芦丁和槲皮素的化学检识省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

芦丁判别及含量测定小组组员：陈丽、陈惠渝、黄雄、李钰川第1页实验目熟悉黄酮类化合物化学检识惯用方法掌握芦丁紫外吸收光谱测定方法与原理学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物含量第2页试验原理芦丁和槲皮素化学检识1.对不一样强度碱液溶解度试验2.浓硫酸和浓盐酸反应3.Molish反应4.盐酸-镁粉试验5.FeCl3反应6.AlCl3反应第3页试验原理对不一样强度碱液溶解度试验：黄酮类化合物因分子中多含有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。因为酚羟基数目及位置不一样，酸性强弱也不一样。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱次序依次为：7,4-二OH7-或4-OH普通酚OH5-OH3-OH所以，酚羟基数目及位置不一样黄酮类化合物酸性不一样，在不一样强度碱液中溶解度也不一样。第4页试验原理浓硫酸和浓盐酸反应：-吡喃环上1-氧原子，因有未共用电子对，故表现微弱碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成盐极不稳定，加水后即可分解。另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中经常表现出特殊颜色，可用于判别。第5页试验原理Molish反应：糖在浓硫酸或浓盐酸作用下脱水形成糠醛及其衍生物与-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸液面间形成紫环，所以又称紫环反应。Molish反应能够判定单糖存在。第6页试验原理盐酸-镁粉试验：盐酸-镁粉反应机制过去解释为因为生成了花色苷元所致，现在认为是因为生成了阳碳离子缘故。FeCl3及AlCl3反应：黄酮类化合物分子中常含有以下结构单元，故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂反应，生成有色络合物。第7页试验原理苯甲酰基桂皮酰基黄酮类化合物结构中交叉共轭黄酮类化合物结构中交叉共轭芦丁紫外吸收光谱测定：芦丁紫外吸收光谱测定：第8页试验原理n芦丁紫外吸收光谱测定多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统电子跃迁引发。BB第9页试验原理带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统电子跃迁所引发。AA第10页试验原理苯甲酰基桂皮酰基黄酮类化合物结构中交叉共轭黄酮类化合物结构中交叉共轭芦丁紫外吸收光谱测定：芦丁紫外吸收光谱测定：第11页说明：（1）+NaOMe或NaOAc,OHONa，变为离子化合物，共轭系统中电子云密度增加，红移 另有3,4-OH或3,3,4-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。（2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4-OH解离。试验原理芦丁紫外吸收光谱测定第12页（3）形成络合物能力：黄酮醇3-OH 黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）邻二酚羟基 二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合；但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合；形成络合物越稳定，红移越多。第13页（4）依据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸紫外光谱吸收峰位相减结果，能够判断邻二酚羟基取代情况。第14页带带II(240-285nm)（苯（苯甲酰系统）甲酰系统）带带I(300-400nm)桂皮酰系统桂皮酰系统类类型型说说明明250-285304-350黄酮类黄酮类-OH越多，带越多，带I带带II越红移越红移B环环3,4有有-OH基，带基，带II为双峰（主为双峰（主峰伴肩峰）峰伴肩峰）328-357黄酮醇类黄酮醇类(3-OR)352-385黄酮醇类黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类异黄酮类二氢黄酮二氢黄酮（醇）（醇）B环上有环上有-OH,OCH3对带对带I影响不大影响不大220-270340-390或或340-390(Ia)300-320(Ib)查耳酮类查耳酮类查耳酮查耳酮2-OH使带使带I红移影红移影响最大响最大370-430(3-4个小峰个小峰)橙酮类橙酮类第15页加入试剂带II带I说明样品+甲醇（黄酮类及黄酮醇类）250-285304-385两峰强度基本相同，详细位置与母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)相关，-OH,-OCH3越多，越长移+NaOMeA环 