花酸其含量大小依次为咖啡酸诃黎勒酸鞣花酸没食子儿茶素没食子酸酯没食子酸 特别是果核中所含的分析物含量均低于果肉、果皮、果汁及果渣但鞣花酸除外鞣花酸在果核中含量是其他部位的 倍果汁、果渣与果肉一样只检测出 种化合物分别为没食子酸、表没食子儿茶素、咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸、鞣花酸 果渣与其他 个余甘子部位比较果渣中的咖啡酸、没食子儿茶素没食子酸酯、诃黎勒酸明显较高尤其是咖啡酸是其他部位的 倍 经常食用的果汁与果肉两者所含已知化合物的含量差异不大但表没食子儿茶素在果汁中含表 余甘子鲜果不同部位中 种成分的含量比较.样品没食子酸表没食子儿茶素咖啡酸没食子儿茶素没食子酸酯诃黎勒酸鞣花酸槲皮素果肉.果皮.果核.果汁.果渣.不同部位没食子酸含量比较.不同部位表没食子儿茶素含量比较.不同部位咖啡酸含量比较.不同部位没食子儿茶素没食子酸酯含量比较 .不同部位诃黎勒酸含量比较 .不同部位鞣花酸含量比较.“”表示未检出与果肉比较.与果肉比较.“”“”.医药导报 年 月第 卷第 期量最高 讨论本实验前期笔者通过考察 色谱条件发现流动相采用甲醇和.磷酸进行梯度洗脱时各峰互不干扰且分离度良好出峰较全面线性范围较广准确可靠重复性好样品测定时间适宜可同时测定余甘子鲜果不同部位中 种成分的含量本研究结果显示余甘子鲜果不同部位有共同的化学成分也有特有的化合物尤其果核经相似度分析得知果核的相似度最低并且未检测出表没食子儿茶素而槲皮素则为余甘子果皮特有 作为余甘子鲜果加工处理时被丢弃的果核与果渣与果肉、果汁同样具有丰富的多酚类化合物且含量相对较高果核中鞣花酸的含量显著高于其他部位 该研究可为新鲜余甘子的进一步推广和应用提供一定的实验基础与参考今后可进一步开发余甘子资源增加产品类别延长产品线以此解决大量余甘子果渣和果核被加工厂遗弃的问题减少环境污染形成可持续化发展提高余甘子产品的综合利用度 由于本实验只采用 法测定余甘子不同部位 种成分的含量研究较单一且不够深入后续将结合余甘子不同部位转录组学进一步研究揭示余甘子不同部位的生物合成及富集机制参考文献 孟达张雅琼秦定梅等.余甘子的酚类成分及药理活性研究进展.中成药():.黄浩洲冉飞谭庆刍等.药食同源品种余甘子综合开发利用策略与思路.中国中药杂志():.:.():.刘晓晖吕乔吉雄等.余甘子化学成分研究.中成药():.赵琼玲马开华张永辉等.余甘子果实品质评价因子的选择.中国农学通报():.管芹冯丹萍段宝忠等.余甘子化学成分、药理作用研究进展及质量标志物预测分析.中草药():.李文杰陈楠.橄榄苦苷对脾切除手术后老年大鼠认知功能障碍的影响.医药导报():.李萍林启云谢金鲜等.民族药余甘子的急性毒理与药效学研究.中医药学刊():.刘鹏张敏敏邓鲲鹏等.测定余甘子鲜果及余甘子果酒中槲皮素的含量.求医问药(下半月)():.孟晓唐鸣跃袁昌益等.响应面法优化余甘子果渣没食子酸的提取工艺.食品工业():.陈军陈洪彬蒋璇靓等.余甘子贮藏与加工研究进展.食品工业科技():.徐涓张雯雯李凯等.高温蒸汽处理对余甘子果汁贮藏期间的品质影响及褐变行为解析.食品科学():.:.李蓉龙小妹陈平等.贮藏条件下新鲜余甘子果实褐变相关指标研究.中国药业():.陈平.余甘子褐变过程中多酚类与糖类化合物含量变化相关研究.昆明:云南中医学院:.黄秋萍黄秋婵郑燕菲等.余甘子果核多酚提取工艺优化及抗氧化性研究.中国酿造():.甘瑾何钊张弘等.余甘子果渣多酚提取工艺优化及其抗氧化活性分析.食品工业科技():.