有-OH，红移 小，无意义40-60nm（不变或增强）50-60nm（下降）有4-OH，无3-OH有3-OH，无4-OH有3,4-OH或3,3,4-OH（衰减更加快）7-OH带I，II随加NaOMe时间延长，逐步衰减320-330nm有吸收，成苷后消失+NaOAc(未熔融)5-20在长波一侧有显著肩峰7-OH加入诊疗试剂后引发位移及结构测定加入诊疗试剂后引发位移及结构测定第16页+NaOAc(熔融)4065有4-OH+NaOAc/H3BO35-1012-30有6,7-OH或7,8-OH(5,6-OH无)B环有邻二酚羟基AlCl3/HCl6050-6035-5517-200有3-OH有3,5-二OH有5-OH，无3-OH有6-OR无3-OH,5-OHAlCl3光 谱-AlCl3/HCl光谱30-4050-650B环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基第17页试验原理芦丁提取物含量测定：在黄酮类化合物紫外光谱图上主要有两个吸收带:环肉桂酰系统引发吸收带1(300)550nm)和环苯酰系统引发吸收带2(240)280nm)。若加入铝盐,则铝离子与黄酮化合物形成稳定配合物,带2会显著向长波方向移动(红移);在NaNO2强碱性溶液中,其在500nm左右吸光度值最大,从而为分光光度法测定提供了可靠依据注意：用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系分光光度法测定总黄酮含量时,必须严格确保稀释定容用乙醇浓度、试剂加入时间、显色时间等测试步骤前后完全一致,不然会出现很大误差。第18页芦丁芦丁标标准品准品浓浓度度mg/ml吸光度吸光度AbsR2=0.9923标准曲准曲线Series1Linear(Series0)第19页试验试剂及仪器试剂：芦丁及槲皮素样品、稀氨水、5%NaHCO3水溶液、5%Na2CO3水溶液、1%NaOH水溶液、浓酸、浓硫酸、乙醇、-萘酚、镁粉、1%FeCl3醇溶液、1%AlCl3醇溶液、无水甲醇、甲醇钠溶液、AlCl3无水甲醇溶液、（1：1）盐酸、无水醋酸钠、硼酸、60%乙醇、30%乙醇、亚硝酸钠溶液（1：20）、硝酸铝溶液（1：10）、4%NaOH水溶液、蒸馏水等仪器：试管若干支、滴管若干个、移液管若干支（公用）、药匙、100ml、50ml、10ml容量瓶各一个、紫外分光光度计等第20页试验步骤芦丁和槲皮素化学检识(1)对不一样强度碱液溶解度试验：芦丁芦丁槲皮素槲皮素第21页试验步骤(2)浓硫酸和浓盐酸反应：(3)Molish反应：第22页试验步骤(4)盐酸镁粉试验:第23页试验步骤(5)FeCl3反应第24页试验步骤(6)AlCl3反应芦丁紫外吸收光谱测定芦丁提取物含量测定第25页试验步骤芦丁紫外吸收光谱测定：测定方法：精密称取芦丁l0mg于l00mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀。从中吸收5mL于50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度；摇匀备用（10g/mL)A、甲醇光谱：取样品溶液置石英杯中，200400nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。B、甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，马上测定。放5分钟后再测一次。C、AlCl3光谱：在置有样品液石英杯中加入AlCl3溶液6滴，停1分钟后进行测定。然后加入3滴盐酸(HCl:水=1:1)再进行测定。第26页试验步骤D、醋酸钠光谱；取样品溶液3mL，加入过量无水醋酸钠固体，摇匀(杯底剩有少许醋酸钠，2分钟内测定，510分钟后再测一次。E、醋酸钠硼酸光谱：方法2第27页试验步骤芦丁提取物含量测定：(1)标准曲线绘制：(2)测定：精密称取精制芦丁20mg，置l00mL量瓶中，加60乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，置50mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得0.1mg/mL样品液。精密吸收样品液3.0mL置10mL量瓶中，加30乙醇使成5mL。精密加亚硝酸钠溶液(1：20)0.3mL，摇匀。放置6分钟，再加硝酸铝溶液(1：10)0.3mL，摇匀，放置6分钟。加4NaOH溶液4mL，用水稀释至刻度，振摇，放置l5分钟置比色皿中，在500nm波长测定吸收度。从标准曲线中读出芦丁含量。第28页THANKS FOR YOUR ATTENTION!第29页